Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

Regeneratieve therapie door Suprachoroidal cel Autograft in droge leeftijdsgebonden maculaire degeneratie: voorontwerp In Vivo verslag

doi: 10.3791/56469 Published: February 12, 2018

Summary

Het doel van deze studie is om te beoordelen of de suprachoroidal prothese van adipeus afkomstige stamcellen opgenomen in de stromale vasculaire Fractie en bloedplaatjes platelet-rich plasma door de Limoli techniek voor de restauratie van de retinale afgeleid gezichtsscherpte verbeteren kan en netvlies gevoeligheid reacties in ogen beïnvloed door droge leeftijdsgebonden Macula degeneratie.

Abstract

Deze studie is gericht op het onderzoeken of een suprachoroidal prothese van autologe cellen best gecorrigeerde gezichtsscherpte (BCVA) verbeteren kan en reacties op microperimetry (MY) in ogen beïnvloed door droog leeftijdsgebonden Macula Degeneratie (LMD) na verloop van tijd door de productie en afscheiding van groeifactoren (GFs) op het omliggende weefsel. Patiënten werden willekeurig toegewezen aan elke studiegroep. Alle patiënten waren gediagnosticeerd met droge AMD en BCVA gelijk is aan of groter is dan 1 logaritme van de minimale hoek van resolutie (logMAR). Een autologe transplantatie van suprachoroidal door Limoli retinale restauratie techniek (LRRT) werd uitgevoerd op groep A, waaronder 11 ogen van 11 patiënten. De techniek werd uitgevoerd door het implanteren van adipocytes, adipeus afkomstige stamcellen verkregen uit de stromale vasculaire breuk, en de trombocyten van platelet-rich-plasma in de suprachoroidal ruimte. Omgekeerd, groep B, met inbegrip van 14 ogen van 14 patiënten, werd gebruikt als een controlegroep. Voor elke patiënt, werd diagnose gecontroleerd door confocale scanning laser oftalmoscoop en spectrale domein-optische coherentie tomografie (SD-OCT). In groep A, BCVA verbeterd door 0.581 aan de 0.504 90 dagen en 0.376 logMAR op 180 dagen (+32.20%) postoperatief. Bovendien, mijn test 11.44 dB tot 12.59 dB stegen op 180 dagen. De verschillende soorten cellen geënt achter het vaatvlies konden verzekeren naar constante GF secretie in de choroidal stroom. Derhalve de resultaten betekenen dat visuele gezichtsscherpte (VA) voor de geënte groep kan verhogen meer dan in de controlegroep na zes maanden.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Celtherapie, bestaande uit de systemische of lokale injectie stam/van voorlopercellen van de gewonde gebied voor de behandeling van meerdere chronische aandoeningen, heeft veel aandacht getrokken in de laatste tien jaar1. Sinds de jaren 1990, hebben groeifactoren (GFs) onderzocht voor hun potentieel therapeutische rol in de retina atrofie2. In feite, kunnen veel menselijke cellen produceren GFs, die specifieke proteïnen die kunnen blokkeren of vertragen apoptosis, dat wil zeggen, de geprogrammeerde dood van cellen3.

Het is bekend dat droge leeftijdsgebonden Macula Degeneratie (LMD) is een atrofische retinale ziekte wanneer geleidelijke en onomkeerbare celdood betrekking heeft op schade aan de fotoreceptor laag en dus het verlies van centrale visuele functie4. AMD is de belangrijkste oorzaak van blindheid bij mensen ouder dan 55 jaar in ontwikkelde landen en goed voor 80% van alle macula degenerations, die het ontbreken van een effectieve behandeling tot nu toe.

Verschillende studies hebben aangetoond dat er zijn verschillende bronnen waaruit autologe GFs kunnen worden verkregen. Deze bestaan uit verschillende soorten cellen, met inbegrip van obesitas stromale cellen afgeleid van orbitale vet, trombocyten afgeleid van platelet-rich plasma (PRP) en adipeus-afgeleide cellen van de stam (ADSCs) opgenomen in de stromale vasculaire fractie (SVF) van vetweefsel5 ,6,7. De huidige GF-set zorgt voor retinale neuroenhancement, en onderzoek uitgevoerd door Filatov, Meduri, Pelaez, en Limoli heeft aangetoond dat autologe transplantatie vet (AFT) effectieve8,9,10.

Bovendien, een voorafgaande studie toonde significante verbeteringen in electroretinogram (ERG) gegevens, in droge AMD geteisterde ogen11post suprachoroidal autologe transplantatie, opgenomen. Het chirurgisch geënte weefsel in de suprachoroidal ruimte gemoduleerd de secretie van de paracrine van netvlies cellen, vertragen hun apoptosis6,7,12. Rekening houdend met de dikte van de nucleaire buitenlaag, het histopathologisch onderzoek van het netvlies van cavia's is gebleken dat GFs kon een trofische effect op het netvlies. Daarom kan de directe of indirecte gebruik van GFs potentieel therapeutische voordelen opleveren door middel van een evenwichtige relatie tussen moleculaire inductoren en inhibitoren6,7,12.

Het doel van deze methode is gecorrigeerd om te beoordelen of de prothese suprachoroidal van adipocytes, ADSCs in SVF en PRP best kan verbeteren gezichtsscherpte (BCVA) en microperimetry (MY) Reacties in droge AMD geteisterde ogen. Deze studie heeft tot doel om aan te tonen van het therapeutische effect van autograft op basis van haar GF-productie, volgens de geciteerde literatuur6,7,12,13.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Het studie-protocol is goedgekeurd door de ethische commissie van de Academie van Low Vision en alle onderwerpen een schriftelijke toestemming overeenkomstig de verklaring van Helsinki ondertekend. Deze studie heeft ethische goedkeuring gekregen van zowel Loughborough en Sheffield universiteiten.

Opmerking: De integratie en uitsluiting criteria van droge leeftijdsgebonden maculadegeneratie patiënten ontvangen suprachoroidal autologe transplantatie door Limoli retinale restauratie techniek (LRRT) wordt beschreven in tabel 1.

1. de diagnose van droge leeftijdsgebonden maculadegeneratie patiënten

  1. Het vaststellen van de diagnose met confocale scanning laser oftalmoscoop, SD-OCT en MY.
  2. Evalueren van elke groep BCVA voor veel en in de buurt van afstand. Maatregel VA voor in de omgeving van zicht (close-up) in punten (Pts). BCVA op moment 0 (T0), 90 (T90), meten en 180 dagen (T180) vergeleken met vroege behandeling diabetische retinopathie studie (EDTRS) grafieken op 4 meter in logMAR.
  3. Record elektrische scotopisch, mesopisch, en fotopisch cel activiteit of flash ERG, volgens de normen die in 2009 door de International Society for klinische electrofysiologie van visie (ISCEV)11.

2. afstomping

Opmerking: De gouden standaard in de anesthesie tijdens LRRT is topische verdoving, versterkt door sub-tenon infiltratie van verdoving en sedatie. In specifieke gevallen heeft narcose de voorkeur.

  1. Verkrijgen hoornvlies en conjunctivale verdoving door toepassing van actuele lokale anesthetica ingeprent dropwise 15-20 min vóór de operatie met lidocaïne op 4% en ropivacaine op 1%.
  2. Verdoving door infiltratie rechtstreeks in sub-conjunctivale injecteren en subtenon van ruimten.
  3. Lokale infiltratie in de abdominale regio, voordat het vetweefsel wordt gewonnen, zowel in de sub-conjunctivale en sub-tenon ruimten, 12 mm van de limbus gebruiken Aannemen van lokale verdoving van carbocaine of marcain gemengd met 1.200 IU epinefrine.
  4. Intraoperatieve sedatie door middel van de verdoving, die goed kan worden uitgevoerd met behulp van fentanyl als een verdovend pijnstiller via herhaalde kleine boli bieden. De dosering is over het algemeen 0,025 mg van fentanyl met 1 mg van midazolam per bolus.

3. Limoli retinale restauratie techniek voorbereiding

Opmerking: Deze techniek vertegenwoordigt een variant van de Pelaez interventie door die orbitale autologe vet is getransplanteerd in de subscleral ruimte1,6,7,12. Operatief geënte cellen kunnen produceren veel GFs met eigenschappen van de neurotrophic en angiotrophic in het omringende weefsel, vaatvlies en netvlies18,19,20,21,22 ,23,24,25. LRRT, de afstand tussen geënte autologe cellen en vaatvlies wordt verminderd door middel van diepe sclerectomy, en de contactpunten tussen de stengel en het vaatvlies is uitgevouwen ter bevordering van de afscheiding autologe cel paracrine in de choroidal stroom9, 10,14.

  1. Voer de juiste ontsmetting van elk van beide ogen voor de operatie met cellulaire enting tussen het vaatvlies en sclera, een procedure genaamd Limoli retinale restauratie techniek (LRRT)15,16,17.
  2. Het enten van de ADSCs, verkregen door Coleman et al. en Lawrences techniek (Figuur 1) van buikvet, in de SVF in de sovrachoroidal ruimte15,16,17.
  3. De obesitas stam infiltreren met bloedplaatjes afgeleid van PRP gel verkregen via de volgende stappen uit.
  4. Centrifugeren van bloed6,12 en verzamelen van platelet-rich plasma (PRP). De stimulans voor bloedplaatjes degranulatie veroorzaakt GF release in de obesitas stam6,12.

4. technische specificaties en strategie

Opmerking: Vetweefsel is verzameld en gezuiverd uit de buik subcutane laag van patiënten, volgens de Lawrence en Coleman techniek17(Tabel van materialen).

  1. Handmatig oogst 10 mL van vet weefsel van de buik subcutane laag van elke patiënt, met behulp van een 3-mm botte canule verbonden met een vergrendeling spuit, volgens de Lawrence en Coleman techniek17 (cijfers 2A/2B).
  2. Pure SVF van vetweefsel van bloed, vet, olie en vloeistof scheiden door middel van centrifugeren voor 5 min bij 1.500 x g bij 20 ° C (Figuur 2C). De SVF is zeer rijk van ADSCs17.
  3. Verzamelen 8 mL perifere bloed met een naald 22 G en in een aparte buis PRP voorbereiding.
  4. Centrifugeer het verzamelde bloed gedurende 5 minuten bij 1.500 x g bij 20 ° C (Figuur 2D). In LRRT, de daaruit voortvloeiende veranderingen leiden tot betere overleving van het autologe transplantatie van vet, ADSC proliferatie, die verhoogde choroidal perfusie gunsten, en een uitgebreidere modulatie van het optreden van die factoren die worden uitgescheiden door vet7, 11,17.
  5. De suprachoroidal zak (meer details in stap 4, bepaalde 4.4 en 4.5) bouwen om de prothese orbitale vet verkregen en het residuele volume van deze zak te verzadigen met een mengsel van ADSCs van SVF en PRP, verkregen volgens de Lawrence en Coleman techniek17.

5. Suprachoroidal Autograft door LRRT (Limoli retinale restauratie techniek): chirurgische ingreep en technische Details

  1. Het verankeren van de sclera met 6-0 zijde hechtdraad, in de buurt van het inferior-temporele limbus.
  2. Open de subconjunctival en subtenonian ruimte op 11 mm van het inferior-temporele limbus, met behulp van 5.5" gebogen schaar Westcott Tenetomy.
  3. Het Limoli-Basile conjunctivale oprolmechanisme in deze ruimte te maken van een scleral chirurgische veld invoegen
  4. Met behulp van een 5-mm wassende mes Schuine Afschuining, snijden vooraf van een flap aan de kant in de sclera op 8 mm, van de limbus. Het klep scharnier is altijd radiale en aan de linkerkant van de chirurg.
  5. Open in het inferior-temporele Kwadrant, op 8 mm van de limbus, een diep scleral deur van ongeveer 5 mm voor de zijde door radiale scharnier met behulp van een halve maan mes, Schuine Afschuining omhoog. Uitvoeren van sclerectomy op een voldoende diepte te bekijken van de leisteen kleur van het vaatvlies.
  6. Maak een gat door het verwijderen van een beetje operculum in het distale deel van de klep, ter vergemakkelijking van de bloedcirculatie in de daaropvolgende suprachoroidal autograft.
  7. Pak met een oogheelkundige Tang de orbitale vet uit een gat boven de inferieure Musculus obliquus. Zorg ervoor dat is voldoende gevacuoliseerd het uitgepakte vet om te overleven na de innesteling kunnen.
  8. Plaats de autologe vet klep voorzichtig op de choroidal bed en hechtdraad met choroidal 6/0 polyglactin vezel aan de proximale rand van de deur.
  9. Sutuur (geologie) de scleral klep om te voorkomen dat compressie op de dikke stam of op haar voedingsstoffen vaartuigen.
  10. Het stroma van de dikke stam met 1 mL PRP gel (verkregen door centrifugering van het bloed-materiaal, scheiding van de component, en bloedplaatjes degranulatie26) infiltreren met behulp van een canule 30 G schuine (30 °).
  11. De zijkanten van het bindvlies voorbereiden op het hechtdraad. Verwijder vervolgens de conjunctivale oprolmechanisme.
  12. Suture het bindvlies, met behulp van 6/0 polyglactin vezel.
  13. Laat een ruimte om in te voegen in de subscleral ruimte, tussen de klep, het vaatvlies en de choroidal autograft, een kleine flexibele kunststof buis met het vet autologe transplantatie alvorens te besluiten.
  14. Verzadig de resterende ruimte tussen de autologe transplantatie van vet, vaatvlies en scleral kleppen met 0,5 cc van SVF (rijk van ADSCs), eerder bereid in stap 3.2, door een kleine flexibele kunststof buis, ingevoegd in de scleral zak.
  15. Sluit na het verzadigen van de resterende ruimte, de hechtdraad.
  16. Na de operatie, drie dagen van antibiotische therapie met 500 mg, Azithromycine te beheren. Ook voorzien van oog neerzetten therapie een antibiotica en steroïden combinatie, zoals chlooramfenicol en Betamethasone, voor ongeveer 15-20 dagen.
    Opmerking: Een autograft samengesteld uit vetcellen, ADSCs van SVF en PRP is nu verkregen26. Verklein de afstand tussen de geënte autologe cellen en vaatvlies door diepe sclerectomy ter stimulering van de secretie van de paracrine van autologe cellen in de choroidal stroom. Vouw voor hetzelfde doel, het gebied van contact tussen de stengel en het vaatvlies.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Met behulp van de procedure die hier gepresenteerd, werden twee groepen van droge AMD geteisterde patiënten, met een BCVA gelijk is aan of groter is dan 1 logaritme van de minimale hoek van resolutie (logMAR), in de studie ingeschreven. Groep A, met inbegrip van 11 ogen van 11 patiënten, ontvangen suprachoroidal autologe transplantatie door Limoli retinale restauratie techniek (LRRT), terwijl groep B, met inbegrip van 14 ogen van 14 patiënten, werd gebruikt als een controlegroep.

Student t-test en de chi vierkante test werden gebruikt om te vergelijken, respectievelijk, gemiddelde leeftijd en geslacht verdeling tussen de twee studiegroepen (tabel 2). Statistische analyses en visualisatie van de gegevens werden uitgevoerd vóór en na de LRRT operatie.

Een Wilcoxon-Mann-Whitney ondertekende rangschikking test werd uitgevoerd om te bepalen of de pre- en post-behandeling verschillen significant waren. Deze niet-parametrische statistische hypothesen test werd toegepast om te vergelijken twee afhankelijke monsters als de bevolking als normaal worden verdeeld, zoals in dit geval niet kan worden beschouwd. VA-waarden werden gemeten bij elke stap van de analyse. Statistische significantie werd vastgesteld op een p -waarde <0.05.

Elf ogen (6 rechts en 5 links ogen) van 11 patiënten (7 mannen en 4 vrouwen) met de klinische diagnose van droge AMD werden onderzocht in deze studie. Patiënt leeftijd varieerde van 62 tot 84 jaar, met een gemiddelde leeftijd van 71.5 jaar (± 3,8 SD).

Tabel 2 geeft een overzicht van de klinische profielen van de patiënten die behandeld werden met LRRT, en de gemiddelde waarden worden vastgelegd op 0 (T0), 90 (T90) en 180 (T180) dagen na de operatie. Bijwerkingen werden altijd gemeld om maximale veiligheid te garanderen. Gemiddelde waarden van de oogboldruk opgenomen in 0 (T0), 90 (T90) en 180 (T180) dagen na de operatie deed niet opnemen elke belangrijke wijziging.

Resultaten na de LRRT operatie waren als volgt:
In groep A, BCVA veranderd van 0.581 (T0) preoperatively 0.504 90 dagen (T90) en 0.376 logMAR op 180 dagen (T180) met een aanzienlijke stijging van 35.20% (p < 0,01). In controle groep B, met inbegrip van 14 ogen van 14 patiënten, 7 reutjes en 7 teefjes, met een gemiddelde leeftijd van 80.4 jaar, SD ± 2,3, veranderde van 0.573 (T0) tot 0.587 (T90), BCVA en te 0.601 logMAR (T180) met een niet-significante gemiddelde daling van 4,72% (tabel 2) (Figuur 3 ). In groep A, mijn test steeg aanzienlijk van 11.44 dB (T0) tot 12.59 dB (T180) (+9.58%) (Figuur 4), terwijl er geen significante verbetering in postoperatieve waarden in groep B.

Figure 1
Figuur 1 : Vertegenwoordiging van autologe transplantatie suprachoroidal. Groeifactoren (GFs) geproduceerd door Obesitas-cellen, platelet-rich plasma (PRP), en adipeus-afgeleide cellen van de stam (ADSCs) komen de choroidal en netvlies weefsels door middel van het retinale pigment epitheel (RPE). Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

Figure 2
Figuur 2 : Technisch procédé. Canule en daaropvolgende intrekking van vetweefsel van de buikstreek (a-Panel). De canule wordt onderhuids vet met milde aspiratie verplaatst door zuigen vetcellen in eigen lumen (Panel B). Na het centrifugeren, er zijn drie-lagen van vetweefsel: olie (hoog-laag), homogene vet (intermediaire laag) en bloed vloeistof (onderste laag) (Panel C). Observeer de buis met bloed onmiddellijk na het centrifugeren. Er zijn drie lagen: bloedplaatjes arme plasma (PPP) en bloedplaatjes rijk plasma (PRP) erytrocyten (Panel D). Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

Figure 3
Figuur 3 : Beste gecorrigeerde gezichtsscherpte (BCVA) in droge leeftijdsgebonden Macula Degeneratie (AMD). In groep A na autologe transplantatie van de suprachoroidal door Limoli retinale restauratie techniek (LRRT) en in de controlegroep (Check), gemeten op tijd 0 (T0), 90 (T90) en 180 (T180) dagen wijzigen. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

Figure 4
Figuur 4 : Microperimetry (MY) bij een patiënt van groep A. Droog leeftijdsgebonden Macula Degeneratie (AMD) zes maanden na Limoli retinale restauratie techniek (LRRT). MIJN verhoogde van 11.44 dB (T0) tot 12.59 dB (T180) (+9.58%). Kleurenschaal van 0 tot 36 in dB. Fixatie stabiliteit: stabiel, relatief onstabiele, unstable. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

Inclusie Criteria Uitsluitingscriteria
Kaukasische onderwerpen Refractieve fouten met bolvormige equivalent > 6 D
Goed gevoed deelnemers Tekenen van exsudatieve LMD door SD-OCT en FA
Diagnose door SD-OCT, AFI en FA Oogbeschadigingen en/of aandoeningen: CT, GL, ON, MP, VM, CRD, enz.
Meetbare VA Oogbeschadigingen en/of trauma
BCVA ≥1 logMAR Systemische ziekten: MS; PD; DM; RD; HD; vasculitis
Normale IOP Hoge bloeddruk, kanker en andere systeemziekten
Goede opslag extrafoveal gebieden
LogMAR: logaritme van de minimale hoek van resolutie; SD-OCT: spectrale domein-optische coherentie tomografie; AFI: autofluorescence imaging; FA: fluoresceïne-angiografie; VA: gezichtsscherpte; IOP: intraoculaire druk; D: dioptrieën; CT: cataract; GL: glaucoom; ON: optische neuritis; MP: Macula plooi; VM: neovascular membranen; CRD: chorioretinal ziekte; MS: multiple sclerose; PD: Ziekte van Parkinson; DM: diabetes mellitus; RD: nierziekten; HD: hepatische aandoeningen.

Tabel 1: Integratie en uitsluiting criteria voor droge leeftijdsgebonden Macula Degeneratie (AMD) patiënten.

PARAMETERS LRRT (n = 11) Controle (n = 14)
Leeftijd (gemiddeld) 71.5 ±3.8SD 80.4 ±2.3SD
Leeftijd (bereik) 62 - 84 73 - 79
Geslacht F:4 M:7 F:7 M:7
BCVA T0 0.581 logMAR 0.573 logMAR
(gemiddeld)
BCVA T0 (bereik) 0.301 - 1.0 0.0 - 1.0
BCVA T90 (gemiddeld) 0.504 logMAR 0.587 logMAR
BCVA T90 (bereik) 0.222 - 1 0.0 - 1
BCVA T180 (gemiddeld) 0.376 logMAR 0.601 logMAR
BCVA T180 (bereik) 0.046 - 0.699 0.0 - 1.0
Percentage 35.19 4.72
wijzigen
p-waarde < 0.01 > 0,5
Leeftijd jaren; n = patiënten en controles; SD = standaardafwijking; F = vrouwelijk; M = mannelijk; BCVA = beste gecorrigeerde gezichtsscherpte in logMAR; T0 = basislijn voordat chirurgie autograft; T90 = 90 dagen post chirurgische autograft; T180 = 180 dagen post chirurgische autograft.

Tabel 2: klinische profielen van patiënten in de studie onderzocht. Gemiddelde waarden opgenomen vóór (T0), 90 (T90) en 180 (T180) dagen na de cel autograft door Limoli retinale restauratie techniek (LRRT) bij alle patiënten.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Het primaire doel van deze studie was om te evalueren of de prothese suprachoroidal van adipocytes, ADSCs in SVF en PRP VA en netvlies gevoeligheid in droge AMD geteisterde ogen na verloop van tijd zou kunnen verbeteren. Een ander hoofddoel was om aan te tonen van mogelijke therapeutische effecten van deze cellen, op basis van de recente literatuur, aangezien verschillende Preklinische studies hebben gesuggereerd dat GF gebaseerde therapie nuttig voor patiëntenzorg in verschillende ziekten zijn kan.

In feite, hebben sommige studies aangetoond dat autologe menselijke geïnduceerde pluripotente stamcellen (iPSC) een cellulaire bron voor de prothese vertegenwoordigen kon, gericht op het retinale pigment epitheel (RPE) regeneratie in weefsel substitutietherapie voor AMD18, 19. deze cel bladen worden gegenereerd als een enkelgelaagde die kan uiten van typische RPE markeringen en vertonen GF secretie, weergegeven: phagocytotic vermogen, evenals genexpressie patronen die vergelijkbaar zijn met die van de inheemse RPE18,19 gepolariseerde . Bij transplantatie toonde autologe niet-menselijke primaten iPSC-RPE cel bladen noch immuun afwijzing noch tumor vorming18,19.

De huidige studie presenteert een aantal verschillende kenmerken. We geanalyseerd rechtstreeks in droge AMD geteisterde menselijke ogen of de suprachoroidal autograft cel visuele prestaties kan verbeteren.

Bovendien, heeft sovrachoroidal prothese van autologe cellen volgens LRRT altijd bewezen veilig te zijn. We hebben nooit geregistreerd sub retinale neovascularization, Macula oedeem, retinale detachement, of andere retinale problemen in het eerste jaar post interventie. Aan de andere kant, ongepaste chirurgische ingrepen kunnen theoretisch leiden tot perforatie van het vaatvlies met latere bloeden, maar in ons onderzoek geen oog werd beschadigd. Het is echter mogelijk dat de sub-conjunctivale bloeding die is meestal convergentieperiode binnen een paar dagen zijn en geen weer als een complicatie.

Recente studies hebben voldoende bewijs van een aanzienlijke toename van de scotopisch ERG waarden verstrekt, BCVA en mijn, bij 90 en 180 dagen na autologe transplantatie. De stijging was echter groter zijn als het netvlies dikte gemiddelde (RTA) opgenomen door SD-OCT hoger11,-26 was. Men gaat ervan uit dat de chirurgisch geënte cellen GFs in het omliggende weefsel, vaatvlies en netvlies kunnen produceren, en dat zij hebben neurotrophic en angiotrophic eigenschappen, zoals fundamentele fibroblast groeifactor (bFGF), vasculaire endotheliale groeifactor (VEGF) , pigment epitheel-afkomstige factor (PEDF), interleukine (IL), macrofaag kolonie-stimulerende factor (M-CSF), granulocyt-macrofaag kolonie-stimulerende factor (GM-CSF) en placenta groeifactor (PlGF), terwijl bloedplaatjes bloedplaatjes afkomstige produceren groeien factor (PDGF), bloedplaatjes afkomstige angiogenese factor (PDAF), etc.6,7,12,13,21

Plaatsing van de prothese in de buurt van het vaatvlies wordt verondersteld dat de geproduceerde GFs in te voeren van de choroidal flow, om te bereiken de endothelial cel receptoren, RPEs, Muller cellen, researchdieren, en tenslotte om te communiceren met hen. In LRRT, de autologe geënte elementen zijn nuttig, elk op hun eigen manier, voor regeneratie. De vet-cellen produceren bFGF, epidermale groeifactor (EGF), insuline-achtige groeifactor-1 (IGF-1), IL, transformerende groeifactor β (TGF-β), PEDF en adiponectin21. De ADSCs produceren bFGF, VEGF, M-CSF, GM-CSF, PlGF, TGF-β, hepatocyte groeifactor (HGF), IGF-1, IL en angiogenin6,7. De bloedplaatjes produceren PDGF, IGF-1, TGF-β, VEGF, bFGF, EGF, PDAF en Thrombospondine (TSP)6,12.

Sommige factoren endothelial regeneratie, sommige bevorderen en ADSC proliferatie, dus ten gunste van zowel de autologe vet en de overleving van de adipocyte, terwijl anderen neovascular processen22,23,24 remmen. PEDF en bFGF gunst fotoreceptor overleving, terwijl EGF haar optreden op Müller cellen oefent door triggering endogene bFGF transcriptie en ADSCs te verhogen hun secretoire activiteit25,27te stimuleren. Hoewel GFs normaal door RPEs uitgescheiden worden, dit gebeurt niet in atrofische maculopathy als gevolg van de complexe RPE/choriocapillaris. Paracrine GF secretie door graft cellen draagt bij aan ten gunste van fotoreceptor en choriocapillaris overleven28. Bovendien, M-CSF, GM-CSF, en IL anti-inflammatoire en Chemotactische gevolgen hebben voor macrofagen, die betrokken zijn bij de afschaffing van de intraretinal cel puin, een functie die fysiologisch door RPEs29,30wordt uitgevoerd.

De celtypes geënt achter het vaatvlies kunnen constante GF secretie in de choroidal stroom zorgen. GFs kunnen komen van het vaatvlies naar het netvlies cellen, interactie met hun membraan-receptoren en ten slotte activeren een intracellulair traject. De gepresenteerde gegevens suggereren dat LRRT choroidal perfusie en fotoreceptor trophism niet alleen door middel van bFGF-receptor interacties, maar ook door stimulatie door Müller cellen, RPEs en netvlies researchdieren kunnen verhogen. Dientengevolge, uitleggen gen expressie veranderingen en het effect van de laatste antiapoptotic de neuroenhancement. Dit cellulair mechanisme ten grondslag ligt aan de mogelijkheid om visuele prestaties, zoals benadrukt in de klinische bevindingen in de geënte groep te verhogen. Kortom, kan LRRT nuttig zijn voor het behoud van de visuele functie van droge AMD geteisterde patiënten op de lange termijn.

Zoals we hebben aangetoond in eerdere studies, blijkt kegel-rod ERG en rod ERG echter een veelbetekenend correlatie met RTA, hoewel dit niet het geval voor cone ERG. Dit kan worden verklaard door het feit dat de fovea functie in gevaar, lijkt hoewel de macula volumes in droge AMD is nog steeds regelmatig, ten minste in de beginfase26. In deze pathologie kunnen resterende retinale trophism gemeten door RTA een prognostische criterium voor LRRT behandeling, omdat betere resultaten vaker bij patiënten met RTA gelijk is aan of groter is dan 250 µm26. De beschikbare GF-set kan leiden tot neuroenhancement, de omvang van die evenredig aan de aanwezigheid van gebieden met meer buiten, is zoals geregistreerd door elektrische activiteit26. In een later stadium zou arme weefsel buiten niet het therapeutische effect dat met de procedure, als gevolg van de schaarse GF-membraan receptor interakties is gewild.

De volgende stappen van dit onderzoek vergt de aanwerving van een groter aantal onderwerpen met grotere VA en centrale fixatie door statistisch beoordeling van alle onmisbaar tests nodig om te bevestigen dat de techniek geldig is en de biochemische effecten te bestuderen. Er kan worden betoogd dat de toename van de trophism van de cel wordt weerspiegeld in de visuele activiteit van de cel, objectief gemeten door ERG, BCVA en mijn11. GF gebaseerde therapie zou geven een actuele, selectieve, veilige en redelijke behandeling in oogheelkundig ziekten.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Gepresenteerd op ARVO 2015, mei 3-7-Denver, CO - USA.

Acknowledgments

De auteurs hebben geen bevestigingen.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Blunt cannula, 3 mm.  Mentor, Santa Barbara, CA.
Luer-LokTM syringe.  BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
Regen-BCT tube.  RegenKit; RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
Centrifuge  RegenPRP Centri. RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
BD Venflon Pro Safety 22G x 1.00 inch (0.9 mm x 25 mm).  BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
SPSS Statistics Version 19.0 IBM Corp., Armonk, NY, USA.
Confocal scanning laser ophthalmoscope  Nidek Inc, Fremont, CA Nidek F10 
Cirrus 5000 Spectral Domain-Optical Coherence Tomography Carl Zeiss Meditec AG, Jena, Germany  SD-OCT 
Maia 100809 Microperimetry  CenterVue S.p.A., Padua, Italy
Ocular electrophysiology electromedical system, C.S.O., S.r.l., Scandicci, Italy  Retimax for ERG 

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Daftarian, N., Kiani, S., Zahabi, A. Regenerative therapy for retinal disorders. J. Ophthalmic Vis. Res. 5, 250-264 (2010).
  2. Thanos, C., Emerich, D. Delivery of neurotrophic factors and therapeutic proteins for retinal diseases. Expert. Opin. Biol. Ther. 5, 1443-1452 (2005).
  3. Cao, W., et al. In vivo protection of photoreceptors from light damage by pigment epithelium-derived factor. Inv. Ophthalmol. Vis. Sci. 42, 1646-1652 (2001).
  4. Bhutto, I., Lutty, G. Understanding age-related macular degeneration (AMD): Relationships between the photoreceptor/retinal pigment epithelium/Bruch's membrane/choriocapillaris complex. Mol. Aspects Med. 33, (4), 295-317 (2012).
  5. McHarg, S., Brace, N., Bishop, P. N., Clark, S. J. Enrichment of Bruch's membrane from human donor eyes. J. Vis. Exp. (105), (2015).
  6. Kevy, S. V., et al. Preparation of growth factor enriched autologous platelet gel. Transactions of the Society for Biomaterials 27th Annual Meeting. St. Paul, Minnesota, USA. April 24-29 (2001).
  7. Schaffler, A., Buchler, C. Concise review: adipose tissue-derived stromal cells-basic and clinical implications for novel cell-based therapies. Stem Cells. 25, 818-882 (2007).
  8. Filatov, V. P. Tissue therapy. Med. Gen. Fr. 11, 3-5 (1951).
  9. Pelaez, O. Retinitis pigmentosa. Cuban experience. Editorial Cientifico Técnica. La Habana, Cuba. (1997).
  10. Meduri, R., et al. Effect of basic fibroblast growth factor on the retinal degeneration of B6(A)- Rperd12/J (retinitis pigmentosa) mouse: a morphologic and ultrastructure study. ARVO 2007 Annual Meeting. Fort Lauderdale. May 6-10 (2007).
  11. Limoli, P. G., Vingolo, E. M., Morales, M. U., Nebbioso, M., Limoli, C. Preliminary Study on Electrophysiological Changes After Cellular Autograft in Age-Related Macular Degeneration. Medicine. 93, (29), 355 (2014).
  12. Tischler, M. Platelet rich plasma: The use of autologous growth factors to enhance bone and soft tissue grafts. N. Y. State Dent. J. 68, 22 (2002).
  13. Zuk, P. A., et al. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. Mol. Biol. Cell. 13, (12), 4279-4295 (2002).
  14. Lin, K. J., et al. Topical administration of orbital fat-derived stem cells promotes corneal tissue regeneration. Stem Cell Res. Ther. 4, (3), 72 (2013).
  15. Limoli, P. The retinal cell-neurorigeneration. Principles, applications and perspectives. The growth factors. FGE Reg. Canelli (AT). 159-206 (2014).
  16. Coleman, W. P., et al. Guidelines of care for liposuction. J. Am. Acad. Dermatol. 45, 438-447 (2001).
  17. Lawrence, N., Coleman, W. P. Liposuction. J. Am. Acad. Dermatol. 47, 105-108 (2002).
  18. Kamao, H., et al. Characterization of human induced pluripotent stem cell-derived retinal pigment epithelium cell sheets aiming for clinical application. Stem Cell Reports. 23, (2), 205-218 (2014).
  19. Dang, Y., Zhang, C., Zhu, Y. Stem cell therapies for age-related macular degeneration: the past, present, and future. Clin. Interv. Aging. 10, 255-264 (2015).
  20. Nebbioso, M., Livani, M. L., Steigerwalt, R. D., Panetta, V., Rispoli, E. Retina in rheumatic diseases: Standard full field and multifocal electroretinography in hydroxychloroquine. Clin. Exp. Optom. 94, (3), 276-283 (2011).
  21. Wang, P., Mariman, E., Renes, J., Keijer, J. The secretory function of adipocytes in the physiology of white adipose tissue. J. Cell. Physiol. 216, 3-13 (2008).
  22. Chen, G., et al. VEGF-Mediated Proliferation of Human Adipose Tissue-Derived Stem Cells. PloS One. 8, 73673 (2013).
  23. Bagchi, M., et al. Vascular endothelial growth factor is important for brown adipose tissue development and maintenance. FASEB J. 27, 3257-3271 (2013).
  24. Carron, J. A., et al. Cultured human retinal pigment epithelial cells differentially express thrombospondin-1, -2, -3,and -4. Int. J. Biochem. Cell. Biol. 32, 1137-1142 (2000).
  25. Kim, S. Y., et al. Expression of pigment epithelium-derived factor (PEDF) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in sickle cell retina and choroid. Exp. Eye Res. 77, 433-445 (2003).
  26. Limoli, P. G., Limoli, C., Vingolo, E. M., Scalinci, S. Z., Nebbioso, M. Cell surgery and growth factors in dry age-related macular degeneration: visual prognosis and morphological study. Oncotarget. 7, (30), 46913-46923 (2016).
  27. Ueki, Y., Reh, T. A. EGF stimulates Müller glial proliferation via a BMP-dependent mechanism. Glia. 61, 778-789 (2013).
  28. Kozlowski, M. R. RPE cell senescence: A key contributor to age-related macular degeneration. Med. Hypotheses. 78, 505-510 (2012).
  29. Schneider, A., et al. The hematopoietic factor G-CSF is a neuronal ligand that counteracts programmed cell death and drives neurogenesis. J. Clin. Invest. 115, 2083-2098 (2015).
  30. Yin, Y., et al. Oncomodulin is a macrophage-derived signal for axon regeneration in retinal ganglion cells. Nat. Neurosci. 9, 843-852 (2006).
Regeneratieve therapie door Suprachoroidal cel Autograft in droge leeftijdsgebonden maculaire degeneratie: voorontwerp <em>In Vivo</em> verslag
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Limoli, P. G., Vingolo, E. M., Limoli, C., Scalinci, S. Z., Nebbioso, M. Regenerative Therapy by Suprachoroidal Cell Autograft in Dry Age-related Macular Degeneration: Preliminary In Vivo Report. J. Vis. Exp. (132), e56469, doi:10.3791/56469 (2018).More

Limoli, P. G., Vingolo, E. M., Limoli, C., Scalinci, S. Z., Nebbioso, M. Regenerative Therapy by Suprachoroidal Cell Autograft in Dry Age-related Macular Degeneration: Preliminary In Vivo Report. J. Vis. Exp. (132), e56469, doi:10.3791/56469 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter