Transurethral instillasjon prosedyre i voksne mannlige musen

Summary

Transurethral instillasjon er en utfordrende prosedyre og har ikke blitt godt beskrevet i litteraturen. Målet med dette manuskriptet er å beskrive en teknikk for transurethral innsetting av et kateter for intravesical levering av væsker med aktive stoffer i urinblæren og/eller prostata hos voksne mannlige mus.

Abstract

Transurethral instillasjon kan brukes til å levere ulike løsninger med aktive ingredienser (f.eks legemidler, kjemikalier, bakterier og virus) lokalt i urinblæren indusere dyremodeller blæren patologi eller vurdere den effektiviteten av intravesical behandlinger. Mest gnager modeller av lavere urin skrift (LUT) patologi er indusert i kvinnelige mus grunn å intravesical instillasjon av stoffer via den kvinnelige urinrøret. Men på grunn av anatomiske forskjellene mellom den kvinnelige og mannlige LUT, transurethral instillasjon i en mannlig mus har vært ansett en svært utfordrende prosedyre, og det har ikke vært beskrevet tidligere. I dette manuskriptet gir vi en detaljert beskrivelse av hvordan å forberede polyetylen rør for påfølgende innsetting urinrøret mannlige museklikk. Dessuten, diskuterer vi de ideelle typene PE rør brukes avhengig av ønsket område av vaksinering. I tillegg beskriver vi punkt for punkt hvordan å forberede et dyr for en vellykket transurethral instillasjon unngå skader til urethra og sikre løsningen til ønsket plassering. Prosedyren er startet av trekke prepuce og glans å utsette åpningen av urinrøret kjøtt. Deretter glans er forstått av sløv ikke-knusing tang å stabilisere penis og PE slangen. PE slangen settes først inn i urinrøret kjøtt parallelt med dyr kroppen og dens vinkel justeres ved å vippe kateter for å manøvrere det å følge ryggsøylens naturlige urinrøret. Denne teknikken kan brukes til indusert murine modeller av blæren patologi og/eller evaluere effektiviteten av intravesical behandlinger i mannlige mus.

Introduction

Transurethral instillasjon tilnærmingen er brukt i tidligere studier som én av metodene til å opprette gnager modeller av blæren, patologi,^1,,^2,,^3,,⁴ og kan brukes til å evaluere den effektiviteten av lokalt levert i mus. Selv om dyremodeller ikke fullt recapitulate menneskelige patologi, gir identifikasjon av de underliggende mekanismene i dyrestudier en bedre forståelse av de menneskelige LUT lidelser som interstitiell cystitt/blære smertesyndrom, neurogenic cystitis, autoimmune cystitis og prostatic betennelse⁵.

Transurethral instillasjon prosedyren utføres på en voksen mann mus er mer teknisk utfordrende enn intravesical instillasjon i en voksen kvinnelig musen⁶. Naturlig buet anatomi av mannlige urinrøret med liten diameter gjør det teknisk vanskelig å oppnå transurethral innsetting av et kateter. Derfor detaljerte instruksjoner for transurethral induksjon musen urin spor infeksjon⁶ og LUT betennelse^{7,8,9,10,11 , 12 , 13 , 14 , 15} via blæren satt inn kateter ble tidligere skissert for kvinnelige mus bare. Dette manuskriptet har som mål å gi en detaljert beskrivelse av teknikken for transurethral instillasjon stoffer i mannlige mus inkludert videoklipp, bilder og illustrasjoner. Transurethral instillasjon prosedyrer i en voksen mann mus kan utføres med variabel inoculates lik som tidligere beskrevet i kvinnelige musen⁷ og slått sammen med flere teknikker som eletromyografi opptak av visceromotor svar (VMR)¹⁶.

Protocol

alle prosedyrer med dyr, inkludert metoden og varigheten av anestesi, samt postoperativ pleie, ble diskutert med en veterinær og godkjent av dyr institusjon og bruk Committee (IACUC) på den tilknyttede institusjon. I dette manuskriptet ble alle prosedyrer utført med 8 til 15-uke-gamle C57BL/6 mannlige mus og protokollen følger retningslinjene for dyr omsorg som er godkjent av IACUC ved University of Colorado. 1. forberedelse av rør Merk: for å innpode i inocu…

Representative Results

Transurethral instillasjon blått fargestoff via PE 50 slangen førte instillasjon fargestoff i urinblæren (figur 4A), og via PE 10 rør i Fargelegging av SV og AP (figur 4B), henholdsvis. For å vurdere om de utførte transurethral instillasjon forårsaker en umiddelbar refluks av inoculum til nyrene eller ikke, ble nyrene og ureter observert etterfulgt av instillasjon av 100 µL av blått fargestoff og fluorescerende farge (<s…

Discussion

Dette manuskriptet beskriver i detalj en metode for transurethral instillasjon voksne mannlige musen. Differensial primære seeding området kan nås ved hjelp av PE rør med forskjellige diametere. PE-50 anbefales for vellykket nå urinblæren lumen, mens en større diameter PE-10 brukes til AP og SV (figur 3A-B). I tillegg til valget av størrelsen på PE rør og målet organ for vaksinering spille andre faktorer, som volumet av innpodet inoculum, også en rolle i slutten …

Materials

BD INTRAMEDIC Polyethylene Tubing/ PE 10	BD Medical	63019-004
BD INTRAMEDIC Polyethylene Tubing/ PE 50	BD Medical	63019-048
BD Insyte-N Autoguard/ Angiocath	BD Medical	311411
Ethanol (EtOH)	Fisher Scientific	BP2818500
BD Needle Only 22 Gauge (G) 1 inch	Becton Dickson	205155
BD Needle Only 27 Gauge (G) 1/2 inch	Becton Dickson	305129
Luer stub, 22 G X 0.5 in / Blunt Needle	Instech	LS22
Luer stub, 27 G X 0.5 in / Blunt Needle	Instech	LS27
6" Long x 2" Wide x 1" Thick, Aluminum Oxide Sharpening Stone / Oil Stone	Norton	40204034
Surgical Lubricant Sterile Bacteriostatic Folilpac	Surgilube	281020543
Isoflurane	Fluriso	13985-528-60
SomnoSuite Low-Flow Anesthesia System	Kent Scientific	SS-01
Dissecting Forceps, Curved	vwr	82027-392
BD 1 ml Syringe	BD Medical	309626
India Ink Solution., 0.2% in PBS buffer	Alfa Aesar	J61007
8~12 weeks old male C57B/6 Mice	Jackson Lab	#000664