Summary
Drosophila yumurtalık kök hücre niş geliştirme eğitim için mükemmel model bir sistemdir. Larva ve yetişkin yumurtalık dissekan için yöntemleri yayımlanmış olsa, Pupa yumurtalık diseksiyonlarının ayrıntılı olarak yayınlanmamıştır farklı teknikler gerektirir. Burada diseksiyon, boyama ve pupa yumurtalık montaj için bir protokol anahat.
Abstract
Yetişkin Drosophila yumurtalık, Pupa yumurtalık erişmek ve onların küçük nedeniyle incelemek nispeten zor olan boyut, translucence ve bir pupa dava içinde kapatan. Pupa yumurtalık dissekan meydan aynı zamanda fiziksel konumlarını pupa içinde yatıyor: yumurtalık içinde pupa karın yağ vücut hücreleri tarafından çevrilidir ve bu yağ hücrelerinin doğru antikor boyama için izin vermek için kaldırılması gerekir. Bu zorlukları aşmak için pupa karından yağ vücut hücreleri ayıklamak için özelleştirilmiş Pasteur pipets bu protokolü kullanır. Ayrıca, Pupa görünürlüğünü artırmak için odacıklı bir coverglass yerine microcentrifuge tüp boyama işlemi sırasında kullanılır. Ancak, bu ve diğer avantajları bu protokol için kullanılan araçlar rağmen bu tekniklerin başarılı yürütme hala pratik pupa yumurtalık küçük boyutu nedeniyle birkaç gün içerebilir. Bu protokol için özetlenen teknikleri yumurtalık çeşitli yaşlardaki pupa analiz edilir zaman ders deneyler için uygulanabilir.
Introduction
Drosophila yumurtalık kullanarak kök hücre araştırma kök hücre niş1,2,3,4ilk belgelenmesi beri yaygın olarak genişletti. Soy izleme genetik araçlarını, Drosophila yumurtalık diseksiyonlarının sık kök hücre soy eğitim için kullanılan gelişimi takip ve kök hücre bakım, yayılmasını önleme ve kök hücre niş kadere düzenleyen yolları sinyal. Bu sinyal yolları bilgisine kanserlerin anormal kök hücre etkinlik5,6,7' den kaynaklanan olası nedenler anlayışlar verim. Ayrıca son zamanlarda folikül kök hücreler (FSCs) bilinen Drosophila yumurtalık somatik kök hücre şiddetle memeli bağırsak kök hücre kendi organizasyon8birçok yönleriyle benzer gösterilmiştir. Bu nedenle, Drosophila yumurtalık kök hücre davranış eğitimi için son derece faydalı model sistemi vardır.
Larva ve yetişkin yumurtalık erken kök hücre gelişimi ve niş içinde son kök hücre organizasyon ipuçları sırasıyla sunarken, Pupa yumurtalık germline ve somatik hücre yeniden düzenlemek ve kimliklerini kurmak bir ara yapıdır 9 , 10. rağmen birçok araştırma yönleri pupa yumurtalık10,11,12,13' te doku gelişimi inceledik, farklılaşma ve mekansal organizasyonu ile ilgili sorular kalır pupa geliştirme sırasında yumurtalık hücre türleri. Özellikle, bu döneminde FSCs tayini oluşur. Bu iletişim kuralı anatomi ve istediğiniz zaman noktalarda pupa yumurtalık boyama yöntemi özetliyor — pupa yumurtalık gelişimi yetişkin sahneye larva üzerinden ayrıntılı olarak analiz zaman ders deneylerde kullanılan bir teknik.
Küçük boyutu, translucence ve pupa karın içinde pupa yumurtalık erişilememesi için hesap için bu iletişim kuralını antikor erişimin engellenmesi karın yağ vücut dokusu kaldırmak için bir ısmarlama ince uçlu Pasteur damlalıklı gibi araçlar kullanır Yumurtalık. Teklifler geniş çaplı bir görünürlük pupa ve yumurtalık "Nutator" üzerinde sallanan nazik bir platform boyama antikor sırasında kullanılan bir açık, odacıklı coverglass Larva yumurtalık gruptakiler için bir protokol Maimon ve beratını14tarafından dayanarak, Triton X-100 nispeten yüksek bir konsantrasyon boyama yordamın ilk adımda hücre zarının permeabilization ve antikor erişimin en üst düzeye çıkarmak için istihdam edilmiştir Yumurtalık hücreleri.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. EggLaying
- Yaklaşık on erkek ve on beş kadın yetişkin Drosophila sinekler istenen genotip normal zengin sinek yemek Maya ile desteklenmiş bir şişe içinde birleştirir. Şişeyi aşırı kalabalık önlemek için 2-4 h14saatten uzun için yumurtlamak şeklindeki kadın izin.
- Yetişkinler şişeyi uçmak gıda ile farklı bir şişe karşı açılış şişe dokunarak yeni bir şişe aktarın. Larvalar, oda sıcaklığında içine 3-4 gün için geliştirmek yumurta izin.
2. kadın larva seçme
- Nemli bir ince fırça ile yumuşak kıllar kullanarak, göçebe üçüncü-biçim larva de 1 fosfat tamponlu tuz çözeltisi (PBS) x ile ağzına kadar dolu bir cam şişe aktarmak için şişe duvar boyunca fırça ile çalışırken bir hareketi yapmak. Gıda artıkları larvalar kapalı onların 1 x PBS ile dolu iyi diğerine transfer ederek yıkayın.
- Erkek ve dişi larva forseps kullanarak ayırın. Büyük, yuvarlak ve yarı saydam testis yağ vücutta yaklaşık üçte vücut yan tarafındaki aşağı onun ön uç15gömülü bir çift tarafından erkek larva tanımlayın. Kadın larva ortalama olarak daha büyük, daha az erkeklerden daha saydam ve daha tespit etmek zordur çok daha küçük gonads var.
- Erkek larva karşı kadın larva toplamak için seçin. En az 10 kadın kuyudan toplamak. Kadın larva de 1 x PBS ile dolu ayrı bir yerleştirin.
- Kadın larva yavaşça taze uçmak yiyecek yeni bir şişe aktarmak için kullanmak forseps Maya ile desteklenmiştir.
- Şişeyi kadın larvaları ile pupariation16kolaylaştırmak için karanlık bir konuma yerleştirin. Gün boyunca, larva pupariation için izleyin. Her larva immobilizes ve bir prepupa geliştirir, şişeyi karşı prepupa daire ve ne zaman o ilk oluşturur bir prepupa yaklaşık süreyi kaydetmek. Prepupae anterior vızıltısı çıkıntı ve zamanlama puparium oluşumu17belirleyebilir. Prepupae (puparium oluşumu, APF sonra saat cinsinden) istenen saat noktasına geliştirmeye olanak sağlar.
Not: bir prepupa puparium formasyonu içerisinde yaklaşık 10 s aralığı tabi herhangi bir hayvan olarak kabul edilebilir. Dahili bir tüy dökme yerini almıştır sonra pupa aşamada yaklaşık 12 h puparium oluşumu sonra başlar.
3. pupa antikor boyama için hazırlanması
-
Sonraki adımda pupa yağ cesedi temizlenmesi için kullanılmak üzere bir ince cam damlalıklı oluştururlar.
- Pasteur damlalıklı cam ucu Bunsen brülör üzerinde kavrulur. Cam erir gibi pens ucunu yatay olarak daha ince bir ipucu oluşturmak üzere damlalıklı kalan uzak çekmek için kullanın.
- Soğutma sonra temiz bir dairesel açılış kurmaya damlalıklı ipucu küçük bir bölümünü kır. Bir ampul damlalıklı diğer ucunu takın.
- 1 x PBS ile damlalıklı yükleyin.
- Şişeyi duvara yapıştırılmış, Pupa, hasat için küçük bir damla su pupa ve flakon arasında temas bölgesi boyunca geçerlidir. Protein bildirmek için 1-2 dakika bekleyin tutkal dağıtılması hafifçe nemli bir ince fırça ile duvarından pupa kaldırma önce. 1 x PBS ile dolu pupa bir cama iyi transfer. Tek bir kuyu kuyu aşırı kalabalık önlemek için pupa başına adamak.
- Pupa başkanı görünene kadar pupa arka sonu forseps bir çift ile açgözlü iken, başka bir çifti pupa modelinde ön kısmını dikkatlice gözyaşı.
- Pupa başından en ön ucu Forseps ile kavrama ve yavaşça pupa pupa kendi halinde dışarı çekin.
Not: Yağ vücudun bir kısmı dışarı bu süreçte dökülme. - Ayrı ve pupa posterior yarım üzerinden ön yarısı kadar sadece karın çuval kalır atın.
-
Yağ vücut hücrelerinin karın çuval ayıklayın.
- 1 x PBS başka bir el ile dolu ince cam damlalıklı tutarken bir yandan Forseps ile karın çuval kuyunun karşı kavramak.
- İnce damlalıklı ipucu açılması çuval ve yavaş yavaş damlalıklı 1 x PBS pupa yumurtalık çevreleyen yağ vücut hücrelerinin silsin karın içine doğru nişan al.
Not: Yumurtalık karın çuval içinde kalması gereken küçük, yarı saydam, çizgili ve dikdörtgen yapıları bir çift vardır. - Yağ vücut hücreleri en az üçte iki yağ vücudun gitmiş oluncaya veya yumurtalıkların karın çuval açılış yakınındaki görünür hale gelene kadar silsin. Yavaş yavaş bu adımı yürütmek çok önemlidir bu yüzden karın dışında yumurtalıkların kazara yıkamak değil.
- Yumurtalık dışarı yağ vücut hücre yıkama sırasında dökülen Eğer kontrol etmek için iyi inceleyin. Yumurtalık içinde iyi görünür değilse, karın içinde kalması gereken. Yumurtalık dışarı gelmiş varsa, yeni bir pupa kuyuda yerleştirebilir ve bu adımı yineleyin.
- Fiksasyon arabellek (1 x PBS, %4 paraformaldehyde) ile dolu bir açık coverglass odasına karın aktarmak ve kapağı üzerinde yer. Yumurtalıklar yeterli sayıda dayanacak boyama ve montaj işlemi, emin olmak için gerekenden daha fazla yumurtalıkların incelemek.
Uyarı: Toksik olan paraformaldehyde fiksasyon arabellek içeriyor. Lütfen uygun korumaları eldiven, koruyucu gözlük, vbgibi tak.
4. immünhistokimya
- Boyama işlemi süresince, forseps cam kuyunun kayan herhangi bir yumurtalık yumurtalık tamamen antikor çözümde daldırılır emin olmak için yavaşça itin için kullanın.
- Yer çift taraflı bant bir Nutator düz yüzeyine çıkarır ve sonra odacıklı coverglass veya yapışkanlı çekilebilecek.
- Oda sıcaklığında 15 dk için adım 3.7 fiksasyon arabellekte yumurtalık kuluçkaya.
- Yumurtalık durulama üç 1 x PBS % 1 ile Triton X-100 5, 10 ve 45 dk (toplamda 1 h), sırasıyla, kapsamlı permeabilization izin vermek için kez.
- 1 x PBS % 0,5 ile % 10 normal keçi Serumda yumurtalık engellemek Triton X-100 30 dk için.
- Yumurtalık gecede 600 kuluçkaya seçim birincil antikor µL Triton X-100 4 ° C'de % 0,5 ile 1 x PBS uygun konsantrasyonu seyreltilmiş
- 1 x PBS % 0.5 ile yumurtalık üç kez 5 min için durulama Triton X-100.
- Triton X-100 oda sıcaklığında 1 x PBS % 0.5 ile uygun konsantrasyon için 2 h seçtiğiniz ikincil antikor 600 µL içinde seyreltilmiş için yumurtalıkların kuluçkaya.
- Yumurtalık iki kez 5 min için 1 x PBS %0.5 Triton X-100 ve 5 dakika içinde 1 x PBS için bir kez ile yıkayın.
5. anatomi ve pupa yumurtalık montaj
- 1 x PBS bir mikroskop slayt üzerine küçük bir damla yerleştirin. Kullanım forseps karın çuval odacıklı coverglass bir cam de aktarmak için 1 x PBS ile dolu. Tek bir kuyu kuyu aşırı kalabalık önlemek için pupa başına adamak.
- Dışında kalan herhangi bir yağ vücut ve karın çuval Forseps ile gözyaşı.
Not: bir çift küçük, yarı saydam, çizgili ve dikdörtgen yapıları vardır, yumurtalık, kuyunun içinde görünür olması gerekir. Yumurtalık kez sıkıca yağ vücut tarafından çevrili, emin olmak önemlidir bu yüzden tüm yağ vücut iyice parçalanmış ayrı. - Yumurtalık kuyudan 1 x mikroskop PBS slayt yumurtalık forseps ipuçları arasında merkezi açgözlü tarafından damla içine aktarın. Bir tutuş yumurtalık sıkma olmadan kullanılması şekilde değil kaybetmek veya aktarım sırasında edilebilmek için çok önemlidir. Çözüm zaman içinde kurur 1 x PBS birkaç damla slayda ekleyin.
- Bir kez tüm yumurtalık disseke ve mikroskop slayt, damlalıklı 40 µL, 22 x 22 mm coverslip ve yer coverslip yavaşça yumurtalıklar üzerine montaj ortamına aktarılır. Slayt kuru gecede görüntüleme önce izin.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Bu yordamın başarılı yürütme Drosophila pupa yumurtalık hücresel organizasyonu ve yapısını ortaya açık antikor boyama sonuçlanmalıdır. Bu protokol için özetlenen immünhistokimya genellikle larva ve yetişkin yumurtalıklarda lekeli hücre tipleri tanımlamak için kullanılabilir. Türetilen pupa SAP hücrelerinin hücre (beyaz Fasciclin III tarafından özetlenen)18 şekil 3' te gösterilen sürüsü. Pupa yumurtalık hücresel organizasyonu vurgulama ek olarak, hücre çoğalması (fosfo-Histon H3 yeşille gösterilen şekil 3' te boyama gibi) belirli boyama antikor kök hücreler ve diğer hücre bölünmesi desen çalışması için kullanılabilir mitotically etkin hücre tipleri. Floresan antikor sinyalleri confocal mikroskop altında incelendiğinde zayıftır, yumurtalık yeterince antikorlar nedeniyle yetersiz yağ vücut çekme pupa karın içinde sinin değil ki olasıdır. Pupa çuval açılış boyama sırasında çöktü olabilir başka bir olasılık.
Şekil 1: yan yana karşılaştırma erkek vs kadın larvaları. (A) yarı saydam, dikdörtgen testis bir çift tarafından tanımlanan PBS çözümde erkek larva yaklaşık 2/3 aşağı onun ön taraftan yer. (B) büyük, yarı saydam testis yokluğunda tarafından tanımlanan PBS çözümünde kadın larva. Ölçek çubukları 2 mm. = Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 2: pupa yumurtalık diseksiyon immünhistokimya sonra. (A) görüntü immünhistokimya boyama üzerine karın çuval kaldırıldı çizgili, yarı saydam pupa Yumurtalık (kırmızı daireler) bir çift. Pupa yumurtalık disseke yaklaşık 48 h APF. 3.6. adımda elde değil kalan yağ vücut hücrelerinin (siyah ok) PBS çözümde dağılmış. (B) PBS çözümünde tek bir pupa yumurtalık görüntüsünü yaklaşık 48 h APF kesmiştim. Ölçek çubukları 100 µm. = Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 3: lekeli vahşi tipi pupa yumurtalık disseke 48 saat APF. Görüntü confocal bir mikroskop kullanarak satın alınmıştır. Wnt yolu muhabir, Fz3 RFP8 (kırmızı), ön somatik hücreler ifade edilir. Antikorlar pupa SAP Fasciclin III (beyaz) ana hatlarıyla hücrelere yönetti. Çekirdeklerin DAPI (mavi) ile counterstained. Fosfo-Histon H3 (yeşil) Boyama hücreler mitoz geçiren vurgulamaktadır. Çapraz beyaz çizgiler özgün resmin kenarlarını gösterir. Ölçek çubuğu 20 µm. = Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Bu iletişim kuralının en kritik ve zor adım pupa yumurtalık fiksasyon öncesinde hazırlanması içerir. Yumurtalıklar, küçük ve gömülü içinde pupa karın yağ vücut hücreleri tarafından yeterince antikorlar ile lekeli emin olmak için sadece büyük bir açılış karın yatakta Forseps ile gözyaşı ama aynı zamanda engel yağ vücut hücreleri ayıklamak önemlidir Yumurtalık antikorlar üzerinden. Bu adımın başarılı yürütme gerektirir yağ vücut hücrelerinin karın çuval dışarı yıkama sırasında Pasteur damlalıklı ampul üzerinde ince baskı uygulamaya (örneğin 1-2 yağ vücut hücrelerinin karın bu adımı sırasında saniyede bırakmak gerektiğini). Yumuşak güç kullanmaya hatası büyük olasılıkla karın ve cam içine de dökmeyi yumurtalıklar neden olur. Yumurtalık kendileri tarafından küçük, yarı saydam ve Forseps ile kavramak zor olduğundan, tüm boyama prosedürü boyunca karın çuval içinde kalmalıdır. Böylece, yumurtalık fiksasyon önce Hazırlık adımı sırasında karın dışarı gelirsen, almak, leke ve iletişim kuralı sırasında kendi izole formunda mount son derece zor olacaktır.
Öncelikle lipid damlacıkları oluşur, yağ vücut hücreleri trigliserid depolama organelleri yaygın Drosophila melanogaster19,20de dahil olmak üzere böcekler içinde bulunan vardır. Bu yana bazı yağ vücut hücreleri fiksasyon, Pupa karın görüntülenmeye devam eder, yumurtalık içinde her iki cell membranes ve herhangi bir artık yağlı mümkün olduğu kadar çok lipidler ayıklamak için ilk üç PBS durular nispeten yüksek Triton X-100 konsantrasyonlarda bu protokolü kullanır Yumurtalık çevreleyen doku. Şekil 3-1 x PBS ile % 1 kullanımı, Triton X-100 sırasında boyama parlak Fasciclin III hücre membran protein antikor tarafından gösterildiği gibi ilk üç durular çalışır de sonuna kadar lipidler hala hücre bütünlüğünü koruyarak ayıklamak için membran.
Bir kez hulâsa yağ vücut, ikinci en önemli adım yumurtalık fiksasyon ve antikor boyama boyunca karın çuval içinde kalır emin olmaktır. Yer onları içinde pupa abdomens daha net görüş için bir microcentrifuge tüp yerine bir açık, odacıklı coverglass boyama sırasında yararlıdır. Forseps yatakta karın dokuları tam olarak antikor çözümde sardı böylece karın çuval odası altına doğru yavaşça itin için kullanın.
Son olarak, büyük yumurtalıklar karın çuval--dan mikroskop slayta montaj işlemi sırasında aktarmak için özen gösterilmelidir. Yumurtalık küçük ve Forseps ile onları pinching olmadan kavramak zor olsa da, bunları slayda aktarmak için en iyi yolu sıkıca yumurtalık ortasına açgözlü tarafından var. Onlar bir kez slayt üzerinde yerleştirilen yapısal olarak olduğu gibi kalır. Yumurtalık kaybetmemek için doğrudan mikroskop slayt üstüne karın üzerinden yumurtalık incelemek mümkündür, ama bu montaj orta aşırı miktarda için slayt üzerinde neden olabilir ve montaj işlemi karmaşık.
Bu iletişim kuralı sınırlamaları tüm diseksiyon oluşum almak, potansiyel olarak düşük verim iyi lekeli yumurtalıklar ve başarıyla her adımı tamamlamak için gereken beceri süreyi içerir. Pupa yumurtalık geniş yağ vücut ayıklama gerektirdiğinden, tek bir pupa fiksasyon için hazırlanıyor her yerde 10'dan 20 dk sürebilir. Ayrıca, emin olmak için yumurtalıklar yeterli sayıda dayanacak tüm yordamı boyama, bu deney için gerekenden daha fazla pupa incelemek için en iyisidir. Bu zaman büyük miktarda sadece fiksasyon adım önce bile pupa hazırlanması üzerinde harcanan olabilir anlamına gelir.
Pupa yumurtalık diseksiyonlarının büyük ölçüde larva14 ve yetişkin21 yumurtalık gruptakiler için protokoller farklı. Yumurtalık içinde pupa canta mantolama bu protokol için kullanılan araçlar tarafından karşılanmaktadır benzersiz sorunlar sunar. Bu yöntemler olabilir ne zaman belirlemek için soy izleme deneyleri için FSCs ve eskort uygulanan hücre zaman içinde pupa yumurtalık içinde belirtilir. Böcek hücre kültür medya içeren bu iletişim kuralı değiştirilmiş bir versiyonu da potansiyel pupa yumurtalık ex vivo canlı görüntüleme analizi için incelemek için kullanılabilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar hiçbir bildirmek için çıkar çatışması var.
Acknowledgments
Bu araştırma Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından desteklenmiştir (RO1 GM079351 D.K. için). Dorothea Godt onun orijinal protokolüne dayanan pupa yumurtalık diseksiyonu yararlı onun tavsiye için teşekkür ediyoruz. Biz ayrıca Amy Reilein ona yardım ve el yazması üzerine yorum için teşekkür ederiz.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Dumont #5 Forceps, biology | Fine Scientific Tools | 11252-20 | |
| Nunc Lab-Tek Chambered Coverglass | Thermo Fisher Scientific | 155383 | |
| Dissection microscope | Nikon | SMZ-10A | |
| Confocal Microscope | Carl Zeiss | LSM 700 | |
| Analysis software | Carl Zeiss | Zen | |
| 9 Depression Glass Spot Plates | Pyrex | 7220-85 | |
| Pasteur pipet | Fisher Scientific | 13-678-6B | |
| Pasteur pipet bulb | Various vendors | ||
| Bunsen burner | Various vendors | ||
| Fisherfinest Premium Frosted Microscope Slides | Thermo Fisher Scientific | 12-544-2 | |
| 22 x 22 mm glass coverslips No 1 | VWR | 48366-067 | |
| Dapi Fluoromount-G | SouthernBiotech | 0100-20 | |
| Double-sided tape | Scotch | ||
| Nutator | Clay Adams | ||
| Fine brush #0, #3-#5 | Various vendors | ||
| Gilson Pipetman Starter Kit | Thomas Scientific | F167300 | Contains p20, p200, p1000 pipettors |
| 16% Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 15710 | Dilute to 4% paraformaldehyde in 1x PBS |
| Triton | Sigma-Aldrich | 9002-93-1 | |
| 10x PBS | Ambion | AM9624 | Dilute to 1x PBS |
| Normal Goat Serum | Jackson ImmunoResearch | 5000121 | Dilute to 10% normal goat serum in PBST with 0.5% Triton concentration |
| Primary antibodies (in protocol: 7G10 anti-Fasciclin III diluted 1:250, rabbit anti-phosphohistone H3 diluted 1:1000) | Various vendors (in protocol: Developmental Studies Hybridoma Bank, Millipore) | Dilute in PBST with 0.5% Triton concentration | |
| Secondary antibodies (in protocol: Alexa-546, FITC-conjugated anti-rabbit serum) | Various vendors (in protocol: Molecular Probes, Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.) | Dilute in PBST with 0.5% Triton concentration | |
| Fly vials | Denville Scientific | V9406 | |
| Cotton Balls, For Wide Vials | Genesee Scientific | 51-102W | |
| Yeast, Bakers Dried Active | MP Biomedicals | 101400 | |
| Fly food | Produced in laboratory | Mixture of water, brewer's yeast, cornmeal, molasses, agar, EtOH, penicillin, methyl 4-hydrobenzoate, and propionic acid | |
| Male and female Drosophila flies (genotype used in protocol: yw; P[Fz3-RFP, w+]/TM2) | Bloomington Drosophila Stock Center |
References
- Losick, V., Morris, L., Fox, D., Spradling, A. Drosophila Stem Cell Niches: A Decade of Discovery Suggests a United View of Stem Cell Regulation. Dev Cell. 21 (1), 159-171 (2011).
- Kirilly, D., Xie, T. The Drosophila ovary: an active stem cell community. Cell Res. 17 (1), 15-25 (2007).
- Dansereau, D. A., Lasko, P. The Development of Germline Stem Cells in Drosophila. Method Mol Biol. 450, 3-26 (2008).
- Pearson, J., López-Onieva, L., Rojas-Ríos, P., Gonzáles-Reyes, A. Recent advances in Drosophila stem cell biology. Int J Dev Biol. 53, 1329-1339 (2009).
- Arwert, E. N., Hoste, E., Watt, F. M. Epithelial stem cells, wound healing and cancer. Nat Rev Cancer. 12 (3), 170-180 (2012).
- Barker, N., et al. Crypt stem cells as the cells-of-origin of intestinal cancer. Nature. 457 (7229), 608-611 (2009).
- Daley, G. Q. Chronic myeloid leukemia: proving ground for cancer stem cells. Cell. 119 (3), 314-316 (2004).
- Reilein, A., et al. Alternative direct stem cell derivatives defined by stem cell location and graded Wnt signaling. Nat Cell Biol. 19 (5), 433-444 (2017).
- Eliazer, S., Buszczack, M. Finding a niche: studies from the Drosophila ovary. Stem Cell Res Ther. 2 (6), 45 (2011).
- Godt, D., Laski, F. A. Mechanisms of cell rearrangement and cell recruitment in Drosophila ovary morphogenesis and the requirement of bric à brac. Development. 121 (1), 173-187 (1995).
- King, R. C., Aggarwal, S. K., Aggarwal, U. The development of the female Drosophila reproductive system. J Morphol. 124 (2), 143-166 (1968).
- Vlachos, S., Jangam, S., Conder, R., Chou, M., Nystul, T., Harden, N. A Pak-regulated cell intercalation event leading to a novel radial cell polarity is involved in positioning of the follicle stem cell niche in the Drosophila ovary. Development. 142 (1), 82-91 (2015).
- Irizarry, J., Stathopoulos, A. FGF signaling supports Drosophila fertility by regulating development of ovarian muscle tissues. Dev Biol. 404 (1), 1-13 (2015).
- Maimon, I., Gilboa, L. Dissection and Staining of Drosophila Larval Ovaries. J Vis Exp. (51), e2537 (2011).
- Kerkis, J. The Growth of the Gonads in DROSOPHILA MELANOGASTER. Genetics. 16 (3), 212-224 (1931).
- Yamanaka, N., et al. Neuroendocrine Control of Drosophila Larval Light Preference. Science. 341 (6150), 1113-1116 (2013).
- Bainbridge, S., Bownes, M. Staging the metamorphosis of Drosophila melanogaster. Development. 66, 57-80 (1981).
- Courdec, J., et al. The bric à brac locus consists of two paralagous genes encoding BTB/POZ domain proteins and acts as a homeotic and morphogenetic regulator of imaginal development in Drosophila. Development. 129, 2419-2433 (2002).
- Arrese, E. L., Soulages, J. L. INSECT FAT BODY: ENERGY, METABOLISM, AND REGULATION. Annu Rev Entomol. 55, 207-225 (2011).
- Zhang, Y., Xi, Y. Fat Body Development and its Function in Energy Storage and Nutrient Sensing in Drosophila melanogaster. J Tissue Sci Eng. 6 (1), (2014).
- Wong, L. C., Schedl, P. Dissection of Drosophila Ovaries. J Vis Exp. (1), e52 (2006).
