Summary
एक माउस में टाप के omental प्रत्यारोपण के लिए एक विधि शुरू की है । पृथक टाप को hydrogel के साथ मिलाया जाता है और मिश्रण को डायबिटिक माउस के omental पाउच में रखा जाता है । फिर, रक्त ग्लूकोज पर नजर रखी है, और इंयूनो-histochemical विश्लेषण किया जाता है ।
Abstract
टाप प्रत्यारोपण के लिए एक संभावित उपचार प्रकार के लिए प्रस्तावित किया गया है 1 मधुमेह. हाल ही में संमोहक सबूत इंगित करता है कि intravascular टाप अर्क आदर्श से दूर है और इसलिए, ओमेंटम पुनः टाप प्रत्यारोपण के लिए एक संभावित मूल्यवान साइट के रूप में उभर रहा है । इस प्रयोग में उच्च कोटि के टाप और मधुमेह प्राप्तकर्ताओं को टाप करने वालों के अलगाव की आवश्यकता है । ओमेंटम के लिए प्रत्यारोपण शल्य चिकित्सा कदम है कि बेहतर नेत्रहीन प्रदर्शन किया जा सकता की आवश्यकता है । यहां, इस कार्यविधि के लिए विस्तृत चरण प्रस्तुत किए गए हैं । मधुमेह के चूहों के omental पाउच में मिश्रण रखने से पहले hydrogel के साथ अलग-थलग टाप मिलाने की दो विधियाँ यहाँ बताई गई हैं. विभिन्न hydrogels विभिन्न स्थितियों के लिए उपयोग किया जाता है । ओमेंटम में syngeneic टाप के मधुमेह माउस प्राप्तकर्ताओं के रक्त शर्करा का स्तर ३५ दिनों तक के लिए निगरानी की गई । इंयूनो-histochemical विश्लेषण करने के लिए 14 दिनों के बाद कुछ पशुओं की बलि दी गई । यह पूर्व नैदानिक प्रत्यारोपण दृष्टिकोण प्रारंभिक नैदानिक प्रत्यारोपण के लिए अनुवाद करने के लिए अग्रणी डेटा के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है ।
Introduction
अंतर्राष्ट्रीय मधुमेह फेडरेशन (ई ड फ) के अनुसार, मधुमेह वर्तमान में ३८२,०००,००० लोगों को प्रभावित करता है, २०३५1द्वारा ५९२,०००,००० लोगों के लिए एक अनुमानित वृद्धि के साथ. दोनों में allogeneic और xenogeneic टाप ट्रांसप्लांटेशन, प्रणालीगत immunosuppressive थेरेपी आवश्यक है । प्रतिरक्षादमन के बिना, प्रतिरक्षा अस्वीकृति भ्रष्टाचार2नुकसान का एक प्रमुख कारण है । वहां भी तुरंत रक्त मध्यस्थता भड़काऊ प्रतिक्रिया (IBMIR)3,4के कारण प्रत्यारोपण टाप नुकसान की एक महत्वपूर्ण समस्या है । हालांकि, यहां तक कि एक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के अभाव में ऐसे syngeneic या ऑटो प्रत्यारोपण मॉडल के रूप में, टाप पोर्टल नस के माध्यम से जिगर में प्रत्यारोपण कोशिकाओं सूजन के कारण खो रहे है और/या गरीब रक्त के रूप में प्रतिकूल पर्यावरणीय स्थितियों, के लिए कम ऑक्सीजन और/या पोषक तत्वों के साथ आपूर्ति5,6। नतीजतन, लंबी अवधि के चयापचय समारोह को सुनिश्चित करने के क्रम में, उच्च टाप संख्या engraftment7कम कर देता है कि प्रारंभिक कोशिका हानि के लिए क्षतिपूर्ति करने के लिए आवश्यक हैं.
एक को टाप engraftment, कई वैकल्पिक संरचनात्मक साइटों को अनुकूलित करने की कोशिश में प्रयोग किया गया है के रूप में अच्छी तरह के रूप में नैदानिक, होनहार के साथ, अभी तक निश्चित नहीं8परिणाम । वैकल्पिक साइटों में से कुछ जबकि आसान और सुरक्षित पहुँच प्रदान करते हैं (जैसे, त्वचा, गुर्दे कैप्सूल, गैस्ट्रिक म्यूकोसा और आँख के पूर्वकाल कक्ष) या बड़ा टाप जनता के लिए एक व्यापक सतह (जैसे, पेरिटोनियल गुहा), अस्तित्व और शारीरिक प्रत्यारोपण टाप के चयापचय प्रदर्शन अभी भी सीमित है और एक चिंता का विषय9रहते हैं । टाप engraftment के लिए एक अधिक उपयुक्त साइट के लिए खोज चल रही है ।
ओमेंटम टाप ट्रांसप्लांटेशन के प्रारंभिक विकास में जांच की गई थी कि कई संरचनात्मक साइटों के बीच था, और टाप10,11,12,13के लिए एक सफल वातावरण साबित 14. हालांकि, intraportal टाप अर्क के कारण नैदानिक भूमिका के सापेक्ष सादगी के लिए भाग में प्रक्रिया और पशु मॉडल6में जल्दी सफलता बन गया । इसके अलावा, भाग में, इस साइट के साथ जुड़े नकारात्मक, विशेष रूप से बड़े पैमाने पर जल्दी टाप नुकसान, कम समझ रहे थे और क्षेत्र परिपक्व के रूप में प्रयोगात्मक टाप ट्रांसप्लांटेशन के प्रारंभिक दिनों में कम विवश । के साथ और अधिक हाल ही में संमोहक संकेत है कि intravascular टाप अर्क से दूर है आदर्श, ओमेंटम फिर से कोशिका प्रत्यारोपण के लिए एक संभावित मूल्यवान साइट के रूप में उभर रहा है ।
ओमेंटम (एक omental थैली के रूप में) जिगर15,16से अधिक रिश्तेदार लाभ प्रदान करता है । यह अच्छी तरह से संवहनी और आसानी से सुलभ है । यह भ्रष्टाचार की पुनर्प्राप्ति की अनुमति देता है (यदि आवश्यक हो) और/ यह कोरोनरी अवधि के द्वारा अनुभव किया जाता है, और ओमेंटम की तुलना में कम है, और अपेक्षाकृत बड़े टाप आम जनता जो संभव intraportally नहीं है, जहां पोर्टल दबाव में वृद्धि जटिलताओं पैदा कर सकता है ।
प्रत्यारोपण के एक syngeneic माउस मॉडल अध्ययन में परीक्षण प्रोटोकॉल में इस्तेमाल किया गया था, 6 के बीच C57BL/6 पुरुष चूहों को रोजगार-8 सप्ताह के एक शरीर के वजन के साथ 20 – 25 छ. टाप प्राप्तकर्ताओं २५० की एक खुराक के साथ streptozotocin का एक इंजेक्शन के साथ मधुमेह प्रदान किया गया मिलीग्राम/ मधुमेह के प्रेरण माना जा सकता है यदि माउस के रक्त शर्करा का स्तर इंजेक्शन के बाद 24 mmol/एल ४८ एच से अधिक है और 5 दिन की एक ंयूनतम के लिए उस स्तर से ऊपर रहता है ।
Syngeneic टाप उंर के अग्ंयाशय से अलग किया गया-मिलान दाताओं कुछ संशोधनों के साथ पहले प्रकाशित तरीकों के बाद । संक्षेप में, collagenase पित्त नली के बजाय पित्ताशय में इंजेक्ट किया गया था । इस इंजेक्शन की आसानी की सुविधा के लिए एक सुधार के रूप में किया गया था । Collagenase इन्फ्यूश़न गर्मी, ऊतक विघटन, घनत्व ढाल जुदाई और हाथ उठा शुद्ध टाप प्राप्त करने के बाद किया गया था । टाप CMRL में रातोंरात संस्कृति थे-१०६६ मध्यम 10% गर्मी के साथ पूरक-निष्क्रिय भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS) T175 कुप्पी में ३७ डिग्री सेल्सियस पर, ९५% हवा-5%2 प्रत्यारोपण से पहले के तहत सह ।
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Protocol
इस अध्ययन में प्रयुक्त सभी चूहों को गुआंग्डोंग प्रांत के चिकित्सा पशु केंद्र से प्राप्त किया गया. पशुओं के उपयोग को शेन्ज़ेन द्वितीय पीपुल्स अस्पताल की आचार समीक्षा समिति द्वारा, पशु कल्याण के सिद्धांतों के अनुसार अनुमोदित किया गया.
1. ओमेंटम को टाप ट्रांसप्लांटेशन
नोट: इस प्रोटोकॉल को पूरा करने के लिए 2 व्यक्तियों की आवश्यकता है ।
- 1 तालिकामें सूचीबद्ध हैं जो सर्जिकल सामग्री को इकट्ठा । ऐसे पर्दे और प्रयोज्यता के रूप में बाँझ सामग्री के साथ शल्य क्षेत्र में अपूतित क्षेत्र तैयार करने और सर्जरी भर में अपूतित शर्तों को बनाए रखने. सभी शल्य चिकित्सा उपकरणों निष्फल । बाँझ गाउन पहनें.
- stereomicroscope के तहत एक २०० µ एल पिपेट टिप का उपयोग कर टाप उठाओ । प्रत्येक माउस को 450 – 500 टाप समकक्ष (IEQ) प्रति tansplant प्राप्त होंगे । प्रत्येक जानवर के लिए, CMRL के १०० µ एल के साथ एक बाँझ १.५ मिलीलीटर स्नैप-टॉप ट्यूब में एक ही प्रत्यारोपण के लिए पर्याप्त टाप प्लेस-१०६६ मध्यम ।
नोट: टाप प्रत्यारोपण के दिन अलग किया जा सकता है, लेकिन यह अलगाव प्रक्रिया के लिए वसूली की अनुमति देने के लिए पहले दिन उन्हें अलग करने के लिए बेहतर है. - बर्फ पर टाप के साथ स्नैप-टॉप ट्यूबों रखें जब तक प्रत्यारोपण के लिए तैयार है ।
- गल तहखाने झिल्ली मैट्रिक्स hydrogel और इसे बर्फ पर रखने के बाद से इसे हटाने के-20 डिग्री सेल्सियस फ्रीजर । hydrogel 4 डिग्री सेल्सियस से 10 डिग्री सेल्सियस पर तरल है और उच्च तापमान पर जम जाता है ।
- तौलना और सभी मधुमेह प्राप्तकर्ता चूहों टैग. ६० मिलीग्राम/किलो pentobarbital सोडियम intraperitoneally इंजेक्षन । एक पैर की अंगुली चुटकी प्रशासन द्वारा संज्ञाहरण की गहराई का परीक्षण. एक अतिरिक्त 10 मिलीग्राम/किलो pentobarbital सोडियम दे अगर पशु चुटकी के लिए प्रतिक्रिया करता है । अगर कोई पलटा वापस ले लिया है, संज्ञाहरण के स्तर सर्जरी के लिए सही है ।
- ७०% इथेनॉल का उपयोग कर पेट पर शल्य साइट झाड़ू । एक razer ब्लेड के साथ साइट से बाल दाढ़ी और Iodophor के साथ क्षेत्र को संक्रमित । आंखों के लिए पशु चिकित्सक मरहम प्रशासन सूखापन को रोकने के लिए जबकि संज्ञाहरण के तहत ।
- पेट के साथ पेट को खोलने के लिए नेत्र कैंची का प्रयोग करें midline 4 से 5 सेमी की एक चीरा के साथ । आंतों को बाईं ओर ले जाएं और खारा लथपथ धुंध के साथ कवर सर्जरी प्रक्रिया के दौरान अत्यधिक निर्जलीकरण को रोकने के लिए ।
- पूरी तरह से पेट के दृश्य क्षेत्र को बेनकाब और ओमेंटम (पेट के नीचे स्थित) का पता लगाने के लिए कपास झाड़ू का प्रयोग करें । ठीक संदंश की दो जोड़ी का उपयोग करने के लिए ओमेंटम का इरादा । आंसू से नुकसान को रोकने के लिए ध्यान रखना ।
- इस बिंदु पर hydrogel पूरी तरह से गल चुकी है । २०० x जी पर 30 एस के लिए टाप के साथ ट्यूब स्पिन और supernatant निकालें । hydrogel के महाप्राण ५० µ एल, यह टाप युक्त ट्यूब करने के लिए जोड़ें, और धीरे बुलबुले के गठन से बचने के मिश्रण resuspend । प्रक्रिया के दौरान बर्फ पर ट्यूबों रखो ।
- संदंश की दो जोड़ी का प्रयोग करें ओमेंटम के किनारों लेने के लिए और धीरे से यह गैस्ट्रिक दीवार और आंत कि टाप भ्रष्टाचार के साथ तरल की एक छोटी मात्रा को समायोजित कर सकते है के बीच एक नाली बनाने के लिए बढ़ा ।
- दूसरे व्यक्ति को प्रक्रिया में सहायता दें और महाप्राण को resuspend टाप-hydrogel मिश्रण (ट्यूब की संपूर्ण सामग्री) को २०० µ l पिपेट टिप के साथ, सामग्री को नाली में वितरित करें ।
- सुनिश्चित करें कि मिश्रण अच्छी तरह से धीरे स्थापना या ओमेंटम के किनारों को कम करके नाली में तैनात है । मिश्रण की पूरी स्थिति 3 मिनट के भीतर hydrogel से पहले शरीर के तापमान का एक प्रभाव के रूप में जम । hydrogel सेट के बाद, ओमेंटम को भ्रष्टाचार को कवर करने के लिए गुना ।
नोट: ओमेंटम hydrogel जम के रूप में आसपास के गैस्ट्रिक दीवार का पालन करेंगे । - hydrogel पूरी तरह से जम जाने के बाद, कपास झाड़ू का उपयोग आंतों को वापस उदर गुहा में बदलने के लिए करते हैं, देखभाल करने के लिए प्रत्यारोपण की साइट को छूने के लिए नहीं ।
- cephalosporin के 20 µ एल जोड़ें (5 ~ 10 मिलीग्राम) उदर गुहा में संक्रमण को रोकने के लिए, तो पेट बंद करने के लिए 4-0 सीवन का उपयोग करें ।
- अपने पिंजरे में माउस लौटें और प्रत्येक माउस प्राप्तकर्ता के लिए सभी चरणों को दोहराएँ । चूहों गर्म रखने के लिए और नेत्रहीन निगरानी जब तक वे पूरी तरह से स्टर्नल recumbency बनाए रखने के लिए पर्याप्त चेतना हासिल. चूहों को पूरी तरह से बरामद होने तक अन्य जानवरों से अलग रखें ।
- पोस्ट सर्जरी प्रोफिलैक्सिस के रूप में एक सप्ताह के लिए प्रत्येक दिन cefazolin सोडियम (०.०५ मिलीग्राम/एमएल) के ५० µ एल इंजेक्षन । प्रशासन Bupivicaine + Buprenorphine, अर्थात् चीरा साइट पर ०.२५% Bupivicaine की 1-3 बूंदें सामयिक घाव क्लिप के स्थान से पहले लागू होते हैं । प्रशासन Buprenorphine (0.03 मिलीग्राम/एमएल के साथ बाँझ ०.९% खारा, 0.05-0.10 मिलीग्राम/intraperitoneal (IP) मार्ग के माध्यम से ।
- प्रत्यारोपण के बाद एक दिन में एक बार एक रक्त ग्लूकोज मीटर का उपयोग कर एक पूंछ नस रक्त नमूना से गैर उपवास रक्त शर्करा के स्तर को मापने । ओमेंटम को प्रत्यारोपित करने पर टाप भ्रष्टाचार में देरी से कार्य हो सकता है और 2-3 सप्ताह तक पूरी तरह से सामान्य रक्त शर्करा के स्तर तक नहीं पहुंच पाता है ।
- प्रोटोकॉल के लिए, प्रत्यारोपण के बाद प्रयोग के अंत में माउस से omental भ्रष्टाचार हटा दें । ऊतकवैज्ञानिक प्रोटोकॉल के अनुसार ऊतक को ठीक करें । immunostaining या इम्यूनोफ्लोरेसेंस अध्ययन के लिए भ्रष्टाचार का विश्लेषण किया जा सकता है ।
2. ओमेंटम को प्रत्यारोपण के लिए वैकल्पिक विधि
नोट: कक्ष के तापमान पर उपयोग किया जाता है एक वैकल्पिक फाइब्रिन-thrombin hydrogel तहखाने झिल्ली मैट्रिक्स hydrogel के लिए प्रतिस्थापित किया जा सकता है । यह 2 घटकों के होते हैं, एक फाइब्रिन मुहर प्रोटीन समाधान (५० यू/एमएल thrombin और 10 मिलीग्राम/एमएल फाइब्रिनोजेन) । जब घटक मिश्रित कर रहे हैं, वे एक थक्का है कि जगह में टाप रखती फार्म ।
- कमरे के तापमान पर फाइब्रिन-thombin hydrogel यौगिक का प्रयोग करें । चरण १.२ में, प्रत्येक माउस 450-500 टाप समकक्ष (IEQ) प्रति प्रत्यारोपण प्राप्त होगा । CMRL-१०६६ मध्यम के १०० µ एल के साथ एक बाँझ १.५ मिलीलीटर स्नैप-टॉप ट्यूब में टाप प्लेस । तुरंत प्रत्यारोपण से पहले, महाप्राण 10 सेमी की लंबाई के लिए एक बाँझ PE50 टयूबिंग में टाप और धीरे केंद्रापसारक (30 एस २०० x जी पर) के लिए एक ढीला गोली फार्म ।
- पशु के रूप में ऊपर कहा गया है (1.5-1.8) बाहर फैल ओमेंटम के साथ तैयार हो जाएं । मिश्रण hydrogel अवयव (10 µ l/प्रत्येक) और ओमेंटम पर जगह है । (चित्रा 3d)
- तुरंत hydrogel पर टयूबिंग से टाप निष्कासित । hydrogel टाप के चारों ओर एक थक्का बनाता है । (चित्रा 3E)
- hydrogel और टाप पर ओमेंटम गुना एक थैली बनाने के लिए । (चित्रा 3F) चरण १.१३ से १.१८ तक जारी रखें ।
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Representative Results
अग्ंयाशय के बाद पाचन राज्य चित्रा 1aमें दिखाया गया है । शुद्धि टाप चित्रा 1bमें दिखाए जाते हैं । Dithizone धुंधला और इस टाप की व्यवहार्यता परीक्षण चित्रा 2में दिखाया गया है । ओमेंटम को टाप प्रत्यारोपण का मुख्य कदम चित्रा 3में दिखाया गया है । omental प्रत्यारोपण के बाद प्राप्तकर्ताओं के रक्त शर्करा का स्तर चित्रा 4में दिखाया गया है । भ्रष्टाचारियों का ऊतकवैज्ञानिक विश्लेषण चित्रा ५में दिखाया गया है.
चित्रा 1 : अग्ंयाशय पाचन और टाप अलगाव । (क) अग्न्याशय पाचन के बाद । निलंबन में रेत के आकार के कणों को नोट करें । (ख) अलगाव के बाद टाप की हल्की माइक्रोस्कोपिक छवि. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 2 : टाप dithizone दाग आणि प्रतिदीप्ति व्यवहार्य रंजक. (क) टाप dithizone द्वारा लाल रंग में दाग हैं. (ख) हल्की माइक्रोस्कोपी. (ग) Propidium आयोडाइड प्रतिदीप्ति लाल दाग (मृत कोशिकाएँ). (घ) Calcein-हूं हरी धुंधला (व्यवहार्य कोशिकाओं) । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 3 : ओमेंटम में प्रत्यारोपण । (क) प्राप्तकर्ता के laparotomy के बाद, पेट सामने आ जाता है और ओमेंटम स्थित हो जाता है. (ख) hydrogel में टाप मिलाया जाता है और धीरे omental ऊतक पर रखा जाता है । (ग) उच्च आवर्धन पर टाप भ्रष्टाचार । hydrogel एक अर्द्ध जम राज्य है । (घ) वैकल्पिक पद्धति. Hydrogel को ओमेंटम पर बिना टाप के रखा जाता है। (ङ) hydrogel के शीर्ष पर टाप रखे जाते हैं. (च) ओमेंटम के चारों ओर जोड़कर टाप है. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 4 : रक्त शर्करा के स्तर के बाद प्रत्यारोपण । गैर उपवास प्राप्तकर्ताओं के रक्त शर्करा का स्तर (n = 7) रोपाई के बाद ३५ दिनों तक । भ्रष्टाचारी प्राप्तकर्ताओं ने सभी को एक ही बैच नहीं दिया था इसलिए रक्त शर्करा के स्तर में बड़े उतार-चढ़ाव के परिणामस्वरूप गुणवत्ता और कार्य में अंतर होता है ।
चित्रा 5 : प्रोटोकॉल । भ्रष्टाचार वर्गों (भ्रष्टाचार है़ 14 दिनों के प्रत्यारोपण के बाद) DAPI (नाभिक), विरोधी माउस इंसुलिन एंटीबॉडी, और hematoxylin के साथ दाग थे. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
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Discussion
टाप प्रत्यारोपण के जरिए जिगर को पोर्टल नस मनुष्यों में टाप प्रत्यारोपण की सबसे अधिक इस्तेमाल की जाने वाली विधि है, लेकिन अभी भी दक्षता और सुरक्षा की चिंताएं जैसे पोर्टल नस घनास्त्रता और लिवर steatosis17है । हाल के अध्ययनों से पता चलता है कि ओमेंटम जिगर के लिए एक उपयुक्त विकल्प हो सकता है, लेकिन अधिक शोध नैदानिक अनुवाद12,14,18,19से पहले आयोजित की जरूरत है ।
माउस टाप ट्रांसप्लांटेशन के लिए एक साइट के रूप में ओमेंटम के परीक्षण के लिए एक उपयुक्त मॉडल है । माउस में, ओमेंटम पेट की दीवार के नीचे स्थित है और आम तौर पर जोड़ रहा है । हालांकि, चूहों में ओमेंटम का आकार छोटा और पहुंच के लिए चुनौतीपूर्ण है । आदेश में यह प्रत्यारोपण के लिए उपयोग करने के लिए, यह धीरे इसके पूर्ण आकार के लिए इसे बाहर फैलाने के लिए आवश्यक है तो यह गुना से अधिक के बाद टाप/hydrogel मिश्रण जमा है । एक बड़े जानवर में, omental ऊतक और अधिक व्यापक है और एक या एक से अधिक पाउच जो में टाप जमा कर रहे है का निर्माण करने के लिए टांका किया जा सकता है । माउस ओमेंटम नाजुक है और आसानी से तोड़ने के बिना टांके स्वीकार नहीं करता है । इस कारण से, एक hydrogel टांके के बिना थैली बनाने के लिए प्रयोग किया जाता है ।
पहली विधि में (कदम 1.1-1.18), hydrogel इस्तेमाल एक तहखाने झिल्ली मैट्रिक्स है और laminin, कोलेजन चतुर्थ और विकास कारकों से बना है । यह शरीर के तापमान को गर्म के रूप में जम जाता है । दूसरी विधि में (कदम 2.1-2.4), एक अलग hydrogel 50U/एमएल thrombin और 10 मिलीग्राम/एमएल फाइब्रिनोजेन से बना प्रयोग किया जाता है । इस तकनीक की बहुमुखी प्रतिभा को दिखाने के लिए दो अलग hydrogels का प्रयोग किया जाता है । यह कई परिस्थितियों में फिट और सिद्धांत के सबूत स्थापित करने के लिए सिलवाया जा सकता है । नैदानिक अनुप्रयोगों के लिए, चाहे एक टांका थैली या एक नैदानिक ग्रेड hydrogel प्रयोग किया जाता है, तकनीक एक न्यूनतम इनवेसिव दृष्टिकोण के साथ जोड़ा जा सकता है, (जैसे, ओमेंटम करने के लिए प्रसव के इंडोस्कोपिक विधि). इस उद्देश्य के लिए, अतिरिक्त बड़े स्तनधारियों पूर्व नैदानिक मॉडल का उपयोग कर अध्ययन की आवश्यकता है ।
समय हमारे साथ ही अन्य अध्ययनों में ओमेंटम में प्रत्यारोपण के बाद माउस प्राप्तकर्ताओं में रक्त शर्करा के स्तर को सामान्य करने के लिए सुझाव है कि ओमेंटम में टाप पर्याप्त इंसुलिन उत्पादन को प्राप्त करने के लिए थोड़ा लंबा समय की आवश्यकता है. Revascularization दक्षता एक महत्वपूर्ण कारक है, के रूप में अध्ययन में उल्लिखित प्रतीत होता है । एक hydrogel की उपस्थिति टाप revascularization और प्रदर्शन की गति को प्रभावित करती है या नहीं, यह निर्धारित किया जाना है ।
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Disclosures
लेखकों के हितों का कोई टकराव नहीं रिपोर्ट ।
Acknowledgments
इस काम के लेखकों में से कुछ के हिस्से में राष्ट्रीय कुंजी आर & चीन के कार्यक्रम (2017YFC1103704), शेन्ज़ेन में चिकित्सा के Sanming परियोजना (SZSM201412020), शेन्ज़ेन (२०१६०३१६३८) के उच्च स्तर चिकित्सा अनुशासन निर्माण के लिए निधि से अनुदान द्वारा समर्थित थे, शेन्ज़ेन फाउंडेशन ऑफ साइंस एंड टेक्नोलॉजी (JCJY20160229204849975, GJHZ20170314171357556, JCYJ20160425110110658), शेन्ज़ेन फाउंडेशन ऑफ हेल्थ एंड फैमिली प्लानिंग कमिशन (SZXJ2017021) ।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Equipment | |||
| 5 inch (12-13 cm) Scissors | RWD Life Science | S12030-11 | |
| Fine Forceps | RWD Life Science | F11010-13 | |
| Small wound clips | RWD Life Science | R33003-01 | |
| Acutenaculum | RWD Life Science | F31044-13 | |
| 2 pair tissue forceps | RWD Life Science | F13023-10 | |
| 4-0 Suture with needle | Chenghe, China | 17094 | |
| 200 μL Pipette and tips | Gilson | PN11 | |
| One Touch ultraeasy Basic blood glucose monitoring system | Johnson & Johnson | 33391713 | |
| razor blade | Philips | HC1099/15 | |
| Material and animals | |||
| Pentobarbital Sodium | Sigmaaldrich.com | P3761 | For anesthesia |
| Hydrogel | bdbiosciences.com | 356234 | Basement Membrane Matrix |
| Fibrin-Thrombin Hydrogel | Baxter.com | 1501250 | Components clot when mixed |
| 70% Ethanol | Yingniu medical, Anhui, China | 23170608 | |
| Iodophor | Lierkang medical technology, Shangdong, China | 170521 | |
| Normal saline | Baxter.com | 2B1324 | |
| Cephalosporin | Lukang medical, Shangdong, China | 150303 | |
| Cefazolin | Baxter.com | 2G3508 | |
| lubricant eye ointment | Major Pharmaceuticals | 203964 | |
| streptozotocin | Sigmaaldrich.com | S0130 | |
| collagenase Type V | Sigmaaldrich.com | C9262 | |
| CMRL-1066 media | celltrans, Wenzhou, China | X018D1 | |
| histopaque | Sigmaaldrich.com | 10771 | density gradient |
| PE50 tubing | Braintreesci.com | PE50 100 FT | Polyethylene .023" x .038 |
| Calcein AM | Sigmaaldrich.com | C1359 | |
| Propidium iodide | Sigmaaldrich.com | P4864 | |
| optimal cutting temperature compound (OCT) | Tissue-Tek; Miles, Naperville, IL | 4583 | embedding medium |
| insulin antibody | Cell Signaling Technology, Danvers, MA 01923 | 8138S | |
| hematoxylin staining media | Cell Signaling Technology, Danvers, MA 01923 | 14166S | |
| eosin staining media | Beyotime Biotech, China | C0109 | |
| DAPI | Thermo Fisher Scientific Inc. | D1306 | |
| C57Bl/6 Mice | Medical Animal Center of Guangdong Province | / | |
| Fetal Bovine Serum | GE Healthcare Life Sciences | SH30084 | |
| T175 flasks | Falcon | 353112 | |
| 1.5 mL Snap-top tubes | Axygen | MCT-150-C |
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