Summary
En protokoll for protein kvantifiseringen i komplekse biologiske væsker ved hjelp av automatiserte immuno-MALDI (iMALDI) teknologi er presentert.
Abstract
Massespektrometri (MS) er en av de mest brukte teknologiene for kvantifisere proteiner i komplekse prøver, med utmerket analysen spesifisitet som følge av direkte deteksjon av masse-til-lade forholdet mellom hvert mål molekylet. Men baserte Proteomikk, som de fleste andre analytiske teknikker, har en bias mot måle høy-overflod analytter, så det er utfordrende for å oppnå oppdagelsen begrenser lav ng/ml eller pg/mL i komplekse eksempler, og dette er området konsentrasjon for mange sykdom relevante proteiner i biofluids som humant plasma. For å bistå i deteksjon av lav-overflod analytter, har immuno-berikelse blitt integrert i analysen å konsentrere seg og rense analytt før MS måling, betydelig bedre analysen følsomhet. I dette arbeidet, er negative Matrix-Assisted Laser desorpsjon/Ionization (iMALDI) teknologien presentert for kvantifisering av proteiner og peptider i biofluids, basert på immuno-berikelse på perler, etterfulgt av MALDI-MS måling uten forutgående elueringsrør. Anti-peptid antistoffer er functionalized på magnetiske perler, og inkubert med eksempler. Etter vasking, perler overføres direkte til en MALDI mål plate, og signalene er målt ved en MALDI-tid på fly (MALDI-TOF) instrument etter matrix løsningen brukes på perlene. Eksempel forberedelse prosedyren er forenklet sammenlignet med andre immuno-MS analyser, og MALDI målingen er rask. Hele utvalget forberedelsene er automatisert med en væske håndteringssystem, med forbedret analysen reproduserbarhet og høyere gjennomstrømming. I denne artikkelen, iMALDI analysen er brukt for å bestemme peptid angiotensin jeg (Ang jeg) konsentrasjon i plasma, som brukes klinisk som avlesning plasma renin aktivitet for screening av primære aldosteronism (PA).
Introduction
Massespektrometri har blitt et uunnværlig verktøy i kvantitative Proteomikk. Massespektrometri kan bestemme massene av målet proteiner eller peptider, innhentet analytt signalene kan derfor være svært spesifikke forhold til immunanalyser. To ionisering metoder, electrospray og MALDI, brukes vanligvis for å oppdage proteiner og peptider1,2,3,4. En stor utfordring i baserte protein kvantifisering ligger i deteksjon av lav-overflod proteiner i komplekse eksempler på ng/mL eller pg/mL konsentrasjonen i nærvær av høy-overflod proteiner, og mange kandidat protein biomarkers i humant plasma er innenfor dette området5. Dette problemet skyldes i stor grad den iboende bredt dynamisk område og kompleksiteten av menneskelig proteom6.
For å overvinne disse oppdagelsen utfordringene, immuno-MS metoder har blitt utviklet for å berike målet proteiner eller peptider fra eksempel løsninger på en solid overflate, etterfulgt av elueringsrør analytter og MS måling7,8 , 9 , 10. gjennom immuno-berikelse, analytter er renset fra komplekse eksempler og derfor ion-undertrykking effekten fra andre molekyler er minimert. Blant ulike solid støtter, er magnetiske perler for tiden mest brukt som de har fordelene av høy antistoff innbindingen behandlingskapasitet og bevegelighet. Magnetiske perler med forskjellige functionalizations og størrelser er utviklet og kommersialisert for immunoprecipitation eksperimenter. Hittil har immuno-berikelse på perler, tilkobles med både electrospray ionization (ESI) og MALDI-MS for protein og peptid måling. Stabil isotop standarder og fangst av anti-peptid antistoffer (SISCAPA) teknologi, er proteiner i prøvene fordøyd, etterfulgt av inkubasjon med antistoff perler for immuno-berikelse. I "klassisk" SISCAPA, er fanget proteotypic peptidene elut fra perler, og målt av flytende kromatografi-ESI-MULTIPLE Sclerosis (LC-MS), eller ved direkte infusjon ESI-flere reaksjon overvåking-MS (ESI-MRM-MS)11,12. Immuno-berikelse forbedret MRM analysen følsomheten av 3-4 størrelsesordener, nådde den lave ng/mL utvalg13.
Sammenlignet med electrospray-MULTIPLE Sclerosis, MALDI-MS er raskere, og innebærer ikke rengjøring og re balanse av LC kolonner slik at det ikke er noen carryover og forurensning problemer, noe som gjør det mer egnet for høy gjennomstrømming studier14. Immuno-MALDI teknologi har blitt utviklet i vårt laboratorium kombinere immuno-berikelse med MALDI-MS for sensitive og bestemt kvantifisering av peptider og proteiner (basert på kvantifisering av proteotypic peptider)15,16 ,17. Etter immuno-berikelse, perler settes på en MALDI mål plate matrix legges til perler og platen er klar for analyse av en MALDI-TOF-MS etter tørking. Elueringsrør av peptider fra perlene utføres ikke som et separat trinn, men affinitet-bundet analytter er elut av MALDI matrise løsningen når det legges til de perle flekkene, og dermed forenkle eksempel utarbeidelsen og minimere eksempel tap. IMALDI teknologien har vært brukt i en rekke programmer18,19, og nylig har vært automatisert og brukes for å måle Angiotensin jeg (Ang jeg) for å bestemme plasma renin aktivitet (PRA)20. Denne protokollen vil demonstrere prosedyren for å utføre automatiserte iMALDI analysen. Tar PRA analysen som et eksempel, mellom dag CVs på mindre enn 10% er oppnådd gjennom automatisering, med evne å måle 744 samplinger dag20.
IMALDI PRA analysen i dette manuskriptet krever ikke protein fordøyelse, som mål molekylet (Ang jeg) er et peptid med en molekylvekt på 1295.7 Da. I andre analyser der protein fordøyelse er nødvendig og et peptid brukes som surrogat for intakt protein, bør den valgte peptid for iMALDI være unike og spesielle mål protein, med en masse over 800 Da slik at det lett kan skilles fra c hemical støy fra MALDI matrise løsning. Anti-peptid antistoffer kreves for immuno-anriking av peptider. Protokollen for iMALDI analysen måle PRA består av fire trinn: 1) generasjon av Ang I humant plasma; 2) immuno-berikelse på Ang jeg bruker antistoff perler; 3) overføring av perler til en MALDI mål plate og legge matrix løsning; og 4) signal oppkjøpet av en MALDI-TOF-MULTIPLE Sclerosis og data analyse20.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
mengder reagensene beskrevet nedenfor er basert på måling av 20 pasienten plasmaprøver. Protokollen presentert nedenfor følger retningslinjene i University of Victoria ' s menneskelige forskning etikk.
1. generasjon av Ang I humant Plasma
- tine plasmaprøver (≥ 200 µL) i et rom temperatur vann bad for 5 minutter, og deretter sette prøvene på is inntil helt tint.
- Overføre 200 µL av hver plasmaprøve manuelt å skille brønner av en 1.1 mL dyptgående brønn plate (eksempel plate), og sentrifuge platen i en centrifuge for 10 min 2 ° C og 1278 x-g.
- Bruker en automatisert væske håndteringssystem å serielt fortynne en 500 fmol/µL Ang jeg NAT standard løsning å forberede seks kalibrator løsninger med kylling egg hvit albumin (0,1, 0,2, 0,6, 1,9, 5.7, 17.2 fmol/µL).
- Pipette 200 µL av hver kalibratoren til et godt og 125 µL av generasjon buffer eksempel platen.
Merk: CEWA i fosfat bufrede saltvann (PBS) bufferen må være nylagde ved eksperimentet. - Bruker en automatisert væske håndteringssystem, i en ny plate blande 125 µL av plasma supernatant eller 125 µL av CEWA på PBS med 25 µL av Ang jeg generasjon buffer, som inneholder 1 M Tris 0.2 mM ethylenediaminetetraacetic syre (EDTA) og 1 mM phenylmethylsulfonyl fluor (PMSF).
Merk: Forberede på Ang jeg generasjon bufferen ved å blande en 1 M Tris/0.2 mM EDTA vandig buffer (justere pH 5.5 med eddiksyre) og en PMSF løsning (100 mM i metanol). Begge løsninger kan lagres til 1 måneden på 4 ° C. Mix to løsninger på dagen for eksperimentet. - Automatisk overføre løsninger i en 96-brønns plate, 3 gjentak per løsning, 34 µL per brønn. Inkuber platen ved 37 ° C i 3 h.
2. Immuno-berikelse på Ang jeg bruker antistoff perler
- Bøyning av antistoff på magnetiske Protein G perler
Merk: Bøyning av antistoffer med perler utføres manuelt under 3 h Ang jeg generasjon periode på den dag av eksperimentet. For andre analytter kunne konjugert perlene lagres i PBS buffer inneholder 0.015% CHAPS (PBSC) på 4 ° C i tre måneder eller lenger, avhengig av egenskapene og stabilitet av antistoffer.- Overføre 110 µL av perle slurry (nok for å måle 20 prøver og gjør en 6-punkts standardkurve) i en 1,5 mL tube. Vask perlene sju ganger med 1 mL av 25% acetonitrile/PBSC, og tre ganger med 1 mL av PBSC. Bruk en magnetisk stand til pellets perlene mellom hver vask trinn. Fjerne vaskebuffer etter den siste Wash
Merk: Vask 7 ganger med 25% er acetonitrile/PBSC avgjørende for å fjerne MS-kompatibel tilsetningsstoffer i den perle slurry, som Tween-20. Hvis det er ingen slike tilsetningsstoffer i valgte perler, dette omfattende vask trinnet ikke er nødvendig. - Resuspend perler i 110 µL av PBSC, og Legg til 110 µL av anti-Ang jeg antistoff (siste antistoff konsentrasjon: 100 µg/mL). Bland perler og løsning av pipettering og deretter ruge dem ved romtemperatur 1t, roterende 8 RPM.
- Vask perlene 3 ganger med 1 mL av PBSC og resuspend i 1100 µL av PBSC.
Merk: Hvis noen perle løsning har strømmet inn i hetten av rør under inkubasjonen, spinne ned løsningen ved å benytte en Borstemmaskin sentrifuge på 2680 x g. - Overføre perle løsningen manuelt til en 96-brønns plate (perle standard plate). Bruke automatisert væsken håndteringssystem til aliquot perler av samme 96-brønns platen, 120 µL per brønn.
- Overføre 110 µL av perle slurry (nok for å måle 20 prøver og gjør en 6-punkts standardkurve) i en 1,5 mL tube. Vask perlene sju ganger med 1 mL av 25% acetonitrile/PBSC, og tre ganger med 1 mL av PBSC. Bruk en magnetisk stand til pellets perlene mellom hver vask trinn. Fjerne vaskebuffer etter den siste Wash
- Immuno-berikelse på perlene
- etter den 3 h Ang jeg generasjon periode, plassere inkubasjon platen på is 10 min å avslutte generering av Ang I.
- Automatisk fortynne SIS peptid lagerløsning (10 pmol/μL) 100-fold med PBS buffer, og videre automatisk aliquot stabile isoptope standard peptid fortynning til en 96-brønns PCR plate. Overføre 1.5 µL av en stabil isotop standarder (SIS) peptid løsning (inneholder 100 fmol) i hver brønn av inkubasjon plate og bland det med plasmaprøver eller CEWA i PBS buffere.
- Automatisk overføre innholdet i inkubasjon platen til perle løsningen, 10 mL per brønn, bland.
- Ruge platen ved 4 ° C 1t mens rotere på 8 rpm.
- Vask perlene tre ganger automatisk med 5 mM ammonium bikarbonat (AmBic) løsning, 100 µL per brønn per vask. Etter siste vask, resuspend perler i 7 µL av 5 mM AmBic løsning i hver brønn. Bruk en magnet for å trekke perler nederst etter den siste Wash
3. Overføring av perler på en MALDI mål Plate og legge Matrix løsning
- overføre 7 µL av perle gjødsel automatisk til en MALDI mål plate med en størrelsen på 2600 µm. La perlene tørke ut.
Merk: En liten USB-drevet fan kan brukes til å akselerere perlen tørking prosessen. - Legg 2 µL av α-cyano-4-hydroxycinnamic syre (HCCA)-matrise løsning (inneholder 3 mg/mL HCCA, 1,8 mg/mL ammonium citrate, 70% acetonitrile og 0,1% trifluoroacetic acid) fra matrisen godt på hvert utvalg flekk på målet platen .
4. Signal oppkjøpet av en MALDI-TOF-MULTIPLE Sclerosis og dataanalyse
- analyser prøven flekker med en MALDI-TOF instrument med positiv reflektor modus. Utføre intern kalibrering, data utjevning og planlagte subtraksjon automatisk med leverandørspesifikke programvare.
Merk: (Positive/negative, lineær/reflektor) valgt modus for MALDI-TOF måling, avhenger av målet peptider eller proteiner. - Beregne relative svar forholdet (Nat/SIS intensitet ratio) og sammenligne det standardkurven å finne ut av på Ang jeg konsentrasjon i hver prøve. Beregne PRA hjelp ligning (1), der Δt Ang jeg generasjon representerer tiden som brukes for generering av Ang I.
PRA = [Ang jeg] / Δt Ang jeg generasjon (1)
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
En automatisert iMALDI prosedyre for å måle Ang jeg er vist i figur 1. Målet peptider (endogene peptider eller peptider fra fordøyd proteiner) er beriket på anti-peptid magnetiske perler, og så perler er overført til en mål-plate for MALDI måling. Hele prosedyren er forenklet sammenlignet med andre immuno-MS teknologier som krever ekstra peptid elueringsrør trinnene. Automatisering av iMALDI analysen gir høy gjennomstrømming analyse av et stort antall prøver med en Inter dag variasjonskoeffisienten (CV) under 10% 20. Representant spectra ved å måle Ang I humant plasmaprøver er vist i figur 2. Funksjonen SIS peptider som interne standard for peptid kvantifisering. Sammenheng med PRA verdier fra 188 pasientprøvene oppnådd med automatiserte iMALDI analysen med PRA verdier hentes ved å bruke en klinisk LC--MS-/ MS prosedyren17 vises i Figur 3. To metoder har en korrelasjonskoeffisienten til 0.98; forskjellen mellom bakkene kan skyldes bruk av ulike interne standarder i to metoder, eller ved bruk av forskjellige antistoffer i iMALDI prosedyre20. Lineær området med analysen eller analysen presisjon er vist i Figur 4 og figur 5.
Figur 1: Prosessen flyt skjematisk av automatiserte iMALDI PRA analysen. Tilpasset fra referanse20, med tillatelse. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2: Representant spektra av NAT og SIS Ang jeg peptider målt fra en menneskelig plasmaprøve.
Figur 3: Sammenheng av PRA verdier målt ved iMALDI og LC--MS-/ MS fra 188 pasientprøvene. Tilpasset fra referanse20, med tillatelse.
Figur 4: Lineær verdiområder iMALDI PRA analysen både (A) reflektor og (B) lineær modus. Tilpasset fra referanse20, med tillatelse. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 5: Intradag presisjon (A) og interday presisjon (B) av iMALDI PRA analyser på plasma bassenger med lav, middels og høy PRA verdier. Tilpasset fra referanse20, med tillatelse. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Sammenlignet med konvensjonelle baserte protein kvantifisering, bruker iMALDI antistoffer til å berike analytter og renser dem fra komplekse prøver, derfor gjør det mulig å kvantifisere proteiner eller peptider i lave konsentrasjoner. En avgjørende skritt i iMALDI protokollen er immuno-anriking av målet peptider. For dette formålet, skal antistoffer med stor detaljrikdom og affinitet velges. I SISCAPA, har det blitt rapportert at antistoff slektskap på 10-9 M eller bedre ville være nødvendig for å oppnå høy følsomhet på lav ng/mL21. I tillegg foretrekkes perler med høy antistoff innbindingen behandlingskapasitet for optimal berikelse.
Det er også viktig å generere relativt "ren" spectra for målmolekyler med minimal bakgrunn nivåer. Høy signal-til-støy-forhold kan oppnås gjennom omfattende perle vaske etter immuno-berikelse trinn. Vi har også funnet at vaske perle flekker på målet platen etter tilføyer og tørking matrix løsningen kan redusere støy signaler og dermed forbedre signal-til-støy-forhold.
IMALDI PRA analysen i dette arbeidet krever ikke proteolyse trinnene, som mål molekylet Ang er et peptid. For å kvantifisere protein molekyler i en prøve, er protein vanligvis fordøyd i peptider før immuno-berikelse, men for epitope inneholder peptider, fordøyelsen kan utføres på fanget protein22,23. I dette tilfellet kan en eksisterende protein fordøyelse protokoll lett settes inn i iMALDI arbeidsflyten. Avhengig av bufferen for fordøyelsen kan en avsalting trinn være nødvendig før opptak av peptider på perler, å unngå interferens med antistoff-peptid bindingen.
I likhet med andre immuno-MS metoder, produksjon av anti-peptid antistoffer er en stor utfordring i utviklingen av iMALDI analyser. Nylig er Triple X Proteomikk teknologi utviklet for å produsere affinitet bindemidler som kan målrette flere peptider per dokumentordner24. Dette kan redusere kostnadene for anti-peptid antistoffer og vil lette utviklingen av samtidige multiplex analyser ved hjelp av en enkelt inkubasjon. Også antistoff fragmenter25 eller syntetisk aptamers26 kunne alternativer til bruk av intakt antistoffer og kunne ha nytte av enklere produksjon. Syntetisk aptamers har blitt rapportert som viser lavere bakgrunn nivåer enn intakt antistoffer når det brukes affinitet-berikelse26.
iMALDI teknologi kombinerer fordelene av immunanalyser med MALDI massespektrometri, muliggjør rask, høy gjennomstrømming protein/peptid analyse i en rekke komplekse eksempler, med høy sensitivitet og spesifisitet. I motsetning til andre immuno-MS metoder, unngå etter immuno-fangst, målet peptider ikke er elut i røret, men perlene bærer analytter overføres til MALDI målet platen for MS-analyse, dermed tap av peptider på grunn av deres adsorpsjon til plast rør. Sammenlignet med brukte proteomic verktøy som western blot eller ELISA, kreves eneste antistoff i iMALDI, redusere analysen utviklingstid og kostnader. Nedre grense for påvisning vi har innhentet i PRA analysen er sammenlignbare til konvensjonelle ELISA, og godt innenfor fysiologiske rekkevidde. Antistoffer og masse-for-avgift forholdet gir en dobbel utvelgelsesprosess, som sikrer høy spesifisitet av analysen. Anvendelser av iMALDI er ikke begrenset til PRA analyser, men kan brukes for kvantifisering av et protein uttrykk og selv kvantifisering av protein endring i komplekse eksempler. Spesielt kan den automatiserte høy gjennomstrømming iMALDI være et kraftig klinisk verktøy for oppdagelsen og validering av protein biomarkers i en rekke sykdommer, på grunn av tilstedeværelsen av Borstemmaskin MALDI instrumenter som brukes i klinikker for bakteriell identifikasjon.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
C.H.B har patent på iMALDI teknologi.
Acknowledgments
Vi takker for økonomisk støtte fra Genome Canada og genom British Columbia for operasjoner (204PRO) og teknologiutvikling (214PRO) gjennom genomet innovasjoner nettverk (GIN). Vi takker Drug Discovery Platform ved Research Institute i McGill University Health Center for bruk av MALDI-TOF instrumentet for filming. H.L. er takknemlig for støtte fra doc. fra National Science og Engineering Research Council for Canada (NSERC). C.H.B er takknemlig for støtte fra ledende Endowment Fund (LEEF). C.H.B. er takknemlig for støtte fra Segal McGill stolen i molekylær onkologi ved McGill University (Montreal, Quebec, Canada). M.X.C. og C.H.B. er takknemlig for støtte fra den Warren Y. Soper Charitable Trust og Alvin Segal Family Foundation til den jødiske General Hospital (Montreal, Quebec, Canada).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Healthy control human plasma | Bioreclamation | HMPLEDTA2 | |
| Ammonium bicarbonate | Sigma Aldrich | 09830 | |
| Ammonium citrate dibasic | Sigma Aldrich | 09833 | |
| CHAPS (>=98%) | Sigma Aldrich | C9426 | |
| Albumin from chicken egg white (>98%) | Sigma Aldrich | A5503 | |
| Ethylenediaminetetraacetic acid | Sigma Aldrich | EDS | |
| Alpha-cyano-4-hydroxycinnamic acid | Sigma Aldrich | 70990 | |
| Phosphate buffered saline | Sigma Aldrich | P4417 | |
| Phenylmethanesulfonyl fluoride | Sigma Aldrich | 78830 | |
| Trifluoroacetic acid | Thermo Fisher Scientific | 85172 | LC-MS grade |
| acetonitrile | Fluka | 34967 | LC-MS grade |
| water | Fluka | 39253 | LC-MS grade |
| acetic acid | Fluka | 320099 | LC-MS grade |
| Tris(hydroxymethyl)aminomethane | Roche Diagnostics | 3118169001 | |
| Dynabeads Protein G magnetic beads | Thermo Fisher Scientific | 10003D | 2.8 μm, 30 mg/mL |
| anti-Ang I goat polyclonal antibody | Santa Cruz Biotechnology | sc-7419 | |
| Nat and SIS Ang I | synthesized at the University of Victoria-Genome BC Proteomics Centre | ||
| Automated liquid handling system | Agilent | 16050-102 | Agilent Bravo robotic workstation |
| Magnet | Thermo Fisher Scientific | 12321D | Invitrogen DynaMag-2 magnet |
| Tube rotator | Theromo Scientific | 400110Q | Labquake Tube Rotator |
| Magnet | Thermo Fisher Scientific | 12027 | DynaMag-96 side skirted magnet |
| Magnet | VP Scientific | 771RM-1 | used to pull the beads to the bottom of the well |
| MALDI-TOF | Bruker | Bruker Microflex LRF instrument |
References
- Aebersold, R., Mann, M.
- Nicol, G. R., et al. Use of an Immunoaffinity-Mass Spectrometry-based Approach for the Quantification of Protein Biomarkers from Serum Samples of Lung Cancer Patients. Mol. & Cell. Proteomics. 7 (10), 1974-1982 (2008).
- Webster, J., Oxley, D. Chemical Genomics and Proteomics: Reviews and Protocols. Zanders, E. D. , Humana Press. 227-240 (2012).
- Yergey, A. L., et al. De novo sequencing of peptides using MALDI/TOF-TOF. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 13 (7), 784-791 (2002).
- Anderson, L. Six decades searching for meaning in the proteome. J. Proteomics. 107, 24-30 (2014).
- Landegren, U., et al. Opportunities for Sensitive Plasma Proteome Analysis. Anal. Chem. 84 (4), 1824-1830 (2012).
- Guo, A., et al. Immunoaffinity Enrichment and Mass Spectrometry Analysis of Protein Methylation. Mol. & Cell. Proteomics. 13 (1), 372-387 (2014).
- Florentinus-Mefailoski, A., Soosaipillai, A., Dufresne, J., Diamandis, E. P., Marshall, J. G. An enzyme-linked immuno-mass spectrometric assay with the substrate adenosine monophosphate. Anal. Bioanal. Chem. 407 (4), 1119-1130 (2015).
- Fredolini, C., et al.
- Tran, J. C., et al. Automated Affinity Capture and On-Tip Digestion to Accurately Quantitate in Vivo Deamidation of Therapeutic Antibodies. Anal. Chem. , (2016).
- Razavi, M., Leigh Anderson, N., Pope, M. E., Yip, R., Pearson, T. W. High precision quantification of human plasma proteins using the automated SISCAPA Immuno-MS workflow. N. Biotechnol. 33 (5 Part A), 494-502 (2016).
- Razavi, M., et al. High-Throughput SISCAPA Quantitation of Peptides from Human Plasma Digests by Ultrafast, Liquid Chromatography-Free Mass Spectrometry. J. Proteome Res. 11 (12), 5642-5649 (2012).
- Anderson, N. L., et al. SISCAPA Peptide Enrichment on Magnetic Beads Using an In-line Bead Trap Device. Mol. & Cell. Proteomics. 8 (5), 995-1005 (2009).
- Parker, C. E., Pearson, T. W., Anderson, N. L., Borchers, C. H. Mass-spectrometry-based clinical proteomics - a review and prospective. The Analyst. 135 (8), 1830-1838 (2010).
- Reid, J. D., Holmes, D. T., Mason, D. R., Shah, B., Borchers, C. H. Towards the Development of an Immuno MALDI (iMALDI) Mass Spectrometry Assay for the Diagnosis of Hypertension. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 21 (10), 1680-1686 (2010).
- Mason, D. R., Reid, J. D., Camenzind, A. G., Holmes, D. T., Borchers, C. H. Duplexed iMALDI for the detection of angiotensin I and angiotensin II. Methods. 56 (2), 213-222 (2012).
- Camenzind, A. G., vander Gugten, J. G., Popp, R., Holmes, D. T., Borchers, C. H. Development and evaluation of an immuno-MALDI (iMALDI) assay for angiotensin I and the diagnosis of secondary hypertension. Clin. Proteomics. 10 (1), 20 (2013).
- Jiang, J., et al. Development of an immuno tandem mass spectrometry (iMALDI) assay for EGFR diagnosis. Proteomics Clin Appl. 1, (2007).
- Jiang, J., Parker, C. E., Fuller, J. R., Kawula, T. H., Borchers, C. H. An Immunoaffinity Tandem Mass Spectrometry (iMALDI) assay for Detection of Francisella tularensis. Analytica chimica acta. 605 (1), 70-79 (2007).
- Popp, R. An automated assay for the clinical measurement of plasma renin activity by immuno-MALDI (iMALDI). Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Proteins and Proteomics. 1854 (6), 547-558 (2015).
- Schoenherr, R. M., et al. Automated screening of monoclonal antibodies for SISCAPA assays using a magnetic bead processor and liquid chromatography-selected reaction monitoring-mass spectrometry. J Immunol Methods. 353 (1-2), 49-61 (2010).
- Borchers, C. H. Methods of quantitation and identification of peptides and proteins. US patent. , US 7846748 B2 (2010).
- Borchers, C. H. Methods of quantitation and identification of peptides and proteins. Canadian patent CA. , CA 2507864 C (2011).
- Weiß, F., et al. Catch and measure-mass spectrometry-based immunoassays in biomarker research. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Proteins and Proteomics. 1844 (5), 927-932 (2014).
- Nelson, A. L. Antibody fragments: Hope and hype. mAbs. 2 (1), 77-83 (2010).
- Gupta, V., et al. An evaluation of an aptamer for use as an affinity reagent with MS: PCSK9 as an example protein. Bioanalysis. 8 (15), 1557-1564 (2016).
