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Medicine

प्लेटलेट आधान में Microparticles के लिए नियमित जांच विधि

Published: January 31, 2018 doi: 10.3791/56893
Automatic Translation
1, 2, 1, 1,3,4
1Research & Development, LightIntegra Technology Inc., 2Quality Engineering & Regulatory, LightIntegra Technology Inc., 3Department of Pathology and Laboratory Medicine; Center for Blood Research, University of British Columbia, 4Canadian Blood Services

Summary

प्लेटलेट सूची प्रबंधन प्लेटलेट में स्क्रीनिंग microparticle सामग्री पर आधारित ध्यान केंद्रित अस्पताल रक्त बैंकों में एक नई गुणवत्ता सुधार की पहल है । प्लेटलेट का उपयोग ऑप्टिमाइज़ करने के लिए गैर-सक्रिय प्लेटलेट्स से सक्रिय अंतर करने के लिए लक्ष्य है । रुधिर-ऑन्कोलॉजी रोगियों को गैर सक्रिय प्लेटलेट्स प्रदान करने दुर्दम्य बनने के लिए अपने उच्च जोखिम को कम कर सकते हैं ।

Abstract

प्लेटलेट सूची प्रबंधन के आधार पर प्लेटलेट में स्क्रीनिंग microparticle सामग्री ध्यान केंद्रित अस्पताल रक्त बैंकों के लिए एक नई गुणवत्ता सुधार पहल है । microparticles (MP) से कक्ष अंश जब वे तनावग्रस्त हैं । रक्त और रक्त घटकों कोशिकाओं की एक किस्म से सेलुलर टुकड़े हो सकते हैं, सबसे विशेष रूप से सक्रिय प्लेटलेट्स से. जब जन्मजात प्रतिरक्षा कोशिकाओं और जमावट और रक्तस्तम्भन में प्रमुख खिलाड़ियों के रूप में अपनी भूमिकाओं प्रदर्शन, प्लेटलेट्स आकार बदलने के लिए और microparticles उत्पन्न करते हैं । गतिशील प्रकाश बिखरने (DLS) आधारित microparticle का पता लगाने के साथ, यह (उच्च microparticle) सक्रिय चढ़ाए में गैर सक्रिय (कम microparticle) प्लेटलेट्स से अंतर करने के लिए संभव है, और इस दुर्लभ रक्त उत्पाद के उपयोग का अनुकूलन. पिछले शोध से पता चलता है कि रुधिर-ऑन्कोलॉजी रोगियों में नियत्रंण उपयोग के लिए गैर सक्रिय प्लेटलेट्स प्रदान दुर्दम्य बनने के अपने जोखिम को कम करने और रोगी देखभाल में सुधार हो सकता है । इस स्क्रीनिंग विधि के लक्ष्य को नियमित रूप से गैर सक्रिय प्लेटलेट्स से सक्रिय अंतर है । यहां वर्णित विधि एक अस्पताल रक्त बैंक में नियमित प्लेटलेट सूची प्रबंधन के लिए किया जा करने के लिए कदम रूपरेखा: एक प्लेटलेट चढ़ाए से एक नमूना प्राप्त करने, DLS माप के लिए केशिका में नमूना लोड हो रहा है, DLS परीक्षण करने के लिए प्रदर्शन microparticles की पहचान, और सक्रिय प्लेटलेट्स की पहचान करने के लिए रिपोर्ट microparticle सामग्री का उपयोग.

Introduction

microparticles में रुचि कोशिका के लिए सेल संचार और जैविक प्रक्रियाओं में उनकी भागीदारी के आसपास ज्यादातर घूमती है । 1 , 2 , 3 अधिक हाल ही में, microparticles भी संभावित स्व-प्रतिरक्षित और हृदय रोगों के प्रारंभिक नैदानिक मार्कर के रूप में रुचि को आकर्षित किया है । 4 , 5 Microparticles, भी extracellular बुलबुले या exosomes के रूप में जाना जाता है, व्यापक रूप से प्रवाह cytometry द्वारा जांच की गई है । दुर्भाग्य से, पारंपरिक प्रवाह cytometry प्रोटोकॉल का मानकीकरण करने के प्रयासों के बावजूद वहां इष्टतम प्रोटोकॉल का उपयोग करने पर कोई आम सहमति है । ६ , 7 , 8 , 9 , 10

हालांकि पारंपरिक प्रवाह cytometry विशिष्ट सांसद उपआबादी को चिह्नित कर सकते हैं,11 यह कई सीमाओं की सूचना दी है । 11 , 12 , 13 , 14 इन सीमाओं में से कुछ में उच्च शक्ति पराबैंगनीकिरण और डिटेक्टरों का उपयोग करके संबोधित किया गया है एक तथाकथित "छोटे कणों विकल्प",15,16 के रूप में के रूप में अच्छी तरह से 15 डिग्री पर पता लगाने-25 ° आगे तितर बितर कोण और संशोधित म्यान दबाव . 17 , 18 फिर भी, एक त्वरित और आसान करने के लिए उपयोग स्क्रीनिंग विधि है कि इन परिष्कृत तरीकों के साथ संयुक्त किया जा सकता है अभी तक जल्दी नैदानिक मार्कर के रूप में microparticles उपयोग की जरूरत है । microparticles का ऊंचा स्तर सामान्य रक्त दाताओं19 के बारे में एक तिहाई में जासूसी कर रहे हैं और उपनैदानिक स्थितियों का संकेत हो सकता है. नतीजतन, दान रक्त उत्पादों में उच्च microparticle स्तर कमजोर प्राप्तकर्ताओं के साथ असंगत हो सकता है । 20

जब प्लेटलेट चढ़ाए प्रदान, वहां गैर प्रतिरक्षा refractoriness का खतरा है-एक शर्त है जिसमें एक मरीज के शरीर को लगातार चढ़ाए खारिज कर देता है और प्लेटलेट्स के एक महत्वपूर्ण हिस्से को प्रसारित करने की अनुमति नहीं है । 21 , 22 गैर प्रतिरक्षा refractoriness व्यर्थ चढ़ाए में परिणाम कर सकते हैं, रोगियों के लिए स्वास्थ्य जटिलताओं, और विस्तारित अस्पताल रहता है । microparticles की उच्च संख्या से युक्त 23 प्लेटलेट आधान कमजोर रुधिर-ऑन्कोलॉजी रोगियों में गैर प्रतिरक्षा refractoriness के विकास के लिए एक योगदान कारक हो सकता है । 20 यह microparticles के लिए स्क्रीनिंग द्वारा प्लेटलेट चढ़ाए की संरचना के अनुसार प्लेटलेट सूची प्रबंधन जिससे कमजोर रोगियों के लिए जोखिम को कम करने के लिए संभव है । हालांकि, सबसे microparticle परीक्षण प्लेटलेट्स से microparticles के अलगाव की आवश्यकता होती है5,12 या अंयथा बहुत श्रम गहन24,25 और इसलिए अस्पताल में नियमित रूप से लागू नहीं किया जा सकता है रक्त बैंकों ।

तकनीक यहां वर्णित गतिशील प्रकाश कैटरिंग (DLS) का उपयोग करता है-यह भी फोटॉन सहसंबंध स्पेक्ट्रोस्कोपी या अर्ध लोचदार प्रकाश बिखरने के रूप में जाना जाता है । दशकों के लिए, गतिशील प्रकाश बिखरने दवा उद्योग में बड़े पैमाने पर इस्तेमाल किया गया है liposomal दवा योगों या पायस जहां कण आकार उप माइक्रोन रेंज में है विशेषताएं । 26 , 27 हालांकि, इन अनुप्रयोगों के लिए विकसित उपकरण स्क्रीन रक्त उत्पादों के लिए अनुकूलित नहीं कर रहे हैं । एक नई DLS प्रणाली को तकनीकी सीमाओं पर काबू पाने और गतिशील प्रकाश छितराना प्लेटलेट आधान की स्क्रीनिंग के लिए उपयोगी बनाने के लिए विकसित किया गया था । 28

गतिशील प्रकाश बिखरने माप लेजर प्रकाश के साथ निलंबित कणों रोशन और निलंबन में चलती कणों का एक परिणाम है जो बिखरे हुए प्रकाश तीव्रता के समय भिन्नता का विश्लेषण द्वारा प्रदर्शन कर रहे हैं. इसके अलावा, इस विधि कण गति और आकार के बीच व्युत्क्रम संबंध का उपयोग करता है-छोटे कणों चाल तेजी से और बड़े कणों धीरे कदम-आकार वितरण और नमूना घटकों के सापेक्ष सांद्रता के बारे में जानकारी प्रदान करने के लिए । DLS का प्रयोग, मतलब microparticle सामग्री और microparticle घटक का मतलब त्रिज्या मात्रा जा सकता है । रक्त उत्पाद में microparticles की सामग्री ५०-५५० एनएम से कण radii के लिए मापा हिस्टोग्राम में क्षेत्र के आधार पर% MP के रूप में दिया जाता है । जबकि ५० एनएम के नीचे radii के साथ कणों DLS द्वारा पता लगाया और DLS प्रणाली द्वारा सूचित कर रहे हैं, वे% MP में शामिल नहीं हैं । प्लेटलेट्स से microparticles को अलग करने के बजाय, प्लेटलेट चढ़ाए जाने वाले विविधता के एक नमूने में microparticles और प्लेटलेट्स की सापेक्षिक सामग्री के आधार पर निर्धारित किया जाता है । वास्तव में, प्लेटलेट और microparticle चोटियों के अनुपात में प्लेटलेट काउंट ज्ञात होने पर निरपेक्ष सांसद एकाग्रता की गणना करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । 19

DLS प्रणाली microparticles मानव रक्त या रक्त उत्पादों से व्युत्पंन नमूनों में पाया के बारे में गुणात्मक और मात्रात्मक जानकारी के साथ स्वास्थ्य देखभाल पेशेवरों प्रदान करता है । प्रवाह cytometry, इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी,29 nanoparticle ट्रैकिंग विश्लेषण के रूप में वैकल्पिक तकनीकों पर वर्णित DLS तकनीक का मुख्य लाभ30 या स्वरित्र प्रतिरोधक पल्स सेंसिंग31 नमूना तैयारी है: प्लेटलेट के aliquots ध्यान सीधे प्लेटलेट्स, नमूना कमजोर पड़ने या अन्य संशोधनों से सांसद को अलग करने की आवश्यकता के बिना मापा जा सकता है । 9 , 17 इसके अलावा, DLS एक निरपेक्ष आकार देने की विधि है और उचित अपवर्तन सूचकांक के साथ अंशांकन मोतियों की कमी से ग्रस्त नहीं है । 14 , ३२

प्लेटलेट सक्रियण और सांसद सामग्री के बीच एक सहसंबंध पहले माइक्रोस्कोपी द्वारा दिखाया गया है३३,20 और रोग की स्थिति में सांसद सामग्री में वृद्धि से आस्थगित किया जा सकता है15,३४, ३५ , ३६ और के अंतर्गत इन विट्रो शर्तों प्लेटलेट्स सक्रिय करने के लिए जाना जाता है । 19 , ३७ , ३८ हालांकि, आगे के अध्ययनों को पूरी तरह से DLS-मापा microparticle सामग्री और प्लेटलेट सक्रियण के संबंध को समझने की जरूरत है । हमारे वर्तमान ज्ञान के आधार पर कि सक्रिय प्लेटलेट्स microparticles की उच्च संख्या होते हैं, वे सबसे अच्छा सक्रिय रूप से खून बह रहा रोगियों के चिकित्सीय उपचार के लिए उपयोग किया जाता है३९, जबकि रुधिर-ऑन्कोलॉजी रोगियों गैर से लाभ सक्रिय microparticles का कोई या निम्न स्तर के साथ प्लेटलेट्स20। यह हाल ही में बताया गया है कि इन विट्रो में दाता प्लेटलेट्स की प्रतिक्रिया काफी वसूली और स्थिर करने के लिए एक आधान में इन प्लेटलेट्स के अस्तित्व को प्रभावित नहीं किया, ज्यादातर गैर-रक्तस्राव रुधिर-ऑन्कोलॉजी रोगियों४० . इस खोज से, यह निष्कर्ष निकाला जा सकता है कि प्लेटलेट सक्रियकरण उच्च सांसद सामग्री द्वारा की पहचान भी रोगियों के नियत्रंण उपचार में कोई महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है । हालांकि, रोगियों के संकीर्ण चयन के कारण, इस अध्ययन जटिल रोगियों जो ज्वर (अध्ययन से बाहर रखा जाता है) के लिए दाता कारकों के प्रभाव का पता नहीं था, स्थिर नहीं है और कई सिर्फ एक से अधिक प्राप्त प्लेटलेट चढ़ाए । सवाल है कि इन मरीज के मामलों की जटिलता को कैसे कम किया जा सकता है-जो refractoriness को कम करने का वादा रखती है-अनुत्तरित रहता है.

Microparticles सूजन के प्रारंभिक मार्करों४१,४२,४३,४४ और प्लेटलेट सक्रियण४५ हैं और इसलिए कई सामान्य दाताओं में पाया जाता है । 19 नतीजतन प्लेटलेट्स डोनेशन में एक्टिवेट प्लेटलेट्स और microparticles मौजूद होते हैं । यह परिकल्पना करने के लिए उचित है कि बुखार के साथ रोगियों, यानी, एक पूरी तरह से सक्रिय जन्मजात प्रतिरक्षा प्रणाली, सक्रिय प्लेटलेट्स की एक चढ़ाए की अतिरिक्त चुनौती बर्दाश्त नहीं कर सकता । हालांकि, इस परिकल्पना को साबित करने के लिए पढ़ाई जरूरी है । Microparticle स्क्रीनिंग प्लेटलेट चढ़ाए की सामग्री के बारे में वर्तमान अनिश्चितता को कम करने और रोगी के इलाज की जटिलता में कमी कर सकते हैं ।

एक अस्पताल के रक्त बैंक में गैर सक्रिय प्लेटलेट्स के लिए सक्रिय का अनुपात मुख्य रूप से दाता जनसंख्या पर और परिवहन, विकिरण, रोगज़नक़ निष्क्रियता और अन्य प्रक्रियाओं है कि प्लेटलेट सक्रियण में वृद्धि हो सकती है पर एक बहुत कम डिग्री करने के लिए निर्भर करता है केंद्रित. संयुक्त राज्य अमेरिका में प्रमुख अस्पताल रक्त बैंकों से 19 डेटा दिखाया गया है कि प्लेटलेट सूची की औसत संरचना ४९% सक्रिय और ५१% गैर सक्रिय (सक्रिय प्लेटलेट्स के लिए सीमा: ३८-६२%, व्यक्तिगत संचार) है । यदि रक्त उत्पाद प्रदाताओं या अस्पताल के रक्त बैंकों को पता है कि कितने सक्रिय और गैर सक्रिय प्लेटलेट पर ध्यान केंद्रित वे उत्पादन या प्राप्त करना चाहते हैं, और microparticle सामग्री द्वारा संकेत के रूप में प्लेटलेट सक्रियण के आधार पर अपनी सूची का प्रबंधन करना चाहते हैं, यह प्रोटोकॉल उनके लिए उपयुक्त हो सकता है ।

प्लेटलेट संरचना के आधार पर एक अस्पताल के रक्त बैंक नियत्रंण उपयोग और सक्रिय, विषम प्लेटलेटों के लिए चिकित्सीय उपयोग के लिए गैर सक्रिय, सजातीय प्लेटलेट्स प्रत्यक्ष करने में सक्षम हो जाएगा । प्लेटलेट स्क्रीनिंग अस्पतालों उपलब्ध सूची है जो रोगी की देखभाल में सुधार और लागत कम हो जाती है के उपयोग को अधिकतम करने के लिए अनुमति देता है । इस प्रोटोकॉल प्रयोगशाला कर्मियों जो बुनियादी हैंडलिंग और रक्त उत्पादों के हेरफेर से परिचित है के लिए करना है ।

यहां प्रस्तुत प्लेटलेट आधान में microparticles के लिए एक स्क्रीनिंग विधि है कि नियमित रूप से अस्पताल के रक्त बैंक सूची का प्रबंधन जहां microparticle सामग्री पर आधारित उत्पाद का चयन वांछनीय है लागू किया जा सकता है । इस प्रोटोकॉल का उद्देश्य दान की गई प्लेटलेट्स की स्क्रीनिंग के लिए DLS के कार्यांवयन और मूल्यांकन को रेखांकित करना है । वर्णित प्रोटोकॉल गैर इनवेसिव नमूने, रक्त बैंक कार्य प्रवाह में परीक्षण के एकीकरण के लिए उपयोग के आम सवालों के पते, और प्रदर्शन विशेषताओं ।

Protocol

निंन प्रोटोकॉल सभी कनाडाई रक्त सेवाओं (CBS) दिशानिर्देशों के अनुपालन में किया गया है । स्वयंसेवकों ने सहमति दी कि उनके दान का इस्तेमाल इन अध्ययनों को लेकर किया जा सकता है. प्लेटलेट ध्यान सीबीएस मानक संचालन प्रक्रियाओं के अनुसार तैयार किया गया । सभी प्रदर्शन परीक्षण यहां वर्णित ब्रिटिश कोलंबिया, वैंकूवर, कनाडा के विश्वविद्यालय में रक्त अनुसंधान के लिए केंद्र में संस्थागत अनुसंधान नैतिकता बोर्ड की मंजूरी के साथ किया गया था ।

1. गुणवत्ता नियंत्रण की जांच

  1. DLS सिस्टम के उचित संचालन को सत्यापित करने के लिए प्रति परीक्षण दिन में एक बार गुणवत्ता नियंत्रण जांच करें । उपयोग के लिए निर्माता के निर्देश के बाद दिए गए नियंत्रण मोतियों (५० एनएम त्रिज्या) को मापने ।
  2. कोल्ड स्टोरेज से कंट्रोल शीशी निकालते हैं और 15 मिनट कमरे के तापमान को गर्म करने की अनुमति देते हैं । मोतियों का उपयोग करने से पहले कमरे के तापमान के लिए equilibrate चाहिए ।
  3. DLS प्रणाली बारी से पहले नमूना तैयार करने के लिए तो 15 मिनट लेजर गर्म अवधि के समय पहला नमूना परीक्षण के लिए तैयार है द्वारा पूरा हो गया है ।
  4. एक बार कंसोल शुरू हो गया है, में प्रवेश करें और नियंत्रण के नमूने को मापने के लिए सिस्टम परीक्षण विकल्प का चयन करने के लिए टच स्क्रीन पर निर्देशों का पालन करें ।
  5. भंवर 10 एस के लिए शीशी मिश्रण एक प्रतिनिधि नमूना सुनिश्चित करने के लिए ।
  6. एक १०० µ l निश्चित मात्रा पिपेट, परीक्षण किट से पिपेट टिप और केशिका का उपयोग कर नियंत्रण मोतियों के साथ एक केशिका भरें ।
  7. जब परीक्षण पूरा हो गया है DLS प्रणाली की स्क्रीन पर निर्देशों का पालन करें ।
    नोट: नियंत्रण मनका परीक्षण के परिणाम स्वचालित रूप से नियंत्रण मनका बारकोड लेबल में संग्रहीत जानकारी की तुलना में है और एक पास या विफल अधिसूचना के रूप में अच्छी तरह के रूप में नमूना जानकारी परीक्षण के अंत में DLS प्रणाली स्क्रीन पर दिखाए जाते हैं ।

2. एक प्लेटलेट ध्यान से एक नमूना प्राप्त करने

नोट: इन चरणों के लिए प्रक्रिया का वर्णन गैर इनवेसिव प्लेटलेट चढ़ाए से नियमित प्लेटलेट सूची प्रबंधन के लिए DLS परीक्षण केशिका में नमूना । ओवरव्यू चित्र 1में दिखाया जाता है । आवश्यक सामान: ट्यूब मुहर, मैनुअल ट्यूब खाल उधेड़नेवाला, कैंची, और छप शील्ड ।

  1. प्लेटलेट ध्यान untested सूची से निकालें ।
  2. या तो एक अप्रयुक्त नमूना थैली से प्लेटलेट उत्पाद का नमूना प्राप्त करें (२.३ कदम के लिए आगे बढ़ना) या एक टयूबिंग खंड (२.४ कदम अगर खाली या चरण २.५ खाली नहीं तो) के लिए आगे बढ़ना ।
    थैली टयूबिंग या टयूबिंग खंड डिस्कनेक्ट करने के लिए एक ट्यूब मुहर का उपयोग करें । ट्यूब मुहर को संचालित करने के लिए, निर्माता के निर्देशों का पालन करें । संक्षेप में, टयूबिंग दबाना दो गर्म जबड़े के बीच एक सटीक स्थिति में बंद हो । एक handheld उपकरण में, एक साथ पिघला हुआ टयूबिंग प्रेस और उच्च दबाव के तहत शांत जबकि लीवर (अवधि हरी बत्ती द्वारा संकेत दिया है) एक स्थाई, रिसाव प्रूफ सील में जिसके परिणामस्वरूप ।
  3. एक थैली से सैंपलिंग
    1. 5 एस के लिए कोमल क्षैतिज आंदोलन द्वारा अच्छी तरह से प्लेटलेट बैग की सामग्री मिश्रण (अंत से tipping पांच बार समाप्त करने के लिए) ।
    2. थैली को दबाना खोलो । पाउच खाली है और खुद से भरना होगा । यह थैली पूरी तरह से भरने के लिए आवश्यक नहीं है के रूप में केवल १०० µ एल नमूना DLS परीक्षण के लिए आवश्यक हो जाएगा ।
    3. गर्मी से बैग से थैली डिस्कनेक्ट एक ट्यूब मुहर के साथ जोड़ने टयूबिंग सील । चरण 3 से जारी रखें ।
  4. खाली टयूबिंग से नमूना
    1. सत्यापित करें कि प्लेटलेट बैग टयूबिंग खाली संग्रहीत किया गया है और टयूबिंग ब्लॉक जगह में अभी भी है । विजुअली ट्यूबिंग में प्लेटलेट ध्यान केंद्रित की एक महत्वपूर्ण राशि नहीं है कि सत्यापित करने के लिए टयूबिंग का निरीक्षण किया । टयूबिंग खाली नहीं है, तो चरण २.५ के साथ जारी रखें ।
    2. टयूबिंग पर ट्यूब खाल उधेड़नेवाला के रूप में संभव के रूप में करने के लिए रोलर्स के बीच ट्यूबिंग निचोड़ संभालती संपीड़ित द्वारा टयूबिंग ब्लॉक के करीब ।
    3. बैग खड़ी लटका और खाल उधेड़नेवाला संभालती compressing रखो ।
    4. जबकि खाल उधेड़नेवाला बंद रखते हुए, टयूबिंग ब्लॉक जारी ।
    5. धीरे से खाल उधेड़नेवाला नीचे खाली टयूबिंग के लिए अनुमति टयूबिंग के लिए धीरे खाल उधेड़नेवाला के पीछे भरने के लिए खींचना । खाल उधेड़नेवाला नीचे अनुभाग पूरी तरह से फुलाया जब तक या खाल उधेड़नेवाला टयूबिंग के अंत के 1 इंच के भीतर है जब तक जारी रखें ।
    6. एक बार रोक बिंदु खाल उधेड़नेवाला के साथ पहुंच गया है, ट्यूब मुहर का उपयोग करने के लिए हीट टयूबिंग 1 इंच खाल उधेड़नेवाला के ऊपर सील ।
    7. मैनुअल ट्यूब खाल उधेड़नेवाला के हैंडल जारी.
    8. हीट सील फिर से 1 से 2 इंच पिछले मुहर के ऊपर परीक्षण खंड बनाने के लिए ।
    9. टेस्टिंग सेगमेंट को प्लेटलेट यूनिट से काट लें । इस सेगमेंट का इस्तेमाल DLS टेस्टिंग के लिए किया जाएगा ।
  5. टयूबिंग से नमूना है कि खाली नहीं है
    1. बैग खड़ी लटका और अगर जगह में टयूबिंग ब्लॉक जारी ।
    2. नेत्रहीन ट्यूबिंग का निरीक्षण करने के लिए निर्धारित अगर कोई महत्वपूर्ण ठोस झुरमुट हैं । अगर ठोस झुरमुट मौजूद हैं, उनके ऊपर सील ऐसे कि वे बैग में नहीं छीन सकते हैं ।
    3. टयूबिंग पर ट्यूब खाल उधेड़नेवाला के रूप में संभव के रूप में ट्यूबिंग के सील अंत के करीब बंद करो ।
    4. बैग में टयूबिंग की सामग्री पट्टी के लिए रोलर्स के बीच टयूबिंग निचोड़ संभालती है और, जबकि clamping बल बनाए रखने, बैग की ओर टयूबिंग के साथ ट्यूब खाल उधेड़नेवाला कदम ।
    5. हैंगिंग हुक से प्लेटलेट बैग निकालें और धीरे से 5 एस के लिए बैग को मिलाकर इसे अंत से इत्तला देकर पांच बार अंत तक खाल उधेड़नेवाला बंद रखते हुए.
    6. खाल उधेड़नेवाला बंद रखते हुए बैग खड़ी लटका ।
    7. धीरे से खाली टयूबिंग नीचे खाल उधेड़नेवाला खींच, टयूबिंग के लिए अनुमति धीरे खाल उधेड़नेवाला के पीछे भरने के लिए । खाल उधेड़नेवाला नीचे अनुभाग पूरी तरह से फुलाया जब तक या खाल उधेड़नेवाला टयूबिंग के अंत के 1 इंच के भीतर है जब तक जारी रखें ।
    8. एक बार रोक बिंदु खाल उधेड़नेवाला के साथ पहुंच गया है, ट्यूब मुहर का उपयोग करने के लिए हीट टयूबिंग 1 इंच खाल उधेड़नेवाला के ऊपर सील ।
    9. खाल उधेड़नेवाला रिलीज ।
    10. हीट सील फिर से 1 से 2 इंच पिछले मुहर के ऊपर परीक्षण खंड बनाने के लिए ।
    11. बंद कट और टयूबिंग के पिछले हिस्से को त्यागें ।
    12. टेस्टिंग सेगमेंट को प्लेटलेट यूनिट से काट लें । इस सेगमेंट का इस्तेमाल DLS टेस्टिंग के लिए किया जाएगा ।

3. DLS परीक्षण केशिका में नमूना भरना

  1. एक छप ढाल और स्वच्छ, सूखी कैंची का प्रयोग, थैली टयूबिंग या परीक्षण खंड के एक छोर में कटौती ।
    नोट: DLS परीक्षण के लिए इस्तेमाल केशिका तुरंत भरा जाना चाहिए ।
  2. नमूना उपकरण का उपयोग करके केशिका भरें (इकट्ठे १०० µ l निश्चित मात्रा पिपेट, पिपेट टिप और केशिका) नमूने को केशिकाओं में खोला थैली या टयूबिंग खंड से सीधे आकर्षित करने के लिए.
  3. कोमल मोड़ और ट्रे के खिलाफ कुछ दबाव लागू करते हुए केशिका ट्यूब सीलेंट में भरा केशिका धक्का धीरे से भर केशिका के नीचे सील ।
  4. १०० µ l निश्चित मात्रा पिपेट और टिप केशिका से डिस्कनेक्ट करें, केशिका मजबूती से केशिका ट्यूब सीलेंट में एम्बेडेड रहता है सुनिश्चित.
  5. केशिका ट्यूब सीलेंट ट्रे से केशिका निकालें, एक isopropyl शराब पैड के साथ पोंछ और यह सुनिश्चित करें कि कोई हवा बुलबुले धीरे केशिका के नीचे झाड़ने से फंस रहे हैं ।
  6. केशिका DLS प्रणाली में रखें ।

4. DLS परीक्षण प्रदर्शन

  1. एक प्लेटलेट नमूने की microparticle सामग्री को मापने के लिए एक नया DLS परीक्षण शुरू करने के लिए सांसद परीक्षण विकल्प का चयन करें ।
  2. बारकोड स्कैनर या मैन्युअल का उपयोग करके नमूना जानकारी (दान पहचान संख्या (ISBT), संग्रह/उत्पादन समाप्ति दिनांक और उत्पाद कोड) दर्ज करें ।
  3. कोई उत्पाद कोड DLS प्रणाली तरल पदार्थ मध्यम जानकारी निकाल सकते हैं, जिसमें से उपलब्ध है, तो मैन्युअल रूप से उपयुक्त द्रव माध्यम का चयन करें (सबसे प्लेटलेट के लिए ध्यान केंद्रित प्लाज्मा का चयन करें लेकिन प्लेटलेट Additive समाधान (क़दम) युक्त नमूनों के लिए, दर्ज करें अवशिष्ट प्लाज्मा का प्रतिशत) ।
    नोट: नाममात्र ६५% से क़दम प्रतिशत में एक छोटा सा विचलन चिपचिपापन में एक छोटी सी त्रुटि का कारण होगा (स्वचालित रूप से DLS प्रणाली द्वारा गणना) जो ंयूनतम परिकलित सांसद त्रिज्या पर प्रभावित करता है, लेकिन नहीं% सांसद ।
  4. निर्देश और परीक्षण शुरू जब DLS प्रणाली में केशिका प्लेस ।
  5. जब परीक्षण पूरा हो गया है, केशिका धारक से नमूने को हटाने और उपभोग्य सामग्रियों के निपटान के उचित सुविधा के दिशा निर्देशों के अनुसार । नमूना केशिका धारक से निकालें और उपभोग्य सामग्रियों के निपटान के उचित सुविधा दिशानिर्देशों के अनुसार ।
  6. परिणाम के लिए इसी रंग के साथ प्लेटलेट बैग टैग, उदाहरण के लिए नारंगी गैर सक्रिय (सजातीय) के साथ% सांसद के बराबर या नीचे 15% और के लिए गुलाबी 15% से ऊपर% सांसद के साथ सक्रिय (विषम) के लिए ।

Figure 1
चित्र 1 : विधि ओवरव्यू. एक अस्पताल रक्त बैंक में नियमित प्लेटलेट सूची प्रबंधन के लिए किया जा करने के लिए चरणों का अवलोकन: एक प्लेटलेट ध्यान से एक नमूना प्राप्त करने, DLS माप के लिए केशिका में नमूना लोड हो रहा है, microparticles की पहचान करने के लिए DLS परीक्षण प्रदर्शन और रिपोर्ट microparticle सामग्री का उपयोग करने के लिए सक्रिय प्लेटलेट्स की पहचान । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Representative Results

औसत तैयारी समय
एक DLS प्रणाली का उपयोग प्लेटलेट स्क्रीनिंग प्रक्रिया चित्रा 1में संक्षेप है । प्लेटलेट्स रक्त आपूर्तिकर्ता से प्राप्ति के समय DLS प्रणाली के साथ परीक्षण किया जाता है । के रूप में विस्तृत तालिका 1 में, प्रशिक्षित उपयोगकर्ताओं के लिए औसत तैयारी समय है 2 मिनट 23 एस जबकि साफ अप और बाद परीक्षण कार्य बार 14 एस और ४६ एस, क्रमशः हैं । कुल में, औसत उपयोगकर्ता 3 मिनट लगते है और हाथ के 23 एस-परीक्षण के अनुसार समय पर ।

गतिविधि सक्रिय समय चले टेस्टिंग टाइम कुल
DLS प्रणाली तैयार 14 एस
नमूना उपकरण इकट्ठा 28 एस
सेगमेंट प्राप्त करें ५२ s
केशिका और शुरू परीक्षण भरें ४९ s
5 min
साफ-सुथरा 14 एस
टैग और सूची प्लेटलेट बैग ४६ s
प्रति नमूना कुल समय की जरूरत 3 मिनट 23 एस 5 min 8 मिनट 23 एस

तालिका 1: सक्रिय परीक्षण समय ब्रेकडाउन. परीक्षण ही एक दूर 5 मिनट की एक औसत अवधि के साथ परीक्षण चलना है । औसत उपयोगकर्ता एक परीक्षण के लिए DLS प्रणाली तैयार करने के लिए 3 मिनट 23 एस लेता है, प्राप्त करने और इस प्रोटोकॉल के बाद एक नमूना परीक्षण, और प्लेटलेट बैग टैग.

परिशुद्धता
DLS प्रणाली की परिशुद्धता तीन microparticle स्तर, 0-7%, 12-25% और 28-75% पर मूल्यांकन किया गया था । % MP की नैदानिक प्रासंगिक श्रेणी 3-75% है । दो ऑपरेटरों के समानांतर में दो DLS प्रणालियों पर 16 ऑपरेटिंग दिनों के लिए कम, मध्यम, और उच्च नियंत्रण के नमूने का परीक्षण किया । नमूनों में नकल का परीक्षण किया गया, लेकिन प्रत्येक परीक्षण दिवस पर यादृच्छिक क्रम में.

तालिका 2 प्लेटलेट्स के सापेक्ष प्रतिशत Microparticles (% MP) के लिए DLS माप के भीतर-डिवाइस शुद्धता को संक्षिप्त करता है ।

Microparticle सामग्री
कम मध्यम उच्च
मतलब% MP (%) ४.४ १९.५ ५३.८
मानक विचलन (%) १.८ २.६ ५.८
सीवी (%) ४०.४ १३.२ १०.६

तालिका 2: प्रतिशत Microparticles (% MP) के भीतर-डिवाइस शुद्धता. बहुत कम microparticle सामग्री छोटे प्लेटलेट्स कम microparticle सामग्री नमूनों के लिए बढ़ी हुई परिवर्तनशीलता में जिसके परिणामस्वरूप% MP में योगदान कर सकते हैं ।

तालिका 3 50-550 एनएम के बीच औसत microparticle त्रिज्या के लिए DLS माप के भीतर डिवाइस परिशुद्धता से पता चलता है ।

Microparticle सामग्री
कम मध्यम उच्च
मतलब त्रिज्या (एनएम) ३३१ १६१ १८८
मानक विचलन (मिमी) १३३ ४१ 25
सीवी (%) ४०.१ २५.२ १३.५

तालिका 3: microparticle त्रिज्या के भीतर-डिवाइस परिशुद्धता. बहुत कम microparticle सामग्री छोटे प्लेटलेट्स कम microparticle सामग्री नमूने के लिए बढ़ी हुई परिवर्तनशीलता में जिसके परिणामस्वरूप Microparticles (% MP) प्रतिशत करने के लिए योगदान कर सकते हैं ।

तालिका 4 प्रतिशत Microparticles (% MP) के लिए DLS मापन की reproducibility दिखाता है ।

Microparticle सामग्री
कम मध्यम उच्च
मतलब% MP (%) ४.४ २९.२ ५३.६
Reproducibility (%) १.५ २.३ 5
सीवी (%) ३५ ११.८ ९.४

तालिका 4: Reproducibility प्रतिशत Microparticles (% MP) के लिए डायनेमिक लाइट कैटरिंग (DLS) माप की ।

linearity
चित्रा 2 से पता चलता है कि DLS परिणाम रैखिक हैं, यानी, नमूनों की नियत मूल्यों के संबंध में एक सीधी रेखा फिट. सात नमूने अलग microparticle सामग्री के साथ तैयार किया गया । उच्च (mp7) और कम (mp1) microparticle सामग्री और मिलान प्लेटलेट एकाग्रता के साथ नमूने तैयार किए गए थे और मध्यवर्ती नमूनों (mpx) बनाने के लिए विभिन्न अनुपात में मिश्रित । नमूनों के साथ परीक्षण किया गया प्रवाह cytometry के रूप में वर्णित पहले19 और DLS और प्रत्येक एकाग्रता पर% सांसद परिणाम इनपुट और आउटपुट के रूप में प्लॉट किए गए थे । निर्धारण का गुणांक ०.९८५ होना पाया गया. निम्न और उच्च microparticle सामग्री के लिए DLS हिस्टोग्राम के उदाहरण चित्रा 3एमें दिखाए जाते हैं. DLS परिणाम प्रवाह cytometry (चित्रा 3बी) द्वारा पुष्टि की गई ।

Figure 2
चित्र 2 : प्रवाह cytometry और DLS परिणामों की तुलना. प्रवाह Cytometry (इनपुट) और DLS (आउटपुट) द्वारा निर्धारित% MP के बीच रेखीय संबंध, खुला प्रतीक ○ द्वारा चिह्नित दो नमूनों से मूल DLS डेटा आरेख 3में दिखाए जाते हैं । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 3
चित्र 3 : सक्रिय और गैर सक्रिय प्लेटलेट्स के बीच अंतर करने के लिए सामग्री Microparticle. (क) सक्रिय प्लेटलेट्स में सांसद सामग्री के DLS परिणाम (डैश्ड लाइन) गैर-सक्रिय प्लेटलेट्स (ठोस लाइन) में 4% की तुलना में ५७% था । परीक्षण ३७ ° c, १.०६ x10 के प्लाज्मा चिपचिपापन सेटिंग-3 Pa · s, और 200-600 kHz के बीच कुल तीव्रता सेटिंग्स के एक माप तापमान पर प्रदर्शन किया गया । (A) में दिखाए गए के रूप में एक ही नमूने के (ख) प्रवाह cytometry परिणाम (पहले19वर्णित के रूप में प्राप्त); आगे तितर बितर हिस्टोग्राम P1 और P2 में क्रमशः सांसद और प्लेटलेट गेट्स का प्रतिनिधित्व करते हैं; सक्रिय प्लेटलेट्स के लिए (बाएँ) घटनाओं के ७६% गैर सक्रिय प्लेटलेट्स के लिए 6% की तुलना में सांसद के गेट में गिर गया (सही). रेखीय प्रतीपगमन रेखा लगातार उच्च परिणामों के लिए अग्रणी प्रवाह cytometry द्वारा% MP के लिए पृष्ठभूमि शोर का एक निरंतर सापेक्ष योगदान पता चलता है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

विशिष्ठता व्यवधान/
मानकीकरण के लिए अंतर्राष्ट्रीय संगठन (ISO) एक माप प्रक्रिया की क्षमता के रूप में विश्लेषणात्मक विशिष्टता को परिभाषित करता है का पता लगाने या केवल measurand को मापने के लिए जबकि नमूना में मौजूद अन्य मात्राएं हैं । microparticle स्क्रीनिंग के विश्लेषणात्मक विशिष्टता लाल रक्त कोशिकाओं (आरबीसी) से प्रभावित हो सकता है । DLS उपाय सांसद प्लेटलेट सामग्री के सापेक्ष सामग्री । आरबीसी हस्तक्षेप हो सकता है क्योंकि आरबीसी के कैटरिंग योगदान प्लेटलेट्स के बिखरने योगदान में शामिल है, सांसद के सापेक्ष योगदान को कम करने । रक्त उत्पादों में स्वीकार्य आरबीसी सामग्री के लिए विनियामक सीमाएं मौजूद हैं; प्लेटलेट में स्वीकार्य आरबीसी एकाग्रता के लिए AABB द्वारा सिफारिश की दहलीज के एक रूढ़िवादी रूपांतरण ध्यान केंद्रित-प्लेटलेट्स की एक इकाई में पैक आरबीसी के 2 मिलीलीटर-८.० x10 में10 कोशिकाओं/l (मांयताओं: आरबीसी मात्रा ८.५ x10 है-14एल, पैक्ड आरबीसी की हेमाटोक्रिट ६८% है, प्लेटलेट यूनिट की मात्रा २०० मिलीलीटर है) । रिपोर्ट अवशिष्ट आरबीसी विभिंन उत्पादों में सांद्रता अच्छी तरह से इस दहलीज४६से नीचे हैं ।

तीन विभिन्न दानदाताओं ने तीन स्वतंत्र प्रयोगों के लिए, पात्र के रूप में, दो भिन्न दिनों पर प्लेटलेट्स और लाल रक्त कोशिकाएं (आरबीसी) दान किए. प्लेटलेट में प्रारंभिक आरबीसी सामग्री ध्यान केंद्रित (संदर्भ नमूना) ०.०५-०.१५ x109 कोशिकाओं/एल के रूप में एक hemocytometer के साथ निर्धारित किया गया था । पांच अतिरिक्त नमूने spiking द्वारा बनाए गए थे-आरबीसी में ज्ञात मात्रा प्लेटलेट ध्यान के aliquots में; लक्ष्य इन नमूनों में आरबीसी स्तर १.०, ५.०, 10, ४० और ८० x109 कोशिकाओं/

लाल रक्त कोशिकाओं के हस्तक्षेप की दहलीज लगभग १.० x1010 कोशिकाओं/एल (चित्रा 4), जो भी स्तर पर लाल रक्त कोशिकाओं की उपस्थिति नेत्रहीन स्पष्ट था (चित्रा 5) के साथ संबंधित था. इस स्तर के ऊपर,% MP आंका गया था जिसका अर्थ है कि नेत्रहीन लाल नमूनों में-जो कि हीमोग्लोबिन के बजाय आरबीसी होते हैं-रिपोर्ट की गई microparticle सामग्री भी कम होगी.

Figure 4
चित्र 4 :% सांसद (DLS) और आरबीसी एकाग्रता के बीच रैखिक संबंध (कोशिकाओं/ ०.१ x10 के आरबीसी सांद्रता में वृद्धि9, १.० x109, ५.० x109, १.० x1010, ४.० x1010, और ८.० x1010 कक्षों/L (बाएं से दाएं) 3 स्वतंत्र प्रयोगों से (○ प्रयोग 1, ● प्रयोग 2, □ प्रयोग 3, रैखिक प्रतीपगमन पंक्तियाँ प्रत्येक प्रयोग के लिए दिखाए जाते हैं) । ऊपर १.० x1010 आरबीसी/% MP का अनुमान लगाने की ओर जाता है । आरबीसी युक्त नमूनों का दृश्य प्रकटन चित्रा 5में दिखाया गया है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 5
चित्र 5 : आरबीसी युक्त नमूनों का दृश्य प्रकटन । ०.१ x109, १.० x109, ५.० x109, १.० x1010, ४.० x1010, और ८.० x1010 कोशिकाओं के आरबीसी सांद्रता युक्त प्लेटलेट नमूनों की लालिमा बाएं से दाएं/ कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

सटीकता
शुद्धता किसी एकल माप परिणाम और नमूना करने के लिए असाइन किया गया एक सही मात्रा मान के बीच अंतर के रूप में परिभाषित किया गया है । इस माप त्रुटि माप पूर्वाग्रह और एक मानक विचलन द्वारा अनुमानित एक यादृच्छिक घटक द्वारा अनुमानित एक व्यवस्थित घटक शामिल हैं । इस प्रकार, एक माप परिणाम की सटीकता सत्यता और परिशुद्धता का एक संयोजन है.

एक मनका मानक DLS परीक्षण की सटीकता का निर्धारण करने के लिए इस्तेमाल किया गया था । सटीकता 3-75% सांसद की परख के नैदानिक प्रासंगिक रेंज के भीतर दो सांद्रता में मूल्यांकन किया गया था । संदर्भ मनका मिश्रण ज्ञात सांद्रता के नमूनों को तैयार करने के लिए इस्तेमाल किया गया क्योंकि संदर्भ मोती एक ज्ञात आकार और एकाग्रता है । नतीजतन, संदर्भ मोती वांछित कण आकार और सांद्रता के साथ नमूनों को प्राप्त करने के लिए मिलाया जा सकता है ।

एक १२५ एनएम त्रिज्या के साथ मानक polystyrene मोतियों के साथ microparticles और मोतियों का प्रतिनिधित्व करने के लिए इस्तेमाल किया गया १.५ µm त्रिज्या प्लेटलेट्स का प्रतिनिधित्व करने के लिए इस्तेमाल किया गया । microparticle परख की सटीकता लगभग 20% और ५०% सांसद सामग्री के मनका मिश्रण के साथ मूल्यांकन किया गया । मापा कण radii की सटीकता की तुलना में कण radii संदर्भ मोतियों के लिए विश्लेषण के प्रमाण पत्र पर प्रलेखित किया गया था के रूप में तालिका 5में दिखाया गया है ।

१२५ एनएम मोती १.५ µm मोती
विश्लेषण प्रमाण पत्र विश्लेषण प्रमाण पत्र
20% सांसद ५०% मप 20% सांसद ५०% मप
मतलब त्रिज्या १२२.० ११३.८ १२४.४ १.५ १.६ १.६०
एसटीडी देव ४.५ २.८३ ३.६ ०.०३५ ०.०६ ०.०७
अनुवादित ३.६०% २.४८% २.८९% २.२०% ३.७४% ४.०५%
सटीकता ६.७०% २.००% ६.५०% ६.३०%

तालिका 5: डायनेमिक लाइट कैटरिंग (DLS) माप की सटीकता. १२५ एनएम त्रिज्या और १.५ मिश्रण में µm त्रिज्या के साथ मोतियों के लिए विश्लेषण के प्रमाण पत्र के खिलाफ DLS परिणाम के लिए आकार तुलना ।

Discussion

इस प्रोटोकॉल microparticle स्क्रीनिंग के लिए एक गतिशील प्रकाश बिखरने विधि का वर्णन उच्च कण ऐसे प्लेटलेट ध्यान केंद्रित के रूप में जैविक नमूनों में पाया सांद्रता के लिए अनुकूलित । DLS की विधि स्वाभाविक रूप से सही आकार मापने के लिए मानकीकृत है । प्लेटलेट एकाग्रता जाना जाता है और प्लेटलेट पीक क्षेत्र संदर्भ पीक19के रूप में प्रयोग किया जाता है, तो microparticles के सापेक्ष एकाग्रता एक निरपेक्ष एकाग्रता में परिवर्तित किया जा सकता है । के रूप में प्लेटलेट सांद्रता आमतौर पर रुधिर विश्लेषक या प्रवाह cytometers के साथ प्राप्त कर रहे है इन तरीकों DLS को साथी प्रौद्योगिकियों माना जा सकता है ।

DLS प्रणाली की कार्यक्षमता नियमित रूप से नियंत्रण मोती चलाने के द्वारा बीमा है । आसुत जल कि पृष्ठभूमि शोर कम है सत्यापित करने के लिए मापा जा सकता है । व्यावसायिक रूप से उपलब्ध प्लेटलेट मानकों के रूप में सांसद के रूप में विश्लेषण किया जा सकता है-नकारात्मक नियंत्रण और, १२५ एनएम त्रिज्या मोतियों के अलावा, सांसद के रूप में सकारात्मक नियंत्रण. ब्याज की सांसद सांद्रता की जैविक सीमा के भीतर, प्रक्रियाओं व्यावहारिक और रक्त बैंक दिनचर्या के भाग के रूप में प्रदर्शन करने के लिए जल्दी कर रहे हैं ।

के रूप में cytometry प्रवाह का विरोध किया, इस विधि कणों के छितराना तीव्रता लेकिन बल्कि उनके Brownian गति की गति की तुलना पर आधारित नहीं है । इस प्रकार, exosomes भी अपने छोटे आकार के बावजूद पता लगाया जा सकता है और सांसद से अलग रिपोर्ट कर रहे हैं ।

एक स्क्रीनिंग उपकरण के रूप में बनाया गया है, इस विधि की सीमाएं microparticles के विभिंन प्रकारों के बीच अंतर करने के लिए अपनी अक्षमता से संबंधित हैं । अतिरिक्त अलगाव कदम का उपयोग किया जाता है, तो सुधार के लिए संभावित कमरे है; नमूनों से पहले और microparticles के विशिष्ट हटाने एंटीबॉडी के माध्यम से चुंबकीय मनका कब्जा युग्मित के बाद परीक्षण किया जा सकता है । इसके अलावा, यह नहीं माना जा सकता है कि सभी पया microparticles सेल व्युत्पन्न हैं क्योंकि hyperlipidemia में गठित chylomicrons में४७,४८ और छोटे बैक्टीरिया या वायरस6 भी microparticle रेंज में रिपोर्ट किए जाएंगे । हालांकि, अंय सुरक्षा के लिए रक्त की आपूर्ति के भीतर मौजूद अत्यधिक lipemic या दूषित प्लेटलेट्स से बचने के लिए अस्पताल रक्त बैंक सूची में प्रवेश ।

नमूना में थक्कारोधी का चुनाव प्लेटलेट सक्रियण की सीमा को प्रभावित करता है और इसलिए सांसद सामग्री४९ विभिंन उत्पादों की तुलना के लिए इस पहलू पर विचार करने की जरूरत है । इसके अलावा, इस तरह के क़दम के रूप में सांसद मुक्त निलंबन मीडिया के साथ प्लाज्मा के आदान प्रदान सांसद सामग्री और विविधता निर्धारित करने के लिए दहलीज को प्रभावित करेगा-अगर केवल मूल सांसद सामग्री के बारे में एक तिहाई ध्यान केंद्रित में अवशिष्ट प्लाज्मा के भीतर छोड़ दिया है तदनुसार कम सांसद सामग्री दहलीज १००% प्लाज्मा में के रूप में प्लेटलेट सक्रियण के एक ही स्तर का संकेत होगा । परसेंट mp प्लेटलेट्स के सापेक्ष मप्र कंटेंट है । यह पहले बताया गया था कि प्राधान्य उत्पाद की औसत प्लेटलेट काउंट कम था जिससे औसत% MP अभी भी ९.५%19था । यूएस में लाइसेंस प्राप्त क़दम प्लेटलेट्स के लिए% MP थ्रेशोल्ड वर्तमान में 10% पर सेट है ।

जबकि प्लेटलेट में मप्र का प्राथमिक स्रोत ध्यान केंद्रित करता है दाता, प्रक्रियाओं है कि प्लेटलेट्स के लिए तनाव का कारण मप्र स्तर को तनाव के लिए प्लेटलेट्स की संवेदनशीलता के आधार पर वृद्धि होगी-यदि प्लेटलेट्स पहले से ही अत्यधिक सक्रिय हैं, मामूली तनाव जैसे विस्तारित शेल्फ जीवन, रोगज़नक़ निष्क्रियता, धुलाई, विकिरण या लंबी दूरी की परिवहन सांसद सामग्री में उल्लेखनीय वृद्धि करने के लिए नेतृत्व कर सकता है । इन तनावों में से कोई भी काफी सजातीय, गैर सक्रिय प्लेटलेट्स19प्रभावित दिखाया गया है । इसके अलावा, ध्यान केशिका के भीतर नमूना संरचना में परिवर्तन के लिए क्षमता का भुगतान किया जाना चाहिए अगर तैयारी के बाद तुरंत परीक्षण नहीं (इस प्रोटोकॉल के चरण 3 के पूरा होने) ।

इस प्रोटोकॉल का ध्यान प्लेटलेट चढ़ाए में मौजूद कणों की संरचना का निर्धारण करने और प्लेटलेट सक्रियण के microparticles के रूप में उपयोग करने पर है । प्लेटलेट आधान या तो गैर सक्रिय (नारंगी) या सक्रिय (गुलाबी) के रूप में 15% की एक microparticle प्रतिशत सीमा के आधार पर टैग कर रहे हैं । १००% प्लाज्मा में प्लेटलेट्स के लिए 15% सांसद की दहलीज empirically कई साइटों से औसत ६६वें प्रतिशत के रूप में निर्धारित किया गया था.

DLS के साथ नियमित microparticle स्क्रीनिंग पर आधारित प्लेटलेट इन्वेंट्री प्रबंधन का उद्देश्य गैर-प्रतिरक्षा प्लेटलेट refractoriness को रोकने के द्वारा रोगी की देखभाल और ड्राइव लागत क्षमता में सुधार करना है । प्लेटलेट बैग की स्क्रीनिंग के लिए DLS प्रणाली के कार्यांवयन उपयोगकर्ता प्लेटलेट refractoriness विकसित करने के लिए जोखिम में सबसे अधिक रोगी आबादी के लिए गैर सक्रिय प्लेटलेट्स प्रत्यक्ष करने के लिए सक्षम हो जाएगा ।

Disclosures

ईएमएस microparticle और प्लेटलेट गुणवत्ता परीक्षण के लिए ThromboLUX प्रणाली विकसित करने के लिए एक चिकित्सा उपकरण कंपनी LightIntegra प्रौद्योगिकी इंक के संस्थापक है । अन्य सभी लेखक LightIntegra टेक्नोलॉजी के कर्मचारी हैं. उत्पादन और इस लेख के लिए नि: शुल्क उपयोग LightIntegra प्रौद्योगिकी इंक द्वारा प्रायोजित कर रहे है

Acknowledgments

हम रक्त दाताओं और कनाडा के रक्त सेवा नेटवर्क केंद्र में संग्रह और इस अध्ययन में इस्तेमाल किया प्लेटलेट के उत्पादन के लिए एप्लाइड डेवलपमेंट के लिए कर्मियों को धंयवाद । हम नवाचार के लिए कनाडा फाउंडेशन स्वीकार करते है और स्वास्थ्य अनुसंधान के लिए माइकल स्मिथ फाउंडेशन रक्त अनुसंधान के लिए UBC केंद्र में बुनियादी सुविधाओं के लिए वित्त पोषण के लिए । प्रकाशन के लिए धन LightIntegra प्रौद्योगिकी इंक, ThromboLUX के निर्माता द्वारा प्रदान किया गया था ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
ThromboLUX-M LightIntegra Technology Inc.  LPN120 DLS System
ThromboSight Software LightIntegra Technology Inc.  LPN124 DLS analysis software
Capillaries LightIntegra Technology Inc. (included in test kit, vendor Optinova MLE) LPN065 Custom extruded non-activating, non-birefringent plastic tube, inspected and irradiated
MiniPet  LightIntegra Technology Inc. (included in test kit, vendor TriContinent Scientific) LPN082 100 µL fixed volume pipette for sampling  
MicroFlex 1-200 µL Pipette tips LightIntegra Technology Inc. (included in test kit, vendor ESBE Scientific) LPN080 Pipette tips for sampling
Critoseal  LightIntegra Technology Inc. (included in test kit, vendor Fisher Scientific) LPN075 Capillary Tube Sealant
Dukal Alcohol Pad or equivalent LightIntegra Technology Inc. (included in test kit, vendor Dukal Corp.) LPN085 Isopropyl pad (saturated with 70% isopropyl alcohol)
Control beads, 50 nm radius LightIntegra Technology Inc. (included in test kit, vendor PolySciences Inc.) LPN128 Control beads
Microbead NIST Traceable Particle Size Standard, 3 µm PolySciences Inc. 64060 Standard microbeads: 1.5 µm radius Polystyrene beads; range 1.43-1.58 µm; 1% solids suspensions in de-ionized water
Nanobead NIST Traceable Particle Size Standard, 250 nm PolySciences Inc. 64014-15 Standard nanobeads: 125 nm radius Polystyrene beads; range 120 - 130 nm; 1% solids suspensions in de-ionized water
Genesis BPS RapidSeal II or equivalent Genesis BPS 428-SE640 Tube sealer
Fresenius Kabi Tube Stripper or equivalent Fresenius Kabi 6R4452 Manual tube stripper
Biohazard Shield - Cell Counter or equivalent CardinalHealth S1389-75 Splash Shield
Corning LSE Vortex Mixer or equivalent Corning Incorporated 6775 Vortex mixer
FACSCanto II Flow cytometer  with FACSDiva software version 6.1.3 or equivalent BD Biosciences 338960 Flow cytometer

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दवा अंक १३१ Microparticles extracellular बुलबुले microvesicles exosomes प्लेटलेट्स चढ़ाए refractoriness स्क्रीनिंग प्लेटलेट ध्यान केंद्रित ।
प्लेटलेट आधान में Microparticles के लिए नियमित जांच विधि
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Millar, D., Murphy, L., Labrie, A.,… More

Millar, D., Murphy, L., Labrie, A., Maurer-Spurej, E. Routine Screening Method for Microparticles in Platelet Transfusions. J. Vis. Exp. (131), e56893, doi:10.3791/56893 (2018).

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