यह लेख प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल का वर्णन करने के लिए मानव myometrium के पूर्व vivo संकुचन और दवा खोज में उनके आवेदन का अध्ययन. इस तकनीक के लिए myometrial फिजियोलॉजी और pathophysiology की समझ में सुधार के रूप में अच्छी तरह के रूप में उपंयास अनुसंधान जांच या दवा सुराग से औषधीय डेटा को मांय किया जाता है ।
डिस्कवरी और उपंयास दवा यौगिकों या जैव रासायनिक जांच के लक्षण वर्णन मजबूत और शारीरिक रूप से प्रासंगिक परख प्रणालियों पर भरोसा करते हैं । हम तरीकों का वर्णन करने के लिए उपाय पूर्व vivo myometrium सिकुड़ना. इस परख कारकों और myometrial संकुचन के मॉडुलन में शामिल अणुओं की जांच करने के लिए और उनके उत्तेजक या निरोधात्मक कार्रवाई निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, और इसलिए vivo मेंउनकी चिकित्सीय क्षमता । बायोप्सी सूचित सहमति के साथ सीजेरियन सेक्शन डिलिवरी के दौर से गुजर महिलाओं से प्राप्त कर रहे हैं । myometrium के ठीक स्ट्रिप्स, विच्छेदित काटा और 1 मिलीलीटर अंग स्नान ३७ डिग्री सेल्सियस पर शारीरिक खारा समाधान के साथ superfused के भीतर एक बल transducer से जुड़ी हैं । स्ट्रिप्स के भीतर सहज संकुचन विकसित 2 – 3 ज तनाव सेट के तहत और कई घंटे के लिए स्थिर रहते हैं (> 6 एच). स्ट्रिप्स भी ऐसे अंतर्जात हार्मोन, ऑक्सीटोसिन और vasopressin, जो संकुचन आवृत्ति, बल और अवधि के एकाग्रता पर निर्भर मॉडुलन के कारण के रूप में अनुबंध करने के लिए प्रेरित किया जा सकता है और अधिक निकटता परिश्रम में संकुचन समान है । इसलिए, ज्ञात और उपंयास दवा सुराग के प्रभाव सहज और एगोनिस्ट प्रेरित संकुचन पर परीक्षण किया जा सकता है ।
इस प्रोटोकॉल विशेष रूप से विवरण कैसे इस परख मानव myometrial संकुचन के विभिंन मापदंडों पर उनके प्रभाव को मापने के द्वारा ज्ञात और उपंयास एजेंटों की शक्ति का निर्धारण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । हम ऑक्सीटोसिन-और V1a रिसेप्टर विरोधी, atosiban और SR49059 ज्ञात यौगिकों जो ऑक्सीटोसिन और vasopressin प्रेरित संकुचन को बाधित के उदाहरण के रूप में उपयोग करते हैं, और प्रदर्शन कैसे इस विधि के पूरक और सत्यापित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है औषधीय डेटा सेल आधारित परख से प्राप्त करने के लिए दवा विकास सहायता । ऑक्सीटोसिन और vasopressin की तुलना में उपन्यास एगोनिस्ट के प्रभाव की विशेषता भी हो सकती है. Whilst हम ऑक्सीटोसिन/vasopressin प्रणाली के उदाहरण का उपयोग करें, इस विधि भी अंय रिसेप्टर्स और आयन चैनल है कि गर्भाशय के संकुचन और विश्राम में एक भूमिका निभाने के लिए मानव गर्भाशय फिजियोलॉजी और pathophysiology की समझ अग्रिम अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है ।
दवा की खोज के लक्ष्य को सक्रिय या बाधा सेलुलर संकेत रास्ते से एक चिकित्सीय प्रतिक्रिया उत्पन्न जो उपंयास, शक्तिशाली, और उच्च चयनात्मक लाइगैंडों का उत्पादन करने के लिए है । यह एक उपयुक्त परख प्रणाली में जो विश्वसनीय, मजबूत, और प्रासंगिक परिणामों के साथ नेतृत्व यौगिकों का परीक्षण करने के लिए1की आवश्यकता है । औषधीय तकनीक जैसे ligand-रिसेप्टर बाइंडिंग और कार्यात्मक परख अक्सर heterologous सेल-आधारित सिस्टम को रोजगार, एक्सप्रेस रिसेप्टर्स जो अंयथा2मौजूद नहीं होगा इंजीनियर. Whilst इन तकनीकों रिसेप्टर औषध और प्रारंभिक दवा के विकास के लिए बहुमूल्य अंतर्दृष्टि प्रदान करते हैं, डेटा प्राप्त vivo परिदृश्य में एक सच को प्रतिबिंबित नहीं कर सकते हैं. इसलिए यह महत्वपूर्ण है कि कोशिका आधारित परख से औषधीय डेटा भी शारीरिक रूप से प्रासंगिक मॉडलों में मांय हैं ।
गर्भाशय चिकनी मांसपेशी (myometrium) गर्भाशय जो परिश्रम के दौरान संकुचन के लिए जिंमेदार है कि efface और गर्भाशय ग्रीवा को चौड़ा और भ्रूण3उद्धार के पेशी परत का गठन किया । myometrium का संकुचन सहज है; यह हार्मोन या तंत्रिका इनपुट4अनुबंध करने की आवश्यकता नहीं है । संकुचन myometrial कोशिका झिल्ली जो वोल्टेज के उद्घाटन की ओर जाता है के सहज ध्रुवीकरण के बारे में लाया जाता है सीए2 +-चैनल (एल प्रकार चैनल) और सीए की आमद2 + सेल5में । कैल्शियम calmodulin के साथ परिसरों और मायोसिन प्रकाश श्रृंखला कळेनासे सक्रिय करता है जो बारी phosphorylates मायोसिन और संकुचन के साथ पार पुल चक्र गठन को सक्षम करने के लिए. छूट आमतौर पर de-फास्फारिलीकरण द्वारा मायोसिन के मायोसिन फॉस्फेट और Ca की एकाग्रता में कमी के द्वारा मध्यस्थता है2 + सेल से बाहर निकालना और/या sequestering sarcoplasmic (SR)5,6 ,7.
कई तरीकों myometrial समारोह और रोग का अध्ययन करने के लिए विकसित किया गया है, से vivo में आंतरिक और बाहरी tocography और अंतर्गर्भाशयी दबाव कैथेटर, बदल या myometrial मूल की कोशिकाओं को अमर की पीढ़ी के लिए8 ,9,10,11,12. Whilst सेल संस्कृति प्रणालियों का पता लगा सकते है कि एक पदार्थ सेलुलर स्तर पर कार्य कर सकते हैं, अंग स्नान के भीतर ऊतकों के स्ट्रिप्स उपकरणों के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है औषधीय रिएजेंट के लिए पूरे ऊतकों के कार्यात्मक प्रतिक्रियाओं को मापने । पारंपरिक अंग स्नान आम तौर पर एक बड़ा गर्म गिलास चैंबर जो 5 और ५० के बीच शारीरिक खारा (PSS) की मिलीलीटर धारण करने में सक्षम है है । इन बड़े कक्षों के भीतर स्ट्रिप्स आम तौर पर ऑक्सीजन और PSS की बड़ी मात्रा के साथ वातन की आवश्यकता होती है । ऊतक के स्ट्रिप्स और विच्छेदित स्नान कक्ष के भीतर निलंबित कर रहे है और एक बल transducer जो तनाव में बदलाव के उपाय, जैसे एक संकुचन के दौरान के रूप में संलग्न । दोनों मनुष्यों और जानवरों सहित, गिनी पिग13, माउस14, चूहा15, खरगोश16, और दूसरों17,18से myometrium के स्ट्रिप्स, अनुसंधान समूहों के एक नंबर के द्वारा इस्तेमाल किया गया है की जांच myometrial शरीर विज्ञान और विकृति से संबंधित कई सवाल, अपरिपक्व और बेकार मजदूरों सहित. उदाहरण के लिए, myometrial स्ट्रिप्स कारकों की पहचान करने के लिए इस्तेमाल किया गया है जो विनियमित और myogenic गतिविधि को संशोधित19,20,21, ऐसे SR22के रूप में organelle समारोह का निर्धारण, के रूप में अच्छी तरह के रूप में आयन चैनल23,24,25,26, पंप और एक्सचेंजर्स27 myometrial फिजियोलॉजी में उनकी भूमिका का निर्धारण करने के लिए की जांच मॉडुलन ।
इस पूर्व vivo तकनीक ऊतक संकुचन प्रदर्शन के आकलन के लिए अनुमति देता है और संकुचन के मापदंडों पर विभिन्न एजेंटों के प्रत्यक्ष प्रभाव सहित मापा जा करने के लिए, संकुचन बल (शक्ति), आवृत्ति, और अवधि, के रूप में अच्छी तरह के रूप में इन मूल्यों के एकीकरण, कुल काम का एक सूचकांक उत्पंन करने के लिए (मतलब अभिंन बल या वक्र के तहत क्षेत्र, ईमेज) । के रूप में पृथक ऊतक पट्टी की तैयारी एक से अधिक कोशिका प्रकार के एक मॉडल का गठन, पूरे ऊतक के शारीरिक प्रतिक्रिया मापा जा सकता है । अंग स्नान और पृथक ऊतक पट्टी इसलिए सेल संस्कृति के काम और पूरे पशु के बीच पुल प्रदान करने में एक उपयोगी उपकरण है/vivo काम में / इसलिए, ड्रग डिस्कवरी के क्षेत्र में, उनके उत्तेजक के संदर्भ में उपन्यास एजेंटों के प्रभाव (यानी, उत्तेजक) या निरोधात्मक (यानी, छूट) vivo में संभावित अधिक बारीकी से मूल्यांकन किया जा सकता है. इस तकनीक का सफलतापूर्वक ऑक्सीटोसिन के विकास में इस्तेमाल किया गया था और वी1aरिसेप्टर (OTR और वी1aआर) एक tocolytic एजेंट के रूप में विरोधी atosiban के लिए अपरिपक्व श्रम संकुचन और देरी अपरिपक्व जन्म को बाधित । इन विट्रो में atosiban के myometrial स्ट्रिप्स पर परीक्षण के लिए काफी ऑक्सीटोसिन (OT)-प्रेरित संकुचन28,29,30को कम करने में सक्षम विरोधी पाया । महत्वपूर्ण रूप से इन अध्ययनों से atosiban के शोधों के मूल्य को मान्य करने में मदद मिली और यह नैदानिक परीक्षणों के लिए आगे ले जाने के लिए आवश्यक सबूत की अवधारणा डेटा उत्पन्न31,३२,३३,३४ . Atosiban अब व्यापक रूप से पसंद की दवा यूरोप में श्रम में देरी के रूप में प्रयोग किया जाता है । इसी तरह के सबूत-अवधारणा अध्ययन ऑक्सीटोसिन एनालॉग carbetocin के लिए किया गया था के बाद को रोकने में अपनी चिकित्सीय क्षमता दिखाने के प्रसवोत्तर रक्तस्त्राव३५,३६,३७। अंय प्रमुख इस परख के साथ विकास के तहत वर्तमान यौगिकों retosiban (GSK221149A)३८ और nolasiban (डेटा अप्रकाशित) शामिल हैं । ये विधियां भी रोगी समूहों के बीच की तुलना करने के लिए सफलतापूर्वक उपयोग किया गया है३९,४०,४१,४२,४३,४४, ४५,४६,४७ और अंतर प्रजातियों के मतभेदों के लिए जांच ।
यहां हम छोटे के भीतर गर्भवती मानव myometrium से अलग पूर्व vivo ऊतक स्ट्रिप्स के उपयोग का वर्णन (1 मिलीलीटर) कस्टम-अंग स्नान उदाहरण देकर स्पष्ट करना कैसे इस विधि के पूरक और औषधीय डेटा सेल से प्राप्त की पुष्टि करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है आधारित परख . बायोप्सी बड़े पैमाने पर पूर्व के दौर से गुजर महिलाओं से प्राप्त किया गया श्रम ऐच्छिक सीजेरियन सेक्शन (सीएस) प्रसव के रूप में वे शल्य चिकित्सा की योजना बनाई है और इसलिए बायोप्सी संग्रह अनुसूची करने के लिए आसान कर रहे हैं, myometrium करने के लिए आसान पहुँच है, और ऊतकों किसी को उजागर नहीं किया गया होगा uterotonic उत्तेजक या ढीला सर्जरी से पहले । हालांकि, बायोप्सी भी अनियोजित (आपातकालीन) श्रम में सीएस प्रसव के दौर से गुजर महिलाओं से प्राप्त किया जा सकता है उपलब्ध कराने के पर्याप्त समय के लिए पूरी तरह से रोगी की सहमति है । अधिकांश बायोप्सी शल्य चीरा की साइट पर कम गर्भाशय खंड से सर्जरी के दौरान प्राप्त कर रहे हैं, लेकिन यह भी ऊपरी खंड से नमूने प्राप्त करने के लिए संभव है४८,४९. योनि प्रसव के बाद कुछ मामलों में, अपरा बिस्तर से पंच बायोप्सी भी५०प्राप्त किया गया है । हालांकि, यह सबसे पारंपरिक मार्ग नहीं है और प्राप्त myometrial ऊतक की मात्रा छोटी है । गैर गर्भवती myometrium पहले से प्राप्त किया जा सकता है या रजोनिवृत्ति के बाद महिलाओं सौम्य स्त्री की स्थिति के लिए गर्भाशय के दौर से गुजर । एक पूर्ण मोटाई बायोप्सी गर्भाशय ग्रीवा से दूर कम कोष से, पोस्ट-पैथोलॉजी परीक्षा का नमूना है, और myometrium serosal और एंडोमेट्रियल सतहों से परहेज गर्भाशय की दीवार के बीच से लिया जाता है ।
Whilst सबसे दवा विकास मानव विकारों के उपचार के लिए करना है, सबसे बुनियादी अनुसंधान मुख्य रूप से पशु ऊतकों में किया जाता है । यहां, हम सर्जरी से प्राप्त मानव myometrium के पूर्व vivo संकुचन की जांच करने के तरीकों का वर्णन करते हैं जो गर्भाशय फिजियोलॉजी और विकृति से संबंधित महत्वपूर्ण सवालों के एक नंबर का पता करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, साथ ही कार्यात्मक प्रतिक्रियाओं को मान्य करने के लिए ज्ञात और उपंयास औषधीय एजेंटों के लिए दवा विकास सहायता । विशेष रूप से, हम इस परख के उपयोग पर प्रकाश डाला एक ज्ञात OTR और V1aके विरोधी प्रतिक्रिया की जांच करने के लिए आर प्रतिस्पर्धी विरोधी, ओटी-प्रेरित गर्भवती myometrial संकुचन पर atosiban, साथ ही साथ प्रतिक्रिया और रिसेप्टर निर्धारित करने के लिए एक नव विकसित चुनिंदा V1aR विरोधी, [D-Arg8] INT के selectivity. हम प्रदर्शित करते है कि महत्वपूर्ण pharmacokinetic मानकों जैसे चुनाव आयोग५० और आईसी५० गणना की जा सकती है, जो कक्ष-आधारित औषध विज्ञान डेटा के साथ अच्छी तरह से संरेखित करें ।
एकाधिक स्ट्रिप्स का उपयोग एक साथ कई एजेंट प्रभाव की प्रत्यक्ष तुलना के लिए अनुमति देता है, विरोधी के साथ प्रतियोगिता प्रयोगों, और उचित समय और वाहन नियंत्रण. के रूप में स्ट्रिप्स अक्सर 2, 4, या 8 के समूहों में तैयार कर रहे हैं, इस तकनीक मध्यम प्रवाह प्रदान करता है, के परीक्षण को सक्षम करने 2 – 4 यौगिकों में 6 – 8 (संचयी) सांद्रता (बायोप्सी प्रति). इस विधि भी वास्तविक समय डेटा प्रदान करता है ताकि प्रभाव जल्दी से मूल्यांकन किया जा सकता है और प्रोटोकॉल समायोजित किया जा सकता है । इसके अलावा, इस तकनीक के हित के किसी भी परिसर का परीक्षण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है और अनुसंधान समूहों के एक नंबर द्वारा सफलतापूर्वक इस्तेमाल किया गया है myometrial शरीर क्रिया विज्ञान और दवा खोज में पर ध्यान केंद्रित । इस पत्र में वर्णित के रूप में शुद्ध यौगिकों का विश्लेषण करने के अलावा, गर्भाशय सिकुड़ना मॉडल भी किया गया है और सफलतापूर्वक इस तरह के पारंपरिक चिकित्सा से हर्बल की तैयारी के रूप में मिश्रण से उपंयास uterotonic यौगिकों के लिए स्क्रीन करने के लिए उपयोग किया जा सकता है7 , ५५ , ५६.
हालांकि इस मॉडल तकनीकी रूप से मजबूत है और अच्छा reproducibility से पता चलता है, यह कुछ सीमाएं हैं: विच्छेदन ऊतक या विच्छेदन उपकरणों का उपयोग कर के साथ अपरिचित उन लोगों के लिए मुश्किल हो सकता है, इसलिए नए उपयोगकर्ताओं को कुछ समय की आवश्यकता के लिए ऊतक का अनुकूलन होगा तैयारी और प्रोटोकॉल । यह भी ध्यान दिया जाना चाहिए कि मानव myometrium ऐसे चूहे और माउस के रूप में अंय मॉडलों के रूप में काफी अलग है । सबसे कुतर uteri दो ट्यूब की तरह गर्भाशय के सींग से बना रहे हैं, एक छोर पर एक अंडाशय के साथ पूरा और गर्भाशय ग्रीवा में शामिल हो गए । प्रत्येक सींग स्पष्ट रूप से मानव myometrium में अलग फाइबर प्रकार whilst विच्छेदन पर आसानी से अलग किया जा सकता है, जो अनुदैर्ध्य और परिपत्र मांसपेशी परतों, निर्धारित है अक्सर एक ‘ जाल ‘ बनाने intertwined हैं । इसके अलावा ह्यूमन myometrium की कॉन्ट्रैक्ट प्रोफाइल को कुतर कर काफी अलग किया जाता है । सबसे विशेष रूप से, मानव myometrium में संकुचन कम अवधि में लगातार लेकिन अब कर रहे हैं । मानव myometrium के साथ काम करने के लिए प्रयोगात्मक समय फ्रेम इसलिए अक्सर ज्यादा कुतर मॉडलों की तुलना में लंबे होते हैं । प्रजातियों के बीच रिसेप्टर अभिव्यक्ति में मतभेद भी काफी एगोनिस्ट करने के लिए प्रतिक्रियाओं में मतभेदों को चिह्नित करने के लिए योगदान कर सकते हैं और यह मन में वहन किया जाना चाहिए अगर प्रजातियों के पार extrapolating परिणाम.
इस प्रणाली से आउटपुट को अधिकतम करने के लिए विचार की जरूरत है कि कदम की भी संख्या में हैं । महत्वपूर्ण चरणों में ऊतक व्यवहार्यता का संरक्षण शामिल है जैसे देखभाल जब ऊतकों को संभालने के लिए विच्छेदन के दौरान किसी भी अनावश्यक क्षति से बचने या जब बढ़ते । एक कुशल आंख गर्भाशय मांसपेशियों के ठीक स्ट्रिप्स टुकड़े करने के लिए आवश्यक है, मांसपेशी फाइबर के उन्मुखीकरण सुनिश्चित करने अनुदैर्ध्य दिशा में है और ऊतक के विमान के बाद, साथ ही निशान ऊतकों, decidua, और छोटे जहाजों से परहेज. अभिविन्यास प्रयोजनों सहायता करने के लिए एक बार नमूना प्रयोगशाला में है, यह एक टैग जोड़ने के लिए संभव है (जैसे छोटे सर्जिकल टांका) की बायोप्सी के एक तरफ करने के लिए संग्रह के समय में decidual किनारे से serosal बढ़त चित्रित.
ऊतकों के रूप में प्रयोग के दौरान एक स्थिर 36-37 डिग्री सेल्सियस पर रखा जाना चाहिए ऊतक समारोह के तापमान में उतार चढ़ाव के अधीन है । इस प्रयोगशाला के भीतर एक मजबूत एयर कंडीशनिंग इकाई के साथ प्राप्त किया जा सकता है । उष्ण PSS के निरंतर छिड़काव तापमान को सुनिश्चित करता है और साथ ही संकुचन से अपशिष्ट उत्पादों के फ्लशिंग को बनाए रखा जाता है । अंग स्नान के भीतर तापमान प्रवाह की दर को बदलने या सीधे पानी स्नान तापमान को एडजस्ट करके बदला जा सकता है । पारंपरिक 5-50 मिलीलीटर स्नान की तुलना में छोटे स्नान के आकार के PSS और रिएजेंट के वॉशआउट के एक अपेक्षाकृत तेजी से कारोबार सुनिश्चित करता है । लघुकृत अंग स्नान के रूप में यहां वर्णित है, यह भी PSS और ब्याज की जरूरत के रिएजेंट की मात्रा कम कर देता है, इस प्रकार लागत को कम करने और कीमती, नव विकसित रसायनों छोड़ । इसके अलावा, छोटे स्नान के आकार के कारण और एक HEPES आधारित बफर का उपयोग कर, इस प्रणाली को ऑक्सीजन की आवश्यकता नहीं है उदा, carbogen के साथ PSS bubbling द्वारा । स्ट्रिप्स के लिए लागू तनाव का मानकीकरण भी महत्वपूर्ण है. इस आकार (5 मिमी x 2 मिमी x 1 मिमी) के स्ट्रिप्स के लिए, यह लगभग 2 mN (बराबर ~ ०.२ g) होना चाहिए । वैकल्पिक तरीकों में एक उच्च पोटेशियम समाधान के आवेदन शामिल करने के लिए अधिक से अधिक संकुचन प्रेरित और इस अधिकतम संकुचन का आधा खींच । यह हालांकि ध्यान दिया जाना चाहिए, कि vivo में लागू तनाव अलग हो सकता है ।
मुख्य चुनौतियों मानव विषयों से ऊतकों को प्राप्त करने में शामिल हैं, लेकिन कर लगाने, मानव ऊतकों स्पष्ट रूप से मानव रोग और दवा खोज में गर्भाशय के संकुचन का अध्ययन करने के लिए सबसे अधिक शारीरिक प्रासंगिक (और पुरस्कृत) मॉडल का प्रतिनिधित्व करते हैं । अलग ऊतक स्ट्रिप्स तथापि, जरूरी नहीं कि vivo में ऊतक के लिए समानता के रूप में वे उदाहरण के लिए छूट रहे हैं, हार्मोनल और तंत्रिका इनपुट के जो, हालांकि संकुचन के लिए आवश्यक नहीं, vivo मेंसंकुचन संग्राहक जाएगा. यह परख हालांकि एक नियंत्रित तरीके से myometrial संकुचन का विश्लेषण करने का अवसर प्रदान करता है, ऐसे प्रभावों से अलग । यह भी इस तरह के संकुचन के हार्मोनल नियंत्रण के रूप में कारकों के प्रभाव के लिए अनुमति देता है (उदा, OT के माध्यम से, वीपी, prostaglandins, आदि) की जांच करने के लिए, myometrial समारोह के विनियमन के लिए सुराग प्रदान । के रूप में ऊतकों को विभिंन महिलाओं से प्राप्त कर रहे हैं, वहां स्वाभाविक रूप से नमूनों के बीच सहज सिकुड़ा प्रोफाइल में कुछ भिंनता है । इसलिए यह अक्सर कुछ datasets५३में भिंनता को कम करने के लिए नमूनों की एक बड़ी संख्या (~ n = 10) पर प्रयोग करने के लिए आवश्यक है । यह सबसे महत्वपूर्ण है जब विभिंन रोगी समूहों के बीच सिकुड़ा गतिविधि की तुलना । गतिविधि को नियंत्रित करने के लिए एगोनिस्ट और विरोधी की प्रतिक्रिया को सामान्य करना (यानी, नियंत्रण गतिविधि या उच्च K+के प्रतिशत के रूप में व्यक्त) इस भिन्नता के कुछ कम कर देता है. इसके अलावा, अंतर पट्टी भिन्नता को कम करने के लिए, डेटा उनकी लंबाई और वजन पोस्ट प्रयोग४१को मापने के द्वारा पट्टी पार अनुभागीय क्षेत्र के लिए सामान्यीकृत किया जा सकता है. यह विशेष रूप से उपयोगी है जब विभिंन रोगी समूहों के बीच संकुचन पैटर्न की तुलना ।
इस तकनीक की सीमाएं भी ताजा ऊतकों जो अस्पताल के कर्मचारियों, विशेष रूप से थिएटर स्टाफ और सहमति प्रक्रिया में शामिल लोगों के साथ अच्छा काम कर रिश्तों की आवश्यकता के लिए उपयोग शामिल हैं । स्थानीय अनुसंधान नैतिकता समिति और संस्थान या अस्पताल की समीक्षा बोर्ड से नैतिक अनुमतियों को भी जगह में होना चाहिए । मानव myometrium का संग्रह सबसे अधिक संभावना सीएस प्रसव के दौरान किया जाता है, जब दाता सर्जरी के दौर से गुजर रहा है । बायोप्सी एक ही गर्भाशय चीरा बच्चे को वितरित करने के लिए बनाई गई साइट से लिया जाता है और इसलिए रोगी किसी भी आगे अतिरिक्त प्रक्रियाओं से गुजरना करने की जरूरत नहीं है । थियेटर स्टाफ और बायोप्सी प्रदर्शन सर्जन के ऊतकों के बाद के उपयोग के बारे में पता किया जा करने की आवश्यकता है और है कि वे ऐसे एक पैथोलॉजी विभाग को भेजने के लिए के रूप में निर्धारण समाधान में रखा जा करने के लिए नहीं कर रहे हैं. लंबी प्रयोगात्मक समय सीमा एक और विचार है । मानव ऊतकों के साथ प्रयोग कई घंटे ले (आमतौर पर > 6 एच) (के रूप में 2 के खिलाफ-3 ज चूहा या माउस गर्भाशय में एक समान प्रयोग के लिए), संकुचन की धीमी आवृत्ति के कारण और 2-3 एच ऊतक के बीच अंतराल समय बढ़ते और स्थापना के सहज संकुचन. हालांकि, जैसा कि हम ने दिखाया है, मानव ऊतक संकुचन मजबूत कर रहे हैं, और जब स्थापित कई घंटे के लिए महत्वपूर्ण थकान के बिना अनुबंध कर सकते हैं४०
यह प्रणाली भी vivo में काम की अन्य चुनौतियों गर्भवती ऊतक पर दवा एजेंट का परीक्षण करने की क्षमता सहित काबू पाने के लिए अनुमति देता है । इस तकनीक को आसानी से माउस सहित अंय प्रजातियों के लिए extrapolated किया जा सकता है जिससे प्रारंभिक परिणाम पूरे पशु अध्ययन में आगे बढ़ने से पहले की पुष्टि की जा सकती है । तापमान में नियंत्रित परिवर्तन, superfusate की संरचना (PSS), और पीएच आसानी से vivo में विभिंन परिदृश्यों की नकल और यौगिक व्यवहार पर इन परिवर्तनों के प्रभाव का विश्लेषण करने के लिए बनाया जा सकता है । myometrial स्ट्रिप्स में isometric तनाव को मापने के बुनियादी सिद्धांतों को भी फ्लोरोसेंट सीए या पीएच के उपयोग द्वारा intracellular कैल्शियम एकाग्रता या पीएच में एक साथ परिवर्तन को मापने के लिए विस्तारित किया जा सकता है (एच+) संकेतक और उपकरणों का पता लगाने के लिए और रर प्रतिदीप्ति५७,५८,५९,६०.
कुल मिलाकर, मानव myometrium का प्रतिनिधित्व करता है एक मजबूत और शारीरिक रूप से प्रासंगिक मॉडल की विशेषता और मांय औषध खोज में उपंयास चिकित्सीय यौगिकों-दोनों शुद्ध यौगिकों और मिश्रण । हम ओटी/वीपी प्रणाली के संबंध में दवा की खोज में इसके उपयोग के उदाहरण प्रदान की है और OTR और V1एकआर विरोधी पर ध्यान केंद्रित करने के लिए कैसे इस मॉडल को परिभाषित लक्ष्य पर यौगिक प्रभावकारिता और शक्ति निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है और ligand selectivity मांय । हालांकि, यह मन में वहन किया जाना चाहिए कि इस तकनीक के हित या myometrial संकुचन (या विश्राम) के लिए अग्रणी मार्ग के किसी भी लक्ष्य का अध्ययन किया जा सकता है, साथ ही साथ नए लक्ष्यों और रास्ते की दवा खोज सहायता के लिए, और myometrial की हमारी समझ अग्रिम फिजियोलॉजी और pathophysiology ।
The authors have nothing to disclose.
इस शोध को यूरोपीय संघ के क्षितिज २०२० अनुसंधान और नवाचार कार्यक्रम (ग्रांट एग्रीमेंट नं ७१४३६६) के तहत प्रोजेक्ट I3243 और यूरोपियन रिसर्च काउंसिल (ईआरसी) के माध्यम से ऑस्ट्रिया के विज्ञान कोष (FWF) द्वारा समर्थन दिया गया है । CWG एक चाप डिस्कवरी अर्ली कैरियर शोधकर्ता (DECRA) फैलोशिप (DE150100784) द्वारा एक ऑस्ट्रेलियाई अनुसंधान परिषद (एआरसी) भविष्य फैलोशिप (FT140100730) और मिमी द्वारा समर्थित किया गया है । एसए एक हैरिस-भलाई अपरिपक्व जंम अनुसंधान केंद्र महिलाओं, ब्रिटेन की भलाई के द्वारा प्रशासित अनुदान द्वारा समर्थित है ।
Origin software | Origin Lab | 2015 version | |
Labscribe Software | WPI | Formally Datatrax | |
GraphPad Prism graphical software | GraphPad Prism | PRISM 5 | |
LabTrax 4-Channel Data Acquisition | WPI | LAB-TRAX-4 | |
Transbridge Transducer Amplifier | WPI | SYS-TBM4M | |
Force-displacement Transducer | WPI | FORT10g | 10 g |
BNC to BNC Cable | WPI | 500184 | |
Magnetic Clamp stand | WPI | M10 | |
Micrometer | Reconditioned from microscopes | ||
Peristaltic pump | Gilson | MINIPULS3 | R4 Standard pump head |
Suction pumps | Various | AP2 air pump | |
Circulating Water bath | Grant Instruments | TC120 | 5L |
Perspex Tissue Bath | Custom made | ||
Water reservoir container | the reallyusefulbox | 7L | |
Tissue Hooks (fixed) | Hand made in house | ||
Peristaltic tubing | Gilson | F117948 | PVC 2.79 mm internal diameter |
Tygon Tubing | Fisher Scientific | various diameters | R-3603 |
Aluminium clips | Laser services, USA | custom made | |
Stereo Zoom binocular microscope | WPI | PZMIV | |
Microscope Fiber-optic Light Source | WPI | PHOTONIC PL 2000 | |
Dissecting Dishes | Handmade with Sylgard | ||
Sylgard Silicone Elastomer kit | Dow Corning | Sylgard 170 Kit | |
Vannas Scissors | WPI | 50086 | 8.5 cm, straight edge |
Iris Forceps | WPI | 15914 | 10 cm, straight edge (serrated) |
Dissecting scissors | WPI | 14393 | 10 cm, straight |
Dissecting pins | SIGMA | Z192341 | B-D precision guide syringe needle 30G |
HBSS | SIGMA | H9269 | |
Physiological Salt Solution | SIGMA | various | PSS |
Oxytocin acetate salt | SIGMA | O6379 | |
[Arg8]-vasopressin acetate salt | SIGMA | V9879 |