Summary
تصف هذه الدراسة إجراء العمليات الجراحية مبسطة وتقنية للقيام بتحفيز العصب الكهفي مع عزل العصب-مسرى معقدة باستخدام غراء السيليكون وقياس الضغط إينتراكافيرنوس.
Abstract
تحفيز العصب الكهفي (CN) وقياس ضغط إينتراكافيرنوس (برنامج المقارنات الدولية) وقد استخدمت على نطاق واسع لاختبار وتقييم العلاج لضعف الانتصاب. ومع ذلك، تختلف الأساليب المستخدمة بين المختبرات، والمخاطر لا تزال قائمة. وكان الهدف من هذه الدراسة لوصف تقنية جراحية توفر نموذج موثوق بها واستنساخه. وذلك بتعريض عضلة إيشيوكافيرنوسوس في نقطة الإدراج في الاحدوبه إيشيال، يمكن أن مقني ساق القضيب مع الحد الأدنى من تشريح والإصابة إلى الهياكل المعنية في وظيفة الانتصاب. وقد تحقق التحفيز المتكرر من CN، دون الحاجة إلى رفع والتجفيف، باستخدام 125 ميكرومتر القطبين قطب الفضة والتصاق السليكون متوافق حيويا لعزل مجمع العصب الكهربائي. هذا الأسلوب يمنع neuropraxia عن طريق الحد من التمدد وتجفيف العصب ويوفر العزل الكامل للعصب، ينفي تسرب الكهربائية ومنع الحث على مسارات بديلة.
Introduction
بدأت الدراسة في فيفو الانتصاب في الحيوانات التجريبية في عام 1863 بأعمال تجريبية رائدة إيكهارد1. واستخدمت اليكتروستيموليشن أعصاب الحوض للحث على زيادة برنامج المقارنات الدولية في الكلاب. خلال القرنال 20، وبروتوكولات تجريبية مماثلة استخدمت في أكبر من الحيوانات مثل الكلاب والقرود والقطط والأرانب. أولاً وضع كوينلان et al. في عام 19892تقييم وظيفة الانتصاب في الفئران. منذ ذلك الحين تم تعديل الأسلوب وتحديثها بواسطة عدة أخرى مجموعات34. اليوم، الفأر نموذج الحيوان الأكثر استخداماً لدراسة علم الأمراض الانتصاب وتقييم خيارات العلاج الناشئة. وتشمل الخطوات الرئيسية لهذا الإجراء، تسجيل ضغط الدم النظامية باستخدام خط في الشريان السباتي، كانوليشن ساق القضيب لتدبير برنامج المقارنات الدولية، وحفز CN للحث على زيادة في برنامج المقارنات الدولية. على الرغم من أن العديد من الباحثين قد صقل النموذج، في إمكانية تكرار نتائج لا يزال يمثل مشكلة، وقد أبلغت نتائج متغير عن مختبرات مختلفة. مطبات عدة لا تزال قائمة.
السابقة المواد5،،من67،،من89،10 وصف استخدام التعرض القضيب كامل مع ديجلوفينج القضيب للجسم الكهفي cannulation. هذا ليس نهج أمثل كالتلاعب وتشريح التخريبية يسبب الضرر للهياكل، التي تعتبر أساسية لوظيفة الانتصاب. وقد تم تشريح CN وصفاً جيدا10،11، ولكن تحفيز العصب ليس الحل الأمثل بسبب العوامل المتعددة التي يمكن أن تؤثر على النتائج التجريبية. ويتضمن أسلوب التحفيز CN رفع العصب من الأنسجة المحيطة بسحب على مسرى هوك ثنائي القطب، الذي يتم وضعه حول العصب، وتجفيف العصب قبل كل التحفيز. وهذا يمكن أن يؤدي إلى درجات مختلفة من تلف الأعصاب والكهربائية التسرب الحالي، أسفر عن تقلص ردا أو زيادة كاذبة في برنامج المقارنات الدولية من خلال تحفيز مسارات بديلة مثلاًوعضلات قاع الحوض والمثانة والجهاز الهضمي 12من المسالك. وكل هذه العوامل تحد من إمكانية تكرار نتائج.
أثناء دراستنا، لاحظنا أن كل من العمق ونوع من التخدير تأثيراً عميقا في برنامج المقارنات الدولية. المسكنات المستخدمة هي بينتوباربيتال الصوديوم أو حقن الكيتامين/إكسيلازيني أو الكيتامين/الميدازولام isoflurane/الأكسجين استنشاق.
هنا يصف لنا طريقة جراحية مبسطة وتقديم البيانات لدعم توحيد بروتوكول تجريبي.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
تم إيواء الحيوانات في مرفق الرعاية الحيوانية في جامعة جنوب الدنمارك وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية. أجريت جميع التجارب على الحيوانات وفقا لدليل "المعاهد الوطنية للصحة" لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية. هذا إجراء جراحة الحادة، وعدم البقاء على قيد الحياة.
1-إعداد أنابيب والقطب، وأدوات لإجراء العمليات الجراحية
- استخدام الصكوك microsurgical التالية: المقص الجراحي والمقص الصغير في الزاوية، ملقط أنسجة، زوج من دومون #7 والملقط الصغير منحنى #5، حامل إبرة الصغير والكامشات.
ملاحظة: هذا هو إجراء حادة، الصكوك التي لا تحتاج إلى تعقيم. بعد الاستخدام، تنظيف ومسح التلميحات مع الإيثانول 70%. - نقع في الأنابيب في الإيثانول 70% وثم طرد مع العقيمة 0.9% كلوريد الصوديوم مع الهيبارين يو/مليلتر 100 قبل الاستخدام. اترك الأنبوب شغلها لتجنب إدخال فقاعات الهواء في النظام.
- قص قطعة طول 20-30 سم من أنابيب البولي إيثيلين (PE)-50 جعل قسطرة لقياس برنامج المقارنات الدولية. التأكد من أن الأنبوب قصيرة قدر الإمكان للحد من الملطف الضغط.
- ينحني معقم ز 24 إبرة لجنبا إلى حتى الإبرة فواصل في الوسط. قم بتوصيل القطعة مع المجسم مشطوف الحواف إلى نهاية الأنبوب PE للإدراج في ساق القضيب البعيدة. إدراج أخرى نصف إلى محور للاتصال الضغط على المفاتيح. ملء هذا النظام مع هيبارينيزيد المالحة (100 U/mL).
- جعل ثنائي القطب الكهربائي المغلفة تفلون، الأسلاك قطع اثنين 125 ميكرومتر الفضة إلى متساوية الطول. استخدام قطعة من الشريط لإرفاق الأسلاك إلى حافة الجدول ومؤشر ترابط لهم معا. وفي وقت لاحق، إرفاق مسرى إلى لوحة سوداء.
- جعل شق صغير في تفلون واستخدام الملقط الصغير #5 لقطاع بطول 4-5 مم لطلاء تفلون قبالة النصائح من أقطاب كهربائية. قطع النصائح مع مشرط لتحقيق حتى الطول وإنشاء هوكس بثني نهايات حول حافة حادة من شفرة المبضع.
- الشريط الكهربائي مع نهاية تمتد قليلاً على حافة اللوحة السوداء مع هوكس مشيراً إلى أعلى. خلط الغراء السيليكون على لوحة بلاستيكية 10 s والتفاف فقاعة غراء حول القطب 1-2 مم من مأزق.
- السماح لتجف لمدة حوالي 5 دقائق قبل الاستخدام (الشكل 1). قطاع تفلون من مقطع أطول على الطرف الآخر، للسماح لاتصال مشجعا.
ملاحظة: مع إعادة القيام خطاف في النهاية البعيدة، مسرى يمكن إعادة استخدامها مرات عديدة.
2-إعداد الحيوانات
- بعد أنيسثيتيزينج الحيوان، حلق النصف السفلي للبطن والرقبة، والعجان. فرك الحيوان بالكحول 70% تليها بوفيدون ثلاث مرات. مكان الفئران على لوح جراحية ساخنة في موقف ضعيف. تطبيق مرهم العين الطبيب البيطري وتبديل التخدير مخروط الآنف مع الأكسجين 2.5% إيسوفلوراني و 0.8 لتر في الدقيقة كالناقل.
ملاحظة: قم بضبط مستوى isoflurane والأكسجين تحقيق مستوى مقبول من التخدير.
3-إعداد بريسورجيكال
- القيام بالإجراءات الجراحية بأكملها تحت مجهر جراحي: تكبير تتراوح بين 3.15 X 20 X غير كافية. استخدام قفازات والحفاظ على بيئة نظيفة طوال عملية جراحية. وضع الفئران في ثني.
4-تشريح العضلات إيشيوكافيرنوسوس لقياس برنامج المقارنات الدولية
- استخدام المبضع، ومقص مستقيم ومنحني دومون #7 الملقط الصغير جعل من 1 سم عمودي الجانبي 5 مم شق الجلد على خط الوسط ابتداء من مستوى قاعدة القضيب وتوسيع النزولي (الشكل 2A). استخدم قطن وتفصل بعناية الجانبي اللفافة إلى الصفن (الشكل 2). وبعد تشريح اللفافة، إرفاق الكامشات وجس مع القطن-مقلوب-مبادلة للعثور على الاحدوبه إيشيال (الشكل 2).
- تشريح من خلال الآنسي الأنسجة الدهنية لهذه النقطة حتى يتم تصور العضلات إيشيوكافيرنوسوس (الشكل 3A). استخدام زوج من الملقط الصغير منحنى دومون #7 وفصل طوليا في العضلات. سوف تظهر الباجينا الغلالة كبنية بيضاء مشرقة (الشكل 3B). استخدام الملقط الصغير ومقص الصغرى، تعرض albuginea الغلالة على نحو كاف لمعرفة مساره (الشكل 3).
- وبعد معايرة إعدادات أنظمة، إدراج الأنابيب عن طريق الجلد على العجان، مع التأكد من أنه يتم تشغيله في موازاة ساق القضيب (الشكل 4). اترك السطر في المكان والحفاظ على الشق رطبة مع المالحة.
5-CN تشريح للتحفيز
- جعل سم 2 السفلي، شق البطن خط الوسط عن طريق الجلد باستخدام، أولاً، مشرط، ومن ثم على زوج من مقص مستقيم والملقط الصغير. إنشاء شق مطابقة من خلال اللفافة على طول ينيا ألبا وأنسجة العضلات الأساسية لفضح المثانة والبروستاتا.
- استخدام الكامشات لتحقيق التعرض جيدة. استخدام مسحات القطن-نصيحة لفصل البروستاتا من الأنسجة الدهنية للحصول على تصور واضح للعقدة الحوض الرئيسية (ميلا في الغالون) و CN، يعمل على الجانب دورسولاتيرال من البروستات (الشكل 5).
- بعد التصور ميلا في الغالون و CN، بعناية جداً اللفافة السطحية العصبية 2-5 مم البعيدة لميلا في الغالون مع مقص الزاوية الصغرى (الشكل 6a). باستخدام الملقط الصغير #5، تنتشر الأنسجة على كل جانب للعصب وتحته لتحرير جزء طويل 4 ملم (الشكل 6b)، والشريحة خياطة 9-0 تحت العصب (الشكل 6 ج).
- رفع العصب قليلاً بمساعدة الخياطة (الشكل 7 أ) لتسهيل إيداع هوكس القطب بين القطبين حول العصب (الشكل 7). واسمحوا مزيج مساعد الغراء السيليكون المكون الثاني مع غيض من الأنسولين إبرة الجاف 5 س. العصب وتطبيق الغراء للمنطقة المحيطة خطاف والعصب (الشكل 7 ج، د). الحفاظ على العصب مرتفعة عن طريق سحب قليلاً على مسرى لحوالي 1 دقيقة للسماح للغراء لتجف.
- إزالة الكامشات، باستثناء الكامشات على الجانب الأيمن لتجنب أي سحب أو التواء القطب. الرطب أجهزة مكشوفة مع شاش المالحة والعلمانيين غارقة في المياه المالحة على الشق.
6-مجوف الجسم كانوليشن لقياس برنامج المقارنات الدولية
- استعادة تصور albuginea الغلالة باستخدام الكامشات. تأكد من عدم إرفاق الكامشات للعضلات إيشيوكافيرنوسوس حيث أنها سوف تشوه الساق.
- إرفاق الإبرة وتدفق الأنابيب مع هيبارينيزيد المالحة قبل إدخاله في الباجينا الغلالة. تبقى من albuginea الغلالة امتدت، استخدام الملقط الصغير منحنى دومون #7 في يد واحدة (غير المهيمنة)، عقد albuginea الغلالة وبقية العضلات السطحية البعيدة إلى نقطة الإدراج. اضغط الإبرة بالملقط الصغير مباشرة في اليد الأخرى المهيمنة وتأكد من إدخال فإنه بالتوازي مع مسار الجسم الكهفي (الشكل 8).
- ادفع الإبرة 5-8 مم داخل الجسم الكهفي. دافق الأنابيب واضغط الساق لاختبار الخط (الشكل 9). تأكد من أنه لا يوجد أي تسرب. ربط الأنابيب إلى الجدول مع الشريط لمنع سحب عرضي على الخط. قم بإزالة الكامشات.
7-الحث على CN
- مع تسجيل البرنامج (مثلاً، 2 سبايك) قيد التشغيل، سجل باستمرار الضغط الشرياني إينتراكافيرنوس ويعني.
- تعيين المعلمات التالية على مشجعا (مثلاً، SD9 العشب الصكوك، انظر الجدول للمواد) لتحفيز CN: الحالية 1.5 mA، والتردد في 16 هرتز، والجهد في 3 الخامس، وعرض النبض في السيدة 5 s 50 تطبيق التحفيز مع الحد أدنى من 1 دقيقة من الراحة بين التحفيز.
ملاحظة: التحفيز الأولى عادة ما يؤدي إلى تناقص استجابة (الشكل 10).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
الاستخدام هذا البروتوكول باستخدام الإعدادات الموصى بها تحفيز، تحت التخدير استنشاق مع الأكسجين 2.0% isoflurane 0.8 لتر في الدقيقة، ينبغي أن تسفر عن نتائج كما هو مبين في الشكل 11 و الرقم12، حيث يوجد العديد من العودة إلى الوراء يظهر التحفيز بين 75-80 مم زئبق الرقم 13 نفس الاستجابة مستقرة على حفز 20 دقيقة مع الاستجابة مستقرة في 73-77 ملم زئبق. اختبار الخط لقياس برنامج المقارنات الدولية بيغ الأنبوب والتنصت على الساق (الشكل 9). الاستجابة السريعة إلى خط الأساس هو السمة المميزة لخط وضع جيد. إذا كان تالفاً سلامة albuginea الغلالة، الاختبار سيؤدي انخفاض ذروة الضغط وبطء الاستجابة مرة أخرى إلى خط الأساس بعد التنظيف والتنصت، واستجابة تقلص عند تنشيط (الشكل 14). كما سيكون هناك تسرب كلوريد الصوديوم هيبارينيزيد عند التنظيف والنزيف خلال التحفيز.
أنواع ومستويات تخدير، فضلا عن استخدام الأوكسجين أثرا كبيرا في برنامج المقارنات الدولية. الرقم 15 يوضح تأثير مستويات مختلفة من إيسوفلوراني على برنامج المقارنات الدولية، مع تناقص استجابة وأقل استقرارا الهضبة. مع إيسوفلوراني في 2%، كان هناك استجابة مستقرة في قياس برنامج المقارنات الدولية مع التحفيز متعددة على 78 مم زئبق. زيادة تركيز isoflurane إلى 3.5 ٪، ومع ذلك، نتج عنه انخفاض سرعة 50% إلى 34 ملم زئبق في متعددة، التحفيز اللاحقة. وقد لوحظ نفس التأثير عند التبديل بين إيسوفلوراني من 2.0 في المائة إلى 3.0 في المائة، حيث ينخفض نسبة 19% استجابة لوحظ، ومن 2.5 في المائة إلى 5 في المائة، حيث تنخفض سرعة أكثر استجابة من 70% كان ينظر. ضغط الدم مستقرا طوال جميع التحفيز. في الفئران تخديره باستخدام التخدير isoflurane/الأكسجين أثناء الجراحة والتحفيز الأولية، الذين تلقوا ثم 25% الجرعة الموصى بها من شيفتشنكو/الميدازولام (في حين أوقف في إيسوفلوراني)، كان هناك استجابة مستقرة على نحو مماثل ولكن وزادت بنسبة 25% خلال التخدير شيفتشنكو/الميدازولام مقارنة مع إيسوفلوراني (الشكل 16).
زادت إدارة أكسجين عن طريق الآنف مخروط تشبع الأكسجين في الدم من 61-75 ٪ إلى 99-100% في حوالي 20 ثانية. عندما أوقف الأوكسجين، النقصان نفسه كان ينظر على مدى ما يقرب من 1 دقيقة ضغط الدم مستقرة في جميع أنحاء التحفيز، ولكن الإدارة الأكسجين عن طريق الآنف مخروط (0.8 لتر/دقيقة) كان لها تأثير كبير على قياس برنامج المقارنات الدولية الحد الأقصى، الحد من قبل 35-45% في التحفيز التعاقب (الشكل 17).
الشكل 1 . القطبين قطب الفضة المغلفة تفلون. (A) الغراء فقاعة في منطقة الانتقال بين مسرى مصقول وغير مصقول. (ب) ديستال سم 2 القطب براديد محكم. (ج) خطاطيف غير المصقول موازية 1 ملم بعيداً. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 2 . تشريح للجسم الكهفي – المعالم. (أ) عمودي 1 سم شق الجلد، الانخفاض الجانبي 2 مم الانطلاق من قاعدة القضيب. (ب) فصل الجانبي اللفافة إلى الصفن باستخدام مسحات القطن ذات الرؤوس. (ج) عرض الحقل التشغيل بعد وضع الكامشات (م: عضلة هرمية، فإنه: نقطة الإدراج من ساق إلى الاحدوبه إيشيال). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3 . تعريض albuginea الغلالة- (أ) عضلة إيشيوكافيرنوسوس (السهم). (ب) الغلالة albuginea (السهم). (ج) طاقة منخفضة التكبير عرض مسار الجسم الكهفي. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 4 . خط لتسجيل الضغط كهفي. إبرة عن طريق الجلد على العجان تعمل بالتوازي مع الجسم الكهفي (السهم). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 5 . التعرض لميلا في الغالون تميزت بالسهم و CN تشغيل عمودي على الجانب دورسولاتيرال البروستاتا. الرئيسية الحوض العقدة (ميلا في الغالون) تميز بالسهم، العصب الكهفي (CN). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الرقم 6 . تشريح العصب الكهفي. (أ) قطع اللفافة تغمر العصب الكهفي مع المقص الصغير. (ب) فصل العصب من الأنسجة الكامنة وراء استخدام الملقط الصغير. (ج) وضع حرف مزدوج 9-0 تحت العصب. الرئيسية الحوض العقدة (ميلا في الغالون) تميز بالسهم، العصب الكهفي (CN). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 7 . ربط العصب. (أ) رفع العصب عن طريق سحب بلطف على الخياطة. (ب) العصب يستريح في خطاطيف القطب. (ج) العصب وقطب مجمع معزولة مع الغراء السليكون متوافق حيويا. (د) فقاعة الغراء إضافية تضاف إلى عزل تماما مجمع العصب الكهربائي. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 8 . Cannulation albuginea الغلالة. ز 23 إبرة متصلة بأنابيب PE-50 إدراجها في الباجينا الغلالة. نقطة الإدراج التي تميزت بالسهم. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الرقم 9 . اختبار خط إينتراكافيرنوس- الردود التي ينظر إليها مع موضع خط صحيح. ملاحظة التنظيف من الخط، واستجابة للتنصت على الساق. أيضا، نلاحظ انخفاض الضغط السريع مرة أخرى إلى خط الأساس. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الرقم 10 . الأولى الردود على تحفيز العصب الكهفي. تناقص الاستجابة الأولى. تحفيز أول 50 ملم زئبق وهضبة متقلبة. التحفيز الثانية والثالثة من 66 ملم زئبق. وسجلت القياسات التالية على المستوى العادي في 73 ملم زئبق. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الرقم 11 . تكرار تسجيل الضغط إينتراكافيرنوس وتحفيز العصب الكهفي. عرض استقرار النتائج باستخدام هذا البروتوكول. عشرة التحفيز التعاقب بين 75-78 ملم زئبق. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الرقم 12 . تحفيز العصب الكهفي وتسجيل الضغط. حوالي 30 من التحفيز التعاقب مع < 6 مم زئبق تقلب في الضغط. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الرقم 13 . التحفيز المستمر التي استمرت 20 دقيقة زيادة التقلبات في النهاية، ولكن التحفيز اللاحقة، بعد راحة 1 دقيقة، تنتج استجابة مستقرة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الرقم 14 . تسرب albuginea الغلالة- استجابة طويلة مرة أخرى إلى خط الأساس بعد التنظيف والتنصت. انخفاض استجابة بعد التحفيز. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الرقم 15 . تأثير جرعة التخدير على الضغط إينتراكافيرنوس- انخفض واستجابة أكثر تقلب على زيادة isoflurane مقارنة استجابة مستقرة على 2% في الأول اثنين، والتحفيز الثلاث الأخيرة. التتبع الأزرق أعلى عرض ثابت يعني الضغط الشرياني. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الرقم 16 . تأثير نوع التخدير على الضغط إينتراكافيرنوس- إجراء التحفيز الأولية تحت إظهار التخدير isoflurane بزيادة ضغط من 80 ملم زئبق، متى كانت تدار شيفتشنكو/الميدازولام وكانت هناك زيادة في استجابة إلى 110 مم زئبق. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الرقم 17 . تأثير الأكسجين في الإدارة من خلال مخروط الآنف. وقف الإدارة الأكسجين عن طريق الآنف مخروط أدت إلى تخفيض كبير في زيادة الضغط مجوف مع تحفيز العصب الكهفي. وذكر أي تأثير على متوسط الضغط الشرياني (أزرق تتبع أعلاه). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الرقم 18 . تأثير التيار الكهربائي على الضغط الاستجابة للتحفيز. الجهد بين 1.5-6 V تنتج استجابة ضغوط مماثلة. الاستجابة تتضاءل أدناه 1.5 V. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
وكان الهدف الرئيسي لهذه الدراسة لوصف تقنية جراحية مبسطة من ساق القضيب كانوليشن لتسجيل برنامج المقارنات الدولية والعزلة من CN اليكتروستيموليشن. ادخلنا تعديلات على التشريح للجسم الكهفي لتبسيط عملية جراحية وتوفير تسجيلات استنساخه من الزيادة في برنامج المقارنات الدولية مع تحفيز CN. مع شق جلد عمودي 1 سم، الجانبية لقاعدة للقضيب، باستخدام الاحدوبه إيشيال ملموسة كالتوجيه، حققنا التعرض جيدة من الباجينا العضلات والغلالة إيشيوكافيرنوسوس. هذا الإجراء أسرع (تحت 15 دقيقة) من تلك الموصوفة في الأدب وأسباب الأنسجة الحد الأدنى تعطل2،3،4.
هذه التقنية المستخدمة حاليا لحفز CN ويشمل تركيب، رفع، وتجفيف CN قبل كل اليكتروستيموليشن التطبيقية10. هذا الأسلوب لا يضمن بقاء الشروط نفسها بالنسبة لكل التحفيز. أيضا، رفع العصب يتطلب استخدام ميكرومانيبولاتور وتكرار التمدد وتحرير العصب، مما قد يؤدي إلى نيوروبراكسيا. بالمقارنة مع تقنية التحفيز CN الحالية، استعمال الغراء السليكون متوافق حيويا لعزل مجمع العصب الكهربائي يقلل من تواتر الأعصاب تمتد إلى حالتين؛ مرة واحدة إلى مكان مسرى القطبين حول العصب، ومرة لعزل العصب والكهربائي باستخدام الغراء. وبعد ذلك، يمكن إجراء نيوروستيموليشنز متعددة دون الحاجة إلى التلاعب العصب.
إدخال الإبرة في الجسم الكهفي لتسجيل الضغط يشكل خطوة حاسمة. يجب على المستخدمين الجدد لهذا الأسلوب ممارسة هذا الجزء قبل بدء التجارب. عند نشر الإبرة إلى الساق، من الأهمية بمكان أن تمتد الساق وتنتشر الإبرة موازية لمسارها. أن الخطوة الحاسمة الأخرى هو عصب المناولة خلال التشريح من الأنسجة المحيطة بها وموضع القطب تحتها. حين تسلخ نفسها ليست مهمة صعبة، يمكن أن يؤدي أي امتداد أو سحق العصب في الضرر. لدينا تعديل هذه الخطوة يجعل الحاجة ميكرومانيبولاتور لا لزوم لها، ويبسط معالجة العصب. يقلل استخدام الغراء السليكون متوافق حيويا لعزل العصب وتوفير اتصال مستقر وموثوق به بين الكهربائي والعصب التلاعب بالضرورة. يمكن أيضا استخدام غراء السيليكون في نماذج حيوانية أخرى حيث يتم تطبيق في فيفو نيوروستيموليشن.
تحفيز المعلمات المسرودة في العديد من الدراسات تتراوح بين 14-20 هرتز و 1.5-12 V11،،من1314. وأظهرت هذه التقنية أن التحفيز باستخدام 1.5 نبض mA، 16 هرتز، 3 الخامس، و 5 مللي ثانية تنتج استجابة كاملة. ومع زيادة تحفيز المعلمات، لا يزيد برنامج المقارنات الدولية (الشكل 18). وهذا يوحي بأن التحفيز باستخدام أية معلمات، التي فوق العتبة لتحريك الشرياني (الشريان كهفي)، استرخاء العضلات الملساء أرتيريولار وجيبيه، تكفي لتحريك المعاكسة، وسيسفر عن كامل الفسيولوجية استجابة. الزيادة اللاحقة في التردد، السعة، أو عرض النبض لا يؤدي إلى استجابة فسيولوجية أقوى، وأنه يمكن أن تستنفد العصبية أو حتى يسبب إصابة العصب. مع المعلمات الموصوفة أعلاه، كنا قادرين على تحقيق استجابة استنساخه بفترة راحة قصيرة 30 ثانية أكثر من 40 مرة في صف واحد.
ويؤثر على عمق التخدير وضوح الاستجابة الفسيولوجية. مع التخدير استنشاق، أنه يمكن أيضا التحكم في، لكن الاستجابة الذروة هو حوالي 25% أقل من ذلك، بالمقارنة مع التخدير شيفتشنكو/الميدازولام تدار عن طريق الحقن. لاحظنا أن جرعة isoflurane يمكن أن يكون الحفاظ على المستوى يحدده تركيز isoflurane الحد الأدنى اللازم للقضاء على أخمص القدمين قرصه استجابة. تستخدم معظم المحققين، حقن التخدير مع الصوديوم بينتوباربيتال شيفتشنكو/الميدازولام، الكيتامين/إكسيلازيني أو الميدازولام الكيتامين/15.
وذكرت أيا من المقالات المنشورة استخدام الأوكسجين التي تسيطر عليها. وتظهر نتائج هذه الدراسة أن هذا كان له أثر كبير على برنامج المقارنات الدولية. ولذلك، من المهم حصول الحيوان على الأكسجين عن طريق الآنف مخروط، بغض النظر عن نوع من التخدير المستخدمة،.
استخدام الفئران مفيد بسبب حجمها ومرونتها. سواء في الدراسات المنشورة سابقا، وأكدت في هذا البحث، أظهرت الفئران "سبراغ داولي" أن يكون استجابة سليمة لتحفيز CN في المجموعة من 6-12 أسابيع من العمر ووزنها 200-550 غ. استخدام الفئران أكثر تحديا، ولكن الفائدة المستحقة على توافر التكنولوجيا المعدلة وراثيا12.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
Acknowledgments
المؤلفين قد لا شكر وتقدير.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Adson forceps | Fine Science Tool | 11006-12 | |
| Dumont #7 forceps | Fine Science Tool | 11271-30 | |
| Dumont #5 forceps | Fine Science Tool | 11273-20 | |
| ToughCut Mayo scissor | Fine Science Tool | 14110-15 | |
| Miniature Vannas Spring scissor | Fine Science Tool | 15006-09 | |
| Ultra Fine Hemostat | Fine Science Tool | 13020-12 | |
| Crile Hemostat | Fine Science Tool | 13004-14 | |
| Kwik-Sil Adhesive | World Precision Instruments | KWIK-SIL | |
| Teflon coated silver wire 0.125 mm | World Precision Instruments | AGT0510 | |
| Elastic wire retractors | Custom made | ||
| Scalpel blade | Fine Science Tool | 10023-00 | |
| PE-50 tubing | Warner Instruments | 64-0753 | |
| 23 G Needle | Kruuse | 121272 | |
| SD-9 Square Pulse Stimulator | Somatco | 1077/183 | |
| Blood pressure transducer and cable | World Precision Instruments | BLPR2 | |
| Raucotupf Cotton-tipped Applicators | Lohmann-Raucher | 11966 | |
| Pro-ophta Ocular Sticks | Lohmann-Raucher | 16515 | |
| NaCl 0,9 % 100 mL | Local pharmacy | ||
| Heparin | Local pharmacy | ||
| 25 mL Syringe | Odense University Hospital | ||
| Vet eye ointment - Viscotears | Local pharmacy | ||
| silver wires | Science Products GmbH, Heidelberg, Germany | ||
| Silicon Glue | Kwik-Sil, World Precision Instruments, Sarasota, FL, USA |
References
- Eckhard, C. Untersuchungen über die Erektion des Hundes In: Beiträge zur Anatomie und Physiologie. , Vol. Band III Giessen: Ferber 123-166 (1863).
- Quinlan, D. M., Nelson, R. J., Partin, A. W., Mostwin, J. L., Walsh, P. C. The rat as a model for the study of penile erection. J Urol. 141 (3), 656-661 (1989).
- Heaton, J. P., Varrin, S. J., Morales, A. The characterization of a bio-assay of erectile function in a rat model. J Urol. 145 (5), 1099-1102 (1991).
- Martinez-Pineiro, L., et al. Rat model for the study of penile erection: pharmacologic and electrical-stimulation parameters. Eur Urol. 25 (1), 62-70 (1994).
- Hayashi, N., et al. The effect of FK1706 on erectile function following bilateral cavernous nerve crush injury in a rat model. J Urol. 176 (2), 824-829 (2006).
- Burnett, A. L., Becker, R. E. Immunophilin ligands promote penile neurogenesis and erection recovery after cavernous nerve injury. J Urol. 171 (1), 495-500 (2004).
- Yamashita, S., et al. Nerve injury-related erectile dysfunction following nerve-sparing radical prostatectomy: a novel experimental dissection model. Int J Urol. 16 (11), 905-911 (2009).
- Burnett, A. L., et al. GGF2 is neuroprotective in a rat model of cavernous nerve injury-induced erectile dysfunction. J Sex Med. 12 (4), 897-905 (2015).
- Lin, H., et al. Nanoparticle Improved Stem Cell Therapy for Erectile Dysfunction in a Rat Model of Cavernous Nerve Injury. J Urol. 195 (3), 788-795 (2016).
- Kapoor, M. S., Khan, S. A., Gupta, S. K., Choudhary, R., Bodakhe, S. H.
- Mehta, N., Sikka, S., Rajasekaran, M. Rat as an animal model for male erectile function evaluation in sexual medicine research. J Sex Med. 5 (6), 1278-1283 (2008).
- Cellek, S., Bivalacqua, T. J., Burnett, A. L., Chitaley, K., Lin, C. S. Common pitfalls in some of the experimental studies in erectile function and dysfunction: a consensus article. J Sex Med. 9 (11), 2770-2784 (2012).
- Chung, E., De Young, L., Brock, G. B. Investigative models in erectile dysfunction: a state-of-the-art review of current animal models. J Sex Med. 8 (12), 3291-3305 (2011).
- Mullerad, M., Donohue, J. F., Li, P. S., Scardino, P. T., Mulhall, J. P. Functional sequelae of cavernous nerve injury in the rat: is there model dependency. J Sex Med. 3 (1), 77-83 (2006).
- Albersen, M., et al. Injections of adipose tissue-derived stem cells and stem cell lysate improve recovery of erectile function in a rat model of cavernous nerve injury. J Sex Med. 7 (10), 3331-3340 (2010).
