Summary
En protokol til protein kvantificering i komplekse biologiske væsker ved hjælp af automatiserede immuno-MALDI (iMALDI) teknologi præsenteres.
Abstract
Massespektrometri (MS) er en af de mest almindeligt anvendte teknologier til kvantificering af proteiner i komplekse prøver, med fremragende assay specificitet som følge af direkte påvisning af masse-til-lade forholdet mellem hvert mål molekyle. Men MS-baseret proteomics, ligesom de fleste andre analytiske teknikker, har en bias i retning af måling af høj-overflod analysander, så det er en udfordring for at opnå registrering begrænser lav ng/ml eller pg/mL i komplekse prøver, og dette er koncentrationsområde for mange sygdom-relevante proteiner i biofluids såsom humant plasma. For at hjælpe med påvisning af lav-overflod analysander, er immuno-berigelse blevet integreret i analysen at koncentrere sig og rense analysand før MS måling, væsentligt forbedre assay følsomhed. I dette arbejde, er immuno - Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionisation (iMALDI) teknologien præsenteret for kvantificering af proteiner og peptider i biofluids, baseret på immuno-berigelse på perler, efterfulgt af MALDI-MS måling uden forudgående eluering. Anti-peptid antistoffer er functionalized på magnetiske perler, og inkuberes med prøver. Efter vask, perlerne overføres direkte på en MALDI target tallerken, og signalerne, der er målt ved en MALDI-tid for flyvning (MALDI-TOF) instrument efter matrix løsningen er blevet anvendt til perlerne. Forberedelse eksempelprocedure er forenklet i forhold til andre immuno-MS assays og MALDI måling er hurtig. Den hele prøveforberedelse er automatiseret med flydende håndtering system, med forbedret assay reproducerbarhed og højere overførselshastighed. I denne artikel, iMALDI analysen bruges til bestemmelse af peptid angiotensin jeg (Ang jeg) koncentration i plasma, der anvendes klinisk som udlæsning af plasma renin aktivitet for screening af primær aldosteronism (PA).
Introduction
Massespektrometri blevet et uundværligt værktøj i kvantitative proteomics. Massespektrometri kan bestemme masserne af target proteiner eller peptider, derfor opnåede analysand signaler kan være meget specifik i forhold til immunassays. To metoder, ioniserende stråling, electrospray og MALDI, er mest almindeligt anvendt til påvisning af proteiner og peptider1,2,3,4. En stor udfordring i MS-baseret protein kvantificering ligger i påvisning af lav-overflod proteiner i komplekse prøver på ng/mL eller pg/mL koncentrationer i overværelse af høj-overflod proteiner, og mange kandidat protein biomarkører fundet i humant plasma er inden for dette område5. Dette problem skyldes i vid udstrækning i sagens natur bredt dynamikområde og kompleksitet af den menneskelige proteom6.
For at overvinde udfordringerne påvisning, immuno-MS metoder er blevet udviklet for at berige target proteiner eller peptider fra prøven løsninger på en solid overflade, efterfulgt af eluering af analysander og MS måling7,8 , 9 , 10. gennem immuno-berigelse, analysander er renset fra komplekse prøver og derfor ion-undertrykkelse virkninger fra andre molekyler er minimeret. Blandt forskellige solid understøtter, er magnetiske perler i øjeblikket mest udbredt som de ikke har fordelene af høj antistof bindende kapacitet og nem håndtering. Magnetiske perler med forskellige functionalizations og størrelser er blevet udviklet og kommercialiseret for immunoprecipitation eksperimenter. Til dato, har immuno-berigelse på perler været forbundet med både electrospray Ionisation (ESI) og MALDI-MS til protein og peptid måling. Stabil isotop standarder og erobring af anti-peptid antistoffer (SISCAPA) teknologi, er proteiner i prøverne fordøjet, efterfulgt af inkubation med antistof-perler for immuno-berigelse. I "klassisk" SISCAPA erobrede proteotypic peptider elueres fra glasperler og målt af Liquid Chromatography-ESI-MS (LC-MS), eller ved direkte infusion ESI-flere reaktion monitorerings-MS (ESI-MRM-MS)11,12. Immuno-berigelse forbedret MRM assay følsomhed ved 3-4 ordrer størrelsesorden, at nå frem til lave ng/mL række13.
I forhold til electrospray-MS, MALDI-MS er hurtigere, og involverer ikke rengøring og re ækvilibrering LC kolonner så der er ingen fremførsel og forurening problemer, hvilket gør det mere velegnet til høj overførselshastighed studier14. Immuno-MALDI teknologi er blevet udviklet i vores laboratorium til at kombinere immuno-berigelse med MALDI-MS til følsom og specifik kvantificering af peptider og proteiner (baseret på kvantitering af proteotypic peptider)15,16 ,17. Perlerne er deponeret på en MALDI target plade efter immuno-berigelse, matrix løsningen føjes til perler, og pladen er klar til analyse af en MALDI-TOF-MS efter tørring. Eluering af peptider fra perlerne er ikke udføres som et separat trin, men affinitet-bundet analysander er elueret af MALDI matrix løsning, når det føjes til perle steder, derved forenkle forberedelsen af prøver og minimere prøve tab. IMALDI-teknologi har været anvendt i en række forskellige applikationer18,19, og for nylig har været automatiseret og bruges til at måle Angiotensin jeg (Ang jeg) til bestemmelse af plasma renin aktivitet (PRA)20. Denne protokol vil demonstrere den procedure, der anvendes til at udføre en automatiseret iMALDI assay. Tager PRA analysen som et eksempel, Inter dag CVs på mindre end 10% har opnået gennem automatisering, med mulighed for at måle 744 prøver pr. dag20.
IMALDI PRA analysen fremgår af håndskriftet ikke kræver protein fordøjelse, som target molekyle (Ang jeg) er et peptid med en molekylevægt på 1295.7 Da. I andre assays hvor protein fordøjelse er nødvendige og en peptid bruges som surrogat for intakt protein, skal den valgte peptid for iMALDI være unik og specifik for target proteinet, med en masse over 800 Da så at det nemt kan skelnes fra c hemical støj fra MALDI matrix løsning. Anti-peptid antistoffer er nødvendige for immuno-berigelsen af peptider. Protokol for en iMALDI analyse måling PRA består af fire trin: 1) generation af Ang jeg i humant plasma; 2) immuno-berigelse af Ang jeg bruger antistof-perler; 3) overførsel af perler til en MALDI target plade og tilføje matrix løsning; og 4) signal erhvervelse af en MALDI-TOF-MS og data analyse20.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
mængder af reagenserne beskrevet nedenfor er baseret på måling af 20 patient plasmaprøver. Protokollen præsenteres nedenfor følger retningslinjer for Universitet Victoria ' s menneskelige videnskabsetisk Komité.
1. generation af Ang jeg i humant Plasma
- tø plasmaprøver (≥ 200 µL) i et rum temperatur vand bad i 5 min, og derefter sætte prøverne på is indtil helt optøet.
- Overføre 200 µL af hver plasmaprøve manuelt at adskille wells af en 1,1 mL deep-godt plade (prøve plade), og der centrifugeres plade i en centrifuge for 10 min. ved 2 ° C og 1278 x g.
- Bruger en automatiseret flydende håndtering system til seriefremstillede fortyndes en 500 fmol/µL Ang I NAT standardopløsning for at forberede seks kalibrator løsninger med kylling æggehvide albumin (0,1, 0,2, 0,6, 1.9, 5.7, 17,2 fmol/µL).
- Pipette 200 µL af hver kalibrator til et godt og 125 µL af generation buffer til prøve plade.
NOTE: CEWA i phosphat bufferet saltvand (PBS) buffer skal være frisk fremstillede på dagen af forsøget. - Ved hjælp af en automatiseret væske håndtering system, i en ny plade mix 125 µL plasma supernatanten eller 125 µL af CEWA i PBS med 25 µL af Ang jeg generation buffer, som indeholder 1 M Tris, 0,2 mM ethylendiamintetra syre (EDTA) og 1 mM phenylmethylsulfonyl fluorid (PMSF).
Bemærk: Forberede Ang jeg generation buffer ved at blande en 1 M Tris/0,2 mM EDTA vandig buffer (justeres til pH 5,5 ved hjælp af eddikesyre) og en PMSF løsning (100 mM i methanol). Begge løsninger kan lagres til 1 måned på 4 ° C. Mix to løsninger på dagen af forsøget. - Automatisk overføre løsningerne til en 96-brønd plade, 3 gentagelser pr. løsning, 34 µL pr. brønd. Inkuber plade ved 37 ° C i 3 h.
2. Immuno-berigelse af Ang jeg bruger antistof perler
- konjugation af antistof på magnetiske Protein G perler
Bemærk: konjugation af antistof med perlerne er udført manuelt under 3 h Ang jeg generation periode på den dagen af forsøget. For andre analysander, konjugeret perlerne muligvis blive gemt i PBS buffer indeholdende 0.015% kæbe (PBSC) ved 4 ° C for tre måneder eller længere, afhængigt af den egenskaber og stabilitet af antistoffet.- Overføre 110 µL af perle gylle (nok til at måle 20 prøver og gør et 6-punkts standardkurven) ind i en 1,5 mL rør. Vaske perlerne syv gange med 1 mL 25% acetonitril/PBSC og tre gange med 1 mL af PBSC. Bruge en magnetisk stå for at sammenpresse perler mellem hver vask trin. Fjerne vaskebuffer efter den sidste Wash
Bemærk: Vask 7 gange med 25% er acetonitril/PBSC kritisk for at fjerne MS-uforenelige tilsætningsstoffer i perle gylle, såsom Tween-20. Hvis der er ingen sådanne tilsætningsstoffer i de valgte perler, denne omfattende vask trin muligvis ikke nødvendige. - Resuspend perlerne i 110 µL af PBSC, og tilføje 110 µL af anti-Ang jeg antistof (endelig-antistof koncentration: 100 µg/mL). Bland perler og løsning af pipettering, og derefter inkuberes dem ved stuetemperatur i 1 time, roterende på 8 rpm.
- Vaske perlerne 3 gange med 1 mL af PBSC, og pelleten i 1100 µL af PBSC.
Bemærk: Hvis nogen perle løsning er strømmet ind i hætten af røret under inkubation, spin ned løsning ved hjælp af en benchtop centrifuge på 2680 x g. - Overføre perle løsning manuelt til en 96-brønd plade (bead standard plade). Bruge automatiserede væsken håndtering system til delprøve perler til den samme 96-brønd plade, 120 µL pr. brønd.
- Overføre 110 µL af perle gylle (nok til at måle 20 prøver og gør et 6-punkts standardkurven) ind i en 1,5 mL rør. Vaske perlerne syv gange med 1 mL 25% acetonitril/PBSC og tre gange med 1 mL af PBSC. Bruge en magnetisk stå for at sammenpresse perler mellem hver vask trin. Fjerne vaskebuffer efter den sidste Wash
- Immuno-berigelse på perlerne
- efter 3 h Ang jeg generation periode, inkubation pladen anbringes på isbad i 10 min at opsige generation af Ang I.
- Automatisk fortyndes SIS peptid stamopløsning (10 pmol/μl) 100 med PBS buffer, og yderligere automatisk alikvot stabile isoptope standard peptid fortynding til en 96-brønd PCR plade. Overføre 1,5 µL af en stabil isotop standarder (SIS) peptid løsning (indeholdende 100 fmol) til hvert hul i inkubation plade og bland det med plasmaprøver eller CEWA i PBS buffere.
- Automatisk overføre indholdet af inkubation plade til perle løsning, 10 mL pr. brønd, bland.
- Ruger plade ved 4 ° C i 1 time mens roterende på 8 rpm.
- Vaske perlerne tre gange automatisk med 5 mM (AmBic) ammoniumbicarbonatopløsning, 100 µL pr. brønd pr. vask. Efter den sidste vask, resuspend perlerne i 7 µL af 5 mM AmBic løsning i hver brønd. Bruge en magnet til at trække perlerne til bunden efter de sidste Wash
3. Overførsel af perler på et MALDI Target plade og tilføje Matrix løsning
- overføre 7 µL af perle gylle automatisk på en MALDI target tallerken med en spot størrelse på 2.600 µm. Lad perlerne udtørre.
Bemærk: En lille USB-drevet fan kan anvendes til at fremskynde perle tørring proces. - Automatisk tilføje 2 µL af α-cyano-4-hydroxycinnamic syre (HCCA)-matrix løsning (som indeholder 3 mg/mL HCCA, 1,8 mg/mL ammonium citrat, 70% acetonitril og 0,1% trifluoreddikesyre) fra matrix godt på hver prøve spot på target plade .
4. Signal erhvervelse af en MALDI-TOF-MS og dataanalyse
- Analyze prøven steder med en MALDI-TOF instrument ved hjælp af positive reflektor tilstand. Udføre interne kalibrering, data gulvafslibning og baseline subtraktion automatisk med leverandørspecifikke software.
Bemærk: Den tilstand (positiv/negativ, lineære/reflektor) valgt for MALDI-TOF måling afhænger af målet peptider eller proteiner. - Beregn relative respons-forholdet (Nat/SIS intensitet ratio) og sammenligne det med standardkurven til at bestemme af Ang koncentrationen i hver prøve. Beregne PRA ved hjælp af ligning (1), hvor Δt Ang jeg generation repræsenterer den tid, der bruges til generation af Ang I.
PRA = [Ang jeg] / Δt Ang jeg generation (1)
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
En automatiseret iMALDI procedure til måling af Ang jeg er vist i figur 1. Target peptider (enten endogene peptider eller peptider fra fordøjede proteiner) er beriget på anti-peptid magnetiske perler, og derefter perlerne er overført til en target plade for MALDI måling. Hele proceduren er forenklet i forhold til andre immuno-MS teknologier, der kræver yderligere peptid eluering trin. Automatisering af iMALDI analysen giver mulighed for høj overførselshastighed analyse af et stort antal prøver med en Inter dag variationskoefficient (CV) under 10% 20. Repræsentative spectra opnået ved at måle Ang jeg i humant plasmaprøver er vist i figur 2. SIS peptider funktion som en intern standard for peptid kvantitering. Korrelation af PRA værdier fra 188 patient prøver med automatiserede iMALDI assay med PRA værdier opnået ved hjælp af en klinisk LC-MS/MS procedure17 er vist i figur 3. De to metoder har en korrelationskoefficient på 0,98; forskellen mellem pisterne kan være forårsaget ved brug af forskellige interne standarder i de to metoder, eller ved brug af forskellige antistoffer i iMALDI procedure20. Det lineære område af analysen og assay præcision er vist i figur 4 og figur 5.
Figur 1: Proces flow skematisk af en automatiseret iMALDI PRA assay. Tilpasset fra reference20, med tilladelse. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: Repræsentative spektre af NAT og SIS Ang jeg peptider målt fra en menneskelig plasmaprøve.
Figur 3: Korrelation af PRA værdier målt ved iMALDI og ved LC-MS/MS fra 188 patientprøver. Tilpasset fra reference20, med tilladelse.
Figur 4: Lineær intervaller af iMALDI PRA assay i både (A) reflektor og (B) lineær tilstand. Tilpasset fra reference20, med tilladelse. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 5: Intradag præcision (A) og interday precision (B) af iMALDI PRA assays på plasmapooler med lav, mellem og høj PRA værdier. Tilpasset fra reference20, med tilladelse. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Sammenlignet med konventionelle MS-baseret protein kvantificering, bruger iMALDI antistoffer til at berige analysander og rense dem fra komplekse prøver, derfor gør det muligt at kvantificere proteiner eller peptider ved lave koncentrationer. Et kritisk trin i iMALDI protokol er immuno-berigelse af target peptider. Til dette formål, skal være markeret antistoffer med høj specificitet og affinitet. I SISCAPA, er blevet rapporteret, at antistof tilhørsforhold på 10-9 M eller bedre ville være nødvendige for at opnå høj følsomhed på lav ng/mL21. Desuden er perler med høj antistof bindende kapacitet foretrukket for optimal berigelse.
Det er også vigtigt at generere relativt "rene" spectra for målmolekyler med minimal baggrundsværdier. Høj signal-støj-forhold opnås gennem omfattende perle vask efter trinnet immuno-berigelse. Også, har vi konstateret, at vaske perle steder på target plade efter tilføjelse og tørring matrix-løsning kan reducere støj signaler og dermed forbedre signal-støj-forhold.
IMALDI PRA analysen fremgår dette arbejde kræver ikke trinene proteolyse som target molekyle Ang jeg er et peptid. For at kvantificere proteinmolekyler i en stikprøve, er protein typisk fordøjet i peptider før immuno-berigelse, selvom for epitop-indeholder peptider, fordøjelsen kan udføres på erobrede protein22,23. I dette tilfælde kan en eksisterende protein fordøjelse protokol indsættes nemt i iMALDI arbejdsproces. Afhængigt af fordøjelsen buffer, er en udvanding trin påkrævet før erobringen af peptider på perler, at undgå interferens med antistof-peptid bindende.
I lighed med andre immuno-MS metoder, produktion af antistoffer, anti-peptid er en stor udfordring i udviklingen af iMALDI assays. For nylig, Triple X Proteomics teknologi er blevet udviklet for at producere affinitet bindemidler, som kan målrette flere peptider pr. binder24. Dette kan reducere udgifterne til anti-peptid antistoffer, og vil lette udviklingen af samtidige multipleksede assays ved hjælp af en enkelt inkubation. Også antistof fragmenter25 eller syntetiske aptamers26 kunne være alternativer til brug af intakt antistoffer og ville have fordel af lettere produktion. Syntetiske aptamers er blevet rapporteret som viser baggrunden lavere end intakt antistoffer når anvendes til affinitet-berigelse26.
iMALDI teknologi kombinerer fordelene ved immunassays med MALDI massespektrometri, muliggør hurtige, høj overførselshastighed protein/peptid analyse i en lang række komplekse prøver, med høj følsomhed og specificitet. I modsætning til andre metoder til immuno-MS, efter immuno-capture, målet peptider ikke er elueret i røret, men perlerne regnskabsmæssige analysander overføres på MALDI target tallerken for MS-analyse, således at man undgår tab af peptider på grund af deres adsorption til plast rør. I forhold til udbredte proteom værktøjer som vestlige skamplet eller ELISA, er kun én antistof påkrævet i iMALDI, hvilket reducerer assay udviklingstid og omkostninger. Den nedre grænse for påvisning, vi har opnået i PRA assay er sammenlignelige til konventionelle ELISA og godt inden for de fysiologiske interval. Antistoffet og masse til ladning forhold giver en dobbelt udvælgelsesproces, der sikrer høj specificitet af analysen. Anvendelser af iMALDI er ikke begrænset til PRA assays, men kan anvendes til kvantitering af ethvert protein udtryk og endda kvantificering af protein ændring i komplekse prøver. Især kunne automatiseret høj overførselshastighed iMALDI være et stærkt klinisk værktøj til registrering og validering af protein biomarkører i en lang række sygdomme, på grund af tilstedeværelsen af benchtop MALDI instrumenter, der i øjeblikket anvendes i klinikker for bakterielle identifikation.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
C.H.B har patent på iMALDI teknologien.
Acknowledgments
Vi takker den finansielle støtte fra genom Canada og genom British Columbia for operationer (204PRO) og teknologiudvikling (214PRO) gennem genom innovationer netværk (GIN). Vi takker Drug Discovery Platform på forskningsinstitut for McGill University Health Center for brugen af MALDI-TOF instrument til at filme. H.L. er taknemmelig for støtte fra en postdoc stipendium fra det nationale Science and Engineering Research Rådet i Canada (NSERC). C.H.B er taknemmelig for støtte fra forkant Endowment Fund (LEEF). C.H.B. er taknemmelig for støtte fra Segal McGill stol i molekylær onkologi på McGill universitetet (Montreal, Quebec, Canada). M.X.C. og C.H.B. er taknemmelig for støtte fra Warren Y. Soper Charitable Trust og Alvin Segal Family Foundation til den jødiske General Hospital (Montreal, Quebec, Canada).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Healthy control human plasma | Bioreclamation | HMPLEDTA2 | |
| Ammonium bicarbonate | Sigma Aldrich | 09830 | |
| Ammonium citrate dibasic | Sigma Aldrich | 09833 | |
| CHAPS (>=98%) | Sigma Aldrich | C9426 | |
| Albumin from chicken egg white (>98%) | Sigma Aldrich | A5503 | |
| Ethylenediaminetetraacetic acid | Sigma Aldrich | EDS | |
| Alpha-cyano-4-hydroxycinnamic acid | Sigma Aldrich | 70990 | |
| Phosphate buffered saline | Sigma Aldrich | P4417 | |
| Phenylmethanesulfonyl fluoride | Sigma Aldrich | 78830 | |
| Trifluoroacetic acid | Thermo Fisher Scientific | 85172 | LC-MS grade |
| acetonitrile | Fluka | 34967 | LC-MS grade |
| water | Fluka | 39253 | LC-MS grade |
| acetic acid | Fluka | 320099 | LC-MS grade |
| Tris(hydroxymethyl)aminomethane | Roche Diagnostics | 3118169001 | |
| Dynabeads Protein G magnetic beads | Thermo Fisher Scientific | 10003D | 2.8 μm, 30 mg/mL |
| anti-Ang I goat polyclonal antibody | Santa Cruz Biotechnology | sc-7419 | |
| Nat and SIS Ang I | synthesized at the University of Victoria-Genome BC Proteomics Centre | ||
| Automated liquid handling system | Agilent | 16050-102 | Agilent Bravo robotic workstation |
| Magnet | Thermo Fisher Scientific | 12321D | Invitrogen DynaMag-2 magnet |
| Tube rotator | Theromo Scientific | 400110Q | Labquake Tube Rotator |
| Magnet | Thermo Fisher Scientific | 12027 | DynaMag-96 side skirted magnet |
| Magnet | VP Scientific | 771RM-1 | used to pull the beads to the bottom of the well |
| MALDI-TOF | Bruker | Bruker Microflex LRF instrument |
References
- Aebersold, R., Mann, M.
- Nicol, G. R., et al. Use of an Immunoaffinity-Mass Spectrometry-based Approach for the Quantification of Protein Biomarkers from Serum Samples of Lung Cancer Patients. Mol. & Cell. Proteomics. 7 (10), 1974-1982 (2008).
- Webster, J., Oxley, D. Chemical Genomics and Proteomics: Reviews and Protocols. Zanders, E. D. , Humana Press. 227-240 (2012).
- Yergey, A. L., et al. De novo sequencing of peptides using MALDI/TOF-TOF. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 13 (7), 784-791 (2002).
- Anderson, L. Six decades searching for meaning in the proteome. J. Proteomics. 107, 24-30 (2014).
- Landegren, U., et al. Opportunities for Sensitive Plasma Proteome Analysis. Anal. Chem. 84 (4), 1824-1830 (2012).
- Guo, A., et al. Immunoaffinity Enrichment and Mass Spectrometry Analysis of Protein Methylation. Mol. & Cell. Proteomics. 13 (1), 372-387 (2014).
- Florentinus-Mefailoski, A., Soosaipillai, A., Dufresne, J., Diamandis, E. P., Marshall, J. G. An enzyme-linked immuno-mass spectrometric assay with the substrate adenosine monophosphate. Anal. Bioanal. Chem. 407 (4), 1119-1130 (2015).
- Fredolini, C., et al.
- Tran, J. C., et al. Automated Affinity Capture and On-Tip Digestion to Accurately Quantitate in Vivo Deamidation of Therapeutic Antibodies. Anal. Chem. , (2016).
- Razavi, M., Leigh Anderson, N., Pope, M. E., Yip, R., Pearson, T. W. High precision quantification of human plasma proteins using the automated SISCAPA Immuno-MS workflow. N. Biotechnol. 33 (5 Part A), 494-502 (2016).
- Razavi, M., et al. High-Throughput SISCAPA Quantitation of Peptides from Human Plasma Digests by Ultrafast, Liquid Chromatography-Free Mass Spectrometry. J. Proteome Res. 11 (12), 5642-5649 (2012).
- Anderson, N. L., et al. SISCAPA Peptide Enrichment on Magnetic Beads Using an In-line Bead Trap Device. Mol. & Cell. Proteomics. 8 (5), 995-1005 (2009).
- Parker, C. E., Pearson, T. W., Anderson, N. L., Borchers, C. H. Mass-spectrometry-based clinical proteomics - a review and prospective. The Analyst. 135 (8), 1830-1838 (2010).
- Reid, J. D., Holmes, D. T., Mason, D. R., Shah, B., Borchers, C. H. Towards the Development of an Immuno MALDI (iMALDI) Mass Spectrometry Assay for the Diagnosis of Hypertension. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 21 (10), 1680-1686 (2010).
- Mason, D. R., Reid, J. D., Camenzind, A. G., Holmes, D. T., Borchers, C. H. Duplexed iMALDI for the detection of angiotensin I and angiotensin II. Methods. 56 (2), 213-222 (2012).
- Camenzind, A. G., vander Gugten, J. G., Popp, R., Holmes, D. T., Borchers, C. H. Development and evaluation of an immuno-MALDI (iMALDI) assay for angiotensin I and the diagnosis of secondary hypertension. Clin. Proteomics. 10 (1), 20 (2013).
- Jiang, J., et al. Development of an immuno tandem mass spectrometry (iMALDI) assay for EGFR diagnosis. Proteomics Clin Appl. 1, (2007).
- Jiang, J., Parker, C. E., Fuller, J. R., Kawula, T. H., Borchers, C. H. An Immunoaffinity Tandem Mass Spectrometry (iMALDI) assay for Detection of Francisella tularensis. Analytica chimica acta. 605 (1), 70-79 (2007).
- Popp, R. An automated assay for the clinical measurement of plasma renin activity by immuno-MALDI (iMALDI). Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Proteins and Proteomics. 1854 (6), 547-558 (2015).
- Schoenherr, R. M., et al. Automated screening of monoclonal antibodies for SISCAPA assays using a magnetic bead processor and liquid chromatography-selected reaction monitoring-mass spectrometry. J Immunol Methods. 353 (1-2), 49-61 (2010).
- Borchers, C. H. Methods of quantitation and identification of peptides and proteins. US patent. , US 7846748 B2 (2010).
- Borchers, C. H. Methods of quantitation and identification of peptides and proteins. Canadian patent CA. , CA 2507864 C (2011).
- Weiß, F., et al. Catch and measure-mass spectrometry-based immunoassays in biomarker research. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Proteins and Proteomics. 1844 (5), 927-932 (2014).
- Nelson, A. L. Antibody fragments: Hope and hype. mAbs. 2 (1), 77-83 (2010).
- Gupta, V., et al. An evaluation of an aptamer for use as an affinity reagent with MS: PCSK9 as an example protein. Bioanalysis. 8 (15), 1557-1564 (2016).
