Summary
Mantel-Zell-Lymphom (MCL) ist ein schwer zu B-Zell-Störung zu behandeln, und es ist ebenso schwierig, zur Einrichtung eines Xenograft-Maus-Modell der primären MCL zu studieren und Therapeutika zu entwickeln. Hier beschreiben wir die erfolgreiche Etablierung von MCL Xenotransplantate bei Mäusen zu helfen, die zugrunde liegende Biologie zu verstehen.
Abstract
B-Lymphozyten sind wichtige Akteure im Immunzelle Zirkulation und sie vor allem zu Hause und in den lymphatischen Organen befinden. Während normalen B-Zellen vermehren sich nur, wenn durch T-Lymphozyten stimuliert, Onkogene B-Zellen überleben und autonom in undefinierter Orgel Nischen zu erweitern. Mantel-Zell-Lymphom (MCL) ist eine solche B-Zell-Störung, wo die mediane Überlebenszeit der Patienten von 4-5 Jahren. Dies erfordert die Notwendigkeit wirksamer Mechanismen, durch die das Homing und Engraftment dieser Zellen blockiert werden, um das Überleben zu erhöhen, und Langlebigkeit des Patienten. Daher ist der Aufwand, ein Xenograft-Maus-Modell um die Wirksamkeit von MCL-Therapeutika zu studieren, durch die Blockierung der homing Mechanismus in Vivo zu entwickeln von größter Bedeutung. Entwicklung der tierischen Empfänger für menschliche Zelle Xenotransplantation, frühen Phase Medikamente zu testen haben seit langem verfolgt worden, wie relevanten präklinischen Mausmodelle für neue Therapeutika Bildschirm entscheidend sind. Dieses Tiermodell ist, menschliche Transplantat Ablehnung zu vermeiden und, ein Modell für menschliche Krankheiten entwickelt und es kann sein, dass ein extrem nützliches Werkzeug, Fortschreiten der Erkrankung von verschiedenen Lymphom-Arten zu studieren und Kandidat Drogen für präklinische Tests durchführen hämatologischen malignen Erkrankungen wie MCL. Wir etabliert ein Xenograft-Maus-Modell, die als eine hervorragende Ressource zu erforschen und entwickeln neue therapeutische Ansätze für MCL dienen wird.
Introduction
Lymphozyten von der Natur eine wichtige Rolle in Immunüberwachung und Lymphozyten Menschenhandel ist ein entscheidender Schritt bei der Montage von Antigen-spezifischen Immunantwort1,2. Dieser Prozess umfasst Migration von naiven T-Lymphozyten aus dem Thymus in den Blutkreislauf und von dort nach sekundären lymphatischen Organe, einschließlich Lymphknoten, Peyer Patches oder Milz, wo sie cognate Antigene treffen. Die B-Lymphozyten im Knochenmark differenzieren und Wandern als naive Zellen in Follikel der sekundären lymphatischen Organe3. Einige dieser B-Zellen Antigen mit ihrem Rezeptor binden und werden durch spezifische T-Zellen aktiviert. Proliferation und Differenzierung dieser B-Zellen schiebt die nicht aktivierte, naive B-Zellen in der Mantelzone des Follikels. Aktivierte Zellen können dann in den Speicher B Zellen, die Patrouille des Körpers, oder in Immunglobulin sezernierenden Plasmazellen, die Migration auf das Knochenmark4Reifen zu unterscheiden.
MCL tritt auf, wenn ein Tumor naive B-Lymphozyten in der Mantelzone verwandeln. Diese Lymphom-Zellen befinden sich in der Mikroumgebung der lymphatischen Organe und vermehren sich unabhängig von spezifischen T-Lymphozyten-Steuerung. Jedoch in einem bestimmten Stadium der Dichte Flucht aus dieser Nische und Umwälzen in die Blutbahn auf der Suche nach Nischen in anderen Organen. In Anbetracht der Komplexität der Adhäsionsmoleküle und die Promiskuität der Chemokine und ihre Rezeptoren der Mechanismus des zellulären Menschenhandel in Vivo kaum verstanden und daher behindert Therapie. Neuartige Methoden genügen, um dieses Migrationsprozesses um die Lymphomzellen B daran hindern, neue Mikroumgebungen effektiv zu blockieren.
MCL ist einer der am schwierigsten zu B-Zell-Tumoren zu behandeln. Die Entwicklung eines neoplastischen Phänotyps MCL ist das Ergebnis einer mehrstufigen Kaskade, zeichnet sich durch den Erwerb von einzigartigen biologischen Eigenschaften. Zum Zeitpunkt der Diagnose stellen die meisten Patienten (70 %) bereits verbreitet Krankheit, mit der Mehrheit der Fälle ausstellenden extranodal Beteiligung an Milz, dem Knochenmark und/oder Magen-Darm-Trakt5,6. Bei behandelten Patienten ist Rückfall von resistenten Tumoren innerhalb weniger Jahre weit verbreitet, obwohl konventioneller Chemotherapie hohe Remissionsraten bei kurzfristigen7,8 induziert. Hier präsentieren wir ein neues Krankheitsmodell, das helfen kann MCL Verbreitung und seine zugrunde liegende Biologie zu verstehen: wir etabliert ein menschliche MCL Xenograft-Maus-Modell aus der primären Tumorzellen des Patienten. Wir hoffen, dass dieses Modell hilft therapeutische Strategien gegen MCL Verbreitung zu entwickeln, und eventuell neue klinische Perspektiven für optimale Diagnose und Behandlung der refraktären Patienten geben.
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Protocol
Die menschlichen Blutproben wurden nach Genehmigung durch die lokale Ethik und menschliche Experimente Ausschüsse des Universitätsspitals Genf Verfahren verwendet.
Tierische Verfahren wurden im Einklang mit den institutionellen ethischen Ausschuss von Animal Care in Genf, der Schweiz und beim kantonalen Veterinäramt durchgeführt (Zulassungsnummer: GE/26/15).
1. Vorbereitung primäre peripheren mononukleären Blutzellen (PBMCs) durch Dichtetrennung Gradient
Hinweis: 3-5 mL des peripheren Blutes wurden Patienten mit MCL in einer leukämischen Phase entnommen. Die Diagnose wurde gemäß standard diagnostischen Kriterien für die Durchflusszytometrie (CD5 +, CD23−, CD200 +, monoklonalen B-Zell-Population) und anschließend durch Vorhandensein von chromosomalen Translokation t(11;14) und Überexpression von cyclin D1 bestätigt. In allen Fällen stellte monoklonale B-Zellen zu > 90 % der gesamten B-Zell-Population. Die verbleibenden Zellen waren vor allem Monozyten und T-Zellen.
- Verdünnen Sie (1:1) 5 mL MCL Blutprobe mit 5 mL Medium Roswell Park Memorial Institute 1640 (RPMI) (Abbildung 1A).
- Invertieren Sie die Dichte Gradienten Medien (Table of Materials) mehrmals vor der Verwendung um gute Durchmischung zu gewährleisten.
- Hinzugeben Sie 5 mL Dichte-Gradienten-Medien in eine 15 mL Zentrifugenröhrchen mit Hilfe einer Pipette Absauganlage.
- Sanft Schicht verdünnten Blutprobe über die Dichte Gradienten Medien in der 15 mL Zentrifugenröhrchen mit einer Absauganlage (das Blut Dichte-Gradienten Medien-Verhältnis sollte 2:1, z.B., 10 mL Blut bis 5 mL der Dichte-Gradienten-Medien). Keine Mischung sollten der beiden Schichten (Abbildung 1 b, C) achten.
- Zentrifugieren Sie die Probe bei 400 X g 40 min bei Raumtemperatur mit der Zentrifuge Bremsen ausgeschaltet.
- Mit einer sterilen Pasteurpipette vorsichtig Aspirieren die mittlere Schicht (weißliche, dünner Ring mit einem Pfeil (Abbildung 1, E) markiert), enthält die mononukleären Zellen und in ein sauberes Röhrchen überführen.
- Waschen von mononukleären Zellen
- Schätzen Sie das Volumen der übertragenen Zellsuspension und hinzufügen 3 Bände von sterilen 1 x Phosphat gepufferte Kochsalzlösung (PBS) mit 1 % Rinderserumalbumin (BSA).
- Mischen Sie die Suspension durch Pipettieren nach oben und unten mehrmals.
- Zentrifugieren Sie die Federung bei 400-500 X g für 10-15 min bei Raumtemperatur.
- Den Überstand der Zelle Pellet und wiederholen der Waschschritt zu verwerfen.
- Entfernen des Überstands und die Zellen in der gewünschten Lautstärke, z.B., 1 oder 2 mL PBS Aufschwemmen.
- Die Anzahl der Zellen durch eine automatisierte Zelle Zähler oder manuell über eine Hemocytometer (Neubauer Kammer).
(2) Anreicherung von B-Zellen durch B-Zellen Negative Selektion
- Die Zellen in PBS, eine Endkonzentration von 50 x 106 Zellen/mL zu verdünnen.
- Übertragen Sie die Zellen auf 5 mL Runde Polystyrol Unterrohr. 2 mL Zellsuspension 100 µL Antikörper cocktail aus dem B-Zell-Anreicherung-Kit hinzu, und mischen Sie leicht durch Pipettieren nach oben und unten (Abbildung 2-1).
- Inkubieren Sie die Zellen bei Raumtemperatur für 10 min.
- Kurz Wirbel die Magnetpartikel mitgelieferten B Zelle Bereicherung für 30 s (Abbildung 2-2). 2 mL der Probe 150 µL der magnetischen Partikel hinzufügen.
- Inkubieren Sie die Probe für weitere 5 Minuten bei Raumtemperatur.
- Bringen Sie das Probenvolumen bis 2,5 mL mit 1 X PBS mit 2 % fetalen Kälberserum (FCS) und 1 mM Ethylenediaminetetraacetic Säure (EDTA). Legen Sie das Rohr in den Magneten und inkubieren Sie das Rohr für weitere 3-5 Minuten (Abbildung 2-3).
- Abholen des Magnet mit dem Rohr im Ort und in einer kontinuierlichen Bewegung, das Rohr zu dekantieren, damit die angereicherten Zellsuspension in einem frischen Rohr (Abbildung 2-4) gesammelt werden. Zählen der Zellen durch eine automatisierte Zelle Zähler oder manuell über eine Hemocytometer, um die Gesamtausbeute der B-Zellen zu erhalten.
Hinweis: In der Regel ergibt sich eine ~ 105 B Zellen/mL für normale B-Zellen und 5-50 x 106 Zellen/mL für MCL. - Bestätigt die Reinheit der B-Zell-Bereicherung
- Nehmen ~ 50.000 Zellen und inkubieren Sie die Zellen mit Anti-CD19/CD20-Antikörper (01:20 Verdünnung) und Anti-CD45 Antikörper gekoppelt mit verschiedenen Fluorochromes (01:10 Verdünnung) bei Raumtemperatur für 15-30 min.
- Waschen mit 1 mL 1 x PBS + 1 % BSA, die Zellen bei 400-500 X g für 5 min Zentrifugieren und Zellen in ~ 200 µL PBS aufzuwirbeln.
- Erwerben Sie die Zellproben durch Durchflusszytometrie und für die Reinheit der B-Zellen zu analysieren. Reinheit ist meist > 90 % von dieser Methode (Abbildung 3).
3. Entwicklung der Xenograft-Maus-Modell
- Aussetzen Sie ~ 40-60 x 106 Zellen in 150-200 µL 1 X PBS (Volumen benötigt, um per Mausklick zu injizieren).
- 150 µL Zellsuspension intravenös zu injizieren (i.v.) in jede Rute Vene von 6-7 Wochen alten immungeschwächte NOD scid Gamma (NSG) Mäusen unabhängig vom Geschlecht (Abb. 4A).
- Lassen Sie die Mäuse, menschlichen Lymphom für ~ 10 Wochen zu entwickeln.
Hinweis: Primäre menschlichen Lymphom-Zellen dauert wesentlich länger, im Vergleich zu menschlichen Lymphom Zelllinien (~ 3 Wochen) Tumor zu entwickeln. - Wenn die Tiere beginnen, zeigen Symptome einer tödlichen Krankheit wie Gewichtsverlust, Opfern zerzauste Haare, verminderte Aktivität, Lähmung der hinteren Extremitäten, etc., die Mäuse Erstickungstod CO2 gefolgt von kardialen Herz durchbohren, Blut zu erhalten.
- Sammeln verschiedener Organe wie Knochenmark, Milz und Leber durch sezieren die Mäuse und peripheren Blut zu sammeln, indem man Blut vom Herzen zum Zeitpunkt des Opfers für Tumor Engraftment Analyse (Abbildung 4 b -F).
4. Chimerism Analyse der Tumorzelle pfropfte in verschiedenen Organen
- Nach dem Sammeln der verschiedenen Organe, verarbeiten sie durch mechanische Störung, einzelne Zellsuspensionen nach lyse der Erythrozyten (RBC) mit 200 µL 1 x Ammoniumchlorid Kalium Puffer für Blut und Knochenmark, 500 µL für Milz und 2 mL für Leber zu generieren .
- Zählen und die Zellen mit menschlichen B-Zell-spezifische Antikörper, d.h.Anti-CD19, Anti-CD20 und Anti-CD45 Flecken.
Hinweis: NSG Mäusen fehlt B-Zellen und damit für Analyse, Zellen sind mit menschlichen bestimmten B-Zell-Markern gefärbt. - Analysieren Sie die Zellen, die von jedem Organ durch Durchflusszytometrie Anspritzung auf B-Zellen (CD19 +, CD20 +, CD45 +) abgeleitet.
- Quantifizieren Sie die eingepflanzt Tumorzellen in verschiedenen Organen abgeleitet von MCL injiziert Mäuse basierend auf den geschlossenen Zellen, wie in Schritt 4.3 (Abbildung 4).
Hinweis: Siehe Tabelle der Materialien für Details.
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Representative Results
Das Manuskript beschreibt eine optimierte Protokoll für die erfolgreiche Entwicklung von einem Xenograft-Maus-Modell für Engraftment MCL Zellen. Vorbereitung einer reinen Zellpopulation (in diesem Fall MCL-Zellen), ist sehr kritisch, erfolgreiche MCL Xenotransplantate zu entwickeln. Abbildung 1 stellt die präparative Schritte zur Isolierung von mononukleären Zellen aus Blut MCL der Patienten durch Dichtetrennung Farbverlauf. Die mononukleären Zellen werden weiter verarbeitet, um reine B-Zellen mit einem negativen B-Zelle Bereicherung Kit zu einer reinen Zellpopulation Xenograft Injektionslösung in Mäuse zu erhalten. Darauf sollte geachtet werden, um maximale Reinheit zu erhalten, um erfolgreiche MCL Engraftment haben. Die Reinheit erhalten mit dieser Methode ist in der Regel > 90 %. Die verbleibenden Zellen waren vor allem Monozyten und einige T-Zellen (Daten nicht gezeigt).
Abbildung 2 stellt die verschiedenen Schritte des B-Zell-Reinigung-Protokolls, wie im Methodenteil beschrieben. Die angereicherten Zellen werden weiter auf ihre Reinheit von Durchflusszytometer mit verschiedenen Markern (CD45, CD19, CD20, CD23, CD200, CD5, Kappa und Lambda) analysiert. Sequentielle gating wie in Abbildung 3 dargestellt ermöglicht die Charakterisierung von MCL-Zellen: CD45 +, CD19 + CD20 +, CD5 +, CD23− und CD200− ausgewählt. Entschädigung für mehrfarbige Färbung erfolgte mit einzelnen gefärbten Steuerelementen für jede der Fluorochromes nach standard Zytometrie Setup verwendet.
Abbildung 3E G ist der typische Dot-Plot der B-Zellen vor und nach Anreicherung. In diesem Fall > 95 % der angereicherten Zellen mit diesem Kit sind B-Zellen. Die Zellen werden in einer Konzentration von 40-60 × 106 Zellen in 150-200 µL PBS wie im Protokoll erwähnt mit PBS-Puffer suspendiert. Sie wurden sofort i.v. NSG Mäusen injiziert. Nach 10 Wochen > 90 % der injizierten Tiere entwickelt Lymphom zeigt Anzeichen einer unheilbaren Krankheit (Gewichtsverlust, zerzauste Haare, verminderte Aktivität, etc.). Nach dem Opfer Milz und Leber entfernt und verarbeitet, um einzelne Zellsuspensionen erhalten durch mechanische Störungen (Abbildung 4, F); Blut wird durch kardiale Herz Punktion sorgfältig gezeichnet und Knochenmark wird verarbeitet, indem man beide Enden des Oberschenkelknochens und spülen es mit einer 2 mL Spritze gefüllt mit RPMI Medium oder PBS (Abbildung 4). Die Zellen werden von Durchflusszytometrie mit menschlichen B-Zell-spezifischen Markern wie CD19/CD20 und CD45 weiterverarbeitet. Wir verwendet menschlichen B-Zell-spezifische Marker hier, weil die Empfänger Maus Belastung (NSG) B-Zellen fehlt. Abbildung 4 b - F steht für die Sammlung von Organen nach Opfer und die Schritte der Weiterverarbeitung. Der Grad des Engraftment MCL Zellen aus zwei Patienten ist in Abbildung 4dargestellt. Das Engraftment Muster in verschiedenen Organen und von Patient zu Patient kann diese Technik nach verglichen werden.
Abbildung 1: Isolierung der PBMCs aus Vollblut. Blut von einem MCL-Patienten ist 1:1 verdünnt in RPMI Medium (A) und legte vorsichtig auf die Dichte-Gradienten Medien-Schicht (B) ohne Vermischung von Blut in dieser Dichte-Gradienten-Medien (C). Zentrifugation bei 400 X g 45 min trennt die mononukleären Zellen, die als weißlicher Ring erscheinen (Pfeil zeigt die mononukleären Zellschicht) (D). Diese Schicht ist sanft ohne Vermischung mit anderen Ebenen in ein sauberes Röhrchen für die weitere Verarbeitung (E) pipettiert. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 2: Anreicherung von B-Zellen von PBMCs. PBMCs durch Dichte-Gradienten-Zentrifugierung isoliert werden zweimal mit PBS gewaschen. Mit der negativen B Zelle Bereicherung Kit und des Herstellers Protokoll folgend ergibt sich eine reine Population von B-Zellen (1–4). Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 3: FACS Analyse der MCL Zellen und Reinheit der B-Zellen vor und nach Anreicherung. MCL mononukleären Zellen zeichnen sich durch FACS Analyse mit verschiedenen Markern wie CD45, CD19, CD20, CD23, CD200, CD5, Kappa und Lambda. Zellen, die positiv für CD45, CD19, CD20, CD5 und negativ sind für CD23 und CD200 ausgewählt (A–F). G steht für die Zellpopulation nach Anreicherung mit dem negativen Auslese-Kit im Vergleich zu E, die Bereicherung vorliegt. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 4: NSG Mäuse als Xenograft Modell für Engraftment MCL Zellen. B-Zellen abgeleitet von MCL Patienten wurden i.v. über die seitlichen Schweif Vene des NSG Mäuse (A) injiziert. Nachdem Sie mehrere Tage für den Tumor, weiterhin erlaubt, die Mäuse wurden geopfert und seziert (B), um verschiedene Organe wie Knochenmark (C), Milz (D), peripherem Blut (E) (gezeichnet von kardialen Herz durchbohren), zu sammeln und Leber (F). Diese Organe waren weiter verarbeitet und analysiert durch Durchflusszytometrie für das Vorhandensein von B-Zellen. G steht für das Engraftment Muster der MCL Zellen in verschiedenen Organen abgeleitet von MCL NSG Mäuse injiziert. Ergebnisse von zwei Patienten werden angezeigt. Daten werden angezeigt, wie meine ± SEM, n = 3. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
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Discussion
Klinische Studien sind möglich für Medikamente, die in einem fortgeschrittenen Stadium der Entwicklung sind jedoch nicht für die Wirkstoffforschung verwendet werden. Bemühungen um tierische Empfänger für die menschliche Zelle Xenotransplantation zu entwickeln, um frühe Phase Medikamente zu testen haben lange verfolgt. Hier präsentieren wir ein Tiermodell, das menschliche Transplantat Ablehnung vermeidet und kann ein Modell für menschliche Krankheiten, wie MCL. Dies ist derzeit ein State-Of-The-Art-Xenograft-Modell, die Mechanismen des menschlichen Tumor Engraftment und Tumorwachstum zu studieren. Hier verwenden wir NSG Mäuse, eines der am meisten immun mangelhaft Mausmodelle bis heute um mehr Erfolg von Lymphom Engraftment zu erreichen. NSG Mäusen fehlt Reife T-Zellen, B-Zellen und NK-Zellen. Außerdem haben beeinträchtigt Cytokine signaling und haben Mängel in der angeborenen Immunantwort.
Lymphozyten-Vorbereitung von MCL Einzelprobe durch Dichtegradienten ist ein wichtiger Schritt, andere Zelltypen wie rote Blutkörperchen und Thrombozyten zu entfernen. Traditionell, ermöglicht eine Dichte-Gradienten-Zentrifugation erfolgreichen Isolierung der Lymphozyten. Weiterverarbeitung von diese Lymphozyten, B-Zell-Population zu bereichern wird durch die Verwendung eines B-Zell Bereicherung Kit nach dem Protokoll innerhalb dieses Manuskript beschriebenen erreicht. Darauf sollte geachtet werden, um eine hohe Reinheit des B-Lymphozyten-Populationen erreichen optimale Engraftment der Lymphomzellen zu erreichen. Die MCL-Zellen sind intravenös injiziert (mindestens 40-60 x 106 Zellen/Maus) durch den seitlichen Schweif Vene und Mäuse durften, für bis zu 10 Wochen Lymphom zu entwickeln. Die Mäuse wurden genau untersucht jeden Tag für Symptome von Erkrankungen einschließlich, Gewichtsverlust, gekräuselte Haare, verminderte Aktivität, Lähmung der hinteren Extremitäten, etc. Analyse verschiedener Organe, wie Milz, Leber, Knochenmark und Blut von Durchflusszytometrie offenbart MCL Engraftment. Vor kurzem hat sich gezeigt, dass primäre MCL-Zellen im Knochenmark und Milz von bestrahlten NSG Mäuse in der 20. Woche Injektion9Einheilungschancen. Unabhängig dieser Erkenntnis haben wir erfolgreich unser eigenes Xenograft-Modell der primären MCL mit schnelleren Tumorbildung entwickelt.
Diese Xenograft-Maus-Modell kann ein extrem nützliches Werkzeug für die Erforschung des Fortschreitens der Krankheit von verschiedenen Lymphom-Arten werden. Xenograft-Modelle bieten auch leistungsstarke Tools zur präklinischen Tests von Kandidaten Medikamenten zur hämatologischen malignen Erkrankungen wie MCL durchzuführen, jedoch mit gewissen Einschränkungen beispielsweise die dominierende Klon bei Rückfall bei einem Patienten anwesend ist nicht unbedingt der Klon Schwellenländer auf Xenotransplantation10. Dies könnte aufgrund der unterschiedlichen Selektionsdruck, die die Xenograft in unterschiedlichen Hostsystemen erfährt. Die hämatopoetische Zusammensetzung in diesem Stamm nicht voll und ganz kurz zusammenfassen menschlichen Hämatopoese, somit die langfristige Erhaltung der menschlichen Zellen zu begrenzen. Die Vorteile bei der Verwendung von menschlichen Tumor Xenografts überschreibt die Einschränkungen, wie Ergebnisse erzielt werden, in ein paar Wochen aus einem menschlichen Tumor-Biopsie bezüglich Ansprechens auf die Therapie. Medikament Antworten korrelieren nicht oft mit klinischen Tätigkeiten in Patienten11 beim humanen Zelllinien anstelle primärer Tumor-Zellen werden als Xenotransplantate verwendet, aber sie helfen, den Grundstein für mögliche therapeutische Antworten bilden. Die Verwendung von Primärtumoren als einer orthotropen Xenograft hat einen stärkeren vorausschauende Antwort Wert, vor allem, wenn eine klinisch relevante Arzneimitteldosierung verwendeten11,12,13. Homing von Lymphom-Zellen ihre Nischen ist eine wichtige Voraussetzung, um zu überleben und Tumor Engraftment zu etablieren. Dieser Prozess ist majorly über das lymphatische System geregelt, und der Eintrag der zirkulierenden Lymphozyten durch die hohe endothelialen Venolen unterhält der Homöostase der Lymphozyten in den Lymphknoten.
Auflage von B-Lymphozyten durch Lymphknoten erfordert Kreuzung endothelialen Barrieren und Lockstoffgradient ausgelöste Zellwanderung durch das koordinierte Zusammenwirken mit verschiedenen Adhäsionsmoleküle. Ausrichtung auf die Moleküle, die Steuern der Homing von Lymphozyten zu den Nischen, die überleben könnte daher eine neue Behandlungsstrategie für B-Zell-Lymphomen dar, da sie Verhalten sich ähnlich wie normale Lymphozyten. Unser Ziel war es, das Molekül JAM-C, ein Knoten Adhäsionsmolekül zu Zielen, die auf MCL vorhanden ist. Dieses Xenograft-Modell wird verwendet werden, um die therapeutischen Wirkungen von JAM-C Antikörper auf Homing und Engraftment des primären Lymphom-Zellen, deren Überleben Nischen zu studieren. Wir haben vor kurzem einen Effekt der anti-JAM-C-Antikörper in Mäusen gezeigt, die erhalten eine MCL-Zelllinie, Jeko-114. Dieser Antikörper hatte eine blockierende Wirkung auf Homing von Jeko-1-Zellen und auch in regelmäßigen Abständen verabreicht, es effizient verhindert das Engraftment Jeko-1-Zellen. Neben seiner Wirkung auf Homing beseitigt die Antikörper-Behandlung das Lymphom pfropfte in einem Großteil der Organe in diesen Mäusen14getestet.
Im Lichte der wissenschaftlichen und klinischen Frage angesprochen repräsentieren diese xenografted Tumoren derzeit ein interessantes Modell, das therapeutische Ergebnis des MCL zu studieren.
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Disclosures
Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen Interessenkonflikte.
Acknowledgments
Diese Arbeit wurde unterstützt durch die Ligue Genevoise Contre le Cancer, Fondation Dr. Dubois Ferriere Dinu-Lipatti, Oncosuisse KPS-OCS, OCS-02260-08-2008 und 2914-02-2012, und Swiss National Science Foundation Grant 31003A_156760 und 310030-153456.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Ficoll-paque media | GE Healthcare | 17-1440-02 | for separation of mononuclear cells |
| RPMI Medium 1640 | Gibco-Life technologies | 61870-010 | for dilution of blood sample |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | Sigma-Aldrich | D8537 | washing of cells |
| Bovine Serum Albumin (BSA) | Sigma-Aldrich | A8412 | for preparation of PBS with 1% BSA used in washing cells during isolation |
| CD19-APC700 | Beckman Coulter | B49212 | human pan-B cell marker |
| CD20-APC | Beckman Coulter | A21693 | human pan-B cell marker |
| CD20-ECD | Beckman Coulter | IM3607 | human pan-B cell marker |
| CD5-PC 5.5 | Beckman Coulter | PN A70203 | human T cell marker |
| CD23-PE | Pharmingen | 555711 | Cell surface protein typically absent in MCL |
| CD45 KO | Beckman Coulter | B36294 | Pan-leucocyte marker |
| CD200-PE | Pharmingen | 552475 | Cell surface protein typically absent in MCL |
| NOD scid gamma (NSG) mice | Charles River Laboratories | 5557 | used to develop MCL xenografts in this study |
| Easy sep Human B cell enrichment kit | Stem cell technologies | 19054 | used to enrich B cells to obtain pure cells for injecting into mice |
| FACS | Beckman Coulter | Navios | used to characterize MCL sample and to study the organs for MCL engraftment |
| 1X ammonium chloride potassium buffer | red blood lysis buffer (NH4Cl 8,024 mg/l; KHCO3 1,001 mg/l; EDTA.Na2·2H2O 3.722 mg/l ) |
References
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