Summary
Denne protokollen beskriver en metode for å utsette gnagere for elektronisk sigarettdamp (E-damp) og sigarettrøyk. Eksponeringskamre er konstruert ved å modifisere anestesiekamre med et automatisert pumpeanlegg som leverer E-damp eller sigarettrøyk til gnagere. Dette systemet kan enkelt endres for å imøtekomme mange eksperimentelle endepunkter.
Abstract
Elektroniske sigaretter (e- sigaretter ) blir mye brukt, og vokser i popularitet. Det er anslått at mer enn 9 millioner voksne bruker dem regelmessig. De potensielle negative helseeffektene av eksponering for e-dampe (E-damp) er dårlig definert. Mens flere dyremodeller med E- vapor eksponering er utviklet, eksponerer få modeller gnagere til klinisk relevante mengder nikotin og gjør direkte sammenligninger med sigarettrøyk innenfor samme eksponeringssystem. Her presenterer vi en metode for konstruksjon og drift av et E- dampkammer og sigarettrøykammer. Kamrene er konstruert ved å utstyre anestesiekamre med et datamaskinstyrt pumpesystem som leverer konsistente mengder av EIze: 14px; "> - damp- eller sigarettrøyk til gnagere. Nikotineksponering måles indirekte ved å kvantifisere kotininnivåer før og etter eksponering. Dette eksponeringssystemet kan modifiseres for å imøtekomme ulike typer e- sigaretter og tobakksigaretter, og kan Brukes til å sammenligne effektene av E- damp og sigarettrøyk in vivo .
Introduction
Siden det amerikanske markedet ble registrert i 2004, har elektroniske sigaretter (e-sigaretter) utvidet seg til en milliard dollarindustri, og det anslås at nesten 9 millioner voksne bruker dem regelmessig 1 . I 2014 og 2015 hadde flere videregående studenter brukt e-sigaretter enn konvensjonelle sigaretter 2 . Det økende antallet brukere av e-sigaretter har skapt en forskningsinnsats for å vurdere deres potensielle negative helseeffekter.
E-sigaretter genererer en damp (kalt "E-damp") ved oppvarming av en viskøs løsning som vanligvis inneholder en blanding av vann, polyetylenglykol eller vegetabilsk glyserin, nikotin og smaksstoffer 3 , 4 . Det har vist seg at E-damp inneholder flere skadelige forbindelser, inkludert reaktive oksygenarter (ROS), nikotin, forskjellige aldehyder og polycykliske aromatiske hydrokarboner 5 ,6. Mange av disse forbindelsene dannes under fordampingsprosessen av E-væske før innånding 7 . Spesielt er flere av disse skadelige forbindelsene også tilstede i sigarettrøyk, og økende bekymring for at e-sigaretter kan ha lignende negative helsehelseproblemer 7 .
Det er lite konsensus om helseeffekter av e-sigaretter. For å løse dette har flere dyrmodeller av E-damp eksponering blitt utviklet ( Tabell 1 ). Disse modellene benytter en rekke metoder som hel kropps E-damp eksponering og mekanisk ventilasjon. Mens nåværende modeller har gitt innsiktsfulle data, gjør noen få direkte sammenligninger med sigarettrøyk innenfor samme eksponeringssystem ( tabell 1 ). I tillegg, mens flere menneskelige studier har vist at e-sigarettbrukere og sigarettrøykere har serumkotininnivåer mellom 30-200 ng / ml, faller mange modeller av eksponering for e-damp og sigarettrøyk utIde dette området 8 , 9 , 10 , 11 , 12 .
Her presenterer vi en metode for å sammenligne effektene av sigarettrøyk og E-damp eksponering in vivo som gir serumkotininnivåer som ligner på menneskelige studier.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Følgende protokoll er utført under veiledning og godkjenning av University of Michigan Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC).
1. Elektronisk sigarett-dampkammermontering
MERK: Det komplette kammeret skal plasseres i en avtrekksvifte under bruk. Kammeret her ble plassert i et temperaturstyrt og filtrert laboratoriemiljø. Undersøkere kan velge å overvåke slike aspekter av systemet for å sikre konsistens av romluftkvaliteten. Som et alternativ kan dekker skjermene med et metallbur, forhindre gnagereutjevning, samtidig som monitorene kan prøve det indre kammermiljøet.
- Skaff et bedøvelseskammer med lufttett avtagbart deksel med volum på 20 L.
- Ved hjelp av en jigsag utstyrt med et blad som er egnet for kutting av materialet, kutt et hul på 10,2 cm i lokket på kammeret ca 7,6 cm fra bakkant avkammer.
- Sett inn justerbar lufte i hullet og fest på plass med et hvilket som helst caulk lim.
MERK: Forsikre deg om at klæbemidlet ikke er tilgjengelig for gnagere i kammeret, da de kan tygge lommen. For å forhindre dette problemet, må du påføre kammeret på utsiden av kammerveggen for å montere ventilen. - Kutt silikonrør i to 15 cm segmenter, og fest endene til hver side av en T-kontakt.
MERK: Silikonrør har potensial til å reagere med noen komponenter i e-damp eller sigarettrøyk. Dermed kan utredere vurdere å bruke ikke-reaktiv slange. - Trekk begge silikonrørene gjennom premade hull nær fronten av kammerlokket slik at T-kontakten er inne i kammeret. Forsikre deg om at slangen er festet til lokket med enten lim eller elektrobånd.
- Koble de frie ender av silikonrøret til utgangssenderne på to mikroluftpumper. Pumper skal monteres på lokket i kammeret med dobbeltsidigSidet tape eller caulk.
MERK: Lengden på slangen som er koblet til utgangssiden av pumpen, skal være kort for å begrense mengden dampoppsamling på innsiden av slangen under bruk. - Ved hjelp av et nytt silikonrør festes den ene enden til innsiden av en av luftpumpe (Pumpe A i Figur 1 ), og kutt denne røret til ca 4 cm i lengde. Det er her den elektroniske sigaretten vil bli satt inn under bruk av kammeret. Forsikre deg om at rørets diameter gir en tett passform rundt e-cig-enden.
- Ved hjelp av et nytt silikonrør festes den ene enden til inngangssiden til den andre luftpumpen (Pumpe B på figur 1 ). Denne pumpen vil introdusere romluft inn i kammeret. Som sådan må rørets ende plasseres utenfor støynivået. Lengden på dette røret er ikke kritisk, men bør være så kort som mulig for å begrense luftstrømningsmotstanden.
- Inne i kammeret fester to små kroker med dobbeltsidig lim for å holde oksygenEn og karbonmonoksid gassmonitorer.
Figur 1. Skjematisk av elektronisk sigarett-dampkammer.
Kammeret er plassert i avtrekksdeksel (ikke vist). Romluftspumpe (Pumpe B) introduserer romluft fra utsiden av kokekaret kontinuerlig til 2 l / min. E-cig pumpe (Pumpe A) puffer 133 ml E-damp over 4 s, med 30 s hvileperiode. E-damp og romluftblanding før du pumpes inn i kammeret. Gassmonitorer måler kontinuerlig karbonmonoksid (CO) og oksygen (O 2 ) konsentrasjoner inne i kammeret. E-damp er passivt uttømt gjennom utlufting i avtrekksdeksel. Vennligst klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
2. Røykerkammermontering av sigarett
MERK: Nesten alle merker oF sigarett kan brukes med dette systemet, men standardiserte forsknings sigaretter som University of Kentucky 1R6F Research Sigarett er kostnadseffektive, pålitelige og beste for denne applikasjonen.
- Følg trinnene 1.1 - 1.6, og trinn 1.9.
- Ved hjelp av et nytt silikonrør festes den ene enden til sigarettbelysningsapparatet, og den andre enden til luftpumpens inngangsside (Pumpe A i figur 2 ). Sigarettbelysningsenheten skal plasseres inne i avtrekksdekselet og utenfor kammeret under bruk.
Merk: Byggingen av sigarettbelysningsapparatet krever kunnskap om metallfabrikasjon og elektroteknikk. Mens en trinnvis veiledning for konstruksjon ikke vil bli gitt her, se tilleggsutstyr til planer. - Ved hjelp av et nytt silikonrør festes den ene enden til den andre luftpumpen (Pumpe B på figur 2 ). Denne pumpen vil introdusere romluft inn i kammeret, slik at enden av røret må plasseres utenfor avtrekksviften. >
- Klipp flere 5 mm brede vertikale slisser i kammerets forside, og monter en datamaskinvifte på utsiden av kammeret slik at den dekker denne åpningen. Sørg for at viften foran vender mot kammeret slik at viften vil blåse luft inn i kammeret gjennom denne åpningen.
Figur 2. Skjematisk av sigarett-røykkammer.
Romluftspumpe (Pumpe B) introduserer romluft fra utsiden av kokekaret kontinuerlig til 2 l / min. Pumpe A trekker på litet sigarett i 40 s med en hastighet på 2 l / min og 20 s senere evakuerer datamaskinviften kammeret i løpet av 3 min. Røk og romluftblanding før du pumpes inn i kammeret. Gassmonitorer måler kontinuerlig kullmonoksid (CO) og oksygen (O 2 ) kammerkonsentrasjoner. Røyk er uttømt gjennom lufte i avtrekksdeksel.Ftp_upload / 55672 / 55672fig2large.jpg "target =" _ blank "> Vennligst klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
3. Mikrokontroller Montering og programvare
- Kontroller pumpesystemet til E-sigarett dampkammeret og sigarettrøykammeret ved hjelp av separate mikrokontroller. Last ned microcontroller-programvaren og last opp operasjonskodene som er oppgitt i S opplementary Materials . Den elektroniske sigarettdampkoden vil kjøre romluftspumpen kontinuerlig og aktivere e-sigarettpumpen i en varighet på 4 s hver 30 s. Sigarettrøykekoden vil løpe romluftspumpen kontinuerlig, aktivere sigarettpumpen i 40 s, og aktiver datamaskinviften 20 s etter at sigarettpumpen er stoppet. Viften slås av etter kjøring i 3 minutter.
Merk: Timing av pumper og vifte kan justeres etter behov. Referanse produsent instruksjoner om hvordan du laster opp relevante koder til microcontroller. - Å montereLe mikrokontrolleren, koble til ledninger, dioder, resistorer og kondensatorer til brødbrettet, som vist i figur 3, og fest alligator-klippetrådene til de tilsvarende luftpumpeene (og datamaskinvifte for sigarettrøykammer). Husk mikrokontrolleren utenfor støynivået om mulig.
Figur 3. Skjematisk av Microcontroller.
Skjematisk av mikrokontroller og brødbrett for å betjene timing av luftpumper og vifte. Vennligst klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
4. Dyr
- Bruk voksne rotter som veier 450 - 520 g.
- Gruppe rotter i henhold til eksponeringstype ( f.eks . Elektronisk sigarett, sigarettrøyk, romluft pumpet inn i kammeret).
- På denne tiden prIor til eksponering, samle 500 μL blod i EDTA-belagte rør fra halevenen ved hjelp av sprøyte for å måle baseline serumkotininkonsentrasjon.
- Spinn ned blodprøver ved 20 000 xg i 30 minutter ved 4 ˚C og samler serum. Sørg for at prøvene blir kjølt på is gjennom hele denne prosessen.
- Etter produsentprotokollen ble det analysert analysen av kotinin i serumprøver. Prøver kan også lagres ved -80 ˚C for senere bruk.
5. Drift av den elektroniske sigarettkammeret
- Rengjør innsiden av kammeret med 70% etanol, deretter med deionisert vann, og la luften tørke til kammeret er helt tørt (eller ca. 30 minutter).
- Kalibrere gassmonitorer og monter hele skjermen på veggen inne i kammeret.
- Plasser rotter inne i kammeret. Merk at opptil tre dyr kan eksponeres samtidig.
- Kontroller at e-sigaretten er fulladet med tilstrekkelig E-væske og sett inn e-sigarettenInn i innløpsrøret. Det er viktig å sikre at E-sigarettbatteriet og E-væskenivåene er tilstrekkelige i løpet av 90-min-eksponeringen.
- Slå på luftpumper, og start timeren.
- Under eksponeringen observere gassmonitorene for å sikre at kammeret inneholder> 20% O 2 og 0 ppm CO.
Merk: Hvis oksygenivået faller, kan kammeret ikke være godt ventilert, eller oksygenmonitoren kan ikke være riktig kalibrert. - Når eksponeringstiden har nådd 90 minutter, fjern E-sigaretten og fortsett å kjøre gasspumpene for å lufte den gjenværende dampen. I tillegg kan toppen av kammeret løftes for å fremskynde ventilasjonen.
- Når dampen har ryddet, fjern rottene og rengjør kammeret.
- Samle 500 ul blod fra halevenen fra hver rotte ca. 1 time etter eksponering ved avslutning av eksperimentell protokoll.
- Følg trinnene 4.4 - 4.5 for å isolere serum og analyse for cotinin.
- Følg trinnene 5.1 - 5.3.
- Sett inn sigarett i sigarettbelysningsenhet, med enden av sigaretten mot varmeelementene.
- Slå på sigarettbelysningsenheten til siktet begynner å smolere (ca. 5 s).
- Når sigaretten er tent, slår du på pumpesystemet, starter timeren og observerer sigarettbrenningen til slutt (ca. 40 s).
- Når sigaretten har brent, fjern forsiktig den brukte sigaretten fra sigarettbelysningsapparatet med tang.
- Sørg for at CO-nivåene ikke stiger over 1000 ppm og O 2- nivåene ikke faller under 20%. Datautløperens tid og varighet er avgjørende for å forhindre oppsamling av karbonmonoksid.
- Etter 4 minutter slår pumpesystemet av og går tilbake til trinn 6.2 til rotter blir utsatt for tobakkrøyk i 90 minutter (eller ca. 23 sigaretter).
MERK: Karbonmonoksidnivå 4 min. Etter sigarettburNing bør falle under 400 ppm, ellers kan karbonmonoksid begynne å samle seg i kammeret. - Når eksponeringen er fullført, fortsett å forlate pumpesystemet for å ventilere gjenværende røyk. Når karbonmonoksid faller under 100 ppm, fjerner rotter fra kammeret. Dette bør ta 5-10 min.
- Fjern rotter og rengjør kammeret.
- Samle 500 μL blod fra halevenen ca. 1 time etter eksponering ved avslutning av eksperimentell protokoll som med E-sigaretter.
- Følg trinnene 4.4 - 4.5 for å isolere serum og analyse for cotinin.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Karbonmonoksid og oksygenovervåking
Oksygenkonsentrasjoner falt ikke under 20% under eksponering for eksponering av damp og CO-konsentrasjonene forblir uoppdagelige gjennom hele eksponeringen. Gassmonitorer under eksponering av sigarettrøyk viste at oksygenkonsentrasjonen var over 20%. Kullmonoksydkonsentrasjonene oversteg ikke 1000 ppm ( figur 4 ).
Figur 4: Kullmonoksidkoncentrasjoner i sigarett-røykkammer. Kullmonoksidkonsentrasjon ble registrert hver 30. s i løpet av innføring av røyk fra 1R6F sigaretter. Resultatene som vises er gjennomsnitt fra 3 påfølgende 4 min. Sykluser. Kullmonoksydkonsentrasjonene oversteg ikke 1000 ppm. Sigaretten blir brent for ferdigstillelse over 40 s, og viften er aktivertD 20 s senere ( dvs. vifte er aktivert 1 min etter sigarettennelse).
Pre- og postexposure serumkotinin
Pre-eksponering og 1 h post-eksponering serumkotinin for E-dampgruppe (n = 3) var henholdsvis 4,2 ± 0,4 ng / ml og 171,6 ± 20,5 ng / ml. Pre-eksponering og 1 h post-eksponering serumkotinin for sigarettrøykgruppe (n = 3) var henholdsvis 3,9 ± 0,3 ng / ml og 98,8 ± 2,1 ng / ml ( figur 5 ).
Figur 5: Serumnivåer av kotinin som følger med sigarettrøyk eller eksponering for egendefinert sigarett-damp. Serumkotinin ble målt før protokollinitiering og 1 time etter en eksponeringsøkt på 90 min. Foreksponering og 1 time etter eksponering av serumkotinin for e-dampgruppe var 4,2 ± 0,4 ng / ml aHenholdsvis 171,6 ± 20,5 ng / ml. Pre-eksponering og 1 h post-eksponering serumkotinin for sigarettrøykgruppe var henholdsvis 3,9 ± 0,3 ng / ml og 98,8 ± 2,1 ng / ml. Forskjellen mellom serumkotininkonsentrasjonene før og etter eksponering var statistisk signifikant. * P <0,05.
Figur 6: Elektronisk sigarett-dampkammer og sigarettrøykammer. Bilde av den elektroniske sigarettdampen (høyre) og sigarettrøykammeret (venstre) i avtrekksdekselet. Røde bokser inneholder mikrokontroller. Vennligst klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
| Dyremodell | <Sterk> Elektronisk sigarett | Tobaks sigarett | Henvisning | |||
| Eksponeringsmetode | Modell organisme | Merkevare (nikotin) | Cotinin ng / mL (serum, [urin]) | Merke | Cotinin ng / mL (serum, [urin]) | |
| Hel kroppseksponering | C57BL / 6J mus | Joytech 510-T (1,8%) | 62,3 ± 3,3, [892,5 ± 234] | N / A | N / A | McGrath-Morrow |
| Mekanisk ventilator | BALB / cJ mus | Ikke rapportert | [400 - 500] | Ikke rapportert | [500 - 800] | Ponzoni |
| Hel kroppseksponering | CD-1-mus | Flere * (0,6 - 24%) | Ikke rapportert | N /EN | N / A | Hwang |
| Hel kroppseksponering | Wistar albino rotter | Ego T (0,9%) | Ikke rapportert | Ikke rapportert | Ikke rapportert | Salturk |
| Hel kroppseksponering | C57BL / 6-mus | NJOY (1,8%) | 267 ± 17 | N / A | N / A | Sussan |
| Hel kroppseksponering | C57BL / 6J mus | CoolCart, Damp Titan | 500 ± 10 | 3R4F referansesigaretter | 76 ± 7,6 | Husari |
| * Xtreme Vaping, Vapure, Vape Addict Juice, Grimm Creations, Green Smart Living, Free Mason Elixer | ||||||
Tabell 1: Egenskaper for elektroniske sigaretteksponeringsmodeller.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Her beskriver vi en metode for konstruksjon av kamre som eksponerer gnagere for e-damp og sigarettrøyk på et kontrollert måte ( figur 6 ). Konstruksjon av E-sigarettkammeret er forholdsvis enkelt og rimelig sammenlignet med kommersielle eksponeringssystemer 14 , 15 , 16 . De delene og verktøyene som kreves for å bygge kammeret, er lett tilgjengelige fra kommersielle leverandører online. På samme måte er konstruksjonen av sigarettrøykammeret relativt enkelt med unntak av sigarettbelysningsanordningen som må fremstilles (se tilleggsmaterialer for planer).
Når kamrene er konstruert, kalibrerer et kritisk trinn i eksponeringssystemet kamrene å eksponere gnagere til ønsket mengde nikotin. I både E-sigarettkammeret og sigarettkammeret justeres mengden av total eksponering tIme er kanskje den enkleste metoden for å øke eller redusere mengden av nikotineksponering. Økning av blåsingstiden i eksponeringssystemet for e-sigarett kan øke nikotindosen, men tegning av damp fra e-sigaretten i lengre tid har vist seg å øke nivåene av ROS, aldehyder og andre farlige forbindelser og kan Eller kan ikke gjenspeile de vanlige vaner til en e-sigarettbruker 5 . Puffvarigheten og total eksponeringstid kan justeres ved å endre koden som er lastet opp til mikrokontrolleren. Det bør også bemerkes at konsentrasjonen av nikotin i e-sigarettløsninger, samt spenningen til E-sigarettoppvarmingselementet, kan variere betydelig og bør tas i betraktning ved kalibrering av systemet.
En av de største fordelene ved dette eksponeringssystemet er dets allsidighet. Nesten alle merker av e-cig eller e-cig løsning kan brukes med dette systemet. Dette er en spesielt nyttig feaTure gitt at e-sigarettmarkedet nå inneholder over 400 merker og tusenvis av e-sigarettløsninger 13 . I tillegg er eksponeringssystemet kompatibelt med flere eksperimentelle endepunkter som muliggjør effekten av e-sigarett på ulike organsystemer og sykdomsprosesser som skal undersøkes. Vi anerkjenner også at det er flere begrensninger på dette eksponeringsparadigmet, som for eksempel metoden der dyrene blir utsatt for dampen. E-sigarettbrukere inhalerer direkte E-damp mens de i dette paradigmet passerer gnagere passivt. I tillegg vil gnagere også sannsynligvis absorbere forbindelser i dampen eller røyken ved andre veier ( dvs. direkte absorbering av huden og inntak i løpet av preening). Vi tror imidlertid at fordelene med eksponeringssystemet langt overveier begrensningene.
Samlet gir dette eksponeringsparadigmet konsekvent og klinisk relevant eksponering for eksponering av E-damp og sigarettrøyk, og kan hjelpeStøtte forskningsinnsatsen ved å fastslå skadelige helseeffekter av e-sigarett og sigarettrøyk.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingenting å avsløre.
Acknowledgments
Denne undersøkelsen ble gjort mulig ved Aortic Research Grant (University of Michigan) til Dr. Eliason. Forfatterne vil også gjenkjenne Nick Scott ved University of Michigan Plant Operations Sign og Graphics Department for å bistå med design og montering av sigarettbelysningsenheten.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| blu PLUS Rechargeable Kit | blu eCigs | N/A | |
| 1R6F Reference Cigarettes | Center for Tob Ref Prod UK | N/A | |
| Lexan Anesthesia Chamber 20 L | Jorgensen Laboratories | JOR265 | |
| Arduino UNO | Arduino | 2877 | |
| Diode Rectifier - 1 A; 50 V | Spark Fun | COM-08589 | |
| Resistor 10 KOhm 1/6th W PTH - 20 pack | Spark Fun | COM-11508 | |
| Electrolytic Decoupling Capacitors - 100 uF/25 V | Spark Fun | COM-00096 | |
| Solderless Plug-in BreadBoard | BusBoard Prototype Systems | BB400 | |
| Alligator-Clip Wires | BusBoard Prototype Systems | CA-M-20 | |
| ZipWire | BusBoard Prototype Systems | ZW-MM-10 | |
| Standard Fan 80 ST2 | Cooler Master | R4-S8R-20AK-GP | |
| ARIC 4" adjustable vent | Bestlouver | N/A | |
| ToxiPro Carbon Monoxide (CO) Monitor | Honeywell Analytics | 54-00-10316 | |
| ToxiPro Oxygen (O2) Monitor | Honeywell Analytics | 54-45-90-VD | |
| ToxiPro IQ Express Docking Station | Honeywell/Sperian Biosystems | 54-46-9100 | |
| Command Wall Hook Small Wire 6-Pack | 3M | N/A | |
| Micro Water/Air Pump | Xiamen Conjoin Electronics | CJWP40-A12A1 | |
| 1/4" Silicon Tubing | NewAge | 2801470-100 | |
| T Connector | Bel-Art Scienceware | F196060000 | |
| Plastic Whole Blood tube with spray-coated K2EDTA | Becton, Dickinson and Company | 367841 | |
| Cotinine ELISA kit | Calbiotech | CO096D |
References
- Schoenborn, C. A., Gindi, R. M. Electronic Cigarette Use Among Adults: United States, 2014 Key findings. NCHS. , (2014).
- Singh, T. Tobacco Use Among Middle and High School Students - United States, 2011-2015. MMWR. 65 (14), 361-367 (2016).
- Flora, J. W. Characterization of potential impurities and degradation products in electronic cigarette formulations and aerosols. Regul. Toxicol. Pharmacol: RTP. 74, 1-11 (2016).
- Tierney, P. A., Karpinski, C. D., Brown, J. E., Luo, W., Pankow, J. F. Flavour chemicals in electronic cigarette fluids. Tob. Control. , (2015).
- Sleiman, M. Emissions from Electronic Cigarettes: Key Parameters Affecting the Release of Harmful Chemicals. Environ. Sci. Technol. 50 (17), 9644-9651 (2016).
- Hwang, J. H. Electronic cigarette inhalation alters innate immunity and airway cytokines while increasing the virulence of colonizing bacteria. Int J Mol Med (Berlin, Germany). 94 (6), 667-679 (2016).
- Cheng, T.
- Etter, J. -F. A longitudinal study of cotinine in long-term daily users of e-cigarettes. Drug Alcohol Depend. 160, 218-221 (2016).
- Etter, J. -F. Levels of saliva cotinine in electronic cigarette users. Addiction. 109 (5), 825-829 (2014).
- Marsot, A., Simon, N. Nicotine and Cotinine Levels With Electronic Cigarette: A Review. Int. J. Toxicol. 35 (2), 179-185 (2016).
- Flouris, A. D. Acute impact of active and passive electronic cigarette smoking on serum cotinine and lung function. Inhal. Toxicol. 25 (2), 91-101 (2013).
- Bot, M. Plasma cotinine levels in cigarette smokers: impact of mental health and other correlates. Eur Addict Res. 20 (4), 183-191 (2014).
- Zhu, S. -H. Four hundred and sixty brands of e-cigarettes and counting: implications for product regulation. Tob. Control. 23, Suppl 3. 3-9 (2014).
- CH TECHNOLOGIES. Single Cigarette Smoking Machine SCSM-STEP. , Available from: http://chtechusa.com/products_tag_smoke_single-cigarette-CSM-SCSM.php (2016).
- SCIREQ. inExpose. , Available from: http://www.scireq.com/inexpose (2016).
- TSE Systems. Cigarette Smoke Generators. , Available from: http://www.tse-systems.com/products/inhalation/aerosol-vapor-generation/cigarette-smoke.htm (2016).
