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Behavior

दर्दनाक मस्तिष्क चोट के बाद चूहों में व्यवहार घाटे का पता लगाने

Published: January 30, 2018 doi: 10.3791/56044
Automatic Translation
*1, *1, 1, 1, 1, 1
1Department of Anesthesiology, University of Texas Medical Branch
* These authors contributed equally

Summary

व्यवहार परीक्षण के लक्ष्य यहां प्रस्तुत दर्दनाक मस्तिष्क की चोट के बाद चूहों में कार्यात्मक घाटे का पता लगाने के लिए है । चार विशिष्ट परीक्षण प्रस्तुत कर रहे है कि व्यवहार में घाटे का पता लगाने के लिए विशिष्ट मस्तिष्क क्षेत्रों को नुकसान को प्रतिबिंबित समय पर चोट के बाद एक साल तक का विस्तार ।

Abstract

दोनों नागरिक और सैंय आबादी में दर्दनाक मस्तिष्क चोट (TBI) की बढ़ती घटनाओं के साथ, TBI अब एक पुरानी बीमारी माना जाता है; हालांकि, कुछ अध्ययनों ने TBI के कुतर मॉडलों में चोट के दीर्घकालिक प्रभावों की जांच की है । यहां दिखाया व्यवहार उपाय है कि अच्छी तरह से चोट के बाद जल्दी समय के लिए TBI अनुसंधान में स्थापित कर रहे हैं, ऐसे दो सप्ताह के रूप में, दो महीने तक । इन तरीकों में से कुछ पहले चोट के बाद बार में इस्तेमाल किया गया है, एक साल तक, लेकिन बहुत कुछ प्रयोगशालाओं द्वारा । यहां का प्रदर्शन किया तरीकों के लिए सजगता, एक बीम परीक्षण संतुलन संतुलन, एक बीम का परीक्षण करने के लिए, संतुलन और मोटर समंवय परीक्षण चलने के लिए एक लघु स्नायविक आकलन कर रहे हैं, और मॉरिस पानी भूलभुलैया कि घाटे के प्रति संवेदनशील हो सकता है की एक काम स्मृति संस्करण संदर्भ स्मृति । पुरुष चूहों संभाला और पूर्व स्नायविक, संतुलन के लिए प्रशिक्षित किया गया, और मोटर समंवय परीक्षण parasagittal द्रव टक्कर चोट (एफपीआई) या शर्म की चोट प्राप्त करने से पहले । चूहों पर परीक्षण किया जा सकता है लघु स्नायविक आकलन (neuroscore), बीम-संतुलन, और बीम-कई बार चलना है, जबकि पानी भूलभुलैया पर परीक्षण केवल एक बार किया जा सकता है । यह अंतर है, क्योंकि चूहों कार्य याद कर सकते हैं, इस प्रकार अगर दोहराया परीक्षण एक ही जानवर में करने का प्रयास किया है परिणाम प्राप्त । चोट के बाद एक से तीन दिनों के परीक्षण के बाद, महत्वपूर्ण अंतर सभी तीन गैर संज्ञानात्मक कार्यों में पाए जाते हैं । हालांकि, बीम-वॉक कार्य में अंतर बाद के समय बिंदुओं (3 महीने बाद) में detectable नहीं थे । घाटे में 3 महीने में बीम-बैलेंस और neuroscore में 6 महीने में पाया गया । काम स्मृति में घाटे की चोट के बाद 12 महीनों के लिए पता लगाया गया है, और एक संदर्भ स्मृति में घाटा पहले 12 महीने में दिखाई दिया । इस प्रकार, मानक व्यवहार परीक्षण एफपीआई के बाद लगातार व्यवहार घाटे के उपयोगी उपाय हो सकते हैं ।

Introduction

यहां प्रस्तुत तरीकों के लिए विशिष्ट मस्तिष्क चूहे में TBI के एक प्रयोगात्मक मॉडल द्वारा प्रेरित क्षेत्रों में कार्यात्मक घाटे का पता लगाने के लिए डिज़ाइन कर रहे हैं । चार अलग व्यवहार परीक्षण वर्णित किया जाएगा । सबसे पहले, लघु स्नायविक मूल्यांकन, neuroscore के रूप में संदर्भित, किसी विशेष उपकरण की आवश्यकता के बिना किया जा सकता है लेकिन अभ्यास की आवश्यकता है; यह परीक्षण सजगता में घाटे का पता लगाता है. दूसरा, बीम-बैलेंस टेस्ट में संतुलन की क्षमता में घाटे का पता लगाता है । इस कार्य के लिए हेंडलर को एक क्रमवार स्केल के आधार पर चूहे को स्कोर करना होता है और हैंडलर के कुछ प्रशिक्षण की आवश्यकता होती है । बीम-बैलेंस टेस्ट में एक संकीर्ण बीम की आवश्यकता होती है और vestibular सिस्टम में घाटे के प्रति संवेदनशील होता है । तीसरा परीक्षण vestibulomotor समंवय का आकलन है । इस परीक्षण बीम-चलना कार्य के रूप में जाना जाता है, और हालांकि कुछ पूर्व प्रशिक्षण चूहे की आवश्यकता है, इस प्रक्रिया को पिछले दो से अधिक उद्देश्य है के रूप में विलंबता बीम पार करने के लिए एक उद्देश्य से व्यक्तिपरक स्कोरिंग पर निर्भर नहीं उपाय है । यह अंतर इसलिए है क्योंकि किसी सुरक्षित बॉक्स तक पहुंचने के लिए संकीर्ण बीम को ट्रैवर्स करने का समय मापा जाता है । बीम-वॉक टेस्ट बीम-बैलेंस के साथ ही एक भागने बॉक्स की तुलना में एक लंबी बीम की आवश्यकता है । यह परीक्षण दोनों मोटर समंवय और संतुलन में घाटे के उपाय है और इस तरह सेरिबैलम और मोटर संबंधित मस्तिष्क क्षेत्रों को नुकसान के प्रति संवेदनशील है । मॉरिस जल भूलभुलैया के काम स्मृति संस्करण (MWM-एम एम) मुख्य रूप से हिप्पोकैम्पस समारोह और अग्रिम प्रांतस्था या कार्यकारी समारोह के साथ एकीकरण परीक्षण । मॉरिस पानी भूलभुलैया का संस्करण भी संदर्भ स्मृति1में घाटे का पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है दिखाया ।

इन तरीकों को साहित्य में उनकी अच्छी तरह से स्थापित ट्रैक रिकॉर्ड के आधार पर चुना गया था । हर एक कई हाथों में अनुसंधान के अनेक वर्षों में चूहों के कई उपभेदों के साथ विभिंन प्रयोगशालाओं से प्रभावी किया गया है । हालांकि, अतीत में, चोट के बाद दो सप्ताह तक के उपायों के बाद चोट "पुराने" समय अंक माना जाता था । इस प्रकार, कुतर में TBI के जीर्ण प्रभाव के अध्ययन के लिए व्यवहार तकनीक स्थापित करने के लिए, इन अच्छी तरह से ज्ञात तरीकों चोट के बाद लंबे समय अंक पर TBI प्रेरित घाटे का पता लगाने के लिए संवेदनशीलता के लिए मूल्यांकन किया जाना चाहिए । जबकि अब TBI के कई कुतर मॉडल हैं, एफपीआई मॉडल सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल में से एक है, और इस अध्ययन में लागू किया जाता है । इस मॉडल को पहले 1950 के2में प्रकाशित किया गया था, और तब से, १,००० से अधिक कागजात चूहों में एफपीआई कार्यरत है3. चोट के इस प्रकार के neuropathology हमारे द्वारा अच्छी तरह से बताया गया है4 और दूसरों5,6,7। संक्षेप में, हिप्पोकैंपस में न्यूरॉन चोट Fluoro-जेड धुंधला चोट के बाद कम समय में उपयोग कर खुराक-निर्भर होना दिखाया गया है, अर्थात, 24-48 ज; जबकि सकल शोष और cavitation आंतरिक कैप्सूल और प्रांतस्था के thinning सहित चोट6,7के बाद एक साल में सूचित किया गया है ।

मस्तिष्क समारोह के सबसे सार्थक प्रतिनिधित्व एक प्रयोगात्मक मस्तिष्क चोट के बाद व्यवहार परिणाम उपायों का उपयोग करके मूल्यांकन किया जाता है । हालांकि, एफपीआई प्रयोगों के विशाल बहुमत है कि व्यवहार के परिणामों का उपयोग अपेक्षाकृत जल्दी उपाय करते हैं, आमतौर पर 1 से 14 दिन चोट के बाद । तरीकों का प्रयोग यहां का प्रदर्शन किया, कुछ व्यवहार घाटे बाहर 12 महीने के लिए चोट के बाद पता लगाया जा सकता है1। स्नायविक समारोह, सकल vestibulomotor समारोह, और ठीक मोटर समंवय पोस्ट पर मूल्यांकन किया गया-चोट दिन (पिड) 1-3 और 3, 6, और 12 महीनों में सर्जरी के बाद, एक लघु स्नायविक आकलन का उपयोग (Neuroscore; Schallert से संशोधित8), बीम-शेष कार्य, और बीम-वॉक टास्क9,10,11. संदर्भ और कार्य स्मृति मॉरिस पानी भूलभुलैया1,12,13के एक काम स्मृति संस्करण का उपयोग कर मूल्यांकन किया गया ।

Protocol

सभी पशु प्रयोगों पहले संस्थागत पशु देखभाल और टेक्सास चिकित्सा शाखा, Galveston, टेक्सास की देखभाल और प्रयोगशाला जानवरों (8 वीं संस्करण के उपयोग के लिए स्वास्थ्य गाइड के राष्ट्रीय संस्थानों द्वारा निर्देशित के विश्वविद्यालय के उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित कर रहे हैं, राष्ट्रीय अनुसंधान परिषद्).

1. सर्जिकल प्रक्रियाओं और द्रव टक्कर TBI

  1. वयस्क पुरुष ३०० g Sprague-Dawley चूहों एक विक्रेता और घर से भोजन और पानी विज्ञापन libitum के साथ एक स्थिर परिस्थितियों के साथ एक vivarium में पिंजरे प्रति दो: प्रकाश चक्र (६०० एच से १,८०० एच), तापमान (21 डिग्री सेल्सियस से 23 डिग्री सेल्सियस), और आर्द्रता (40-60%) ।
  2. सर्जरी से पहले, तीन से पांच दिनों के लिए चूहों को संभाल, और फिर Neuroscore, बीम के लिए चूहों को प्रशिक्षित-संतुलन, और बीम-एक से तीन दिन से पहले आधारभूत मूल्यांकन के लिए प्रक्रियाओं चलना । आधारभूत मूल्यांकन या तो दिन या सुबह सर्जरी से पहले आचरण ।
    नोट: हमेशा इस तरह के रूप में उन है कि एक चोट प्राप्त होगा और, या तो बेतरतीब ढंग से या एक संतुलित तरीके से, उपचार समूहों में चूहों समूह के रूप में एक ही तरीके से शर्म से संचालित या शल्य चिकित्सा भोले चूहों के रूप में नियंत्रण चूहों, तैयार करते हैं ।
  3. रोकनेवाला शर्तों के तहत सर्जरी प्रदर्शन (बाँझ उपकरण, साफ सर्जिकल गाउन, बाँझ दस्ताने, मास्क और सिर कवर).
  4. Anesthetize 4% में प्रेरण और रखरखाव के लिए 1.5-2% पर isoflurane का उपयोग चूहों । Intubate और यांत्रिक रूप से चूहों हवादार (हवा में isoflurane का उपयोग कर: ऑक्सीजन (70:30) और parasagittal द्रव टक्कर चोट के लिए तैयार के रूप में पहले से वर्णित14,15।
  5. suturing से पहले ०.१०% bupivicane के साथ घाव साइटों घुसपैठ और रेक्टल एसिटामिनोफेन सपोसिटरी (१२० मिलीग्राम/) संज्ञाहरण से जगाने के लिए पहले डालने । वसूली की अवधि के दौरान और संक्रमण के लक्षण के लिए अगले दिन, गंभीर स्नायविक चोट (जैसे पक्षाघात) या गंभीर असुविधा (जैसे निर्बाध निद्रालु स्थिति) के लिए चूहों की निगरानी करें ।
    नोट: इन लक्षणों के किसी भी प्रदर्शन चूहों euthanized होना चाहिए (4% isoflurane एक संवेदनाहारी decapitation द्वारा पीछा चैंबर में) ।

2. Neuroscore प्रशिक्षण और परीक्षण

  1. Neuroscore प्रशिक्षण
    1. ज्ञात चूहों पर प्रशिक्षण के लिए प्रयोग किया जाता है भोली, निंनलिखित क्रम में परीक्षण के माध्यम से चलाने के लिए शुरू से (कदम 2.2.1-2.2.5) को समाप्त करने के लिए, 1 मिनट के लिए घर पिंजरे में वापस, तो दोहराने के एक अंक तक शूंय हासिल की है ।
    2. प्रत्येक चूहे के लिए प्रशिक्षण परीक्षणों के रिकॉर्ड के लिए स्कोर शीट पर मार्क स्कोर । प्रशिक्षण के बाद, एक ही या अगले दिन पर एक परीक्षण सत्र (नीचे देखें) प्रदर्शन करते हैं ।
      नोट: यदि परीक्षण सत्र आधार रेखा के लिए एक शूंय स्कोर का उत्पादन नहीं करता है, प्रशिक्षण और परीक्षण दोहराया जा सकता है या चूहे एक गैर व्यवहार प्रयोग को हटा दिया जा सकता है ।
  2. Neuroscore परीक्षण
    नोट: निंनलिखित क्रम में परीक्षण के माध्यम से चलाने के लिए, 1 मिनट के लिए घर पिंजरे में वापस, तो तीन बार की कुल के लिए दो बार दोहराना ।
    1. Forelimb फ्लेक्स टेस्ट
      1. पूंछ से चूहा उठा और मेज की सतह के ऊपर के बारे में 6-12 इंच पकड़ो ।
      2. निरीक्षण चाहे चूहा फैली या ठोके forelimbs । (1) या अनुपस्थिति (0) के फ्लेक्स की उपस्थिति स्कोर ।
        नोट: फ्लेक्स असामांय है । 1 x 3 = 3 (कुल संभव = 3) के संभावित स्कोर ।
    2. Hindlimb फ्लेक्स टेस्ट
      1. पूंछ से चूहा उठा और मेज की सतह के ऊपर के बारे में 6-12 इंच पकड़ो ।
      2. निरीक्षण चाहे चूहा फैली या ठोके hindlimbs । (1) या अनुपस्थिति (0) के फ्लेक्स की उपस्थिति स्कोर ।
        नोट: फ्लेक्स असामांय है । 1 x 3 = 3 (संचई कुल संभव = 6) का संभावित स्कोर ।
    3. नेत्रहीन को परीक्षा देने का ट्रिगर
      1. पूंछ से चूहा उठा ।
      2. धीरे मेज के किनारे की ओर चूहा कम जब तक नाक के बारे में बढ़त से 10 सेमी है ।
      3. चूहे को धीरे से किनारे की ओर ले जाएं (मूंछों को किनारे छूने की अनुमति न दें) ।
      4. गौर करें कि चूहे तक पहुंचते हैं और मेज की ओर forepaws फैली हैं । उपस्थिति स्कोर (0) या अनुपस्थिति (1) का विस्तार forepaws ।
        नोट: दृश्य संकेतों के प्रत्युत्तर में तालिका के लिए पहुँचना सामान्य है । 1 x 3 = 3 (संचई कुल संभव = 9) का संभावित स्कोर ।
    4. संपर्क चालू रखने का परीक्षण
      1. चूहा पकड़ो, हाथ में शरीर के साथ, टेबल एज और forelegs मुक्त करने के लिए समानांतर ।
      2. धीरे मेज के किनारे की ओर चूहा कम जब तक एक तरफ मूंछ मेज के किनारे को छूने ।
      3. गौर से देखें कि क्या चूहा उसी तरफ forelimb का विस्तार करता है जितनी कि मूंछों को टेबल एज की ओर मेज छू रहे हैं जैसे ही मूंछों को छूते हैं ।
        नोट: इस प्रतिक्रिया के रूप में काफी अभ्यास लेता है और शोधकर्ताओं को अच्छी तरह से इस परीक्षण लगातार प्रदर्शन करने के लिए प्रशिक्षित करने की आवश्यकता है ।
      4. तालिका की ओर पहुंचने की उपस्थिति (0) या अनुपस्थिति (1) स्कोर ।
        नोट: स्पर्श उत्तेजना के जवाब में पहुंचना सामांय है । 1 x 3 = 3 (कुल संभव = 12) का संभावित स्कोर ।
      5. दोहराएं चरण 2.2.4.1-2.2.4.4 विपरीत पक्ष के लिए । 1 x 3 = 3 (संचई कुल संभव = 15) का संभावित स्कोर ।
    5. Hindpaw लोभी पलटा टेस्ट
      1. forelimbs के नीचे छाती के चारों ओर अंगूठे और तर्जनी के साथ एक हाथ में चूहे पकड़ो ।
      2. धीरे दूसरे तर्जनी के साथ एक hindpaw की हथेली को छूने ।
      3. निरीक्षण चाहे चूहा तर्जनी को पकड़ता है. उपस्थिति स्कोर (0) या अनुपस्थिति (1) लोभी की ।
        नोट: लोभी सामान्य है । 1 x 3 = 3 (कुल संभव = 18) के संभावित स्कोर ।
      4. दोहराएं चरण 2.2.5.1-2.2.5.3 विपरीत पक्ष के लिए । 1 x 3 = 3 (कुल संभव = 21) का संभावित स्कोर ।
    6. रन
      1. 7 x 3 = 21 के संभावित संचयी कुल के लिए स्कोर का योग । शून्य का स्कोर सामान्य है ।

3. बीम-संतुलन प्रशिक्षण और परीक्षण

  1. उपकरण
    1. लंबाई में एक बीम ६० सेमी, चौड़ाई में १.७५ सेमी, ऊंचाई में ४.० सेमी, सेट ९० सेमी की ऊंचाई में, एक बैरियर के साथ 30 सेमी चौड़ाई में, 30 सेमी । संलग्न बैरियर के साथ एक मेज पर बीम सुरक्षित ताकि बाधा से बीम के ५० सेमी, मेज से दूर है ।
    2. बीम के नीचे एक तकिए सुरक्षा बॉक्स रखें कि गिरने चूहों के प्रभाव को नरम ।
  2. बीम-बैलेंस प्रशिक्षण
    1. सर्जरी से पहले 24-48 ज पर, एक ६० एस परीक्षण के लिए बीम पर चूहे की जगह ।
    2. अगर चूहा अपने आप को संतुलित करने में विफल रहता है, चूहे की सुरक्षा बॉक्स में गिर करने के लिए अनुमति देते हैं ।
    3. चूहा सुरक्षित रूप से बीम पर तैनात है जब समय शुरू करते हैं ।
    4. ६० s अवधि के लिए चूहे का पालन करें और निम्न पैमाने के आधार पर अपने प्रदर्शन की दर: 1 = स्थिर संतुलन से पता चलता है (दूल्हे, चलता है, बाधा चढ़ाई करने का प्रयास), 2 = दिखाता है अस्थिर संतुलन (बीम के पक्षों लोभी और/या अस्थिर आंदोलनों है), 3 = संतुलन की कोशिश करता है लेकिन फिसल जाता हे आर spins बीम पर, पर लटका बीम आलिंगन से, 4 = संतुलन की कोशिश करता है, लेकिन falls 10 एस के बाद, 5 = पर या बीम से लटकी हुई है और 10 एस के तहत में बंद हो जाता है, 6 = बंद हो जाता है, कोई संतुलन या बीम पर लटका प्रयास कर ।
    5. कार्यपत्रक पर स्कोर रिकॉर्ड है ।
    6. चूहा घर पिंजरे में 15 एस के लिए आराम करने के लिए अनुमति दें, तो कदम 3.2.1-3.2.5 दोहराएं जब तक चूहा 1 या 2 के तीन अंक प्राप्त करता है । चूहा तो प्रशिक्षित माना जाता है.
    7. सर्जरी से पहले सर्जरी के दिन 24 घंटे में एक पूर्व मूल्यांकन या प्रदर्शन ।
  3. बीम-बैलेंस टेस्टिंग
    1. सर्जरी के बाद 24 ज शुरू करने और 4 दिनों के लिए जारी रखने के लिए, चूहों दैनिक परीक्षण ।
      1. बीम पर चूहे प्लेस और टाइमर शुरू करते हैं । ६० एस के लिए बारीकी से निरीक्षण चूहा पर स्कोर रिकॉर्ड ।
      2. एक संक्षिप्त आराम की अवधि (1-3 मिनट) के लिए घर पिंजरे में चूहे लौटें ।
      3. तीन परीक्षणों के लिए चरण 3.3.1.1-3.3.1.2 दोहराएं ।

4. बीम-वॉक प्रशिक्षण और परीक्षण

  1. उपकरण
    1. लंबाई में एक लकड़ी के बीम १०० सेमी, चौड़ाई में २.५ सेमी, और ऊंचाई में ४.० सेमी का उपयोग करें ।
    2. एक समायोज्य खड़े हो जाओ, एक समायोज्य मेज, और चार खूंटे, ऊंचाई में 2 सेमी, और एक काला लक्ष्य बॉक्स लंबाई में 28 सेमी, ऊंचाई में 18 सेमी, और 18 सेमी चौड़ाई में, एक बहुत बड़ा अंत पर एक खोलने के साथ करने के लिए चूहे के माध्यम से पारित करने के लिए ।
    3. लक्ष्य बॉक्स है कि समायोज्य मेज पर रखा गया है के खुले पक्ष को बीम के लक्ष्य अंत देते हैं । चमकीले प्रकाश और सफेद शोर जनरेटर बीम के शुरू अंत के पास रखें । बीम के शुरू अंत समायोज्य खड़े करने के लिए तय है तो बीम और बॉक्स एक ही स्तर पर हैं, के बारे में 1 मीटर फर्श के ऊपर ।
  2. बीम-वॉक प्रशिक्षण
    1. सर्जरी से पहले 24-48 एच प्रशिक्षण शुरू करें ।
    2. लक्ष्य बॉक्स में चूहे को 1 मिनट के लिए रखें । 1 मिनट के बाद, चूहा निकालें और परीक्षण शुरू करते हैं ।
    3. परीक्षण शुरू करने के लिए, प्रकाश और सफेद शोर पर बारी और लक्ष्य बॉक्स के लिए निकटतम खूंटी छेद के स्थान पर बीम पर चूहे की जगह और चूहे लक्ष्य बॉक्स में प्रवेश करने के लिए अनुमति देते हैं ।
    4. जब चूहे के सामने पैर लक्ष्य बॉक्स की दहलीज पार, तुरंत प्रकाश और शोर स्रोतों (यह एक परीक्षण के अंत है) बंद कर देते हैं ।
    5. प्रत्येक परीक्षण के बीच 30 एस के लिए लक्ष्य बॉक्स में चूहे आराम करने के लिए अनुमति दें ।
    6. चरण में प्रक्रिया दोहराएं 4.2.3-4.2.5 दो बार प्रत्येक खूंटी स्थान पर और प्रारंभिक स्थिति से । छेद में खूंटे डालें और एक पूर्ण बीम चलाने-जगह में खूंटे के साथ चलते हैं ।
    7. भागो तीन समय बीम-परीक्षण चलना ।
      1. लक्ष्य बॉक्स से चूहा निकालें । प्रकाश और सफेद शोर पर बारी और स्टॉपवॉच जब बीम पर चूहा रखने शुरू करते हैं । स्टॉप वॉच को तुरंत रोकें जब चूहे के सामने पैर गोल बॉक्स की दहलीज को पार कर जाते हैं, और फिर तुरंत लाइट और शोर बंद कर देते हैं ।
      2. कार्यपत्रक पर समय रिकॉर्ड करना ।
      3. दोहराएं कदम 4.2.7.1-4.2.7.2 जब तक चूहे 5 एस या उससे कम की तीन बार हासिल की है । चूहा अब प्रशिक्षित माना जाता है ।
  3. बीम-चलना आधारभूत आकलन
    1. दिन या सुबह सर्जरी से पहले, जगह में खूंटे के साथ तीन समय परीक्षण करते हैं ।
    2. 30 एस के लिए लक्ष्य बॉक्स में चूहे को रखकर शुरू करें. लक्ष्य बॉक्स से चूहा निकालें और सफेद शोर और प्रकाश पर बारी । बीम के स्टार्ट एंड पर चूहा रखें और साथ ही स्टॉप वॉच को शुरू करें । जब चूहे के सामने पैर लक्ष्य बॉक्स की दहलीज पार, तुरंत प्रकाश और शोर स्रोतों बंद करो और टाइमर बंद करो ।
    3. कार्यपत्रक पर समय रिकॉर्ड करना । 30 एस के लिए लक्ष्य बॉक्स में चूहे बने रहने दें ।
    4. दोहराएं चरण 4.3.2-4.3.3 जब तक तीन विलंब कार्यपत्रक पर रिकॉर्ड किए गए हैं । तीन समय के परीक्षण पूरा होने के बाद घर के पिंजरे में चूहे लौटें ।
  4. बीम-वॉक टेस्टिंग
    1. परीक्षण चूहों दैनिक सर्जरी के बाद 24 घंटे शुरू करने और 4 दिनों तक के लिए जारी । चरण ४.३ में के रूप में तीन समय परीक्षण निष्पादित करें ।

5. काम स्मृति पानी भूलभुलैया

  1. उपकरण
    1. 28 सेमी की ऊंचाई तक पानी से भरे टैंक का उपयोग करें और 26 ± 1 डिग्री सेल्सियस पर बनाए रखा ।
    2. एक स्पष्ट ऐक्रेलिक ग्लास मंच है कि ऊंचाई में एक स्टैंड 26 सेमी पर व्यास में 10 सेमी है का प्रयोग करें ।
      नोट: मंच के शीर्ष सतह के साथ एक चक्र के आकार में सिलिकॉन के साथ लेपित किया जाना चाहिए यह भर में एक्स । यह चूहों को मंच पर चढ़ने के लिए अनुमति देता है और उंहें कर्षण देता है ताकि वे बंद पर्ची नहीं है ।
    3. एक स्टॉपवॉच, एक गर्मी चिराग, डिस्पोजेबल तौलिए, शोषक पैड, अतिरिक्त पिंजरों, और एक छोटा सा, लंबे समय से संभाला मछलीघर मछली शुद्ध इकट्ठा । एक कंप्यूटरीकृत वीडियो ट्रैकिंग प्रणाली है कि एक वीडियो कैमरे से जुड़ा है चूहे तैराकी रिकॉर्ड और कंप्यूटर के लिए डेटा भेजने का उपयोग करें । बाद में विश्लेषण के लिए वीडियो और कंप्यूटर पर डेटा सहेजें ।
  2. काम स्मृति पानी भूलभुलैया परीक्षण
    1. पांच दिनों के लिए प्रत्येक दिन चूहों परीक्षण के चार जोड़े दे दो, चार चक्रों में से प्रत्येक में मंच जगह और नीचे वर्णित के रूप में चार शुरू अंक (एन, एस, ई, डब्ल्यू) में से प्रत्येक से चूहों शुरू करते हैं ।
    2. पहले प्रयोग में इस्तेमाल किया जा करने के लिए प्रारंभिक स्थान-मंच जोड़े को परिभाषित ।
      नोट: चक्र का क्रम जहां मंच स्थित है और प्रारंभिक बिंदु इस्तेमाल तैराकी के पांच दिनों में से प्रत्येक के लिए एक अलग क्रम में होने की जरूरत है, लेकिन प्रत्येक चूहे के लिए एक ही ।
      1. चार प्रारंभिक अंक (एन, एस, ई, या डब्ल्यू) और चार मंच स्थानों का उपयोग करें (चक्रों 1, 2, 3, या 4; चित्र 1) । उदाहरण के लिए, (N, 2; ड, 4; एस, 1; W, 3; चित्र 1) देखें । योजना एक संतुलित आदेश (यादृच्छिक नहीं) के लिए शुरू अंक भी प्लेटफार्मों के करीब से बचने के लिए (कोई प्रारंभिक बिंदु मंच स्थान के रूप में एक ही चक्र है) । एक डेटा शीट का उपयोग कर सेट अप मंच चक्र और चार प्रारंभिक अंक ।
      2. वीडियो ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर के लिए एक प्रोटोकॉल लिखने के लिए उपयोग करने के लिए चूहों तैराकी वीडियो और निर्दिष्ट डेटा (उदा., तैरने की अवधि, गति, दूरी मंच ढूंढने से पहले कूच) इकट्ठा ।
        नोट: ट्रैकिंग सॉफ़्टवेयर निर्दिष्ट अवधि के बाद स्वचालित रूप से रिकॉर्डिंग बंद कर देगा. प्रोटोकॉल जहां मंच रखा गया है निर्दिष्ट करने के लिए अनुमति चाहिए, कितने परीक्षण पशु प्रति चलाने के लिए, और कितने जानवरों के प्रति सत्र परीक्षण किया जाएगा, और भी अधिकतम अवधि की अनुमति (उदा, १२० s) ।
      3. परीक्षण 4-6 प्रति सत्र चूहों ।
        नोट: 6 चूहों से अधिक चूहों के बीच समय में एक मुद्दा बनाने के लिए और हैंडलर द्वारा त्रुटि के लिए नेतृत्व कर सकते हैं. वार्मिंग के बक्से में भी भीड़ हो जाती है ।
    3. ट्रायल 1
      1. वीडियो ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर खोलें और पानी भूलभुलैया नक्शा सहित सही प्रोटोकॉल लोड ।
      2. प्लेटफ़ॉर्म को असाइन किए गए स्थान पर रखें (उदा., 2; चित्र 1) और जांच करें कि यह सॉफ्टवेयर में नक्शे से मेल खाता है । ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर शुरू करने के लिए तैयार है जब चूहे वीडियो कैमरे के देखने के क्षेत्र में प्रवेश करती है ।
      3. सौंपा स्थान पर दीवार का सामना करना पड़ टैंक में चूहे प्लेस (उदा., N; चित्र 1) और तुरंत टाइमर शुरू करते हैं ।
      4. अनुमति चूहे १२० s मंच खोजने के लिए । जब चूहा प्लेटफॉर्म पाता है, टाइमर को रोकें और कार्यपत्रक पर समय रिकॉर्ड करें । अगर चूहा प्लेटफार्म खोजने में विफल रहता है, तो उसे हाथ से प्लेटफार्म पर ले जाएं और रिकॉर्ड १२० एस. चूहे 15 एस को प्लेटफार्म पर रहने दें ।
    4. परीक्षण 2
      1. जांच करें कि सॉफ़्टवेयर परीक्षण 2 के लिए तैयार है । एक ही प्रारंभिक स्थिति (एन) पर टैंक में चूहे वापस प्लेस । दोहराएँ चरण 5.2.3.4.
    5. 2 परीक्षण के बाद, गर्म बाड़े में चूहा 4 मिनट के लिए जगह है । प्लेटफ़ॉर्म को दूसरे स्थान पर ले जाएं (4; चित्र 1), और जांचें कि यह सॉफ़्टवेयर में मानचित्र से मेल खाता है ।
    6. दोहराएं परीक्षण 1 और 2 प्रक्रियाएं (चरण 5.2.3-5.2.4) जब तक सभी चार प्रारंभिक स्थान/

6. डेटा विश्लेषण

  1. Neuroscore
    1. मैन्युअल रूप से हस्तलिखित परिणामों को किसी कंप्यूटर स्प्रेडशीट पर स्थानांतरित करें.
    2. प्रत्येक दिन पर चूहे प्रति तीन अंक प्राप्त करने के लिए प्रत्येक परीक्षण के लिए परिणामों का योग करें ।
    3. सांख्यिकीय विश्लेषण के लिए डेटा (या तो लंबे या चौड़े प्रारूप में सॉफ्टवेयर वरीयता के आधार पर) प्रारूप ।
      नोट: लंबे प्रारूप के उपचार के लिए एक एकल कॉलम है (इस मामले में, या तो "भोली" के साथ आबाद, "अन्तर्वासना", या "TBI"), दिन के लिए एक एकल कॉलम (इस मामले में "0", "1", "2" या "3"), और परीक्षण के लिए एक एकल कॉलम (या तो "1", "2" या "3") । व्यापक स्वरूप कारक स्तर के प्रत्येक संयोजन के लिए एक कॉलम है (तो भोले के लिए एक कॉलम, 0 दिन, 1 परीक्षण, भोली के लिए एक और कॉलम, 0 दिन, 2 परीक्षण, आदि.)
    4. प्रत्येक दिन पर प्रत्येक जानवर के लिए स्कोर औसत । के बाद से वहां तीन प्रत्येक दिन पर किया परीक्षण वहां प्रति दिन प्रत्येक जानवर के लिए तीन मूल्यों होगा ।
    5. आकलन करें कि डेटा सामान्य रूप से वितरित किया जाता है या नहीं. किसी nonparametric सांख्यिकीय (उदा., Kruskal-वालिस) परीक्षण का उपयोग करके विश्लेषण करें कि प्रत्येक दिन पर स्कोर समूहों के बीच भिंन है या नहीं । इस स्थिति में, चूंकि ये डेटा निरंतर नहीं हैं, इसलिए इंहें सामांय रूप से वितरित नहीं किया जाता ।
    6. यह निर्धारित करने के लिए कि कहां अंतर झूठ है, पोस्ट-हॉक परीक्षण, जैसे Tukey का पोस्ट-हॉक विश्लेषण ।
      नोट: यहां, आर सांख्यिकीय सॉफ्टवेयर पैकेज16, Kruskal. test () समारोह और posthoc. Kruskal. nemenyi. test फ़ंक्शन के भीतर Pairwise माध्य रैंकों पैकेज (PMCMR) की एकाधिक तुलना17 का उपयोग किया गया ।
    7. साथ ही, यदि प्रत्येक समूह में दिनों के बीच कोई अंतर है देखने के लिए परीक्षण ।
      नोट: उदाहरण के लिए, देखने के लिए अगर अन्तर्वासना जानवरों दिन 0 दिन 1, दिन 2, या 3 दिन की तुलना में पर अलग ढंग से व्यवहार करते हैं । ऐसा करने के लिए, एक-तरफ़ा दोहराया उपाय ANOVA । इस ईज़ी पैकेज के भीतर ezANOVA समारोह का उपयोग कर R में पूरा किया जा सकता है ।
    8. एक दोहराया उपाय ANOVA चलाने के लिए, पहले sphericity के बारे में धारणा की जांच करें ।
      नोट: यहाँ, डेटा संकेत मिलता है कि भीतर कारक (दिन) भोली और अन्तर्वासना के लिए sphericity धारणा को पूरा करता है, लेकिन TBI के लिए नहीं. इस प्रकार, एक सुधार भोले या अन्तर्वासना के लिए आवश्यक नहीं है । TBI डेटा के लिए, ग्रीनहाउस-Geisser सुधार का उपयोग करें ।
    9. यदि महत्वपूर्ण अंतर पाए जाते हैं, एक पोस्ट हॉक परीक्षण चलाने के लिए निर्धारित जहां मतभेद झूठ । यह R में pairwise tपरीक्षण फ़ंक्शन का उपयोग कर प्राप्त की है । परिणाम को एक बॉक्स प्लॉट के रूप में प्लॉट करें, जैसा कि प्रतिनिधि परिणामों में दिखाया गया है (चित्र 2) ।
  2. बीम-बैलेंस
    1. मैन्युअल रूप से हस्तलिखित स्कोर एक कंप्यूटर स्प्रेडशीट के लिए स्थानांतरण । सांख्यिकीय विश्लेषण के लिए डेटा (या तो सॉफ्टवेयर वरीयता के आधार पर लंबे या चौड़े प्रारूप में) प्रारूप । चरण 6.1.3 में नोट देखें ।
    2. प्रत्येक चूहे के प्रति दिन एक स्कोर होगा ताकि हर दिन पर प्रत्येक चूहे के लिए औसत स्कोर । प्रत्येक दिन पर स्कोर भोली, अन्तर्वासना, और TBI के बीच अलग है कि क्या परीक्षण करने के लिए, आकलन है कि डेटा सामान्य रूप से वितरित कर रहे हैं.
      नोट: इस स्थिति में, क्योंकि डेटा निरंतर नहीं हैं, इन डेटा सामांय रूप से वितरित नहीं हैं । इसलिए, एक nonparametric सांख्यिकीय परीक्षण (उदा, Kruskal-वालिस परीक्षण) का उपयोग करें ।
    3. जहां मतभेद झूठ का निर्धारण करने के लिए, पोस्ट-हॉक परीक्षण, उदा, Tukey के बाद हॉक विश्लेषण । प्रत्येक उपचार समूह में दिनों के बीच अंतर के लिए परीक्षण करने के लिए, एक-तरफ़ा दोहराया उपाय ANOVA (चरण 6.1.7 देखें) चलाएं । sphericity के बारे में धारणा की जांच करें ।
      नोट: इस अध्ययन में, डेटा संकेत मिलता है कि भीतर का पहलू (दिन) समूहों में से किसी के लिए sphericity धारणा को पूरा नहीं करता है, तो निरंतरता सुधार करते थे । ग्रीनहाउस-गयीऽऽऽ निरंतरता सुधार का उपयोग करें ।
    4. प्रतिनिधि परिणामों में दर्शाए अनुसार एक बॉक्स प्लॉट पर परिणाम प्लॉट करें (चित्र 3) ।
  3. बीम-वॉक
    1. मैन्युअल रूप से एक कंप्यूटर स्प्रेडशीट के लिए हस्तलिखित परिणाम स्थानांतरित. प्रत्येक दिन के लिए प्रत्येक जानवर के लिए तीन बीम-चलना विलंब औसत । सांख्यिकीय विश्लेषण के लिए डेटा स्वरूपित करें (चरण 6.1.3 देखें) ।
    2. आकलन करें कि क्या डेटा सामांय रूप से वितरित किया गया है ।
      नोट: इस स्थिति में, डेटा निरंतर है, और सामान्य रूप से वितरित किया जाता है । इसलिए, प्रत्येक दिन पर विलंबता भोली, अन्तर्वासना, और TBI के बीच अलग है, यह निर्धारित करने के लिए एक-तरफ़ा ANOVA का उपयोग करें ।
    3. एक उपचार समूह के भीतर दिनों के बीच कोई अंतर है, तो यह देखने के लिए एक-तरफ़ा दोहराया उपाय ANOVA चलाते हैं । पहले sphericity के बारे में धारणा की जांच करें ।
      नोट: इस अध्ययन में, डेटा संकेत मिलता है कि भीतर का पहलू (दिन) हमारे समूहों में से किसी के लिए sphericity धारणा को पूरा नहीं करता है, तो निरंतरता सुधार किया जाता है । ग्रीनहाउस-गयीऽऽऽ सुधार का उपयोग करें ।
    4. प्रतिनिधि परिणामों में दर्शाए अनुसार एक बॉक्स प्लॉट पर परिणाम प्लॉट करें (चित्र 4) ।
  4. काम स्मृति पानी भूलभुलैया
    1. कार्यपत्रक या कंप्यूटर ट्रैकिंग प्रोग्राम से डेटा को किसी स्प्रेडशीट पर स्थानांतरित करें । विश्लेषण करने के लिए परिणामों का चयन करें ।
      नोट: कई संभावित परिणाम कंप्यूटर ट्रैकिंग प्रोग्राम से विश्लेषण के लिए उपलब्ध हैं । विश्लेषण के लिए चयनित परिणामों के उदाहरणों में शामिल हैं: विलंबता, पथ लंबाई, thigmotaxia, और तैरने की गति हो सकती है । सबसे अधिक रिपोर्ट परिणाम विलंबता है, के रूप में प्रदान की उदाहरण में इस्तेमाल किया ।
    2. सांख्यिकीय विश्लेषण के लिए डेटा (या तो सॉफ्टवेयर वरीयता के आधार पर लंबे या चौड़े प्रारूप में) प्रारूप ।
      नोट: लंबे प्रारूप (इस मामले में, या तो "भोली", "अन्तर्वासना", या "TBI") के साथ आबाद उपचार के लिए एक एकल कॉलम है, दिन के लिए एक एकल स्तंभ (इस मामले में "1", "2", "3", "4", या "5") और परीक्षण के लिए एक एकल स्तंभ (या तो "1", "2", "3", "4", "5" , "6", "7", या "8") । हम भी प्रयास की पहचान करने के लिए एक अतिरिक्त स्तंभ की आवश्यकता है (या तो "1" या "2"). वाइड प्रारूप कारक के स्तर के प्रत्येक संयोजन के लिए एक कॉलम है (तो उदाहरण के लिए, भोली, दिन 1, 1 परीक्षण, 1 प्रयास, भोली, दिन 1, 2 परीक्षण, 2 प्रयास के लिए एक और कॉलम के लिए एक एकल कॉलम) । इसके अलावा, परीक्षण 1 और परीक्षण 2 के बीच अंतर प्रत्येक सत्र के लिए गणना की जा सकती है और एक अंतर स्कोर के रूप में विश्लेषण किया ।
    3. चोट समूहों के बीच एक समग्र अंतर है, तो ढूँढने के लिए, निम्न चरणों का पालन करें ।
      1. सबसे पहले, 1 दिन के लिए प्रत्येक जानवर के लिए पानी भूलभुलैया विलंबता औसत ।
        नोट: प्रत्येक दिन पर चार सत्रों थे, तो परीक्षण 1 और 2 परीक्षण के प्रत्येक के लिए पशु प्रति चार मूल्यों औसत । इस गणना को शेष दिनों के लिए भी करें ।
      2. चोट अंतर के लिए समग्र जांच करने के लिए, एक दो तरह से दोहराया उपाय ANOVA चलाते हैं । दो कारक हैं, चोट और दिन । चोट समूह के बीच एक कारक है और दिन के भीतर एक समूह कारक है । नोट: यहां R उपयोग किया गया था ।
      3. यदि परिणाम चोट के कारण एक महत्वपूर्ण अंतर का संकेत है, तो एक Tukey के बाद हॉक परीक्षण चलाने के लिए जहां मतभेद झूठ देखना ।
    4. कि क्या विशिष्ट दिनों पर चोट समूहों के बीच अंतर निम्न चरणों का पालन करने के लिए पता लगाने के लिए ।
      नोट: 1 दिन एक उदाहरण के रूप में प्रयोग किया जाता है, और एक ही विश्लेषण के लिए सभी निंनलिखित दिनों के लिए किया जाना चाहिए । इसके अलावा, इस विश्लेषण कई मायनों में किया जाता है, पहले परीक्षण के लिए 1 ही, दूसरा परीक्षण के लिए 2 ही, और तीसरे के बीच अंतर के लिए ट्रायल 1 और परीक्षण 2. परीक्षण 1 एक उदाहरण के रूप में प्रयोग किया जाता है; एक ही कदम अंय विश्लेषण के लिए इस्तेमाल किया जाना चाहिए ।
      1. सबसे पहले, 1 दिन के लिए प्रत्येक जानवर के लिए पानी भूलभुलैया विलंबता औसत । के बाद से वहां प्रत्येक दिन पर "परीक्षण 1" के चार दोहराव थे, औसत प्रत्येक जानवर के लिए चार मूल्यों ।
      2. आकलन करें कि क्या डेटा सामांय रूप से वितरित किया गया है ।
        नोट: इस स्थिति में, डेटा निरंतर है, और सामान्य रूप से वितरित किया जाता है । इसलिए, यह निर्धारित करने के लिए एक-तरफ़ा ANOVA का उपयोग करें 1 दिन पर पानी भूलभुलैया विलंबता भोली, अन्तर्वासना, और TBI के बीच अलग है. आर सांख्यिकीय सॉफ्टवेयर पैकेज और aov () समारोह यहां इस्तेमाल किया गया ।
      3. एक 5% महत्व का स्तर का उपयोग करें । यदि परिणामी p-मान ०.०५ से कम है, तो समूहों के बीच महत्वपूर्ण अंतर होते हैं ।
      4. जहां उन मतभेदों झूठ का निर्धारण करने के लिए, Tukey के बाद हॉक परीक्षण का उपयोग करें । इस TukeyHSD () समारोह में आर.
    5. उपचार समूह में दिनों के बीच अंतर हैं, तो यह जानने के लिए, निम्न चरणों का पालन करें ।
      1. सबसे पहले, एक तरह से दोहराया उपायों ANOVA चलाते हैं । इस ईज़ी पैकेज के भीतर ezANOVA समारोह का उपयोग कर R में पूरा किया जा सकता है ।
      2. एक दोहराया उपाय ANOVA चलाने से पहले, पहले sphericity के बारे में धारणा की जांच करें ।
        नोट: के भीतर कारक (दिन) समूहों के सभी के लिए sphericity धारणा को पूरा करती है, इस प्रकार कोई निरंतरता सुधार का उपयोग करने की आवश्यकता है ।
      3. यदि दिनों के बीच अंतर पाया जाता है (p-मान ०.०५ से कम), तो एक पोस्ट-हॉक परीक्षण चलाने के लिए वास्तव में जहां मतभेद झूठ निर्धारित करते हैं । इस चरण में pairwise. t. test फ़ंक्शन का उपयोग कर R में प्राप्त किया है ।
    6. ग्राफ लाइन रेखांकन का उपयोग कर परिणाम (चित्रा 5). इसके अलावा, परीक्षण 1-परीक्षण 2 ग्राफी किया जा सकता है ।

Representative Results

neuroscore प्रक्रिया (चित्रा 2) के परिणाम (0 दिन में झूठी सकारात्मक (अन्तर्वासना और TBI समूहों) और छोटे मतभेदों का पता लगाने के लिए इस परीक्षण की संवेदनशीलता के लिए दोनों संभावित प्रदर्शन करते हैं । झूठी सकारात्मक हो सकता है जब चूहे की प्रक्रिया को अच्छी तरह से आदत नहीं है, तो यह पूरी तरह से आराम नहीं है । 0 दिन सर्जरी से पहले है, तो आदर्श रूप में सभी चूहों 0 के एक अंक के एक अध्ययन में प्रवेश करने से पहले की कसौटी तक पहुंच जाना चाहिए । दिन 1-3 स्कोर में छोटे परिवर्तन का पता लगाने के लिए इस परीक्षण की संवेदनशीलता का प्रदर्शन । जबकि 21 के रूप में उच्च के रूप में एक अंक के लिए एक संभावित है, स्कोर से अधिक 3 इस मॉडल में असामांय हैं । इस उदाहरण में, दोहराया उपाय ANOVA भोली के लिए दिनों के बीच कोई अंतर नहीं पता चला (पी = ०.७८) या (p = ०.०९) अन्तर्वासना; हालांकि, TBI समूह के लिए दिनों (p < ०.०५) के बीच अंतर थे । पोस्ट-हॉक pairwise तुलना ने संकेत दिया है कि 0 दिन 1, 2 और 3 दिनों से काफी अलग है । यह परिणाम दर्शाता है कि चोट स्नायविक आकलन में छोटे अभी तक महत्वपूर्ण परिवर्तन का उत्पादन किया ।

इसके अलावा विश्लेषण Kruskal-वालिस परीक्षण की तुलना में भोली, अन्तर्वासना, और TBI प्रत्येक दिन, Tukey के बाद हॉक परीक्षण के लिए वास्तव में जहां मतभेद झूठ निर्धारित करने के बाद का उपयोग कर । 0 दिन के लिए, परीक्षण आंकड़ा १३.३७, पी = ०.००१, और अन्तर्वासना भोली (पी = ०.००८) से काफी अलग था । आदर्श रूप में, 0 दिन पर समूहों के बीच कोई अंतर नहीं होना चाहिए, के रूप में कोई उपचार या प्रक्रियाओं प्रशासित किया गया है । इस मामले में, चूहों प्रक्रिया को आगे आदत, या एक गैर व्यवहार अध्ययन करने के लिए हस्तांतरित किया जाना चाहिए । 1 दिन के लिए, परीक्षण आंकड़ा ३२.३९ था, पी = 9.75 ई-8, पद-हॉक परीक्षण के साथ, यह दर्शाता है कि शम और TBI भोली से काफी अलग थे (पी = ०.००२, पी = 5.9 ई-7, क्रमशः) । 2 दिन के लिए, परीक्षण आंकड़ा २३.३९ था, पी = 8.34 ई-6, और शम और TBI भोली से अलग थे (पी = ०.००२, पी = 6.8 ई-5) । 3 दिन के लिए, परीक्षण आंकड़ा ३८.४ था, पी = 4.59 ई 9, और फिर, अन्तर्वासना और TBI भोली से काफी अलग थे (पी = ०.००१, पी = 2.1 ई-8, क्रमशः) । ये परिणाम तथ्य यह है कि शर्म की तैयारी भी तंत्रिका विज्ञान के आकलन में कुछ घाटे समय पर जल्दी चोट के बाद पैदा करने के लिए बिंदु ।

प्रतिनिधि बीम-शेष परिणाम (चित्रा 3) चोट के बाद शीघ्र ही घाटे के लिए बीम संतुलन परीक्षण की संवेदनशीलता का प्रदर्शन (चित्रा 3, बाएँ) और एक समय बिंदु पर चोट के बाद अब (चित्रा 3, सही). बीम की संवेदनशीलता-मस्तिष्क की चोट के प्रभाव के लिए संतुलन परीक्षण समय के साथ घटता है, क्योंकि के रूप में घायल चूहों उम्र और वजन हासिल, वे कठिनाई बीम पर संतुलन में वृद्धि हुई है. बाद के समय अंक में, बीम तो चूहों बीम के व्यापक पक्ष पर संतुलन कर रहे है बदल गया है । फिर भी, चोट के बाद 6 महीने तक, यह परीक्षण अब उंर और/या वजन के रूप में चोट के प्रभाव के प्रति संवेदनशील नहीं है कार्य करने की क्षमता को पाया (चित्रा 3, सही) । वैकल्पिक रूप से, चिकित्सा vestibular प्रणाली में हुई हो सकता है, और इन आंकड़ों को सही दर्शाते है कि चूहों की क्षमता को संतुलित नियंत्रण समूहों के रूप में एक ही स्तर तक पहुंचता है ।

हर दिन भोले, अन्तर्वासना, और TBI की तुलना में हमने Kruskal-वालिस का परीक्षण किया । चोट के बाद जल्दी समय अंक के लिए परिणाम चित्रा 3, बाएं में दिखाए जाते हैं । दिन 0 पर, Kruskal-वालिस परीक्षण ६.८१, p = ०.०३३ होना करने के लिए परीक्षण आंकड़ों का मान मिला । वहां समूहों के बीच एक महत्वपूर्ण अंतर था, Tukey के बाद हॉक परीक्षण दिखा रहा है कि भोली समूह अन्तर्वासना से अलग था (पी = ०.०३८); हालांकि, सभी तीन समूहों को अच्छी तरह से २.० से नीचे का मतलब था, यह दर्शाता है कि सभी चूहों मानदंडों को पूरा किया था जारी है । यह 0 दिन पर समूहों के बीच कोई अंतर नहीं है बेहतर होगा, लेकिन जब से सभी समूहों 2 से नीचे हैं, वे अध्ययन में जारी रख सकते हैं । PID 1 पर, Kruskal-वालिस परीक्षण सांख्यिकीय ६९.७२, p = 7.25 ई-16 थी । Tukey की पोस्ट-हॉक टेस्ट में पता चला है कि TBI समूह भोली और अन्तर्वासना दोनों समूहों (पी = 4.9 ई-14, पी = 9.1 ई-08, क्रमशः) से काफी अलग था । 2 दिन पर, Kruskal-वालिस परीक्षण के आंकड़े ६२.८४ और पी = 2.26 ई-14, पद के बाद से भोली और अन्तर्वासना से अलग TBI दिखा परीक्षा (पी = 1.0 ई-10, पी = 2.1 ई-10 क्रमशः) था । 3 दिन पर, Kruskal-वालिस परीक्षण सांख्यिकीय ६२.६९ और पी = 2.44 ई-14 था । पोस्ट-हॉक टेस्ट भोली और अन्तर्वासना से अलग TBI दिखाया, (पी = 9.6 ई-12, पी = 1.7 ई-08, क्रमशः) । हम इसके अतिरिक्त यदि प्रत्येक समूह के भीतर दिनों के बीच किसी भी मतभेद थे देखने के लिए देखा । एक दोहराया उपाय ANOVA का प्रयोग, भोली के लिए, वहां दिनों के बीच कोई अंतर नहीं थे (पी = ०.३६७) । अन्तर्वासना और TBI के लिए दिन (p = ०.००२, p = 3.90 e-29, क्रमशः) के बीच अंतर थे । पोस्ट-हॉक pairwise तुलना के लिए पता चला अन्तर्वासना दिवस 1 दिन से काफी अलग है 2 और दिन 3 (पी = ०.००१, p = ०.०१, क्रमशः), और TBI के लिए, दिन 0 उल्लेखनीयतया भिन्न प्रपत्र दिन 1, 2 और 3 (p < 2e-16, पी = 5.5 ई-16, और पी = 2.7 ई-13, क्रमशः) । दिन 1 भी काफी दिन से अलग है 3 (p = ०.०३६) ।

6 महीने में चोट के बाद, भोली, अन्तर्वासना के बीच तुलना, और TBI Kruskal-वालिस परीक्षण का उपयोग कर प्रत्येक दिन पर किए गए थे (चित्रा 3, दाएं) । 0 दिन पर, परीक्षण सांख्यिकीय का मान ३.३६ और p = ०.१८७ था, इसलिए 0 दिन पर कोई अंतर नहीं थे । सभी मतलब 2 से नीचे थे, यह दर्शाता है कि सभी चूहों और समूहों के मानदंडों को पूरा करने के लिए अध्ययन में जारी है । PID 1 पर, परीक्षण सांख्यिकीय ६.११, p = ०.०४७; हालांकि, पोस्ट-हॉक Tukey के बाद हॉक परीक्षण का उपयोग कर विश्लेषण से पता चला कि समूहों में से कोई भी काफी अलग थे जब कई परिकल्पना परीक्षण के लिए लेखांकन । दिन 2 पर, परीक्षण सांख्यिकीय ४.०९, p = ०.१३, ns, और 3 दिन पर, परीक्षण सांख्यिकीय २.९१, p = ०.२३, ns था । इस प्रकार, किसी भी दिन पर चोट समूहों के बीच कोई मतभेद नहीं थे ।

इसके अतिरिक्त, उपचार समूहों के भीतर दिनों के बीच मतभेदों को देखते हुए, एक दोहराया उपाय ANOVA भोली, अन्तर्वासना के लिए दिनों के बीच महत्वपूर्ण मतभेदों को पता चला, और TBI (पी = ०.०००३, पी = 2.61 ई-5, पी = 5.59 ई-7, क्रमशः; चित्र 3, दाएं) । पोस्ट-हॉक परीक्षणों में निम्न अंतर प्रदर्शित किया गया. भोले के लिए, 0 दिन से काफी अलग था दिन 1, 2, और 3 (p = ०.००२, p = ०.०४४, p = ०.००४, क्रमशः) । अन्तर्वासना के लिए, सभी दिन एक दूसरे से काफी अलग थे: 0 दिन से काफी अलग था दिन 1, 2, और 3 (p = ०.०००६, p = ०.००१, p = ०.०००६, क्रमशः); दिन 1 दिनों से काफी अलग था 2 और 3 (p = ०.०३१, p = ०.०००६, क्रमशः); और दिन 2 3 दिन से काफी अलग था (पी = ०.०४४) । TBI के लिए, दिन 0 काफी दिनों से अलग है 1, 2, और 3 (p = ०.०००५, p = ०.०००८, p = ०.०००५, क्रमशः) ।

बीम-वॉक टेस्ट के नतीजे दो टाइम पॉइंट्स (फिगर 4) पर दिखाए जाते हैं । बीम-बैलेंस के समान, यह परीक्षण चोट के बाद जल्दी घाटे का पता लगाता है (चित्रा 4, बाएं) । हालांकि, 6 महीने की चोट के बाद, वहां समूहों (चित्रा 4, सही) के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर हैं, चिकित्सा सुझाव घायल समूह में हुई । यह परिणाम और अधिक उंनत उंर और बढ़ वजन के प्रभाव को प्रतिबिंबित कर सकते हैं ।

हर दिन जल्दी चोट लगने के बाद भोले, अन्तर्वासना, और TBI की तुलना करना, एक-तरफ़ा ANOVA का इस्तेमाल किया गया । 0 दिन (F = ०.८५९, p = ०.४२६) पर कोई मतभेद नहीं थे और सभी विलंब 5 एस के नीचे थे, यह दर्शाता है कि सभी चूहों मानदंडों को पूरा करने के लिए अध्ययन में जारी है । 1 PID पर, वहां १५.३६, p = 1.18 ई-6 के एक महत्वपूर्ण परीक्षण के आंकड़े थे । है Tukey पोस्ट हॉक टेस्ट TBI और भोली (पी = ०.०००००४) और TBI और शम (पी = ०.०००१) के बीच एक महत्वपूर्ण अंतर का संकेत दिया । 2 दिन पर, समूहों (F = ९.४९, p = ०.०००२) के बीच एक महत्वपूर्ण अंतर था । पोस्ट-हॉक परीक्षण TBI और भोली (पी = ०.०००२) और TBI और शम (p = ०.००५) के बीच मतभेद से पता चला । 3 दिन पर, कुल मिलाकर परीक्षण सांख्यिकीय ६.२७, p = ०.००२५, इंगित करता है कि समूहों के बीच मतभेद है बराबर है । Tukey के बाद हॉक टेस्ट से पता चला है कि फिर, TBI भोली और अन्तर्वासना से अलग था (p = ०.००३, p = ०.०३५, क्रमशः).

एक तरह से दोहराया उपाय ANOVA का उपयोग करना, उपचार समूहों के भीतर दिनों के बीच मतभेदों का पता लगाया गया । पहले sphericity की धारणा प्रत्येक समूह के लिए जांच की थी । इस दरम्यान फैक्टर (Day) पर भोले या अन्तर्वासना समूहों के लिए sphericity धारणा पूरी नहीं हुई, इस प्रकार निरंतरता सुधार, ग्रीनहाउस-गयीऽऽऽ उन समूहों को लागू किया गया. अन्तर्वासना के लिए, दिनों के बीच कोई मतभेद नहीं थे (p = ०.०६६), भोली और TBI के लिए थे (p = ०.००६, p = 2.89 e-7, क्रमशः) । पोस्ट-हॉक तुलना भोली के लिए दिखाया, अंतर 0 दिन और दिन 1 (पी = ०.००३) के बीच था । TBI के लिए, मतभेद 0 दिन और दिन 1, 2, और 3 के बीच थे (p = 9.2 e-6, p = ०.०००५, p = ०.००२, क्रमशः), और दिन के बीच एक अंतर था 1 और दिन 3 (p = ०.०१८) ।

चोट के बाद 6 महीने में, किसी भी दिन (0 दिवस, एफ = ०.३१५, पी = ०.७३२ पर भोली, अन्तर्वासना, या TBI के बीच कोई महत्वपूर्ण मतभेद थे; दिन 1, F = ०.३३६, p = ०.७१७; 2 दिन, एफ = ०.५, पी = ०.६१; 3 दिन, एफ = १.१७, पी = ०.३२२; चित्र 4, दाएं) । प्रत्येक समूह में दिनों के बीच अंतर की तुलना करते समय, TBI समूह में एक महत्वपूर्ण अंतर था (p = ०.०२६), दिन 1, 2, और 3 (p = ०.०२६, p = ०.००२, p = ०.००२) से भिंन होने के साथ । भोले या अन्तर्वासना के लिए किसी भी दिन के बीच कोई मतभेद नहीं थे (p = ०.१०४, p = ०.०६३, क्रमशः) ।

मॉरिस पानी भूलभुलैया के काम स्मृति संस्करण से डेटा तरीके की एक किस्म में ग्राफी किया जा सकता है । यहां हम 3 महीने के लिए परिणामों का प्रदर्शन (चित्रा 5, बाएं) और 12 महीने (चित्रा 5, ठीक है) दोनों लाइन रेखांकन का उपयोग करने के लिए समय पाठ्यक्रम का प्रतिनिधित्व करते हैं, और बॉक्स भूखंडों डेटा का एक समग्र सारांश प्रदान करने के लिए (चित्रा 5, नीचे) । हम तो परीक्षण 1 तुलना और परीक्षण 2 तुलना स्वतंत्र रूप से प्रत्येक दिन पर और साथ ही समग्र चोट की वजह से मतभेदों कल्पना कर सकते हैं । परीक्षण 1 विलंब संदर्भ स्मृति और परीक्षण 2 विलंब कार्य स्मृति चित्रण का प्रतिनिधित्व करते हैं ।

चूहों से 3 महीने की चोट के बाद डेटा में दिखाया गया है चित्रा 5, बाएं । ट्रायल 1 के लिए (चित्रा 5, ऊपरी बाएं), जब भोली, अन्तर्वासना की तुलना, और TBI, केवल 4 दिन समूहों (F = ४.१२, p = ०.०२५) के बीच एक महत्वपूर्ण अंतर दिखाई दिया, के बाद-हॉक है Tukey परीक्षण का संकेत है कि TBI से अलग था के साथ भोली (प = ०.०१९) । परीक्षण के लिए 2 (चित्रा 5, मध्य बाएं), वहां एक दिन में महत्वपूर्ण अंतर था 1 (F = ५.९३, p = ०.००६), के बाद-हॉक विश्लेषण का संकेत है कि TBI से अलग था अन्तर्वासना (पी = ०.००५) । दोहराया उपायों ANOVA 3 महीने में चोट समूहों के बीच एक समग्र अंतर नहीं मिला (p = ०.५६) । इन परिणामों का सुझाव है कि इन चूहों के संदर्भ में छोटे अभी तक महत्वपूर्ण घाटे के रूप में के रूप में अच्छी तरह से चोट के बाद 3 महीने में काम स्मृति ।

12 महीने में चोट के बाद, परीक्षण की तुलना 1 भोली, अन्तर्वासना, और TBI (चित्रा 5, सही), दोहराया उपाय ANOVA चोट का एक महत्वपूर्ण समग्र प्रभाव का प्रदर्शन (F = ३.९४, p = ०.०३). Pairwise तुलना से पता चला कि TBI भोली और अन्तर्वासना दोनों से काफी अलग था (पी = ०.०४३ और पी = ०.००६., क्रमशः) (चित्रा 5, नीचे सही). इसके अलावा, प्रत्येक दिन पर चोट समूहों की तुलना करके, एक-तरफ़ा ANOVA का उपयोग करके, एक महत्वपूर्ण अंतर दिन 3 पर पाया गया था (F = ७.२८, p = ०.००३) । पोस्ट-हॉक तुलना से पता चला है कि TBI (पी = ०.००१८) (चित्रा 5, ऊपरी दाएं) से अलग था । 2 परीक्षण के लिए, दोहराया उपाय ANOVA चोट के कारण एक महत्वपूर्ण अंतर पाया (एफ = ३.९७, पी = ०.०२९), पोस्ट-हॉक pairwise तुलना TBI और अन्तर्वासना के बीच अंतर का पता लगाने के साथ (p = ०.०१७) (चित्रा 5 , नीचे दाईं ओर) । एक तरह से प्रत्येक दिन पर ANOVA 2 और 4 दिनों में महत्वपूर्ण अंतर पाया । 2 दिन (F = ४.०२, p = ०.०२८) पर, Tukey के पद-हॉक परीक्षण में पाया गया कि TBI अन्तर्वासना (p = ०.०२३) से भिन्न था. 4 दिन पर (F = ४.१२, p = ०.०२६), पोस्ट-हॉक विश्लेषण TBI और (पी = ०.०२५) (चित्रा 5, मध्य सही) के बीच एक अंतर मिला ।

Figure 1
चित्र 1. पानी भूलभुलैया के आरेख । यह आरेख कार्य स्मृति मॉरिस पानी भूलभुलैया के लिए संभव मंच स्थानों (1, 2, 3, 4) और शुरू अंक (एन, एस, ई, डब्ल्यू) दर्शाता है । चूहों प्रत्येक प्रारंभिक स्थान से दो परीक्षणों की अनुमति दी है/ एक 15 एस अंतर परीक्षण अंतराल और 4 परीक्षणों के जोड़े के बीच एक वार्मिंग चैंबर में एक दैनिक सत्र के लिए परीक्षण के चार जोड़े की कुल के लिए आराम है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 2
चित्र 2. neuroscore परीक्षण के परिणाम । सभी चूहों सरल पलटा परीक्षण कार्य करने के लिए 0 दिन से पहले प्रशिक्षित किया गया (प्रशिक्षण, परीक्षण पर विवरण के लिए पाठ देखें, और स्कोरिंग) । परिणाम माध्य (काली रेखा), प्रथम और तृतीय quartiles (बॉक्स की सीमाएं), और 10th और ९०वें शतमक (त्रुटि पट्टियां) के रूप में दिखाए जाते हैं । मतलब यह भी काले डॉट्स के रूप में लाल लाइनों और झूठ बोल अंक द्वारा दिखाया गया है । डेटा दिन के लिए प्रस्तुत कर रहे हैं 0 बेसलाइन और पोस्ट-इंजरी दिनों 1-3. प्रत्येक समय बिंदु के लिए पोस्ट-हॉक t-परीक्षण के परिणाम ग्राफ़ पर दिखाए जाते हैं: * p < ०.००१ vs TBI Day 0; ^ p < ०.००१ vs एक ही दिन भोले । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 3
चित्र 3. बीम-बैलेंस टेस्ट के परिणाम । सभी चूहों को बीम पर संतुलन के लिए प्रशिक्षित किया गया जब तक वे तीन लगातार परीक्षणों के लिए ६० एस के लिए शेष सकता है (प्रशिक्षण, परीक्षण और स्कोरिंग पर विवरण के लिए पाठ देखें) । बाद के परीक्षणों पर, चूहों 1 सामान्य संतुलन वाचक और 6 कोई बीम पर रहने का प्रयास वाचक के साथ 1-6 से एक पैमाने पर बनाए गए थे. परिणाम माध्य (काली रेखा), प्रथम और तृतीय quartiles (बॉक्स की सीमाएं), और 10th और ९०वें शतमक (त्रुटि पट्टियां) के रूप में दिखाए जाते हैं । मतलब यह भी काले डॉट्स के रूप में लाल लाइनों और झूठ बोल अंक द्वारा दिखाया गया है । डेटा दिन के लिए प्रस्तुत कर रहे हैं 0 बेसलाइन स्कोर, पोस्ट-इंजरी दिनों 1-3 (बाएँ), और चोट के बाद 6 महीने (दाएँ). प्रत्येक समय बिंदु के लिए पोस्ट-हॉक टी-टेस्ट के परिणाम रेखांकन पर दिखाए जाते हैं । 0-3 दिनों के लिए: * p < ०.००१vs TBI day 0; ^ p < ०.००१ vs एक ही दिन भोले; @ p < ०.००१ बनाम एक ही दिन अन्तर्वासना । 6 महीनों के लिए: * p < ०.००१vs TBI day 0; # p < ०.००१ vs भोली day 0; & p < ०.००१ vs अन्तर्वासना दिन 0 । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 4
चित्र 4. बीम-वॉक टेस्ट के परिणाम । सभी चूहों को एक सुरक्षा बॉक्स में बचने के लिए पदों के बीच बुनाई जबकि बीम पार करने के लिए प्रशिक्षित किया गया. वे जब तक वे तीन लगातार परीक्षणों पर ≤ 5 एस के मानदंडों को मिले प्रशिक्षित किया गया (प्रशिक्षण, परीक्षण और स्कोरिंग पर विवरण के लिए पाठ देखें) । आधारभूत परीक्षण 0 दिन पर पूरा किया गया था और चूहों बाद चोट (बाएं) के बाद 1-3 दिनों पर परीक्षण किया गया । चोट (दाएं) के बाद 6 महीने में चूहों के एक सबसेट का भी दोबारा परीक्षण किया गया । परिणाम माध्य (काली रेखा), प्रथम और तृतीय quartiles (बॉक्स की सीमाएं), और 10th और ९०वें शतमक (त्रुटि पट्टियां) के रूप में ग्राफ़ित होते हैं । मतलब भी काले डॉट्स के रूप में लाल लाइनों और झूठ बोलने से संकेत दिया है । प्रत्येक समय बिंदु के लिए पोस्ट हॉक परीक्षण के परिणामों के रेखांकन पर दिखाए जाते हैं । 0-3 दिनों के लिए: * p < ०.००१vs TBI day 0; ^ p < ०.००१ vs एक ही दिन भोले; @ p < 0.001 बनाम एक ही दिन अन्तर्वासना; 6 महीने के लिए: * p < ०.००१vs TBI Day 0. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 5
चित्र 5. काम स्मृति मॉरिस पानी भूलभुलैया के परिणाम । परिणाम 3 महीने (बाएं कॉलम) और 12 महीने (दायां कॉलम) में चूहों के अलग समूहों के लिए दिखाए जाते हैं । ऊपरी पैनलों औसत विलंब दिखाने के लिए (समय यह चूहों छिपा मंच को खोजने के लिए ले लिया) दो के पहले परीक्षण पर पांच परीक्षण के दिनों में से प्रत्येक के लिए परीक्षण बाँधना. मध्य पैनलों प्रत्येक दिन पर दूसरे परीक्षणों के औसत विलंब दिखाओ । पोस्ट-हॉक विश्लेषण के परिणाम ग्राफ़ पर दिखाए जाते है (* p < ०.०५ बनाम उसी दिन अन्तर्वासना; ^ p < ०.०५ बनाम उसी दिन भोले) । निचले पैनलों औसत (काली रेखा), 25वें और ७५वें शतमक (बॉक्स की सीमाओं), और 10वें और ९०वें शतमक (त्रुटि पट्टियां) दिखा परिणामों का सारांश । मतलब यह भी काले डॉट्स के रूप में लाल लाइनों और झूठ बोल अंक द्वारा दिखाया गया है । पोस्ट-हॉक विश्लेषण के परिणाम ग्राफ़ (*p < ०.०५ बनाम समान परीक्षण शम, ^ p < ०.०५ बनाम समान परीक्षण भोली) पर दिखाए जाते हैं । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Discussion

जब व्यवहार परीक्षण के किसी भी प्रकार का आयोजन, यह सुसंगत होना महत्वपूर्ण है । इस विस्तार कई विचार है कि तुच्छ लग रहे हैं, लेकिन जानवर की प्रतिक्रिया पर एक बड़ा प्रभाव है शामिल हैं । एक महत्वपूर्ण कदम है कि अनदेखी नहीं किया जा सकता है किसी भी प्रयोग करने से पहले उनके घर पिंजरे/आवास की स्थिति के लिए पशुओं के acclimation है । यह तैयारी ' जानवरों शारीरिक तनाव प्रतिक्रिया है, जो व्यवहार के परिणाम18बदल सकते है के प्रभाव को कम कर देता है । इसी तरह यह बिल्कुल जरूरी है कि सभी जानवरों को समान रूप से संभालने के लिए हर संभव प्रयास किया जाए । इस निरंतरता शामिल है, के रूप में पहले उल्लेख किया है, आवास के लिए acclimation और भी हैंडलिंग और प्रशिक्षण या परीक्षण से पहले कमरे के बीच परिवहन के लिए acclimation । इस अवधारणा को ख़ामोश नहीं किया जा सकता है । मैला पशु हैंडलिंग किसी भी व्यवहार19परीक्षण के लिए विनाशकारी है । इसी तरह, हर प्रयास के लिए दिन के एक ही समय में पशुओं के परीक्षण किए जाने की जरूरत है, चाहे उनके अंधेरे या प्रकाश चक्र के दौरान । परीक्षण के लिए यहां चर्चा की, प्रकाश या अंधेरे चरण के दौरान परीक्षण स्वीकार्य है, के रूप में लंबे समय के रूप में परीक्षण लगातार प्रदर्शन कर रहे हैं । circadian चक्र के दौरान अलग समय पर किया परीक्षण व्यवहारिक परिणामों को बदलने के लिए दिखाया गया है18,20. इसके अतिरिक्त, हैंडलर के रूप में के रूप में अच्छी तरह से पशु एक तनाव मुक्त, शांत राज्य में होना चाहिए ताकि परिणामों की सटीकता को अधिकतम करने के लिए ।

विशेष रूप से Neuroscore के मामले में, झूठी सकारात्मक और नकारात्मक आम हैं । झूठी सकारात्मक आम तौर पर हो जब एक जानवर पूरी तरह से हैंडलिंग और परीक्षण के लिए आदत नहीं है । जानवर पूरी तरह से आराम से किया जाना चाहिए तो मनाया प्रतिक्रिया सजगता और तनाव या डर से बाहर प्रतिक्रिया से कस मांसपेशियों के कारण नहीं है । एक तनावग्रस्त हेंडलर जानवर के लिए तनाव संचारण द्वारा परिणामों को प्रभावित कर सकते हैं । इसलिए, चूहे भी तंग या बहुत ढीला पकड़े दोनों समस्याग्रस्त किया जा सकता है । इसके अतिरिक्त, यदि हैंडलर तंत्रिका है, यह चूहों की प्रतिक्रिया मिल सकता है । वहां भी जोखिम है कि एक अनुभवहीन पर्यवेक्षक चूहे की प्रतिक्रिया गलत व्याख्या करेंगे । अच्छा प्रशिक्षण और अभ्यास के एक बहुत सफलता और Neuroscore की निरंतरता के लिए आवश्यक हैं ।

सामांय में, इन परीक्षणों के साथ मुख्य चिंता का एक बड़ा अंतर की कमी है, और कई बार कोई फर्क नहीं पड़ता, उपचार समूहों के बीच । के बाद से जानवरों अलग संचालकों, शोर, दिन के समय, और संभावित, मौसम21के लिए अलग तरह से प्रतिक्रिया कर सकते हैं, हर प्रयास सभी संभव मिल कारकों को कम करने के लिए किया जाना चाहिए.

बीम के परिणाम-संतुलन और बीम-चलो यहां दिखाया कार्य प्रदर्शित करता है कि इन परीक्षणों के बाद जल्दी vestibulomotor समारोह में घाटे का पता लगाने के लिए चोट के बाद उपयोगी होते हैं । इन घाटे आमतौर पर समय1,14के साथ हल । इस मॉडल में, 6 महीने की चोट के बाद, चोट से प्रेरित घाटे का समाधान हो गया है । 6 महीने के समय बिंदु के परिणाम से संकेत मिलता है कि नादान, अन्तर्वासना, या घायल चूहों के बीच कोई मतभेद नहीं हैं; हालांकि, सभी चूहों 6 महीने के लिए किया गया है अपने घर पिंजरों में आराम, उंर बढ़ने और वजन हो रही है । इस प्रकार, वे फिर से कर रहे है समय 6 महीने के बाद सर्जरी (भोली के मामले में या समकक्ष), वे मूलतः पुराने और वसा होते जा रहे हैं, और इसलिए सभी समूहों के रूप में के रूप में अच्छी तरह से प्रदर्शन नहीं करते वे अपने बेसलाइन दिन 0 परिणाम की तुलना में किया ।

एक अंय महत्वपूर्ण विचार है कि व्यवहार परीक्षण का उपयोग सही परीक्षण है । उदाहरण के लिए, यहां कार्यरत परीक्षणों को विशिष्ट मस्तिष्क क्षेत्रों के समारोह का प्रतिनिधित्व करने के लिए सोचा जाता है । एक उदाहरण vestibular प्रणाली है, जो संतुलन के लिए महत्वपूर्ण है । मस्तिष्क ज्ञानेन्द्रिय समारोह में शामिल क्षेत्रों, जैसे ज्ञानेन्द्रिय प्रांतस्था, thalamus, corticospinal न्यूरॉन्स, बेसल गैंग्लिया, नीगरो-striatum, कुछ नाम के लिए, vestibulomotor समंवय में सभी शामिल हैं । इस प्रकार, बीम में घाटा-संतुलन या बीम-वॉक इन क्षेत्रों में संभावित घाटे का संकेत देती है. इसके अलावा, हिप्पोकैंपस और आकडे प्रांतस्था सीखने और स्मृति कार्य स्मृति जल भूलभुलैया द्वारा परीक्षण कार्यों में शामिल हैं । जब भी सही परीक्षण चुना जाता है, तो नियोजित किए जाने वाले परीक्षणों की सीमाएं ध्यान में रखनी चाहिए । उदाहरण के लिए, यहां प्रस्तुत परीक्षणों में से कोई भी मूड में घाटे के प्रति संवेदनशील हैं, जैसे अवसाद, चिंता, या सामाजिक बातचीत जैसे आक्रामकता, निर्णय लेने, या impulsivity । दोहराने के लिए, यह व्यवहार और मस्तिष्क क्षेत्र के लिए उचित परीक्षण का चयन करने के लिए अनिवार्य है मूल्यांकन किया जाना है ।

व्याख्या और व्यवहार डेटा का विश्लेषण सावधानी के साथ संपर्क किया जाना चाहिए । यह अत्यधिक परीक्षण के प्रत्येक प्रकार के बिजली विश्लेषण शामिल करने के लिए अलग से सिफारिश की है, क्योंकि, तंत्रिका घाटे का एक उपाय के रूप में एक व्यवहार के परिणाम का उपयोग, अपनी प्रकृति, एक सूक्ष्म प्रभाव के एक कच्चे उपाय से है । इसके अलावा, विभिंन परीक्षणों सांख्यिकीय विश्लेषण के विभिंन प्रकार की आवश्यकता है । उदाहरण के लिए, Neuroscore और बीम-बैलेंस परीक्षण वर्णित एक प्रशिक्षित पर्यवेक्षक की व्याख्या पर एक क्रमवार पैमाने का उपयोग कर व्यवहार स्कोर करने के लिए निर्भर हैं । डेटा के इन प्रकार निरंतर नहीं है और सामांय रूप से वितरित नहीं हैं, इसलिए nonparametric आंकड़े, जैसे Kruskal-वालिस परीक्षण, वर्गों ६.१ और ६.२ में प्रदर्शन के रूप में इस्तेमाल किया जाना चाहिए । वैकल्पिक रूप से, बीम चलना और काम कर स्मृति जल भूलभुलैया परीक्षण डेटा है कि निरंतर और सामांय रूप से वितरित कर रहे हैं, तो पैरामीट्रिक आंकड़े इस्तेमाल किया जा सकता है, जैसे कि एक तरह ANOVA या दोहराया-उपाय दो तरह ANOVA, के रूप में वर्गों ६.३ और ६.४ में प्रदर्शन किया ।

व्यवहार कार्यों यहां प्रस्तुत समय की कसौटी पर खरी उतरी है और प्रतिलिपि परिणाम दे, विशेष रूप से जब चूहों में एफपीआई मॉडल के साथ जोड़ा, हालांकि मस्तिष्क चोट के लिए व्यवहार परीक्षण के कई अंय तरीकों मौजूद हैं । neuroscore एक लघु उपकरणों की एक ंयूनतम के साथ प्रदर्शन किया आकलन है । सजगता और शक्ति के अंय परीक्षणों उपलब्ध है और एक स्नायविक आकलन में शामिल किया जा सकता है, जैसे पार्श्व pulsion कार्य, akinesia परीक्षण, झुका विमान परीक्षण, और पकड़ शक्ति (Fujimoto एट अल देखें । 22 और गोल्ड एट अल । 23). बीम-बैलेंस और बीम-वॉक कार्यों में वर्णित चोट के बाद vestibulomotor घाटे के उपाय हैं. Vestibulomotor समंवय सकल हरकत व्यवहार का एक उपाय माना जा सकता है, जबकि सकल हरकत घाटे के अंय उपायों Rotarod, घूर्णन ध्रुव, और खुले क्षेत्र गतिविधि शामिल हैं । तैरने की क्षमता, पानी भूलभुलैया के दौरान गति तैरने के रूप में मापा, यह भी सकल मोटर समंवय22,23का एक संकेत है । काम स्मृति पानी भूलभुलैया कार्य दोनों संदर्भ स्मृति घाटे का पता लगाने के द्वारा परीक्षणों के इस सेट को पूरा करता है (परीक्षण 1 द्वारा संकेत) और काम स्मृति घाटे (परीक्षण 2 या परीक्षण के बीच अंतर से संकेत दिया 1 और परीक्षण 2). संज्ञानात्मक समारोह के अंय उपायों आठ हाथ रेडियल भूलभुलैया, बार्ंस भूलभुलैया, उपंयास वस्तु मांयता परीक्षण, और पानी भूलभुलैया के विभिंन रूपों में शामिल हैं । इन परिवर्तनों को मूल मॉरिस पानी भूलभुलैया और Lashley III भूलभुलैया शामिल है (फिर से Fujimoto एट अल देखें । 22 और गोल्ड एट अल । 23). परीक्षण की यह बैटरी चोट के बाद जल्दी उपयोगी साबित हो गया है और, डिग्री बदलती में, चोट1के बाद 12 महीने के लिए बाहर ।

इसके अतिरिक्त, कार्य यहां प्रदर्शित विभिंन उपभेदों, सेक्स के साथ इस्तेमाल किया जा सकता है, और चूहों की उंर; हालांकि, आवास अलग आकार के लिए और अधिक से अधिक निभाने के मामलों में किए जाने की आवश्यकता हो सकती है । उदाहरण के लिए, पुराने, भारी चूहों बीम के लिए एक व्यापक बीम-संतुलन कार्य और वृद्ध, कमजोर चूहों की जरूरत है, पानी भूलभुलैया में तैरने बार की छोटी अवधि की आवश्यकता हो सकती है । इस प्रकार, इन परीक्षणों और नए परीक्षणों के विकास के लिए संभावित विभिंन स्थितियों और परिकल्पनाओं को समायोजित करने में लचीलापन के लिए जगह नहीं है ।

Disclosures

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

हम उसे सावधानीपूर्वक संपादन के लिए इयान विषयों और एलिजाबेथ समनर के सर्जिकल तैयारी के साथ सहायता के लिए bolding धंयवाद । इन अध्ययनों के एक समूह के रूप में पूरा किया गया मूडी परियोजना द्वारा वित्त पोषित के लिए अनुवाद दर्दनाक मस्तिष्क चोट अनुसंधान.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Sprague-Dawley rats Charles Rivers Laboratories
251 Ballardvale St
Wilmington, MA 01887-1096
Phone: 800-522-7287		 CD-IGS rats, strain code 001 male, albino, 300-350g at arrival
Name Company Catalog Number Comments
Beam-Balance
Beam home built wood, 25" l x 1" h x 3/4" w sealed with polyurethane varnish
C-clamp Home Depot 1422-C 2 1/2"
barrier Home Depot styrofoam, 18" x 17 1/2"
table (for both BB & BW) generic office supply 37" h x 30" w x 60" l
Name Company Catalog Number Comments
Beam-Walk
Beam home built wood 38-1/2" l x 1-3/4" h x 1" w sealed with polyurethane varnish (~ 37" off floor)
escape box home built woodpainted black 12 1/2 " l x 9" h x 7-1/4" w
nails (pegs) 2"
hinges
clamps
white noise machine San Diego Instruments
9155 Brown Deer Rd, Suite 8 San Diego, CA 92121
Phone: (858)530-2600		 http://www.sandiegoinstruments.com/libraries/misc/datasheets/whitenoise.pdf
light Home Depot
Name Company Catalog Number Comments
Morris Water Maze
fiberglass pool manufacturer unknown
(similar to one made by SDI) San Diego Instruments 7000-0723 72" diameter x 30" deep (~ 500 gal)
plexiglass platform hand-made by Maggie Parsley 10 cm diameter, 26" tall with silicone applied to the surface of the platform to provide a gripping surface
(similar to one made by SDI) SDI 7500-0272
plexiglass animal boxes w/ lids UTMB Machine Shop 2 boxes, 10" w x 16" L x 9" h
spot lights/ heat lamps Home Depot 3 around pool, 2 over boxes to dry animals
AnyMaze San Diego Instruments
9155 Brown Deer Rd, Suite 8 San Diego, CA 92121
Phone: (858)530-2600		 /9001 http://www.sandiegoinstruments.com/any-maze-video-tracking/

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References

  1. Sell, S. L., Johnson, K., DeWitt, D. S., Prough, D. S. Persistent Behavioral Deficits in Rats after Fluid Percussion Injury. J Neurotrauma. 34 (5), 1086-1096 (2017).
  2. Gurdjian, E. S., Lissner, H. R., Webster, J. E., Latimer, F. R., Haddad, B. F. Studies on experimental concussion: relation of physiologic effect to time duration of intracranial pressure increase at impact. Neurology. 4, 674-681 (1954).
  3. Anonymous. US National Library of Medicine. , (last accessed Jan. 9, 2018) www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/$term=fluid+percussion+injury+rat (2017).
  4. Hellmich, H. L., Capra, B., Eidson, K., Garcia, J., Kennedy, D., Uchida, T., et al. Dose-dependent neuronal injury after traumatic brain injury. Brain Research. 1044, 144-154 (2005).
  5. Bramlett, H. M., Detrich, W. D. Long-Term consequences of Traumatic Brain Injury: Current Status of Potential Mechanisms of Injury and Neurological Outcomes. J. Neurotrauma. 32, 1-15 (2015).
  6. Pierce, J. E. S., Smith, D. H., Trojanowski, J. Q., McIntosh, T. K. Enduring cognitive neurobehavioral and histopathological changes persist for up to one year following severe experimental brain injury in rats. Neuroscience. 87 (2), 359-369 (1998).
  7. Smith, D. H., Chen, X. H., Pierce, J. E. S., Wolf, J. A., Trojanowski, J. Q., Graham, D. I., McIntosh, T. K. Progressive atrophy and neuron death for one year following brain trauma in the rat. J Neurotrauma. 14 (10), 715-727 (1997).
  8. Schallert, T. Behavioral tests for preclinical intervention assessment. NeuroRx. 3 (4), 497-504 (2006).
  9. Sell, S. L., Avila, M. A., Yu, G., Vergara, L., Prough, D. S., Grady, J. J., DeWitt, D. S. Hypertonic resuscitation improves neuronal and behavioral outcomes after traumatic brain injury plus hemorrhage. Anesthesiology. 108 (5), 873-881 (2008).
  10. Hamm, R. J. Neurobehavioral assessment of outcome following traumatic brain injury in rats: an evaluation of selected measures. J Neurotrauma. 18 (11), 1207-1216 (2001).
  11. Feeney, D. M., Gonzalez, A., Law, W. A. Amphetamine, haloperidol, and experience interact to affect rate of recovery after motor cortex injury. Science. 217, 855-857 (1982).
  12. Hamm, R. J., Temple, M. D., Pike, B. R., O'Dell, D. M., Buck, D. L., Lyeth, B. G. Working memory deficits following traumatic brain injury in the rat. J Neurotrauma. 13, 317-323 (1996).
  13. Morris, R. G., Hagan, J. J. Allocentric spatial learning by hippocampectomised rats: A further test of the "Spatial Mapping" and "Working Memory" Theories of hippocampal function. The Quart J of Exp Psych. 38 (4), 365-395 (1986).
  14. Dixon, C. E., Lyeth, B. G., Povlishock, J. T., Findling, R. L., Hamm, R. J., Marmarou, A., Young, H. F., Hayes, R. L. A fluid-percussion model of experimental brain injury in the rat. J. Neurosurg. 67, 110-119 (1987).
  15. DeWitt, D. S., Smith, T. G., Deyo, D. J., Miller, K. R., Uchida, T., Prough, D. S. L-arginine and superoxide dismutase prevent or reverse cerebral hypoperfusion after fluid-percussion traumatic brain injury. J. Neurotrauma. 14, 223-233 (1997).
  16. R Core Team. R: A Language and Environment for Statistical Computing. , R Foundation for Statistical Computing. Vienna, Austria. (2017).
  17. Pohlert, T. The Pairwise Multiple comparison of Mean Ranks Package (PMCMR) R package. , http://CRAN.R-project.org/package=PMCMR (2014).
  18. Verma, P., Hellemans, K. G., Choi, F. Y., Yu, W., Weinberg, J. Circadian phase and sex effects on depressive/anxiety-like behaviors and HPA axis responses to acute stress. Physiol Behav. 99, 276-285 (2010).
  19. Schallert, T., Woodlee, M. T., Fleming, S. M. Experimental Focal Ischemic Injury: Behavior-Brain Interactions and Issues of Animal Handling and Housing. ILAR J. 44 (2), 130-143 (2003).
  20. Ruis, J. F., Rietveld, W. J., Buys, J. P. Properties of parametric photic entrainment of circadian rhythms in the rat. Physiol Behav. 50, 1233-1239 (1991).
  21. Ferguson, S. A., Maier, K. L. A review of seasonal/circannual effects of laboratory rodent behavior. Physiol Behav. 119, 130-136 (2003).
  22. Fujimoto, S. T., Longhi, L., Saatman, K. E., McIntosh, T. K. Motor and cognitive function evaluation following experimental traumatic brain injury. Neurosci & Biobehav Reviews. , (2004).
  23. Gold, E. M., Su, D., Lopez-Velazquez, L., Haus, D. L., Perez, H., Lacuesta, G. A., Anderson, A. J., Cummings, B. J. Functional assessment of long-term deficits in rodent models of traumatic brain injury. Regen. Med. 8 (4), 483-516 (2013).

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Hausser, N., Johnson, K., Parsley, M. A., Guptarak, J., Spratt, H., Sell, S. L. Detecting Behavioral Deficits in Rats After Traumatic Brain Injury. J. Vis. Exp. (131), e56044, doi:10.3791/56044 (2018).

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