Summary
Drosophila äggstocken är en utmärkt modell för att studera stamceller nisch utveckling. Även om metoder för dissekera larver och vuxna äggstockarna har publicerats, kräver Pupp äggstock dissektioner olika tekniker som inte har publicerats i detalj. Här beskriver vi ett protokoll för dissekera, färgning och montering Pupp äggstockarna.
Abstract
Till skillnad från vuxna Drosophila äggstockar, Pupp äggstockar är relativt svårt att komma åt och undersöka på grund av deras små storlek, genomskinlighet och innesluta inom en Pupp fall. Utmaningen att dissekera Pupp äggstockarna ligger också i deras fysiska plats inom puppan: äggstockarna är omgivna av fett kroppsceller inne i Pupp buken, och dessa fettceller måste avlägsnas för att möjliggöra korrekt antikropp färgning. Detta protokoll använder för att övervinna dessa utmaningar, och tredjeparts anpassade Pasteur-pipetter för att extrahera fett kroppsceller från Pupp buken. Dessutom används ett kamrar täckglas istället för en mikrocentrifug rör under färgning processen för att förbättra synligheten för puppor. Men trots dessa och andra fördelar med de verktyg som används i detta protokoll, kan framgångsrikt genomförande av dessa tekniker fortfarande innebära flera dagars praktik på grund av den lilla storleken på Pupp äggstockarna. De tekniker som beskrivs i detta protokoll skulle kunna tillämpas på tid kursen experiment där äggstockarna analyseras i olika skeden av Pupp utveckling.
Introduction
Stamcellsforskning använda Drosophila äggstockarna har kraftigt expanderat sedan den första dokumentationen av en stamcell nisch1,2,3,4. Följer utvecklingen av lineage tracing genetiska verktyg, Drosophila äggstock dissektioner har ofta använts för att studera stamceller härstamningar och signalering vägar som reglerar stamceller underhåll, spridning och öde i stamcellsnischen. Kunskap om dessa signalvägar kan ge insikter om potentiella orsaker till cancer som härrör från aberrant stem cell aktivitet5,6,7. Det har nyligen också visat att somatiska stamceller i Drosophila äggstocken, kallas follikel stamceller (Scheme), starkt liknar däggdjur intestinal stamceller i många aspekter av deras organisation8. Av denna anledning är Drosophila äggstockar mycket användbara modellsystem för att studera stamceller beteende.
Även larver och vuxna äggstockarna erbjuda ledtrådar till tidig stamceller utveckling och slutliga stamceller organisation i nisch, respektive, är Pupp äggstocken en mellanliggande struktur där de könsceller och kroppsceller omorganisera och fastställa deras identiteter 9 , 10. om flera studier har undersökt aspekter av vävnad utveckling i Pupp äggstock10,11,12,13, frågor kvarstår om differentiering och rumslig organisation ovariell celltyper under Pupp utveckling. I synnerhet uppstår specifikationen av Scheme under denna period. Detta protokoll beskriver en metod för dissekera och färgning Pupp äggstockarna vid önskade tidpunkter – en teknik som kan användas i tid kursen experiment som analysera Pupp äggstock utveckling i detalj från den larver till vuxen scenen.
För att beakta den liten storlek, genomskinlighet och otillgänglighet Pupp äggstockscancer i Pupp buken, detta protokoll använder verktyg såsom en skräddarsydd tunn spets Pasteur Pipettera ta bort buk fett vävnad hindrar antikropp tillgång till den äggstockarna. En klar, kamrar täckglas används under antikroppen färgning erbjuder större synlighet puppor och en skonsammare plattform för gunga äggstockarna på en ”Nutator”. Baserad på ett protokoll för larval äggstock dissektioner av Maimon och Gilboa14, en relativt hög koncentration av Triton x-100 har varit anställd i de inledande stegen i färgningsproceduren att maximera cellmembranet permeabilisering och antikropp tillgång till den äggstockscancer celler.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. EggLaying
- Kombinera cirka tio manliga och femton kvinnliga vuxna Drosophila flugor av önskad genotyp i en injektionsflaska av normala rik flyga mat kompletteras med jäst. För att undvika överbeläggning injektionsflaskan, Tillåt Parade honorna att lägga ägg längre än 2-4 h14.
- Överför vuxna från injektionsflaskan till en ny injektionsflaska genom att trycka på ampullöppningen mot olika injektionsflaska med flyga mat. Låt äggen utvecklas till larver i rumstemperatur i 3 – 4 dagar.
2. att välja kvinnliga larver
- Med en fuktig fin borste med mjuk borst, göra en rullande rörelse med borsten längs väggen på injektionsflaskan överföra vandrande tredje-instar larver från injektionsflaskan till ett glas väl fylld till brädden med 1 x fosfatbuffrad saltlösning (PBS). Tvätta mat skräp bort larverna genom att överföra dem till en annan väl fylld med 1 x PBS.
- Separata manliga och kvinnliga larverna med pincett. Identifiera de manliga larvaena av ett par stora, runda och genomskinlig testiklarna inbäddade i fett kroppen på den laterala sidan av kroppen ungefär två tredjedelar ner från dess främre änden15. Kvinnliga larver är i genomsnitt större, mindre genomskinlig än hannarna och har mycket mindre könskörtlarna som är svårare att upptäcka.
- Välj mot manliga larver att samla kvinnliga larver. Samla in minst tio kvinnor från brunnen. Placera de kvinnliga larvaena i en separat väl fylld med 1 x PBS.
- Använd tången att överföra kvinnliga larverna försiktigt en ny injektionsflaska med färsk flyga mat kompletteras med jäst.
- Placera injektionsflaskan med de kvinnliga larvaena i en mörk plats för att underlätta pupariation16. Hela dagen, övervaka larvaena för pupariation. Eftersom varje larv immobilizes och utvecklas till en prepupa, cirkel i prepupa mot injektionsflaskan och registrera den ungefärliga tid som när det först bildar in en prepupa. Identifiera prepupae genom den utskjutande delen av främre trakeer och tidpunkten för puparium bildandet17. Låt prepupae att utvecklas till den önska tidpunkten (mätt i timmar efter puparium bildandet, APF).
Obs: Alla djur som genomgår puparium formation inom ca 10 h intervall kan betraktas som en prepupa. Pupp scenen börjar cirka 12 h efter puparium bildandet efter en inre molt har ägt rum.
3. Förbered puppor för antikropp färgning
-
Bilda en tunn glas Pipettera användas i senare steg för att rensa ut Pupp fett kroppen.
- Smält glas spetsen av en Pasteur Pipettera över en bunsenbrännare. Som glaset smälter, använda pincett för att dra vågrätt från resten av den Pipettera att bilda en tunnare spets.
- Efter kylning bryta av en liten del av Pipettera tipset att bilda en snygg rund öppning. Koppla en lampa till andra änden av Pipettera.
- Ladda Pipettera med 1 x PBS.
- För att skörda de puppor, som limmas på väggen i injektionsflaskan, applicera en liten droppe vatten längs zonen kontakt mellan puppa och injektionsflaskan. Vänta 1 – 2 min att låta proteinet lim upplösas innan försiktigt lyfta puppa av väggen med en fuktig fin pensel. Överföra den puppa till ett glas väl fylld med 1 x PBS. Ägna en enda brunn per puppa att undvika överbeläggning brunnen.
- Medan greppa bakre ände puppa med ett par pincett, noggrant riva den främre delen av Pupp fallet med ett annat par tills huvudet av puppan är synliga.
- Greppa främre-mest spetsen av Pupp huvudet med pincett och dra försiktigt puppan ur fodralet Pupp.
Obs: En del av fett kroppen kan spilla ut under denna process. - Separata och kassera den främre halvan av puppan från den bakre hälften tills endast buk säcken kvar.
-
Extrahera fett kroppens celler från buken säcken.
- Greppa den buk säcken mot botten av brunnen med tång i ena handen medan du håller tunna glas Pipettera fylld med 1 x PBS i en annan hand.
- Sikta tunn Pipettera spetsen mot öppning av säck och långsamt Pipettera 1 x PBS i buken att tvätta bort fett kroppens celler kring Pupp äggstockarna.
Obs: Äggstockarna är ett par små, genomskinliga, tvärstrimmig och avlånga strukturer som bör finnas kvar inuti buken säcken. - Tvätta bort fett kroppen celler förrän minst två tredjedelar av fett kroppen är borta eller äggstockarna är synliga nära öppnandet av buken säcken. Det är mycket viktigt att utföra detta steg långsamt så att inte tvätta äggstockarna av buken av en slump.
- Undersöka den väl för att kontrollera om äggstockarna har spillt ut under fett kroppen cell tvätten. Om äggstockarna inte är synliga inuti brunnen, bör de har hållits i buken. Om äggstockarna har kommit ut, placera en ny puppa i brunnen och upprepa detta.
- Överföra buken in i en tydlig täckglas kammare fylld med fixering buffert (1 x PBS, 4% PARAFORMALDEHYD) och placera locket ovanpå. För att säkerställa ett tillräckligt antal äggstockarna motstå färgning och monteringen förlopp, dissekera mer äggstockarna än behövs.
Försiktighet: Fixering bufferten innehåller PARAFORMALDEHYD som är giftigt. Vänligen bära lämpliga skydd såsom handskar, skyddsglasögon, etc.
4. immunohistokemi
- Genom färgning processen använda pincett att försiktigt pressa ned någon flytande äggstockarna till botten av skyddsglaset brunnen att säkerställa att äggstockarna är helt nedsänkt i antikropp lösning.
- Remsor av dubbelhäftande tejp på den plana ytan av en Nutator och sedan placera den kamrar täckglas på självhäftande yta.
- Inkubera äggstockarna i fixering buffert från steg 3,7 under 15 minuter vid rumstemperatur.
- Skölj äggstockarna tre gånger i 1 x PBS med 1% Triton x-100 för 5, 10 och 45 min 1 h totalt, respektive för att tillåta noggrann permeabilisering.
- Blockera äggstockarna i 10% normala get serum i 1 x PBS med 0,5% Triton x-100 i 30 min.
- Inkubera äggstockarna över natten i 600 µL av primär antikropp val utspädd i lämpliga koncentrationen i 1 x PBS med 0,5% Triton x-100 vid 4 ° C.
- Skölj äggstockarna tre gånger för 5 min i 1 x PBS med 0,5% Triton x-100.
- Inkubera äggstockarna för 2 h i 600 µL av sekundär antikropp val utspädd i lämpliga koncentrationen i 1 x PBS med 0,5% Triton x-100 vid rumstemperatur.
- Skölj äggstockarna två gånger för 5 min i 1 x PBS med 0,5% Triton x-100 och en gång för 5 min i 1 x PBS.
5. dissekera och montering Pupp äggstockarna
- Placera en liten droppe av 1 x PBS på ett objektglas. Använd tången överföra buk säcken från de kamrar täckglas till ett glas väl fylld med 1 x PBS. Ägna en enda brunn per puppa att undvika överbeläggning brunnen.
- Riva sönder buken säcken och eventuella återstående fett kroppen med pincett.
Obs: Äggstockarna, som är ett par små, genomskinliga, tvärstrimmig och avlånga strukturer, bör vara synlig inuti brunnen. Äggstockarna är ofta tätt omgiven av fett kroppen, så det är viktigt att se till att alla fett kroppen grundligt slits isär. - Över äggstockarna från brunnen till släpp av 1 x PBS på mikroskopet glida genom att greppa mitten av äggstockarna mellan spetsarna på tången. Det är mycket viktigt att använda ett fast grepp utan att klämma äggstockarna så att inte att förlora eller förstöra dem under överföringen. Tillsätt några droppar 1 x PBS till bild när lösningen torkar ut med tiden.
- När alla äggstockarna har dissekeras och överföras till objektglas, Pipettera 40 µL av monteringsmedium på en 22 x 22 mm täckglas och plats täckglaset försiktigt på toppen av äggstockarna. Låt den glida torka över natten innan imaging.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Framgångsrikt genomförande av detta förfarande bör resultera i tydlig antikropp färgning som avslöjar struktur och cellulära organisation av en Drosophila Pupp äggstock. Immunohistokemi som beskrivs i detta protokoll kan användas för att identifiera celltyper som ofta färgas i larver och vuxna äggstockarna. Cellerna i Pupp stjälken härrör från swarm celler18 (beskrivs av Fasciclin III i vitt) visas i figur 3. Förutom att lyfta fram den cellulära organisationen av Pupp äggstockar, kan antikropp färgning specifika för cellproliferation (till exempel phospho-Histon H3 färgning i figur 3visas i grönt) användas att studera celldelning mönster av stamceller och andra mitotiskt aktiva celltyper. Om fluorescerande antikropp signaler är svag när den undersöks i Mikroskop för confocal, är det troligt att äggstockarna inte var tillräckligt utsätts för antikropparna på grund av otillräcklig fett kroppen utvinning i Pupp buken. En annan möjlighet kan vara att Pupp säck öppnandet kollapsade under färgningen.
Figur 1: sida-vid-sida jämförelse av manliga vs kvinnliga larver. (A) manliga larva i PBS lösning identifieras av ett par genomskinliga, avlånga testiklarna ligger ungefär två tredjedelar ner från dess främre änden. (B) kvinnliga larva i PBS lösning identifieras genom avsaknad av stor, genomskinlig testiklarna. Skala barer = 2 mm. vänligen klicka här för att visa en större version av denna siffra.
Figur 2: dissekering av Pupp äggstockarna efter immunohistokemi. (A) bild av ett par av tvärstrimmig, genomskinlig Pupp äggstockarna (röda cirklar) som har tagits bort från buken säcken vid immunhistokemi färgning. Pupp äggstockarna var dissekeras ca 48 h APF. De återstående fet kroppsceller (svart pil) som inte var extraherade i steg 3.6 är spridda i PBS lösning. (B) bild av en enda Pupp äggstocken i PBS lösning dissekerade ca 48 h APF. Skala barer = 100 µm. vänligen klicka här för att visa en större version av denna siffra.
Figur 3: betsad vildtyp Pupp äggstock dissekeras 48 timmar APF. Bild förvärvades med confocal Mikroskop. Wnt väg reportern, Fz3 RFP8 (röd), uttrycks i främre kroppsceller. Antikroppar riktad till Fasciclin III (vita) konturer celler av Pupp stjälken. Atomkärnor var counterstained med DAPI (blå). Phospho-Histon H3 färgning (grön) belyser celler som genomgår Mitos. Diagonala vita linjer indikerar kanterna på den ursprungliga bilden. Skalstapeln = 20 µm. vänligen klicka här för att visa en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Det mest kritiska och svåra steget i detta protokoll innebär utarbetandet av Pupp äggstockarna före fixering. För att säkerställa att äggstockarna, små och begraven av fett kroppsceller inuti Pupp buken, färgas tillräckligt med antikroppar, är det viktigt att inte bara Riva en stor öppning i buken säcken med pincett, men också extrahera fett kroppens celler som hindrar den äggstockarna från antikropparna. Framgångsrikt genomförande av detta steg kräver tillämpning av subtila tryck på Pasteur Pipettera lampan när du tvättar fett kroppens celler ur buken säcken (t.ex. 1 – 2 fett kroppsceller bör lämna buken per sekund under detta steg). Underlåtenhet att använda mild kraft kommer sannolikt orsaka äggstockarna att spilla ur buken och in i glaset väl. Eftersom äggstockarna själva är små, genomskinliga och svåra att få grepp med tången, måste de förbli inom buken säcken under hela färgning förfarandet. Således, om äggstockarna kommer ut i buken under beredning steget före fixering, det vore extremt svårt att hämta, fläcken och montera dem i sin isolerade form under protokollet.
Fett celler, som främst består av lipid droppar, är triglycerid lagring organeller vanligt förekommande i insekter, däribland Drosophila melanogaster19,20. Eftersom vissa fett kroppsceller kvar i Pupp buken på fixering, detta protokoll använder tredjeparts relativt höga Triton x-100 koncentrationer i de tre första PBS sköljningar extrahera så många lipider som möjligt från båda cell membranes i äggstockarna och eventuella överblivna feta vävnaden som omger äggstockarna. Som framgår av den ljusa Fasciclin III cellmembranet protein antikroppen färgning i figur 3, använder 1 x PBS med 1% Triton x-100 under de första tre sköljningar fungerar bra att maximally extrahera lipider samtidigt bibehålla integriteten i cellen membran.
När fett kroppen har utvunnits, är det näst mest kritiska steget att se till att äggstockarna kvar inom buken säcken hela fixering och antikropp färgning. Det är bra att placera dem i ett tydligt, kamrar täckglas i stället för en mikrocentrifug rör för tydligare synligheten för de Pupp abdomens under färgningen. Använda pincett för att försiktigt skjuta de buk säckarna längst ned i kammaren så att buk vävnader i säcken är helt uppslukade i antikropp lösning.
Slutligen bör vara mycket försiktig att överföra äggstockarna från buken säcken till objektglas under monteringen förlopp. Även äggstockarna är liten och svår att få grepp med tången utan nyper dem, är det bästa sättet att överföra dem till bild genom att greppa ordentligt mitten av äggstockarna. De kommer att förbli strukturellt intakt en gång placerade i bilden. Det är möjligt att dissekera äggstockarna från buken direkt ovanpå den objektglas att undvika att förlora äggstocken, men detta kan leda till en överdriven mängd monteringsmedium på bilden och kan försvåra monteringen förlopp.
Begränsningarna i detta protokoll omfatta tiden hela dissektion kan processen ta, potentiellt låga avkastningen av väl färgade äggstockarna och den skicklighet som krävs för att framgångsrikt slutföra varje steg. Eftersom Pupp äggstockarna kräver omfattande fett kroppen utvinning, kan förbereder en enda puppa för fixering ta allt från 10 till 20 min. Dessutom för att säkerställa ett tillräckligt antal äggstockarna tåla hela färgning förfarande, är det bäst att dissekera mer puppor än behövs för experimentet. Detta innebär att en stor del av tiden kan spenderas helt enkelt på att förbereda puppor redan innan steget fixering.
Pupp äggstock dissektioner skiljer sig till stor del från protokoll för larval14 och vuxna21 äggstock dissektioner. Fodral i äggstockarna inom Pupp fall presenterar unika utmaningar som uppfylls av de verktyg som används i detta protokoll. Dessa metoder kan vara tillämpas på lineage tracing experiment att avgöra när Scheme och eskort celler specificeras i Pupp äggstocken över tid. En modifierad version av detta protokoll som rör insekt cell kulturmassmedia skulle också kunna användas att dissekera Pupp äggstockarna för ex vivo det levande bildanalys.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har inga intressekonflikter att deklarera.
Acknowledgments
Denna forskning stöddes av National Institutes of Health (RO1 GM079351 till D.K.). Vi tackar Dorothea Godt för hennes goda råd om Pupp äggstock dissektioner baserat på hennes ursprungliga protokollet. Vi tackar också Amy Reilein för hennes hjälp och synpunkter på manuskriptet.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Dumont #5 Forceps, biology | Fine Scientific Tools | 11252-20 | |
| Nunc Lab-Tek Chambered Coverglass | Thermo Fisher Scientific | 155383 | |
| Dissection microscope | Nikon | SMZ-10A | |
| Confocal Microscope | Carl Zeiss | LSM 700 | |
| Analysis software | Carl Zeiss | Zen | |
| 9 Depression Glass Spot Plates | Pyrex | 7220-85 | |
| Pasteur pipet | Fisher Scientific | 13-678-6B | |
| Pasteur pipet bulb | Various vendors | ||
| Bunsen burner | Various vendors | ||
| Fisherfinest Premium Frosted Microscope Slides | Thermo Fisher Scientific | 12-544-2 | |
| 22 x 22 mm glass coverslips No 1 | VWR | 48366-067 | |
| Dapi Fluoromount-G | SouthernBiotech | 0100-20 | |
| Double-sided tape | Scotch | ||
| Nutator | Clay Adams | ||
| Fine brush #0, #3-#5 | Various vendors | ||
| Gilson Pipetman Starter Kit | Thomas Scientific | F167300 | Contains p20, p200, p1000 pipettors |
| 16% Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 15710 | Dilute to 4% paraformaldehyde in 1x PBS |
| Triton | Sigma-Aldrich | 9002-93-1 | |
| 10x PBS | Ambion | AM9624 | Dilute to 1x PBS |
| Normal Goat Serum | Jackson ImmunoResearch | 5000121 | Dilute to 10% normal goat serum in PBST with 0.5% Triton concentration |
| Primary antibodies (in protocol: 7G10 anti-Fasciclin III diluted 1:250, rabbit anti-phosphohistone H3 diluted 1:1000) | Various vendors (in protocol: Developmental Studies Hybridoma Bank, Millipore) | Dilute in PBST with 0.5% Triton concentration | |
| Secondary antibodies (in protocol: Alexa-546, FITC-conjugated anti-rabbit serum) | Various vendors (in protocol: Molecular Probes, Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.) | Dilute in PBST with 0.5% Triton concentration | |
| Fly vials | Denville Scientific | V9406 | |
| Cotton Balls, For Wide Vials | Genesee Scientific | 51-102W | |
| Yeast, Bakers Dried Active | MP Biomedicals | 101400 | |
| Fly food | Produced in laboratory | Mixture of water, brewer's yeast, cornmeal, molasses, agar, EtOH, penicillin, methyl 4-hydrobenzoate, and propionic acid | |
| Male and female Drosophila flies (genotype used in protocol: yw; P[Fz3-RFP, w+]/TM2) | Bloomington Drosophila Stock Center |
References
- Losick, V., Morris, L., Fox, D., Spradling, A. Drosophila Stem Cell Niches: A Decade of Discovery Suggests a United View of Stem Cell Regulation. Dev Cell. 21 (1), 159-171 (2011).
- Kirilly, D., Xie, T. The Drosophila ovary: an active stem cell community. Cell Res. 17 (1), 15-25 (2007).
- Dansereau, D. A., Lasko, P. The Development of Germline Stem Cells in Drosophila. Method Mol Biol. 450, 3-26 (2008).
- Pearson, J., López-Onieva, L., Rojas-Ríos, P., Gonzáles-Reyes, A. Recent advances in Drosophila stem cell biology. Int J Dev Biol. 53, 1329-1339 (2009).
- Arwert, E. N., Hoste, E., Watt, F. M. Epithelial stem cells, wound healing and cancer. Nat Rev Cancer. 12 (3), 170-180 (2012).
- Barker, N., et al. Crypt stem cells as the cells-of-origin of intestinal cancer. Nature. 457 (7229), 608-611 (2009).
- Daley, G. Q. Chronic myeloid leukemia: proving ground for cancer stem cells. Cell. 119 (3), 314-316 (2004).
- Reilein, A., et al. Alternative direct stem cell derivatives defined by stem cell location and graded Wnt signaling. Nat Cell Biol. 19 (5), 433-444 (2017).
- Eliazer, S., Buszczack, M. Finding a niche: studies from the Drosophila ovary. Stem Cell Res Ther. 2 (6), 45 (2011).
- Godt, D., Laski, F. A. Mechanisms of cell rearrangement and cell recruitment in Drosophila ovary morphogenesis and the requirement of bric à brac. Development. 121 (1), 173-187 (1995).
- King, R. C., Aggarwal, S. K., Aggarwal, U. The development of the female Drosophila reproductive system. J Morphol. 124 (2), 143-166 (1968).
- Vlachos, S., Jangam, S., Conder, R., Chou, M., Nystul, T., Harden, N. A Pak-regulated cell intercalation event leading to a novel radial cell polarity is involved in positioning of the follicle stem cell niche in the Drosophila ovary. Development. 142 (1), 82-91 (2015).
- Irizarry, J., Stathopoulos, A. FGF signaling supports Drosophila fertility by regulating development of ovarian muscle tissues. Dev Biol. 404 (1), 1-13 (2015).
- Maimon, I., Gilboa, L. Dissection and Staining of Drosophila Larval Ovaries. J Vis Exp. (51), e2537 (2011).
- Kerkis, J. The Growth of the Gonads in DROSOPHILA MELANOGASTER. Genetics. 16 (3), 212-224 (1931).
- Yamanaka, N., et al. Neuroendocrine Control of Drosophila Larval Light Preference. Science. 341 (6150), 1113-1116 (2013).
- Bainbridge, S., Bownes, M. Staging the metamorphosis of Drosophila melanogaster. Development. 66, 57-80 (1981).
- Courdec, J., et al. The bric à brac locus consists of two paralagous genes encoding BTB/POZ domain proteins and acts as a homeotic and morphogenetic regulator of imaginal development in Drosophila. Development. 129, 2419-2433 (2002).
- Arrese, E. L., Soulages, J. L. INSECT FAT BODY: ENERGY, METABOLISM, AND REGULATION. Annu Rev Entomol. 55, 207-225 (2011).
- Zhang, Y., Xi, Y. Fat Body Development and its Function in Energy Storage and Nutrient Sensing in Drosophila melanogaster. J Tissue Sci Eng. 6 (1), (2014).
- Wong, L. C., Schedl, P. Dissection of Drosophila Ovaries. J Vis Exp. (1), e52 (2006).
