Summary
Vi beskriver her stenose i de underlegne vena cava som murine modell av dyp venetrombose. Denne modellen viser blod flyte begrensning, en av de største utløserne av venous tromboser hos mennesker.
Abstract
Dyp vene-trombose (DVT) og dens ødeleggende komplikasjoner, lunge embolism, er et alvorlig helseproblem med høy dødelighet. Mekanismer for dannelse i årer forblir uklar. Mangel på mobilitet (f.eksetter kirurgi eller langdistanseflygninger) er en av de viktigste faktorene som fører til DVT. Patofysiologiske konsekvensen av mangel på mobilitet er blodet flyt stagnasjon i venøs ventiler. Her, er en modell beskrevet som etterligner slik flyt forstyrrelser som en blodpropp-kjøring faktor. I denne modellen opprettes delvis flyt begrensning (stenose) i den underlegne vena cava (IVC). Nedleggelsen av ca 90% av IVC lumen for 48t resulterer i utviklingen av thrombi strukturelt ligner de i mennesker. Likhetene er: i) de fleste av blodpropp volumet er rød, dvs. består av røde blodlegemer og fibrin, ii) tilstedeværelsen av en hvit del (linjer av Zahn), iii) ikke-blottet endotelial monolayer, iv) opphøyet plasma D-Dimer nivåer og v) muligheten til å forhindre blodpropp av lav molekylvekt heparin. Begrensninger omfatter variabel størrelse thrombi og faktum at en viss prosentandel av vill-type mus (0 - 35%) kan ikke produsere en blodpropp. Visuell observasjon og måling, kan thrombi visualiseres ikke-invasive teknologier, for eksempel ultrasonography, som tillater overvåking dynamikken i blodpropp utvikling. På kortere tid poeng (1-6 h), intravital mikroskopi kan brukes til å direkte observere hendelser (f.eks, rekruttering av celler til fartøyet veggen) foregående dannelse. Bruk av denne metoden av flere team verden har gjort det mulig å avdekke grunnleggende mekanismer av DVT og identifisere potensielle mål som kan være gunstig for det forebyggende arbeidet.
Introduction
Dyp vene-trombose (DVT) er utvikling av thrombi i dype vener, vanligvis (men ikke bare) i bena. I konjunksjoner med lunge embolism (PE; utpekt sammen som venøse Thromboembolism, VTE) det utvikler i ca 900 000 amerikanere årlig og representerer en alvorlige helsemessige problemet og økonomisk problem1,2. PE, en komplikasjon av DVT, oppstår når en blodpropp blir løsrevet fra sin opprinnelige plassering og når lungene, som kan forårsake luftveissykdommer insuffisiens og død. Dødstallene fra VTE overskrider dødeligheten av AIDS, bryst kreft og trafikk ulykker, kombinert3.
Hovedfaktoren forårsaker DVT dessuten er kjent grunner, for eksempel kreft eller traumer, mangelen på mobilitet 4,5. Dette kan skyldes kirurgi (spesielt Ortopedisk), lammelser, langdistanseflygninger eller andre grunner. Blodstrøm i venene avhenger muskel pumpen og derfor lem immobilisering resultater i stagnerende blod flyte i venøs ventiler, som fører til blodpropp. Formålet med metoden beskrevet heri skal recapitulate slike blod flyte forvrengning6,7. Delvis flyt begrensning i dårligere vena cava (IVC) etterligner tilstander opprettet i menneskelig venøs ventiler og resultater i dannelsen av en blodpropp ligner i struktur til menneskelig thrombi6. Store deler av en blodpropp er rød og består av røde blodlegemer, fibrin og innlemmelse av blodplater. Thrombi har en liten "hvit del" beriket i blodplater (figur 1), som ligner "linjer av Zahn" beskrevet i menneskelig venøse thrombi. Begge deler av embolus inneholder også nøytrofile8, som er blant de første cellene å bli rekruttert på stedet av fremtidige blodpropp6,9. Nøytrofile i den røde delen utvise nøytrofile ekstracellulære feller (nett), mens nøytrofile i den hvite delen synes å være blottet for garn8. Tilsvarende til menneskelig DVT, er blodpropp i mus ledsaget av opphøyet plasma D-dimer nivåer (figur 2). Lav molekylvekt heparin (enoxaparin), brukes for DVT profylakse hos pasienter, forhindrer også blodpropp i mus. En viktig fordel med denne metoden er fravær av endotelial denudation9, som er karakteristisk for menneskelig DVT10. Denne funksjonen gjør IVC stenose en mer klinisk relevante modell av DVT enn for eksempel induksjon av tromboser av ferric chloride, som induserer endotelial denudation og der thrombi består hovedsakelig av blodplater11, 12,13. En modell av komplett stasis i IVCEN foretrekkes av flere lag14,15,16. I motsetning til stenose, der gjenværende flyt opprettholdes i fartøyet, anvendelse av stasis stopper helt flyten, og dermed begrenser tilgjengelighet av systemisk administrert stoffer til blodpropp området. Også det synes at mekanismene bak trombose indusert av stenose og stasis er forskjellige: stenose resulterer i utviklingen av lokal betennelse (aktivisering endotelet, utgivelsen av Weibel-Palade kroppen innhold, rekruttering av immunceller og blodplater til fartøyet veggen) forårsaker "immunothrombosis"6,9,17, mens stasis synes å indusere heller trombose basert, spesielt på vev faktor og andre koagulering og fibrinolyse-relaterte mekanismer18,19,20. Dermed reflektere stenose og stasis modellene litt forskjellige aspekter av venøs blodpropp utvikling, selv om deres mekanismer kan sikkert overlappe. Elektrolytisk IVC modell (EIM) DVT21,22 induserer en blodpropp bare delvis skjule fartøyet veggen. Derfor er det praktisk for testing av systemisk administrasjon av ulike på blodpropp vekst. Denne modellen, men antar avbrudd IVC veggen integritet (innsetting av en nål) og induksjon av tromboser av elektrisk strøm gjør patofysiologiske relevansen av denne mekanismen minst diskutabel.
Protocol
Alle dyr prosedyrer ble godkjent av dyr velferd etiske gjennomgang kropp og hjemmekontor UK (Storbritannia, prosjektet lisens 40/3745). Mus på C57BL/6 bakgrunn, 8-12 uke gamle, 19-25 g kroppsvekt, av begge kjønn brukes.
1. dyr anestesi
- Plasser musen i en induksjon kammer og indusere anestesi av en blanding av 5% isoflurane med 100% oksygen. En strømningshastighet på 0,5 L/min. Vent til musen slutter helt å flytte og dens bruksfrekvens puste blir sjelden.
- Fjern musen fra kammeret og barbere magen med en elektrisk avklipt. Fjerne hår fra magen så grundig som mulig for å unngå forurensning i bukhulen.
- Plasser musen i supine posisjon og plassere musen er nesen i en kjegle knyttet til anestesi systemet. Redusere prosent av isoflurane 2-3% (nøyaktig prosent avvike litt fra dyr til dyr). Kontroller at dyret sover med sine respirasjonsfrekvens er lavere enn vanlig, men unngå gisper. Hvis gisper oppstår, redusere prosent av isoflurane med 0,5%.
- Sjekk det pedal refleks for å bekrefte riktig anesthetization og starte kirurgi bare hvis den er negativ. Bruke vet salve på øynene for å hindre tørrhet.
- Bruke en anti-bakteriedrepende løsning (1% Hibitane) på musen er magen og tørk området bruker en steril bomull bud på en måte unntatt potensielle re forurensning av kirurgiske området (f.eks, innsiden til ut i en sirkulær måte). Gjenta 3 ganger.
2. anvendelsen av IVC stenose og mus utvinning
Merk: Alle instrumenter også komme i kontakt med kirurgi området må sterilt som materiale (bomull knopper, gasbind, saltvann etc.). Operatoren må skrubbe før kirurgi og bærer sterilt hansker og kjole under prosedyren. Mikroskopet håndtak skal være innpakket i et sterilt folie.
- Gi mus en anti-smertebehandling før kirurgi og i hele eksperimentelle perioden. Bruk for eksempel buprenorfin 0,1 mg/kg subcutaneously 30 min før kirurgi og deretter hver 12 timer til dyret er euthanized. Som blodpropp i denne metoden utvikler tilsvarende til sterilt betennelse, kan du unngå å bruke anti-inflammatorisk legemidler som en premedication.
- Dekker musen med en bakteriefri drapere og lage et hull i det drapere å avsløre stedet av kirurgi. Bruke saks, lage et snitt langs abdominal midtlinjen, 1,5 cm ned fra sternum. Bruke bomull knopper exteriorize tarmene til venstre side av musen og dekke dem med sterilt gasbind dynket i varm (37 ° C) saline å unngå uttørking.
- Identifisere IVCEN og dens sidegreiner (det kan være 0, 1 eller 2 av dem) i caudal retning fra området blanding av IVC med venstre nyre venen. Ligate alle synlige siden grener med 7-0 inert Prolene suturer som nær IVC som mulig.
- Prøv ikke å holde sidegreiner med tang direkte, men heller trekke dem opp holde i fett vevet rundt dem med tang i den ene hånden og gjøre en tunnel under grenen med tang i den andre hånden. Ikke Lukk tilbake grener.
- Holder omkringliggende vev med tang, trekke den IVC opp og venstre produsere spenning i små området mellom IVCEN og den aorta nøyaktig på vinkelen mellom IVCEN og venstre nyre venen. Ta hensyn til at det er nesten umulig å skille aorta fra IVC med 2-3 mm under (i caudal retning).
- Bruke avvikende bevegelser med tang tips på din høyre hånd gjør et hull mellom aorta og IVC. Husk at flere bevegelser gjort, jo høyere sjanse for skade fartøyet. Ideelt sett, prøv å minimere antall bevegelser til 3-5.
- Forberede et stykke 7-0 inert Prolene suture av ca 2 cm lang. Legge den i musen er bukhulen operatørens venstre å IVC.
- Trekk IVCEN opp og igjen igjen. Sette inn høyre tang tips i hullet mellom aorta og IVCEN slik at tipsene vises på den andre siden av IVC. Ta Sutur og trekke det tilbake gjennom hullet (Figur 3A).
- Lage en provisorisk knute med suture, men ikke lukk det. Plasser 30G p ("en avstand») bøyd som en krok i knuten og nå lukke det (Figur 3B).
- Fjern mellomlegget (Figur 3C).
- Returnere tarmen tilbake til bukhulen med en bomull bud og distribuere dem like i den.
- Lukk peritoneum med 6-0 vicryl Sutur bruker kontinuerlig looper. Lukk de første og siste ledd som en knute.
- Nær huden ved hjelp av metall stifter.
- Injisere musen med 0,5 mL av varm (37 ° C) glukose saline subcutaneously å gjenopprette den likvide beholdningen av organismen.
- Plasser musen i en individuell bur i en varm (25 ° C) kammer eller og sette mat og gel vann inne i buret. Observere før musen er fullstendig gjenopprettet (vanligvis rundt 1 h).
Representative Results
Her, er en modell av DVT indusert av flyt forvrengning i IVC beskrevet. Induksjon av stenose i IVCEN starter forvrengning og stagnasjon av blodstrøm og etter en stund (i dette tilfellet 48 h) resulterer i utviklingen av en blodpropp, strukturelt ligner menneskelige DVT thrombi (figur 1A). Tilstedeværelsen av en blodpropp i IVC er lett detectable visuelt (figur 1B). En viktig likheten mellom modellen og menneskelige DVT er opphøyet plasma D-dimer nivåer (figur 2). D-dimer er et produkt av fibrin fornedrelse og sin tilstedeværelse i blodet foreslår at en aktiv trombotiske prosess som skjer.
Modellen vises trinnvise i Figur 3Vekselstrøm. IVC er nøye utsatt, hull mellom IVCEN og aorta er laget og en Sutur (Prolene 7-0) trekkes gjennom hullet under IVC. Deretter er IVC samskrevet av suture over en avstand (30G p, Figur 3D), etter som avstandsstykket er fjernet. Denne prosedyren kan ca 90% nedleggelsen av IVC lumen forlater de resterende 10% patent. Dette sikrer blodet flyt stagnasjon til slutt fører til blodpropp.
Figur 4 viser store ulempen av modellen, variabel blodpropp størrelse. Alle disse thrombi ble oppnådd i samme eksperimentet utføres på wild type mannlige mus samme opprinnelse, alder og lignende kroppsvekt. Selv om alle mus produsert thrombi (blodpropp utbredelsen av 100%), varierer størrelsen tydelig i et bredt spekter.
Figur 1: Representant blodpropp etter 48t begrensning/stenose. (A) en typisk blodpropp etter 48 h IVC stenose. Merk rød (røde blodlegemer-beriket) og hvite (blodplater-beriket) deler. (B) IVC med (venstre) eller uten (høyre) en blodpropp. Skalere barer = 2 mm. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2 : Opphøyet plasma D-dimer nivåer etter IVC stenose søknad. Mus ble utsatt for IVC stenose. Blodet ble tatt på de angitte tidspunkt, stabilisert 1:9 med 3,8% natrium citrat, plasma ble utarbeidet av sentrifugering (2300 x g, 5 min) og D-dimer nivåer ble bestemt av en ELISA kit i henhold til produsentens instruksjoner. Sirkler utpeke humbug-opererte mus, krysser angi IVC stenose. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3: Flyte begrensning/stenose i dårligere Vena Cava (IVC) modell av DVT i mus. Etapper av modellen presenteres. (A) et hull mellom IVCEN og aorta er laget og en Sutur dras gjennom det rundt IVC. (B) en knute er stengt over en avstand (30 G p). (C) avstandsstykket er fjernet: den siste visningen som kirurgen ser før du lukker musen. Gul prikkelinje demarcates IVC. LRV står for venstre nyre blodåre. Skalere barer = 0.2 mm. (D) avstand (30 G p). Skalere barer = 2 mm. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4 . Variasjon av blodpropp størrelse.
Mus ble utsatt for 48t IVC stenose. Presenteres er thrombi oppnådd i samme eksperiment. Skala barer 2 mm. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Discussion
Her presenteres protokollen IVC stenose, som etterligner blodet flyt forvrengning, en stor utløsende faktor for DVT. Stenose til IVCEN induserer utviklingen av thrombi i 65-100% av C57BL/6 mus innen 48 timer og 25-50% av mus innen 2-6 h6,8,23 (Brill A, upublisert data, 2016). En stor begrensning av metoden er variasjon i blodpropp størrelse24 (Figur 4), som er observert etter både kortsiktige (6 h) og langsiktig (48 h) IVC stenose. Årsakene til slike variasjoner (gitt at samme betingelser, for eksempel mellomlegget, anestesi etc., brukes) forblir obskure, men man kan spekulere at anatomiske variasjoner mellom mus (f.eks bredden på IVC, antall og plassering av både side- og rygg grener) ligger dette fenomenet. Variasjon i blodpropp størrelse gjør trombose prevalens (prosent av mus med en blodpropp) viktigste utfallet. Blodpropp prevalens kan sammenlignes med beredskapsplaner bord og den Fisher eksakt test. Ett av forsøkene var et unntak når redusert blodpropp størrelse med samme trombose utbredelsen etter injeksjon av podoplanin-hemmende antistoffer ble observert 7.
Denne metoden er spesielt nyttig når venetrombose innvielse er studert. Det tillater undersøker tidlig hendelser i fartøyet veggen, for eksempel rekruttering av celler, til slutt fører til blodpropp. Pro - eller anti - thrombotic effekter av narkotika kan evalueres ved hjelp av denne modellen trombose utbredelse som en primær avlesning. Stenose 48 h gjelder å avsløre en anti-trombotiske fenotype, mens 6t stenose kan brukes hvis en prothrombotic fenotypen forventes. Histologiske analyse av blodpropp og IVC ringmuren kan også utføres.
Spørsmålet om siden grener skal samskrevet eller venstre patent forblir åpen. En gruppe har vist at ligation av sidegreiner øker ikke blodpropp størrelsen og plasseringen av en side gren nærmere enn 1,5 mm til IVC ligation området dramatisk Hemmer blodpropp utvikling25. Nedleggelsen av sidegreiner kan indusere endothelial skade i dem og også øke kirurgi26. I våre hender reduserer mangel på siden gren nedleggelse betydelig trombose prevalens (ned 10-30% etter 48t stenose; Brill, upublisert) og derfor vi ligate alle synlige siden grener.
Littermate kontroller bør ideelt sett brukes som mus, selv på samme bakgrunnen, men fra ulike kilder, kan ha litt annerledes trombose utbredelse. Hvis effekten av DVT seg på parametere (for eksempel biokjemiske) er undersøkt, bør humbug-opererte dyr brukes. Humbug-opererte mus gjennomgå samme fremgangsmåte, men ligatur rundt IVCEN lukkes løst og igjen der uten å produsere stenose.
Den vanligste feilen (et avgjørende skritt) i denne protokollen er et forsøk på å skille aorta og IVC ikke nettopp på vinkelen mellom fartøyene men litt lavere, som vanligvis resulterer i blødninger. Når en massiv blødning oppstår, god utvinning av musen blir usannsynlig og det anbefales å stoppe eksperimentet og euthanize dyret. Normalt mus gjenopprette godt, flytte innenfor byrået og mister ikke betydelig vekt. Vi anbefaler at du bruker mus over 20 g for både menn og kvinner og holde dyr (spesielt hanndyr) i individuelle bur etter operasjonen til slutten av å unngå kamper og skade. Det har blitt rapportert i en annen (elektrolytisk) modell av DVT at mannlige mus produsere større thrombi enn kvinner27. Analyse av våre data avslørt ikke betydelig forskjell i utbredelsen av tromboser mellom mannlige og kvinnelige mus (Brill, upublisert). Derfor er forskere oppfordres til å utføre eksperimenter med IVC stenose modellen på mus av begge kjønn.
Rakne suturer og/eller stifter kan ikke utelukkes spesielt i lang eksperimenter (uka og lengre). Dermed mus bør kontrolleres minst to ganger om dagen for Sutur integritet og en spesiell oppmerksomhet bør gis til visningen av blod spor på buret bedding.
Det bør bemerkes at som alle andre dyr modell, stenose til IVCEN har sine begrensninger når det gjelder oversettelse til mennesker. Murine IVCer har for eksempel ikke ventiler, mens menneskelige DVT utvikler inne venøs ventiler. Mennesker har også loddrett spinal retning med muskel pumpen er en viktig mekanisme akselererende blodstrøm i venene. Mus har derimot vannrett spinal orientering med ingen rolle av muskel pumpen støtte blodet tilbake til hjertet. Disse begrensningene bør vurderes når oversette musen data til menneskelig sykdom.
Disclosures
Forfatterne ikke avsløre.
Acknowledgments
Dette arbeidet ble støttet av British Heart Foundation (PG/13/60/30406) og University of Birmingham.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| C57BL/6 mice | Charles River | 8 - 10 weeks old, bothe genders | |
| Scissors | WPI | 15922 | |
| Scissors | WPI | 14003 | |
| Dumont 5/45 forceps | FST | 11251-35 | |
| 7-0 Prolene suture | Ethicon | W8725 | |
| 6-0 Vicryl suture | Ethicon | W9981 | |
| Cotton buds | Spar | ||
| Millswabs sterile | Millpledge veterinary | 611950 | |
| Drapes | Kruuse | 141765 | |
| Glucose Saline-Aqupharm3 | Animal Care | XVD589 | |
| Clear H20 HydroGel 98% sterile water | Clearh2o | ||
| Buprenorphine | National Veterinary Supplies | ||
| Isoflurane vaporizer | General Anaesthetic Services | ||
| IsoFlo 100% W/W inhalation vapour, liquid | National Veterinary Supplies | ||
| Sterilizer Steri350 | Inotech | ||
| Microscope Olympus SZX10 | Olympus |
References
- Heit, J. A. The epidemiology of venous thromboembolism in the community. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28 (3), 370-372 (2008).
- Huang, W., Goldberg, R. J., Anderson, F. A., Kiefe, C. I., Spencer, F. A. Secular trends in occurrence of acute venous thromboembolism: the Worcester VTE study (1985-2009). Am J Med. 127 (9), 829-839 (2014).
- House of Commons Health Care Committee. The Prevention of Venous Thromboembolism in Hospitalised patients. The House of Commons. , (2005).
- Kuipers, S., et al. Travel and venous thrombosis: a systematic review. J Intern Med. 262 (6), 615-634 (2007).
- Lopez, J. A., Chen, J.
- Brill, A., et al. von Willebrand factor-mediated platelet adhesion is critical for deep vein thrombosis in mouse models. Blood. 117 (4), 1400-1407 (2011).
- Payne, H., Ponomaryov, T., Watson, S. P., Brill, A. Mice with a deficiency in CLEC-2 are protected against deep vein thrombosis. Blood. 129 (14), 2013-2020 (2017).
- Brill, A., et al. Neutrophil extracellular traps promote deep vein thrombosis in mice. J Thromb Haemost. 10 (1), 136-144 (2012).
- von Bruhl, M. L., et al. Monocytes, neutrophils, and platelets cooperate to initiate and propagate venous thrombosis in mice in vivo. J Exp Med. 209 (4), 819-835 (2012).
- Sevitt, S. The structure and growth of valve-pocket thrombi in femoral veins. J Clin Pathol. 27 (7), 517-528 (1974).
- Witsch, T., et al. A novel hollow and perforated flexible wire allows the safe and effective local application of thrombolytic therapy in a mouse model of deep vein thrombosis. J Thromb Thrombolysis. 37 (4), 450-454 (2014).
- Shaya, S. A., et al. Comparison of the effect of dabigatran and dalteparin on thrombus stability in a murine model of venous thromboembolism. J Thromb Haemost. 14 (1), 143-152 (2016).
- Ni, H., et al. Persistence of platelet thrombus formation in arterioles of mice lacking both von Willebrand factor and fibrinogen. J Clin Invest. 106 (3), 385-392 (2000).
- Wrobleski, S. K., Farris, D. M., Diaz, J. A., Myers, D. D., Wakefield, T. W. Mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis. J Vis Exp. (52), (2011).
- Diaz, J. A., Farris, D. M., Wrobleski, S. K., Myers, D. D., Wakefield, T. W. Inferior vena cava branch variations in C57BL/6 mice have an impact on thrombus size in an IVC ligation (stasis) model. J Thromb Haemost. 13 (4), 660-664 (2015).
- Siefert, S. A., et al. Enhanced venous thrombus resolution in plasminogen activator inhibitor type-2 deficient mice. J Thromb Haemost. 12 (10), 1706-1716 (2014).
- Schulz, C., Engelmann, B., Massberg, S. Crossroads of coagulation and innate immunity: the case of deep vein thrombosis. J Thromb Haemost. 11, Suppl 1 233-241 (2013).
- Day, S. M., et al. Macrovascular thrombosis is driven by tissue factor derived primarily from the blood vessel wall. Blood. 105 (1), 192-198 (2005).
- Diaz, J. A., et al. Impaired fibrinolytic system in ApoE gene-deleted mice with hyperlipidemia augments deep vein thrombosis. J Vasc Surg. 55 (3), 815-822 (2012).
- Zhou, J., May, L., Liao, P., Gross, P. L., Weitz, J. I. Inferior vena cava ligation rapidly induces tissue factor expression and venous thrombosis in rats. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 29 (6), 863-869 (2009).
- Diaz, J. A., et al. Electrolytic inferior vena cava model (EIM) of venous thrombosis. J Vis Exp. (53), e2737 (2011).
- Diaz, J. A., et al. The electrolytic inferior vena cava model (EIM) to study thrombogenesis and thrombus resolution with continuous blood flow in the mouse. Thromb Haemost. 109 (6), 1158-1169 (2013).
- Brill, A., et al. Extrahepatic high-density lipoprotein receptor SR-BI and apoA-I protect against deep vein thrombosis in mice. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (8), 1841-1847 (2012).
- Diaz, J. A., et al. Critical review of mouse models of venous thrombosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (3), 556-562 (2012).
- Brandt, M., et al. Deep vein thrombus formation induced by flow reduction in mice is determined by venous side branches. Clin Hemorheol Microcirc. 56 (2), 145-152 (2014).
- Geddings, J., et al. Strengths and weaknesses of a new mouse model of thrombosis induced by inferior vena cava stenosis: communication from the SSC of the ISTH. J Thromb Haemost. 12 (4), 571-573 (2014).
- Alvarado, C. M., et al. Male mice have increased thrombotic potential: sex differences in a mouse model of venous thrombosis. Thromb Res. 127 (5), 478-486 (2011).
