Summary
يصف لنا هنا طرق لعلاج الأطفال حديثي الولادة كبخاخات للحث على الاستشرائية في الفئران والتعرض من فورمالدهايد المتبخرة للتحقيق في آثار استنشاق والفورمالديهايد في الاستشرائية.
Abstract
هو الانتكاس مزمن حاك الاكزيما الاستشرائية ويسود العالم لا سيما في البلدان المتقدمة النمو. من المعروف التفاعلات المعقدة بين العوامل الوراثية والبيئية تلعب دوراً مهما في الفسيولوجيا المرضية لالتهاب الجلد الاستشرائي. ومع ذلك، لا نزال نفتقر صورة مفصلة عن الآلية المرضية لهذا المرض. وبالتالي، فمن أهمية لتطوير نماذج حيوانية مناسبة لتوضيح تطور الاستشرائية. وعلاوة على ذلك، التحقيق في تأثير العوامل البيئية مثل ملوثات الهواء على الاستشرائية يوسع الفهم لهذا المرض. وهنا يصف لنا وسيلة لحفز الاستشرائية في الفئران مع معاملة المواليد كبخاخات وبروتوكول للتعرض لتركيز ثابت من فورمالدهايد للفئران للكشف عن آثار على التنمية الاستشرائية في الرضع والمراهقين الفترات. هذه البروتوكولات قد طبقت بنجاح على عدة تجارب، ويمكن استخدامها للمواد الأخرى.
Introduction
لاستجواب آثار استنشاق فورمالدهايد (اتحاد كرة القدم) على التقدم الاستشرائية (AD)، قمنا بوضع بروتوكول للإعلان التعريفي وتطوير دائرة تداول تقليدية للتعرض المزمن لاتحاد كرة القدم.
الإعلان مرض جلدي التهاب مزمن المنسوبة للتفاعلات المعقدة بين الاستعداد الوراثي والمشغلات البيئية1،2. مطلوب نموذج حيوان سليم لدراسة الإعلان في الحالة الإكلينيكية. وهذا الأكثر أهمية عند توضيح الآلية المرضية للإعلان تحت تأثير العوامل البيئية. وعلاوة على ذلك، أفضل التحقيق آثار المشغلات البيئية على تطور الإعلان، من الضروري الفصل بين العوامل البيئية الفردية وتقدير درجة التعرض.
لقد أظهرنا نموذج الفئران رواية الإعلانية الناجم عن معاملة الأطفال حديثي الولادة كبخاخات. هذا الإعلان النموذجي3 على بعض مزايا النماذج الإعلانية الأخرى مثل النماذج الإعلانية الناجمين عن طريق التوعية ابيكوتانيوس والنماذج الإعلانية المهندسة وراثيا، ونماذج الماوس العفوية للإعلان4. أولاً، يتطور هذا النموذج أعراض تشبه الإعلانية في سن 3 أسابيع، الذي يتوافق مع الرضع الإعلانية وهو أقدم من نماذج أخرى الماوس العفوية للإعلان مثل الماوس NC/نغا. في بعض الحالات، خلافا للنماذج الإعلانية المهندسة وراثيا، تهدأ أعراض النماذج الإعلانية والانتكاس عفويا على مدى فترة 20 أسبوعا. وعلاوة على ذلك، عملية الاستقراء من أعراض شبيهة بالإعلان في النموذج أسهل من أن نموذج التوعية ابيكوتانيوس، والذي أشبه بالاكزيما في منظور عملية الاستقراء.
وادخلنا البروتوكول الرواية لاتحاد كرة القدم من التعرض لنموذج حيوان باستخدام دائرة زجاج اكريليك و منظم الأوكسجين طبي التقليدي5 لدراسة آثار استنشاق اتحاد كرة القدم في وضع الإعلان في فترات الرضع والمراهقين. المنظم قد سمح لنا أن تعرض الحيوانات لتركيز الغاز عن طريق ضبط معدلات التدفق مستمر وتركز الحل. وأفادت الدراسات السابقة العديد من الطرق للتعرض لكرة القدم إلى نماذج حيوانية. شو et al. ووصف طريقة التعرض في كرة القدم الذي حل تم تطبيقها مباشرة على الجلد6. دراسة أخرى أجريت مؤخرا موجهة بروتوكول اتحاد كرة القدم الغاز التعرض باستخدام مولد مذيبات المتطايرة متخصصة، نموذج 49127. بالمقارنة مع أساليب الدراسات السابقة، أسلوب جديد مجهز بسهولة أكبر ويمكن تطبيقها لحلول أخرى بالإضافة إلى اتحاد كرة القدم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
وافق جميع الأساليب الموصوفة هنا عليها "رعاية الحيوان الدولية" واستخدام اللجنة (IACUC) من كوريا جامعة كلية للطب. 6 أسابيع بعد الولادة، ويمكن أن تحفز انثانساسيا المجربون وجمع عينات مختلفة مثل الجلد ومصل الجرذان.
1-تحريض الإعلانية "حديثي الولادة كبخاخات علاج"
- لإعداد 5 ملغ/مل الحل كبخاخات، إضافة 50 مغ من كبخاخات إلى 1 مل من توين 80 و 1 مل من الإيثانول 100% في أنبوب مخروطي 15 مل. إضافة
- 8 مل من المحلول الملحي العادي إلى الأنبوبة المخروطية. اهتز الأنبوب بقوة حتى لا طبقات فصل مرئية
- الحل كبخاخات (10 ميليلتر/g) بحقن الأنسجة تحت الجلد، على خط الوسط والمؤخرة من الرقبة من الفئران سبراغ داولي حديثي الولادة.
- التسليم كبخاخات بين ح 12 إلى 48 ساعة بعد الولادة (حرجة).
ملاحظة: إذا تم تأجيل الحقن بأكثر من بضعة أيام، لن تطور التهاب الجلد أو أنها ستستمر لأسابيع قليلة فقط. إذا كان الحقن مبكرا جداً، الضائقة التنفسية يمكن أن تحدث بسبب الألم الشديد- - لمنع الفئران حديثي الولادة من اعتقال الجهاز التنفسي بسبب حقن كبخاخات، دفع الصدر لحديثي الولادة تشجيع التنفس أو إبقاء الولدان في تشكيل غرفة أكسجين حتى يصبح التنفس العادي. حيث يمكن الآلام التي يسببها كبخاخات تثبيط التنفس، مشيراً إلى التخدير العام ويمكن أن تزداد سوءا ربما صعوبة التنفس. وهكذا، المجربون يجب عدم استخدام أنيسثيسيكس لزيادة البقاء على قيد الحياة فئران.
- التسليم كبخاخات بين ح 12 إلى 48 ساعة بعد الولادة (حرجة).
2. تقييم الحكة والتهاب الجلد في "نموذج الفئران" من الإعلان
- قياس حكة عن طريق العد عفوية السلوك الخدش
- البلاستيك تحضير الدوائر (20 سم × 30 سم × 20 سم) مزودة بمرآة للسماح بالتغطية الكاملة لعرض وثقوب للسماح للفئران للتنفس.
- تعيين إعداد وضبط كاميرا الفيديو رقمية بشكل صحيح لتسجيل مرآة آراء ووجهات نظر الجبهة من الفئران في وقت واحد.
- مكان الفئران في البلاستيك للدائرة وتغطية سقف قاعة بجسم ثقيل لمنع فتح-
- تسجيل التصرفات العفوية من الفئران ح 1 وإعادة تشغيل مقاطع الفيديو، وحساب عدد الخدش السلوكيات.
- تقييم الجلدية باستخدام نظام لتسجيل النقاط
- وضع الفئران في قاعة التعريفي.
- تحويل مقياس الأكسجين في التدفق إلى 2 لتر في الدقيقة معدل التدفق وضبط المبخر isoflurane إلى 3% للتخدير.
- تحديد مدى وشدة من التهاب في أذنيه وأجزاء أخرى من الفئران.
- تحديد حجم الوحدة لمدى آفات الجلد 0.25 سم 2 وشدة الآفات الجلدية ب التالي الجدول 1: مؤشر خطورة؛ ودرجة درجة التهاب الجلد بضرب مدى وشدة (انظر النتيجة التهاب الجلد في < فئة قوية = "إكسفيج" > 1B الرقم).
3. التعرض "كرة القدم الغازية" للحيوانات
- إعداد قاعة استنشاق
- إعداد شكل مربع زجاج اكريليك (55 سم × 40 سم × 35 سم) يحتوي على منافذ هما على طرفي نقيض.
- الحذر. لتوزيع الغاز فا، ضع مأخذ أعلى من المدخل وجعل حجم المنفذ أكبر من المدخل.
- الحذر. لقياس تركيز الغاز الداخلية، في جانب آخر من منافذ البيع، حفر ثلاثة ممرات الصغيرة، التي يمكن أن تكون مغلقة- أنابيب
- الاتصال بالمأخذ على حد سواء. ضع أنبوب منفذ إلى هود تداولها أو خارج المبنى لانبعاثات الغاز، وتوصيل أنبوب المآخذ الأخرى لمنظم الأوكسجين طبي-
- مكان قفص الفئران تقليدية داخل مربع زجاج اﻷكريليك.
- وضعت الفئران في القفص من أسبوع واحد بعد الولادة لمدة 5 أسابيع (ح 2 في اليوم و 5 أيام في الأسبوع).
- ختم المربع زجاج اﻷكريليك محكم ممكن للحيلولة دون تسرب للغاز-
ملاحظة: لختم ضيق، ينبغي أن تتضمن غطاء الدائرة المطاطية. تطبيق الفيلم تتشبث التفاف الدائرة لختم ضيق.
- جيل لكرة القدم الغازية باستخدام منظم الأوكسجين طبي
- يذوب 5 غ من اتحاد كرة القدم في 1 لتر الماء-
- وضع حل اتحاد كرة القدم 0.5% في زجاجة المرطب من الجهة المنظمة للأوكسجين الطبي-
- بعد توصيل أنبوب مدخل للجهة المنظمة، قم بتشغيل المنظم وتعيين معدل التدفق إلى 5 لتر/دقيقة
- ضبط تركيز الحل ومعدل التدفق لتحديد تركيز الغاز في الدائرة-
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
ويرد في الشكل 1Aالتهاب الجلد الإعلانية مثل نموذج الفئران الإعلانية تعامل كبخاخات في 7 أسابيع عمر. ويبين السلوكيات الخدش قوية نموذج الفئران الإعلانية تعامل كبخاخات 1 فيديو. علاج الأطفال حديثي الولادة كبخاخات أثارت حساسية وخطورة الخدش السلوكيات في الفئران 3 أسابيع عمر، وأعراض تشبه الإعلانية استمرت لعدة أسابيع (الشكل 1، ج). وأن كان الدرجة أقل حدة، عانت بعض الفئران من التهاب الجلد النكس في 16 أسبوعا عمر بعد قرار أعراض مثل الإعلان في وقت مبكر (الشكل 1). وعلاوة على ذلك، تم رفع المصل مستوى فريق الخبراء الحكومي الدولي، الذي علامة بيولوجية للإعلان شدتها8، في نموذج الفئران الإعلانية تعامل كبخاخات (الشكل 1E). التعبير مرناً لايل-4، وايل-13 زيادة أيضا في نموذج الفئران الإعلانية تعامل كبخاخات (الشكل 1-واو، وزاي).
وأظهرت الصور التمثيلية أن اتحاد كرة القدم الناجمة عن تفاقم التهاب الجلد في نموذج الفئران الإعلانية تعامل كبخاخات في 5 أسابيع عمر (الشكل 2A). تفاقم التعرض 1.2 جزء في المليون فا الخدش السلوكيات والتهاب الجلد في نموذج الفئران الإعلانية كبخاخات علاج لأكثر من أسبوعين. ومع ذلك، لم تفاقم التعرض 0.8 جزء في المليون فا الخدش السلوكيات والتهاب الجلد في نموذج الفئران الإعلانية تعامل كبخاخات (الشكل 2، ج). وعلاوة على ذلك، مرتفعة التعرض 1.2 جزء في المليون فا المصل المستوى الحكومي في نموذج الفئران الإعلانية تعامل كبخاخات (الشكل 2D).
للتعرض لكرة القدم الغازية، أنشئت دائرة التهوية كما هو موضح في البروتوكول (الشكل 3A). قبل التعرض، وكان قياس تركيز اتحاد كرة القدم في قاعة مرارا وتكرارا لضمان تركيز متسقة. عند تغيير تركيز حل اتحاد كرة القدم، وكان قياس تركيز فا الغازي في الدائرة. زيادة تركيز الحل، بتركيز الغاز في قاعة زاد ببطء وتركيز الغاز في الدائرة من نفس الحل لم تختلف كثيرا في القياسات المتكررة (الشكل 3B).
رقم 1: علاج الأطفال حديثي الولادة كبخاخات الناجم عن التهاب الجلد مثل الإعلان النكس وحكة في الفئران. صور الممثل لالتهاب الجلد في الفئران المعالجة كبخاخات (A). ميزات الزمني من التهاب الجلد (ب) والسلوكيات الخدش (ج) من الفئران تعامل كبخاخات. صورة الممثل النكس الآفات الجلدية من الفئران تعامل كبخاخات الأسبوع عمرها 16 (د). (ﻫ) ارتفاع كبير من مستويات المصل فريق الخبراء الحكومي الدولي في الحيوانات تعامل كبخاخات. (و) ارتفاع كبير التعبير مرناً إيل-4 في تعامل كبخاخات الحيوانات. (ز) ارتفاع كبير التعبير مرناً إيل-3 في تعامل كبخاخات الحيوانات. جميع النتائج وأبديت كما يعني ± ووزارة شؤون المرأة وتحليلها باستخدام الاختبار t للطالب. *ف < 0.05، * * ف < 0.005، * * *ف < 0.001. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 2: التعرض فا تفاقم الحكة والتهاب الجلد في نموذج الفئران الإعلانية تعامل كبخاخات. صور الممثل الأسبوعال 5 من العلاج باستخدام 1.2 جزء في المليون و 0.8 جزء من المليون من اتحاد كرة القدم (A). التعرض 1.2 جزء في المليون من اتحاد كرة القدم، ولكن عدم التعرض 0.8 جزء في المليون من اتحاد كرة القدم، إلى حد كبير من تفاقم الحكة (ب) والتهاب الجلد (ج) في نموذج الإعلان تعامل كبخاخات. المصل مستوى فريق الخبراء الحكومي الدولي زيادة في نموذج الفئران الإعلانية تعامل كبخاخات تعامل مع 1.2 جزء في المليون فا التعرض (د). وأعرب عن النتائج كما يعني ± ووزارة شؤون المرأة وتحليلها باستخدام ANOVA اتجاه واحد متبوعاً الاختبار في توكي أو اختبار t للطالب. *ف < 0.05، * * *ف < 0.001 (مقابل الفئران المعرضة للهواء النقي). 1.2 اتحاد كرة القدم-م: نموذج الفئران الإعلانية كبخاخات علاج يتعرضون ل 1.2 جزءا من المليون من اتحاد كرة القدم؛ 0.8 فا-م: نموذج الفئران الإعلانية تعامل كبخاخات يتعرضون ل 0.8 جزء في المليون اتحاد كرة القدم؛ والجو-م: تعامل كبخاخات الإعلانية نموذج الفئران المعرضة للهواء النقي. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3: المعاملة FA. التخطيطي التوضيح المنظم وغرفة الغاز (A). وكان تركيز فا الغازي في قاعة متناسباً مع تركيز فا الحل (ب). وأعرب عن النتائج كوسيلة ± sem. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الفيديو 1: سجلت نوبات فئران المعالجة "خدش السلوكيات من كبخاخات" "القياس من الحكة". من فضلك انقر هنا لمشاهدة هذا الفيديو. (انقر بالزر الأيمن التحميل.)
| المنطقة | نقاط | الوصف |
| باستثناء الأذنين | 0 | عادي |
| 1 | الفراء ناعم | |
| 2 | الحاصة أو مضيئة | |
| 3 | نزيف أو جرب | |
| آذان | 0 | عادي |
| 1 | مضيئة | |
| 2 | نزيف أو جرب | |
| 3 | فقدان الأنسجة |
الجدول 1: مؤشر الخطورة-
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
يمكن تكييفها لدراسة الفيزيولوجيا المرضية الإعلانية البروتوكول الموصوفة هنا لتنظيم دورات تعريفية لأعراض تشبه الإعلانية في الفئران واستخدامها كأداة لفحص لاختبار المخدرات. يمكن تطبيق هذا الصك للتعرض لكرة القدم الغازية للفئران التي تعامل كبخاخات لتقييم آثار التعرض لمختلف الغازات في نماذج حيوانية متنوعة.
نموذج الإعلانية كبخاخات علاج الأطفال حديثي الولادة يعتمد على إجراء بسيط أكثر من النماذج التاتبيه الأخرى مثل دنكب العلاج النموذجي9 وابيكوتانيوس التوعية النموذجي4، وهو أكثر يسرا من الماوس NC/Nga4. ويتسق المجاهرة بأعراض تشبه الإعلانية في نموذج الإعلان. وعلاوة على ذلك، في بعض الحالات، يتسبب هذا البروتوكول عفوية الآفات الجلدية مثل الإعلان النكس في الفئران المتضررة دون أي معالجة إضافية3. أثارت الخلايا العصبية الموت ونيوروكوتانيوس التهاب10 حقن جرعة زائدة كبخاخات وتسبب آلاماً شديدة في الفئران. البعض منهم ربما يعاني من اعتقال الجهاز التنفسي بسبب الألم. أنها ذات أهمية لمنعهم من الإقامة الجبرية في الجهاز التنفسي. وهكذا، بعد حقن كبخاخات، الجراء ينبغي أن توضع في دائرة لأكسجين وقد تتطلب بعض الجراء ضغط الصدر. لا حمل الولدان كبخاخات علاج أعراض تشبه الإعلانية في الفئران، وسبب ذلك لا يزال غير معروف. وهكذا، التدخل الجيني يكاد ينطبق على هذا الطراز الإعلانية باستخدام سلالة المغلوب، ولكن النهج الوراثية الأخرى مثل siRNA تعويض معقول لهذا القصور. وعلاوة على ذلك، تتفق مظاهر أعراض تشبه الإعلانية نموذج الفئران مفيد لدراسة منشأ المرض الإعلانية، فضلا عن تطبيقها على أداة فحص المخدرات.
ويتطلب إنشاء قاعة الدورة الدموية للتعرض لكرة القدم سوى معدات المختبرات التقليدية بما في ذلك شكل مربع اكريليك ومنظم الأوكسجين طبي. وعلاوة على ذلك، عن طريق تغيير الحل في زجاجة المرطب من الجهة المنظمة للأكسجين، يمكن تطبيق أنواع مختلفة من الغازات في التجربة. يمكن الحفاظ على تركيز الغاز في الدائرة بسهولة عن طريق ضبط معدل التدفق المنظم وتركز الحل. أنها حاسمة لضمان ختم ضيق في تركيب نظام الدورة الدموية لاتحاد كرة القدم من التعرض لنموذج الفئران الإعلانية كبخاخات علاج استخدام دائرة اكريليك ومنظم الأوكسجين طبي. ليس فقط لأن تركيز الغاز في قاعة يمكن أن تختلف في كل مرة بسبب التسرب، ولكن أيضا يمكن أن تضر تسرب الغاز في المجربون. التبخير لبعض المركبات العضوية المتطايرة (VOC) غالباً ما كتل الأنبوب بالتبلور. وهكذا، أنها ذات الصلة لتجنب انسداد من خلال إدارة أنبوب مستمر للاستخدام على المدى الطويل باستبدال الأنابيب بانتظام. ويعكس هذا النظام التبخر أدق تطور المرض في المرضى الذين يعانون من طرق التطبيق الموضعي11. وكشف هذا الأسلوب عن السمات المميزة لآثار استنشاق اتحاد كرة القدم في نموذج الفئران من الإعلان مقارنة بالدراسات السابقة التي تعرض فا للسذاجة الحيوانات7،12.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
Acknowledgments
هذا البحث وأيده "الصالح العام" & برنامج أبحاث السلامة عن طريق الوطنية بحوث مؤسسة من كوريا (جبهة الخلاص الوطني) الممولة من وزارة التعليم والعلوم والتكنولوجيا (جبهة الخلاص الوطني-2014M3C8A5030612)، وتدعمها تشونغ يانغ، تشأ يونغ الشمس، دكتوراه في الطب وجانغ مرحبا التذكارية سا يو جو الصندوق.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Medical Oxygen Regulator | Yuyao Jiahua Medical | manufacturer will not affect results | |
| Tube | manufacturer will not affect results | ||
| Acrylic Chamber | Taejin Acryl | manufacturer will not affect results | |
| Plastic Chamber | Taejin Acryl | manufacturer will not affect results | |
| Paraformaldehyde, powder | Sigma | 158127 | manufacturer will not affect results |
| Wrap filme | Uniwrap | manufacturer will not affect results | |
| Capsaicin | Sigma | M2028 | manufacturer will not affect results |
| Tween 80 | Sigma | P4780 | manufacturer will not affect results |
| Digital Video Camera | Sony | HDR-CX380y | manufacturer will not affect results |
| Isoflurane | JW pharmaceutical | manufacturer will not affect results |
References
- Geha, R. S. Allergy and hypersensitivity. Nature versus nurture in allergy and hypersensitivity. Curr Opin Immunol. 15 (6), 603-608 (2003).
- Novak, N., Bieber, T., Leung, D. Y. Immune mechanisms leading to atopic dermatitis. The J Allergy Clin Immunol. 112 (Suppl 6), S128-S139 (2003).
- Back, S. K., et al. Chronically relapsing pruritic dermatitis in the rats treated as neonate with capsaicin; a potential rat model of human atopic dermatitis. J Dermatol Sci. 67 (2), 111-119 (2012).
- Jin, H., He, R., Oyoshi, M., Geha, R. S.
- Han, R. T., et al. Formaldehyde-Induced Aggravation of Pruritus and Dermatitis Is Associated with the Elevated Expression of Th1 Cytokines in a Rat Model of Atopic Dermatitis. PLOS ONE. 11 (12), e0168466 (2016).
- Xu, B., Aoyama, K., Takeuchi, M., Matsushita, T., Takeuchi, T. Expression of cytokine mRNAs in mice cutaneously exposed to formaldehyde. Immunol Lett. 84 (1), 49-55 (2002).
- Kim, J. Y., Jeong, M. S., Park, K. Y., Seo, S. J. Aggravation of atopic dermatitis-like symptoms by consecutive low concentration of formaldehyde exposure in NC/Nga mice. Exp Dermatol. 22 (3), 219-221 (2013).
- Laske, N., Niggemann, B. Does the severity of atopic dermatitis correlate with serum IgE levels? Pediatr Allergy Immunol. 15 (1), 86-88 (2004).
- Fujii, Y., Takeuchi, H., Sakuma, S., Sengoku, T., Takakura, S. Characterization of a 2,4-dinitrochlorobenzene-induced chronic dermatitis model in rats. Skin Pharmacol Physiol. 22 (5), 240-247 (2009).
- Sugimoto, T., Xiao, C., Ichikawa, H. Neonatal primary neuronal death induced by capsaicin and axotomy involves an apoptotic mechanism. Brain Res. 807 (1-2), 147-154 (1998).
- Saito, A., et al. Characterization of skin inflammation induced by repeated exposure of toluene, xylene, and formaldehyde in mice. Environ Toxicol. 26 (3), 224-232 (2011).
- Jung, W. W., et al. Formaldehyde exposure induces airway inflammation by increasing eosinophil infiltrations through the regulation of reactive oxygen species production. Environ Toixcol Pharmacol. 24 (2), 174-182 (2007).
