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Artigo de método

Estabelecimento de um Biorepository baseado em Clínica

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DOI:

10.3791/55583

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29 de maio de 2017

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Neste artigo

Resumo

Os tumores cutâneos são frequentemente descartados após a cirurgia micrográfica de Mohs. Descreve-se aqui um protocolo que permite que a equipe de suporte clínico processe e armazene eficazmente amostras de tumores cutâneos ( por exemplo, carcinoma de células escamosas, carcinoma basocelular e melanoma) para aplicações laboratoriais a jusante sem interferir com as operações clínicas.

Resumo

A incidência de cancro da pele ( por exemplo, carcinoma epidermóide, carcinoma basocelular e melanoma) tem vindo a aumentar nos últimos anos. Espera-se que haja uma demanda paralela de amostras tumorais cutâneas para estudos de pesquisa biomédica. A disponibilidade de tecidos, no entanto, é limitada devido ao custo de estabelecimento de um biorrepositório e à falta de protocolos disponíveis para a obtenção de amostras clínicas que não interfiram com as operações clínicas. Um protocolo foi estabelecido para coletar e processar tumores cutâneos e sangue associado e amostras de saliva que tem impacto mínimo em procedimentos clínicos de rotina na data de uma cirurgia de Mohs. As amostras de tumor são recolhidas e processadas a partir de pacientes submetidos à sua primeira camada de cirurgia de Mohs para neoplasias cutâneas comprovadas por biopsia pelo histotecnista de Mohs. O tecido normal adjacente é recolhido no momento do fecho cirúrgico. As amostras adicionais que podem ser coletadas são swabs de sangue total e bucal. Utilizando amostras de tecido que são normalmente descartadas, um biorrepositório foi gerado que oferece várias vantagens fundamentais por estar baseado na clínica versus o laboratório. Estes incluem uma vasta gama de amostras recolhidas; Acesso a registros de pacientes não identificados, incluindo relatórios de patologia; E, para o doador típico, o acesso a amostras adicionais durante as visitas de acompanhamento.

Introdução

A pesquisa com câncer e biomarcadores depende de uma oferta de amostras de tecido humano de qualidade, e a oferta limitada tem dificultado a pesquisa 1 , 2 . Muitos estudos dermatológicos são limitados pela oferta inadequada, qualidade variável e custos associados ao uso de tecido humano. O custo de estabelecer um grande biobank dedicado foi estimado em aproximadamente dois milhões de dólares 3 , e esses custos colocam o uso de tecido humano fora do alcance de muitos pesquisadores. Além disso, o processo de geração e armazenamento de amostras de pesquisa apresenta o risco de afetar as ....

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Protocolo

Todas as experiências em amostras de tecido humano foram aprovadas pelo Western IRB (Protocolo WIRB # 20142461). O único critério para a coleta de tecidos para esses procedimentos é um diagnóstico de SCC comprovado por biópsia. Não foram descritos critérios de exclusão no protocolo IRB original, mas não foram utilizadas amostras de doentes com uma doença transmissível transmitida pelo sangue conhecida. O consentimento informado foi obtido antes da coleta de tecido cutâneo, sangue e saliva. O Midwestern Institutional Review Board aprovou o trabalho de validação com amostras de bio-depositário baseadas em clínicas na Midwestern University (AZ # 807).

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Resultados

O tumor e a ANT foram utilizados com sucesso na isolação de proteínas e testados por Western blotting. Como mostrado na Figura 3 , os marcadores cutâneos de carcinoma de células escamosas (Muc1 14 , FHL- 15 e p40 16 , 17 ) podem ser detectados em amostras de pacientes coletadas e armazenadas em nosso biorrepositório clínico.

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Discussão

Para o conhecimento do autor, este protocolo é o primeiro de seu tipo que se concentra na aquisição clínica de amostras de tecido cutâneo, tanto em uma abordagem de custo eficaz e rápido. Pacientes submetidos a microcirurgia de Mohs são tipicamente agendados durante blocos específicos de tempo, ea coleta é limitada a esses períodos. A colheita de amostras envolve esforços do assistente médico envolvido na assistência ao paciente, o histotechnologist de Mohs que processa as amostras de tumor, e um membro do pessoal de la.......

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Divulgações

Os autores não têm nada a revelar.

Agradecimentos

Este trabalho foi apoiado por fundos da Midwestern University College de Ciências da Saúde Research Facilitation Grant, concedido à EEH, e Midwestern University Office of Research and Sponsored Programs Intramural Grant, atribuído à KJL. O suporte adicional foi fornecido por Affiliated Laboratories e Affiliated Dermatology. Agradecemos a Sarah Potekhen, Jamie Barto, Stefani Fawks, Cody Jording, Stacie Schimke, Heather Kissel e Ali Zaidi por sua assistência técnica.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Tubos de coleta de sangue de plástico BD Vacutainer com K3EDTAThermoFisher Scientific02-685-2B
Ciências de Microscopia Eletrônica Lâminas de borda duplaThermoFisher Scientific50-949-411
Pinça de propósito geral de ponta média curvaThermoFisher Scientific16-100-110
Tubos demicrocentrífuga premiumThermoFisher Scientific05-408-138
Lonza Walkersville KGM Meio de QueratinócitosThermoFisher ScientificNC9791321
Ciências de Microscopia Eletrônica Tecido TEK OCT CompostoThermoFisher Scientific50-363-579
Leica CM1950 CriostatoLeica Biosystems14047743909
Lâminas de Microscópio FoscoThermoFisher Scientific12-550-343
Shandon Rapid-Chrome H& Kit de coloração de seção congelada EThermoFisher Scientific99-900-01
Tubos criogênicos de armazenamento de longo prazoNalgene ThermoFisher Scientific03-337-7X
Tubos de centrífuga cônicos Falcon 15 mLThermoFisher Scientific14-959-53A
Boca Scientific BuccalT-Swab ThermoFisher ScientificNC9679349
Tecnologia de Sinalização Celular 10x RIPA BufferThermoFisher Scientific50-195-822
Halt Protease e Inibidor de Fosfatase CoquetelThermoFisher ScientificPI78443
Eppendorf 5424R MicrocentrífugaThermoFisher Scientific05-401-203
GranuladorGranulador Sem FioThermoFisher Scientific12-141-3
Pilão de pellets livre de RNAseThermoFisher Scientific121-141-364
Forma SteriCycle CO2 IncubadoraThermoFisher Scientific13-998-089
HyClone Soro Fetal BovinoThermoFisher ScientificSH30071.02
Gibco Advanced DMEM/F-12ThermoFisher Scientific12-634-028
Gibco Penicilina-EstreptomicinaThermoFisher Scientific15140148
Gibco 1 M HepesThermoFisher Scientific15-630-130
Nunc Cell Culture 35 mm com VentThermoFisher Scientific1256591
Anti-CFH clone de anticorpo monoclonal OX-24AbnovaMAB12583
Anti-p40 (p63 delta) anticorpoAbnovaABX-144A
Anti MUC-1 anticorpoSanta Cruz Biotechsc-7313
Anti-Caracol + Lesma (phospho S246)AbcamAb63568
IgG anti-coelho de cabra, Alexa Fluor 488InvitrogenA-11034
Alexa Fluor 568 PhallodinMolecular Probes A12380
ProLong Gold Antifade Mountant comSondas Moleculares DAPI P36941
Zeiss Axio Imager Z1 Microscópio com câmera AxiocamContraste de fase Zeiss4300009901
Olympus IX51 com câmera DP72OlympusIX511F3

Referências

  1. Baker, M. Biorepositories: Building better biobanks. Nature. 486, 141-146 (2012).
  2. Ambrosone, C. B., Nesline, M. K., Davis, W. Establishing a cancer center data bank and biorepository for multidisciplinary research. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 15<....

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Reimpressões e permissões

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