Transuretral Instillation förfarande i vuxna manliga mus

Summary

Transuretral instillation är en utmanande förfarande och inte är väl beskriven i litteraturen. Syftet med detta manuskript är att beskriva en teknik för transuretral införande av en kateter för intravesical leverans av vätskor med aktiva substanser i den urinblåsa eller prostata hos vuxna manliga möss.

Abstract

Transuretral instillation kan användas för att leverera olika lösningar med aktiva ingredienser (t.ex. läkemedel, kemikalier, bakterier och virus) lokalt i urinblåsan att inducera djurmodeller av urinblåsan patologier eller utvärdera den effektiviteten av intravesical behandlingar. Mest gnagare modeller av nedre urinvägarna (LUT) patologier induceras hos honmöss på grund att underlätta intravesical instillation av ämnen via kvinnliga urinröret. Dock beror på anatomiska skillnader mellan den kvinnliga och manliga LUT, transuretral instillation i en manlig mus har ansetts vara en mycket krävande procedur, och det har inte tidigare beskrivits. I detta manuskript ger vi en detaljerad beskrivning av hur du förbereder polyeten (PE) slangar för efterföljande insättning i urinröret av en manlig mus. Dessutom diskuterar vi idealtyper av PE slangen ska användas beroende på den önskade platsen för inympning. Dessutom beskriver vi punkt för punkt hur man förbereder ett djur för en framgångsrik transuretral instillation att undvika skador på urinröret och säkerställa leverans av lösningen till önskad plats. Förfarandet är startat av Upprullningskraften förhuden och ollonet att exponera öppnandet av den urinrörets meatus. Nästa, ollonet är förstått av trubbiga icke-krossning pincett att stabilisera penis och PE slangen. PE slangen sätts först in i urinrörets meatus parallellt med animaliskt kroppen, då dess vinkel justeras genom att luta katetern för att manövrera det för att följa den naturliga krökningen av urinröret. Denna teknik kan användas till inducerad murina modeller av urinblåsan patologier och utvärdera effektiviteten av intravesical behandlingar hos hanmöss.

Introduction

Metoden med transuretral instillation har använts i tidigare studier som en av metoder för att skapa gnagare modeller av urinblåsan patologier^1,2,3,4 och kan användas för att utvärdera den effektiviteten av lokalt levererade möss. Även om djurmodeller inte fullt recapitulate mänskliga patologier, ger identifiering av de underliggande mekanismerna i djurstudier en bättre förståelse av de mänskliga LUT störningarna såsom interstitiell cystit/blåsa smärtsyndrom, neurogen cystit, autoimmuna cystit och prostata inflammation⁵.

Transuretral instillation förfarandet utförs på en vuxen manlig musen är mer tekniskt krävande än intravesical instillation i en vuxen kvinnlig mus⁶. Manliga urinröret tillsammans med dess små diameter naturligt böjda anatomi gör det tekniskt svårt att åstadkomma transuretral införandet av en kateter. Därför utförliga anvisningar för transuretral induktion av mus urinvägarna infektion⁶ och LUT inflammation^{7,8,9,10,11 , 12 , 13 , 14 , 15} via urinblåsan-insatt kateter skisserades tidigare för honmöss endast. Detta manuskript syftar till att ge en stegvis beskrivning av tekniken för transuretral instillation av ämnen hos hanmöss inklusive videoklipp, bilder och illustrationer. Transuretral instillation i en vuxen manlig mus kan utföras med variabel infektionsstadierna liknande den som tidigare beskrivits i kvinnliga mus⁷ och samman med ytterligare tekniker såsom Elektromyogram inspelningar av visceromotor svar (VMR)¹⁶.

Protocol

alla förfaranden med djur, inklusive metod och varaktigheten av anestesi, liksom postoperativ vård, diskuterades med en veterinär och godkänts av institutionell djur vård och användning kommittén (IACUC) på den anknuten institution. I detta manuskript, utfördes alla förfaranden med 8 till 15 veckor gamla C57BL/6 hanmöss och protokollet följer djurvård riktlinjerna godkändes av IACUC vid University of Colorado. 1. beredning av slangar Obs: för att ing…

Representative Results

Transuretral instillation av blått färgämne via PE 50 slangar resulterade i instillation av färgämnet i urinblåsan (figur 4A) och via PE 10 slangar i färgläggning av SV och AP (figur 4B), respektive. För att utvärdera om den utförda transuretral instillationen orsakar en omedelbar reflux av inokulatet till njurarna eller inte, observerades njure och urinledare följt av instillation av 100 µL av blått färgämne och …

Discussion

Detta manuskript beskriver i detalj en metod för transuretral instillation i vuxna manliga mus. Differentiell primära sådd området kan nås med hjälp av PE rör av olika diametrar. PE-50 rekommenderas för att framgångsrikt nå urinblåsan lumen, medan en större diameter PE-10 används för att nå AP och SV (figur 3A-B). Förutom valet av storlek av PE rör och målorgan för inympning spela andra faktorer, såsom volym av ingjuten inokulatet, också en roll i slutet…

Materials

BD INTRAMEDIC Polyethylene Tubing/ PE 10	BD Medical	63019-004
BD INTRAMEDIC Polyethylene Tubing/ PE 50	BD Medical	63019-048
BD Insyte-N Autoguard/ Angiocath	BD Medical	311411
Ethanol (EtOH)	Fisher Scientific	BP2818500
BD Needle Only 22 Gauge (G) 1 inch	Becton Dickson	205155
BD Needle Only 27 Gauge (G) 1/2 inch	Becton Dickson	305129
Luer stub, 22 G X 0.5 in / Blunt Needle	Instech	LS22
Luer stub, 27 G X 0.5 in / Blunt Needle	Instech	LS27
6" Long x 2" Wide x 1" Thick, Aluminum Oxide Sharpening Stone / Oil Stone	Norton	40204034
Surgical Lubricant Sterile Bacteriostatic Folilpac	Surgilube	281020543
Isoflurane	Fluriso	13985-528-60
SomnoSuite Low-Flow Anesthesia System	Kent Scientific	SS-01
Dissecting Forceps, Curved	vwr	82027-392
BD 1 ml Syringe	BD Medical	309626
India Ink Solution., 0.2% in PBS buffer	Alfa Aesar	J61007
8~12 weeks old male C57B/6 Mice	Jackson Lab	#000664