Summary
عباءة الخلية اللمفاوية (MCL) مهمة صعبة لعلاج اضطراب خلايا ب ويصعب وضع نموذج ماوس إكسينوجرافت من MCL الأولية دراسة وتطوير المداواة. هنا، يصف لنا النجاح في إقامة MCL تكثيفها في الفئران للمساعدة على فهم البيولوجيا الأساسية لها.
Abstract
من الفعاليات الرئيسية في التداول الخلايا المناعية وأنها موطن أساسا للخلايا الليمفاوية ب ويقيمون في الأجهزة اللمفاوية. بينما تتكاثر الخلايا العادية ب فقط عندما يحفزه لمفاوية T، النمطان ب الخلايا البقاء على قيد الحياة وتوسيع استقلالية في منافذ الجهاز غير معرف. عباءة الخلية اللمفاوية (MCL) أحد هذه الخلية باضطراب، وحيث معدل متوسط بقاء المرضى 4-5 سنوات. وهذا يدعو إلى حاجة الآليات الفعالة التي يتم حظرها بصاروخ موجه وانجرافتمينت من هذه الخلايا بغية زيادة البقاء على قيد الحياة وطول العمر للمرضى. ولذلك، بالجهود المبذولة لتطوير نموذج ماوس إكسينوجرافت لدراسة مدى فعالية العلاجات MCL بعرقلة صاروخ موجه إليه في فيفو أهمية قصوى. واتبعت طويلة التنمية الحيوانية المتلقين للسلالة البشرية الخلية لاختبار المخدرات المرحلة المبكرة، كنماذج الماوس السريرية ذات الصلة حاسمة بالنسبة للعوامل العلاجية الجديدة الشاشة. تم تطوير هذا النموذج الحيواني لتجنب رفض الابتزاز البشرية ووضع نموذج للأمراض التي تصيب الإنسان، وأنها قد تكون أداة مفيدة للغاية لدراسة تطور المرض لأنواع مختلفة من الأورام اللمفاوية، والقيام بالتجارب السريرية للمخدرات مرشح الأورام الخبيثة الدموية، مثل MCL. قمنا بإنشاء نموذج ماوس إكسينوجرافت التي ستكون بمثابة مصدرا ممتازا دراسة وتطوير نهج علاجية مبتكرة ل MCL.
Introduction
لمفاوية بالطبيعة تؤدي دوراً رئيسيا في منأى عن المراقبة، واللمفاويات الاتجار خطوة حاسمة في تركيب مستضد حصانة محددة1،2. وتشمل هذه العملية الهجرة من السذاجة تي لمفاوية من الغدة الصعترية إلى مجرى الدم، ومن هناك إلى الأجهزة اللمفاوية الثانوية، بما في ذلك الغدد الليمفاوية أو بقع بير في الطحال، حيث يلتقي المستضدات المشابهة. الخلايا الليمفاوية ب التفريق في نخاع العظام وتهاجر كخلايا ساذجة في المسام من الأجهزة اللمفاوية الثانوية3. بعض من هذه الخلايا ب ربط مستضد مع مستقبلات بهم ويتم تفعيلها من خلال خلايا T معينة. انتشار وتمايز هذه الخلايا ب يدفع الخلايا السذاجة ب عدم تفعيلها، إلى منطقة عباءة المسام. يمكن أن تفرق في الذاكرة ب تنشيط الخلايا ثم الخلايا التي دوريات الهيئة، أو تنضج في الغلوبولين المناعي إفراز خلايا البلازما التي تهاجر إلى نخاع العظم4.
MCL عند لمفاوية السذاجة ب في منطقة عباءة تحويل إلى ورم. هذه الخلايا اللمفاوية الموجودة في المكروية الأجهزة اللمفاوية وتتكاثر مستقلة عن مراقبة محددة تي اللمفاويات. بيد أنه في مرحلة معينة من كثافة الهروب من هذا مكانة واوافيكم في مجرى الدم في البحث عن منافذ في الأجهزة الأخرى. نظراً للطابع المعقد لجزيئات الالتصاق والانفلات من المستقطبات وعلى المستقبلات، إليه هذا الخلوية الاتجار في فيفو هو غير مفهومة ويعوق ذلك العلاج. أساليب الرواية ضرورية لفعالية حظر هذا عملية الهجرة لمنع الخلايا اللمفاوية ب من الوصول إلى ميكرونفيرونمينتس جديدة.
MCL واحد من الأكثر صعوبة في علاج الأورام الخبيثة الخلية ب. تطوير النمط الظاهري الورمية ل MCL هو نتيجة لسلسلة متعددة الخطوات، تتميز باكتساب الخصائص البيولوجية الفريدة. وقت التشخيص، يقدم معظم المرضى (70 في المائة) الفعل مع مرض نشرها، مع غالبية الحالات العارضة مشاركة اكسترانودال في الطحال ونخاع العظام، و/أو الجهاز الهضمي5،6. في معالجة المرضى، والانتكاس بمقاومة الأورام في غضون سنوات قليلة شائع، على الرغم من أن العلاج الكيميائي التقليدي يدفع معدلات عالية مغفرة في المدى القصير7،8. هنا نقدم نموذجا أمراض جديدة التي يمكن أن تساعد على فهم نشر MCL وعن البيولوجيا الأساسية: قمنا بإنشاء نموذج ماوس xenograft MCL بشرية التي نشأت من الخلايا السرطانية الأولية للمرضى. ونأمل أن يساعد هذا النموذج وضع استراتيجيات علاجية ضد نشر MCL، وربما توفر منظورات جديدة السريرية للأمثل التشخيص والعلاج للمرضى الذين انتكست.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
وقد استخدمت عينات الدم البشري وفقا للإجراءات التي أقرتها بالأخلاقيات المحلية ولجان إجراء التجارب على البشر في مستشفى جامعة جنيف.
وأجريت إجراءات الحيوانية وفقا "المؤسسية الأخلاقية اللجنة للحيوان الرعاية" في جنيف، سويسرا، ومكتب الطب البيطري الكانتونات (رقم الترخيص: جنرال الكتريك/26/15).
1-إعداد خلايا الدم الطرفية الأولية وحيدات النوى (ببمكس) بكثافة الفصل التدرج
ملاحظة: تم الحصول على 3-5 مل دم المحيطي من المرضى تقديم مع MCL في مرحلة ليوكيميك. التشخيص المنشأة وفقا للمعايير التشخيصية للتدفق الخلوي (CD5 +، CD23−، CD200 +، والسكان [مونوكلونل] بالخليه)، وأكدت وجود t(11;14) إزفاء و overexpression cyclin D1 في وقت لاحق. وفي جميع الحالات، تشكل الخلايا ب [مونوكلونل] إلى > 90 في المائة من السكان الإجمالي بالخليه. وكانت الخلايا المتبقية أساسا وحيدات وبعض الخلايا T.
- تمييع (1:1) 5 مل من عينة الدم MCL مع 5 مل من روزويل بارك التذكاري المعهد المتوسط 1640 (ربمي) (الشكل 1A).
- عكس الإعلام الكثافة المتدرجة (جدول المواد) عدة مرات قبل الاستعمال لضمان خلط دقيق.
- إضافة 5 مل من كثافة وسائل الإعلام التدرج في أنبوب الطرد مركزي 15 مل المضخة ماصة باستخدام.
- بلطف طبقة عينة الدم المخفف أكثر كثافة وسائل الإعلام التدرج في أنبوب الطرد المركزي 15 مل باستخدام الشافطة (يجب أن يكون الدم إلى كثافة وسائل الإعلام التدرج نسبة 2:1، مثلاً، 10 مل من الدم إلى 5 مل من الكثافة المتدرجة وسائط الإعلام). ينبغي الحرص على عدم مزيج الطبقتين (الشكل 1، ج).
- الطرد المركزي العينة في 400 غرام x لمدة 40 دقيقة في درجة حرارة الغرفة مع إيقاف تشغيل الفرامل أجهزة الطرد المركزي.
- استخدام ماصة باستور معقمة، نضح بلطف طبقة وسطى (حلقة بيضاء، رقيقة ملحوظ مع سهم (الشكل 1، ﻫ)) التي تحتوي على الخلايا وحيدات النوى، وتحويلها إلى أنبوب نظيفة.
- غسل الخلايا وحيدات النوى
- تقدير حجم تعليق خلية المحولة، وإضافة إلى ذلك 3 مجلدات العقيمة 1 × الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) مع ألبومين المصل البقري 1% (BSA).
- مزيج التعليق من بيبيتينج صعودا وهبوطاً عدة مرات.
- الطرد المركزي بتعليق في 400-500 غم x لمدة 10-15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
- تجاهل المادة طافية على الحصول على خلية بيليه وكرر الخطوة يغسل مرة أخرى.
- إزالة المادة طافية وريسوسبيند الخلايا الموجودة في وحدة التخزين المطلوبة، مثلاً، مل 1 أو 2 من برنامج تلفزيوني.
- حساب عدد الخلايا عداد الآلي خلية أو يدوياً باستخدام هيموسيتوميتير (دائرة نويباور).
2-تخصيب الخلايا ب بتحديد الخلية بالسلبيه
- تمييع الخلايا في برنامج تلفزيوني لتركيز نهائي من 50 × 106 خلايا/مل.
- نقل الخلايا إلى 5 مل جولة الأنبوبة البوليستيرين السفلي. إضافة 100 ميليلتر من جسم كوكتيل من الطقم تخصيب خلية بالي 2 مل تعليق خلية، وتخلط بلطف من بيبيتينج صعودا وهبوطاً (الشكل 2-1).
- احتضان الخلايا في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق.
- بإيجاز دوامة الجزيئات المغناطيسية المنصوص عليها في مواد تخصيب خلية ب 30 ثانية (الشكل 2-2). إضافة 150 ميليلتر من الجزيئات المغناطيسية إلى 2 مل العينة.
- احتضان العينة لآخر 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
- جعل حجم العينة إلى 2.5 مل مع PBS x 1 يحتوي على 2% مصل العجل الجنين (FCS) وحمض الإيثيلين 1 مم (يدتا). ضع الأنبوبة في المغناطيس واحتضان الأنبوب لآخر 3-5 دقيقة (الشكل 2-3).
- التقاط المغناطيس مع الأنبوب في المكان، وفي حركة مستمرة واحدة، صب الأنبوبة حيث أن تعليق التخصيب الخلية يتم جمعها في أنبوب جديد (الشكل 2-4). عد الخلايا عداد الآلي خلية أو يدوياً باستخدام هيموسيتوميتير الحصول على عائد إجمالي الخلايا ب.
ملاحظة: عادة ما يكون العائد ~ 105 ب خلايا/مل للعادي ب الخلايا و 5-50 × 106 خلايا/مل ل MCL. - يؤكد نقاء تخصيب خلية ب
- تأخذ ~ الخلايا 50,000 واحتضان الخلايا مع الأجسام المضادة-CD19/CD20 (01:20 إضعاف) والأجسام المضادة-CD45 بالإضافة إلى فلوروتشروميس مختلفة (01:10 إضعاف) في درجة حرارة الغرفة لمدة 15-30 دقيقة.
- يغسل مع 1 مل 1 × برنامج تلفزيوني + 1% جيش صرب البوسنة، والطرد المركزي الخلايا في 400-500 غم x لمدة 5 دقائق، وريسوسبيند الخلايا في ~ 200 ميليلتر من برنامج تلفزيوني.
- الحصول على عينات الخلايا بالتدفق الخلوي وتحليل لنقاء الخلايا باء. النقاء الغالب > 90% بهذه الطريقة (الشكل 3).
3-وضع النموذج الماوس إكسينوجرافت
- تعليق ~ 40-60 × 106 خلايا في 150-200 ميليلتر من برنامج تلفزيوني 1 x (الحجم المطلوب لحقن كل الماوس).
- ضخ 150 ميليلتر من تعليق خلية عن طريق الوريد (رابعا) الوريد ذيل كل 6-7 الأسبوع القديمة العوز الفئران مشمولان إيماءة غاما (مجموعة موردي المواد النووية) بغض النظر عن نوع الجنس (الشكل 4 أ).
- السماح للفئران لتطوير الأورام اللمفاوية البشرية ~ 10 أسابيع.
ملاحظة: الخلايا اللمفاوية البشرية الأولية يستغرق وقتاً أطول لوضع الورم مقارنة بخطوط الخلايا البشرية سرطان الغدد الليمفاوية (~ 3 أسابيع). - عندما تبدأ الحيوانات في إظهار أعراض أمراض قاتلة مثل فقدان الوزن، تكدرت الشعر، تناقص النشاط، الشلل أطرافهم هند، إلخ، التضحية الفئران CO2 خنقاً متبوعاً بثقب القلب القلب للحصول على الدم ب.
- جمع مختلف الأجهزة مثل نخاع العظم والطحال والكبد بتشريح الفئران وجمع الدم بسحب الدم من القلب وقت التضحية للورم انجرافتمينت تحليل (الشكل 4 باء -و).
4-تشيميريسم تحليل خلية الورم انجرافتيد في مختلف الأجهزة
- وبعد جمع مختلف الأجهزة، عملية لهم بتعطيل الميكانيكية لتوليد تعليق خلية مفردة عقب تحلل خلايا الدم الحمراء (RBC) استخدام ميليلتر 200 1 x البوتاسيوم كلوريد الأمونيوم العازلة للدم ونخاع العظام، 500 ميليلتر للطحال، ومل 2 للكبد .
- عد ووصمة عار الخلايا باستخدام الأجسام البشرية بخليه محددة أيوالمضادة-CD19، CD20 مكافحة، ومكافحة CD45.
ملاحظة: الفئران مجموعة موردي المواد النووية تفتقر خلايا ب والتالي للتحليل، ملطخة الخلايا مع علامات خلية ببشريه محددة. - تحليل الخلايا المستمدة من كل جهاز بالتدفق الخلوي النابضة في الخلايا ب (CD19 + CD20 +، CD45 +).
- تحديد الخلايا السرطانية انجرافتيد في الأجهزة المختلفة المستمدة من MCL حقن الفئران استناداً إلى بوابات الخلايا كما هو مبين في الخطوة 4، 3 (الشكل 4).
ملاحظة: انظر الجدول للمواد لمزيد من التفاصيل.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
ويصف المخطوط بروتوكولا أمثل للتنمية الناجحة لنموذج الماوس إكسينوجرافت engraftment الخلايا MCL. إعداد سكان خلية النقي (في هذه الحالة في خلايا MCL)، حرج للغاية لتطوير ناجح MCL تكثيفها. ويمثل الرقم 1 الخطوات التحضيرية لعزل الخلايا وحيدات النوى من دم المريض MCL بكثافة الفصل التدرج. وتجهز الخلايا وحيدات النوى كذلك الحصول على النقي ب الخلايا باستخدام مجموعة إثراء سلبي بخليه للحصول على عدد سكان خلية نقية لحقن إكسينوجرافت في الفئران. وينبغي الحرص على الحصول على نقاء الحد الأقصى كي يكون ناجحاً MCL engraftment. نقاء الحصول عليها باستخدام هذا الأسلوب عادة > 90%. وكانت الخلايا المتبقية أساسا وحيدات وبعض خلايا T (البيانات لا تظهر).
ويمثل الرقم 2 الخطوات المختلفة للبروتوكول تنقية الخلية بكما هو موضح في المقطع أساليب. كذلك يتم تحليل خلايا التخصيب للنقاء بهم بتدفق سيتوميتير باستخدام علامات مختلفة (CD45، CD19، CD20، CD23، CD200، CD5، كابا، وامدا). النابضة متتابعة كما هو مبين في الشكل 3 يسمح تميز الخلايا MCL: يتم تحديد CD45 + CD19 + CD20 +، CD5 +، CD23−، و CD200−. أجرى التعويض لتلطيخ متعدد الألوان باستخدام عناصر تحكم مفردة الملون لكل من فلوروتشروميس المستخدمة، وفقا للهيكل الخلوي القياسية.
الرقم 3E ، ز يمثل مؤامرة نقطة نموذجية من الخلايا ب قبل وبعد تخصيب اليورانيوم. وفي هذه الحالة، > 95% الخلايا التخصيب باستخدام هذه المجموعة من الخلايا ب. يتم تعليق الخلايا في برنامج تلفزيوني بتركيز 40-60 × 106 خلايا في 150-200 ميليلتر برنامج تلفزيوني كما ورد في البروتوكول. أنها كانت حقن فورا رابعا للفئران مجموعة موردي المواد النووية. وبعد 10 أسابيع، > 90% من الأورام اللمفاوية حقن الحيوانات المتقدمة يظهر علامات من مرض عضال (فقدان الوزن، تكدرت الشعر، تناقص النشاط، إلخ). بعد إزالة التضحية والطحال والكبد ومعالجتها للحصول على تعليق خلية مفردة بواسطة تعطل الميكانيكية (الشكل 4، و)؛ الدم هو رسمها بعناية في ثقب القلب القلب ونخاع العظام تتم معالجتها عن طريق خفض كل من طرفي عظم الفخذ والتنظيف باستخدام حقنه 2 مل مليئة ربمي المتوسطة أو برنامج تلفزيوني (الشكل 4). كذلك معالجة الخلايا بواسطة التدفق الخلوي استخدام علامات البشرية بخليه محددة مثل CD19/CD20 و CD45. كنا علامات محددة البشرية بخليه هنا لأنه يفتقر إلى سلالة الماوس المتلقية (مجموعة موردي المواد النووية) "خلايا ب". الشكل 4B - و يمثل مجموعة الأجهزة بعد التضحية والخطوات لمزيد من المعالجة. ويمثل درجة engraftment الخلايا MCL المستمدة من اثنين من المرضى في الشكل 4. ويمكن مقارنة نمط انجرافتمينت في الأجهزة المختلفة وبين المرضى اتباع هذا الأسلوب.
رقم 1: عزل ببمكس من الدم كله. الدم من مريض MCL المخفف 1:1 في المتوسط ربمي (A)، ووضعت بعناية على رأس الطبقة كثافة وسائل الإعلام التدرج (ب) دون اختلاط الدم في هذه الوسائط الكثافة المتدرجة (ج). الطرد المركزي في 400 غرام x لمدة 45 دقيقة يفصل الخلايا وحيدات النوى، والتي تظهر كحلقة بيضاء (يشير السهم إلى طبقة الخلايا وحيدات النوى) (د). هو بيبيتيد هذه الطبقة بلطف دون خلط مع الطبقات الأخرى في أنبوب نظيف لمواصلة تجهيزها (E). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 2: إثراء ب الخلايا من ببمكس- ببمكس معزولة بسبب كثافة الطرد المركزي التدرج يتم غسلها مرتين مع برنامج تلفزيوني. استخدام النفي ب خلية طقم الإثراء باتباع البروتوكول الخاص بالشركة المصنعة، يتم الحصول على جمهرة نقية من الخلايا ب (4من1–). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 3: تحليل نظام مراقبة الأصول الميدانية للخلايا MCL ونقاء ب الخلايا قبل وبعد تخصيب. MCL الخلايا وحيدات النوى تتميز بنظام مراقبة الأصول الميدانية التحليل باستخدام علامات مختلفة مثل CD45، CD19، CD20، CD23، CD200، CD5، كابا، وامدا. تحديد الخلايا التي إيجابية ل CD45، CD19، CD20، CD5، والسلبية ل CD23 و CD200 (A–و). ز تمثل السكان خلية بعد تخصيب اليورانيوم باستخدام مجموعة الانتقاء السلبي ه، الذي قبل تخصيب اليورانيوم بالمقارنة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 4: الفئران مجموعة موردي المواد النووية كنموذج إكسينوجرافت engraftment الخلايا MCL. تم حقن الخلايا ب المستمدة من المرضى MCL رابعا عن طريق الوريد الذيل الأفقي لمجموعة موردي المواد النووية الفئران (A). بعد السماح لعدة أيام للورم انجرافت، ضحى بها الفئران وتشريح (ب) لجمع مختلف الأجهزة مثل نخاع العظم (ج)، الطحال (د)، والدم المحيطي (E) (المستمدة من صميم القلب ثقب)، و الكبد (F). هذه الأجهزة كانت معالجتها وتحليلها بواسطة التدفق الخلوي لوجود خلايا ب. ز تمثل نمط engraftment MCL الخلايا في الأجهزة المختلفة المستمدة من MCL حقن الفئران مجموعة موردي المواد النووية. يتم إظهار النتائج من اثنين من المرضى. وترد البيانات يعني ± ووزارة شؤون المرأة، n = 3. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
التجارب السريرية ممكنة للمخدرات التي في مرحلة متقدمة من التنمية ولكن لا يمكن استخدامها لاكتشاف المخدرات. واتبعت منذ فترة طويلة الجهود الرامية إلى تطوير المستلمين الحيوان للسلالة البشرية الخلية من أجل اختبار المخدرات المرحلة المبكرة. هنا نقدم نموذجا حيوان أن يتجنب رفض الابتزاز البشرية ويمكن وضع نموذج للأمراض التي تصيب الإنسان، مثل MCL. وهذا في الوقت الحاضر نموذج xenograft أحدث دراسة الآليات engraftment الأورام البشرية ونمو الورم. هنا نستخدم مجموعة موردي المواد النووية الفئران، واحد من النماذج الماوس القصور المناعي الأكثر حتى الآن من أجل تحقيق نجاح أكبر من الأورام اللمفاوية انجرافتمينت. مجموعة موردي المواد النووية الفئران تفتقر إلى الخلايا التائية الناضجة وب الخلايا والخلايا ناغورني كاراباخ. كما يعانون من ضعف إشارة سيتوكين ولها عيوب في الاستجابة المناعية الفطرية.
إعداد اللمفاويات من العينة MCL الأولية بكثافة التدرج خطوة هامة لإزالة أنواع الخلايا الأخرى مثل خلايا الدم الحمراء والصفائح الدموية. تقليديا، يسمح استخدام الطرد المركزي تدرج في كثافة العزلة الناجح للخلايا الليمفاوية. ويتحقق مزيد من المعالجة لهذه الخلايا الليمفاوية إثراء السكان بالخليه باستخدام مجموعة أدوات تخصيب خلية بيتبع البروتوكول كما هو موضح في هذه المخطوطة. وينبغي الحرص على تحقيق درجة نقاء عالية من السكان باللمفاويات تصل إلى engraftment الأمثل للخلايا اللمفاوية. يتم حقن الخلايا MCL الوريد (على الأقل 40-60 × 106 خلايا/الماوس) من خلال الذيل الأفقي سمح الوريد، والفئران لتطوير الأورام اللمفاوية لمدة 10 أسابيع. الفئران وبحثت عن كثب كل يوم لأعراض المرض بما في ذلك فقدان الوزن، تكدرت الشعر، وانخفاض النشاط، الشلل أطرافهم هند، إلخ تحليل أجهزة مختلفة مثل الطحال والكبد ونخاع العظام والدم بالتدفق الخلوي وكشف MCL انجرافتمينت. في الآونة الأخيرة، لقد ثبت أن انجرافت الابتدائي MCL الخلايا في نخاع العظم والطحال من الفئران المشععة في مجموعة موردي المواد النووية في 20 أسبوعا من حقن9. مستقلة لهذا الاستنتاج، أننا نجحنا في تطوير منطقتنا نموذج xenograft MCL الأولية مع زيادة سرعة تشكيل الأورام.
هذا الطراز الماوس xenograft قد تصبح أداة مفيدة للغاية لدراسة تطور المرض لأنواع مختلفة من الأورام اللمفاوية. نماذج xenograft أيضا توفر أدوات قوية لإجراء التجارب الإكلينيكية للمخدرات مرشح للأورام الخبيثة الدموية مثل MCL، ومع ذلك، مع بعض القيود، على سبيل المثال، استنساخ المهيمن الحالي في الانتكاس في مريض ليس بالضرورة استنساخ الناشئة عن السلالة10. يمكن أن يكون هذا بسبب الضغط الانتقائي المختلفة الذي يخضع إكسينوجرافت في أنظمة المضيف مختلفة. عدم تكوين المكونة للدم في هذه السلالة تماما الخص هيماتوبويسيس البشرية، وبالتالي، الحد من الصيانة الطويلة الأجل للخلايا البشرية. المزايا في استخدام تكثيفها الأورام البشرية يتجاوز القيود كما يتم الحصول على النتائج في غضون بضعة أسابيع من خزعة ورم البشري فيما يتعلق بالاستجابة للعلاج. ردود المخدرات غالباً ما ترتبط بالأنشطة السريرية في المرضى11 عندما تستخدم خطوط الخلايا البشرية بدلاً من الخلايا السرطانية الأولية تكثيفها، ولكنها تساعد تشكل الأساس للاستجابات العلاجية الممكنة. استخدام الأورام الأولية xenograft المتعامدة على قيمة تنبؤية استجابة أقوى، لا سيما عندما تكون جرعة المخدرات ذات صلة سريرياً المستخدمة11،،من1213. هو صاروخ موجه خلايا اللمفاوية إلى منافذها شرط مسبق هام من أجل البقاء على قيد الحياة وإنشاء engraftment الورم. مجورلي ينظم هذه العملية عن طريق الجهاز اللمفاوي، ودخول تعميم الخلايا الليمفاوية عن طريق الأوردة بطانية عالية يحافظ على التوازن اللمفاويات في العقد الليمفاوية.
الدورة الدموية للخلايا الليمفاوية ب عن طريق الغدد الليمفاوية يتطلب عبور الحواجز بطانية وخلية chemoattractant-أدت الهجرة بتنسيق التفاعل مع جزيئات التصاق مختلفة. ولذلك، يمكن أن يشكل استهداف الجزيئات التي تتحكم في استضافة أكثر من الخلايا الليمفاوية إلى منافذها بقاء استراتيجية علاج جديد للأورام الليمفاوية الخلية بكما أنها تسلك سلوك مشابهة للخلايا اللمفية العادية. وكان هدفنا لاستهداف الجزيء جيم جام، جزيء التصاق هالة، التي موجودة على MCL. سيتم استخدام هذا النموذج إكسينوجرافت لدراسة الآثار العلاجية من جسم جام-ج على صاروخ موجه وانجرافتمينت من الخلايا اللمفاوية الأولية إلى منافذها البقاء على قيد الحياة. أننا أظهرنا مؤخرا مفعول الأجسام المضادة بعد ج جم في الفئران التي حصلت خط الخلية MCL، جيكو-114. هذا الجسم أثر حظر على استضافة أكثر خلايا جيكو-1 وأيضا عندما تدار في فترات منتظمة، حالت دون كفاءة engraftment الخلايا جيكو-1. بالإضافة إلى أثره على صاروخ موجه، استئصال علاج الأجسام المضادة اللمفاوية انجرافتيد في معظم الأجهزة التي تم اختبارها في هذه الفئران14.
في ضوء هذه المسألة العلمية والسريرية يجري تناولها، تمثل هذه الأورام إكسينوجرافتيد في الوقت الحاضر، نموذجا جديرا باهتمام لدراسة نتائج علاجية MCL.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب يعلن أن لديهم لا تضارب المصالح المالية.
Acknowledgments
هذا العمل كان يدعمها جنيه جنيف رابطة مكافحة السرطان، مؤسسة الدكتور دوبوا فيريير دينو--Lipatti، أونكوسويسي شرطة-مكتب الدعم الدستوري، مكتب الدعم الدستوري-02260-08-2008 و 2914-02-2012، و "منحة من مؤسسة العلوم الوطنية السويسرية" 31003A_156760 و 310030-153456.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Ficoll-paque media | GE Healthcare | 17-1440-02 | for separation of mononuclear cells |
| RPMI Medium 1640 | Gibco-Life technologies | 61870-010 | for dilution of blood sample |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | Sigma-Aldrich | D8537 | washing of cells |
| Bovine Serum Albumin (BSA) | Sigma-Aldrich | A8412 | for preparation of PBS with 1% BSA used in washing cells during isolation |
| CD19-APC700 | Beckman Coulter | B49212 | human pan-B cell marker |
| CD20-APC | Beckman Coulter | A21693 | human pan-B cell marker |
| CD20-ECD | Beckman Coulter | IM3607 | human pan-B cell marker |
| CD5-PC 5.5 | Beckman Coulter | PN A70203 | human T cell marker |
| CD23-PE | Pharmingen | 555711 | Cell surface protein typically absent in MCL |
| CD45 KO | Beckman Coulter | B36294 | Pan-leucocyte marker |
| CD200-PE | Pharmingen | 552475 | Cell surface protein typically absent in MCL |
| NOD scid gamma (NSG) mice | Charles River Laboratories | 5557 | used to develop MCL xenografts in this study |
| Easy sep Human B cell enrichment kit | Stem cell technologies | 19054 | used to enrich B cells to obtain pure cells for injecting into mice |
| FACS | Beckman Coulter | Navios | used to characterize MCL sample and to study the organs for MCL engraftment |
| 1X ammonium chloride potassium buffer | red blood lysis buffer (NH4Cl 8,024 mg/l; KHCO3 1,001 mg/l; EDTA.Na2·2H2O 3.722 mg/l ) |
References
- Baggiolini, M., Dewald, B., Moser, B.
- Baggiolini, M.
- Janeway, C. A., Travers, P., Walport, M., Shlomchik, M. J. Immunobiology: The Immune System in Health and Disease. , 5th edition, (2001).
- De Silva, N. S., Klein, U. Dynamics of B cells in germinal centres. Nat Rev Immunol. 15 (3), 137-148 (2015).
- Cohen, P. L., Kurtin, P. J., Donovan, K. A., Hanson, C. A. Bone marrow and peripheral blood involvement in mantle cell lymphoma. Br. J. Haematol. 101, 302-310 (1998).
- Meusers, P., Hense, J., Brittinger, G. Mantle cell lymphoma: diagnostic criteria, clinical aspects and therapeutic problems. Leukemia (Baltimore). 11 (Suppl 2), S60-S64 (1997).
- Herrmann, A., et al. Improvement of overall survival in advanced stage mantle cell lymphoma. J Clin Oncol. 27 (4), 511-518 (2008).
- Martin, P., et al. Intensive treatment strategies may not provide superior outcomes in mantle cell lymphoma: overall survival exceeding 7 years with standard therapies. Ann Oncol. 19 (7), 1327-1330 (2008).
- Iyengar, S., et al. Characteristics of human primary mantle cell lymphoma engraftment in NSG mice. Br J Haematol. 173 (1), 165-169 (2016).
- Klco, J. M., et al. Functional heterogeneity of genetically defined subclones in acute myeloid leukemia. Cancer cell. 25 (3), 379-392 (2014).
- Kerbel, R. S. Human tumor xenografts as predictive preclinical models for anticancer drug activity in humans: better than commonly perceived-but they can be improved. Cancer Biol Ther. 2 (4 Suppl 1), S134-S139 (2003).
- Johnson, J. I., et al. Relationships between drug activity in NCI preclinical in vitro and in vivo models and early clinical trials. Br. J. Cancer. 84, 1424-1431 (2001).
- Scholz, C. C., Berger, D. P., Winterhalter, B. R., Henss, H., Fiebig, H. H. Correlation of drug response in patients and in the clonogenic assay with solid human tumour xenografts. Eur. J. Cancer. 26, 901-905 (1990).
- Doñate, C., Vijaya Kumar, A., Imhof, B. A., Matthes, T. Frontline Science: Anti-JAM-C therapy eliminates tumor engraftment in a xenograft model of mantle cell lymphoma. J Leukoc Biol. 100 (5), 843-853 (2016).
