Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Neuroscience

Neuroimaging felt metoder ved hjælp af funktionelle nær infrarød spektroskopi (NIRS) Neuroimaging at studere globale børns udvikling: landdistrikter Sahara

Published: February 2, 2018 doi: 10.3791/57165

Summary

Bærbare neuroimaging tilgange (funktionel nær infrarødspektroskopi) yde forskud til undersøgelsen af hjernen på tidligere utilgængelige områder; her, landdistrikter Côte d'Ivoire. Innovation i metoder og udvikling af kulturelt passende neuroimaging protokoller tillader roman undersøgelse af hjernens udvikling og børns læringsresultater i miljøer med stor fattigdom og modgang.

Abstract

Bærbare neuroimaging tilgange giver nye forskud til undersøgelsen af hjernefunktion og hjernens udvikling med tidligere utilgængelige befolkninger og i fjerntliggende steder. Dette papir viser udviklingen i feltet funktionelle nær infrarødspektroskopi (fNIRS) imaging studier af børns sprog, læsning og kognitive udvikling i landdistrikter landsby omgivelser i Côte d'Ivoire. Innovation i metoder og udvikling af kulturelt passende neuroimaging protokoller tillader en førstegangs kig ind i hjernens udvikling og børns læringsresultater i forsømt miljøer. Dette papir viser protokoller for transport og opsætning af et mobilt laboratorium, diskuterer overvejelser for feltet versus laboratorium neuroimaging, og præsenterer en guide til at udvikle neuroimaging samtykke procedurer og bygning meningsfulde langsigtede samarbejder med lokale regering og videnskab partnere. Bærbare neuroimaging metoder kan bruges til at studere komplekse barn udviklingssammenhænge, herunder virkningerne af betydelig fattigdom og modgang på hjernens udvikling. Protokollen præsenteres her er udviklet til brug i Côte d'Ivoire, verdens primære kilde af kakao, og hvor rapporter om barn arbejdskraft i sektoren for kakao er fælles. Men lidt er kendt om virkningen af børnearbejde på hjernens udvikling og læring. Feltet neuroimaging metoder har potentiale til at give ny indsigt i sådanne uopsættelige spørgsmål, og for børns udvikling globalt.

Introduction

Bærbare fNIRS imaging giver mulighed for at studere hjernefunktion og udvikling uden for laboratoriet, i tidligere utilgængelige indstillinger eller med forsømt populationer. Meget af viden inden for kognitiv neurovidenskab kommer fra imaging studier udført i universitetet eller hospitalet laboratoriet indstillinger, i overvejende vestlige lande. Ved design, dette bidrager til en sjældent-talt-af problemet i forskning: meget af hvad der vides om hjernen er baseret på undersøgelser med deltagerne for hvem laboratorium indstillinger i (det meste) vestlige lande er tilgængelige. Det vil sige, indebærer de fleste neuroradiologisk forskning deltagere, der bor i rimelig nærhed til en neuroimaging laboratory og har både tid og ressourcer for at kunne deltage i en undersøgelse. Som en disciplin, kognitiv neurovidenskab har til formål at forstå hjernen og de faktorer, der former sin udvikling — herunder de kraftfulde effekter af et barns miljø og deres opvækst oplever1,2,3. Metoder, at forhånd field's kapacitet til at undersøge udviklingen i et fyldigere udvalg af menneskelig erfaring kan dramatisk fremme forståelsen af komplekse forholdet mellem hjernens udvikling og livets oplevelser, som former det.

Dette paper præsenterer en protokol for feltet neuroimaging, som blev udviklet til brug i landdistrikter Sahara i Afrika, specielt sydlige Côte d'Ivoire. Formålet med dette felt neuroimaging research program var at forstå børns læsning udvikling i et miljø med en høj risiko for analfabetisme. Côte d'Ivoire er unge (15-24 år) læse-og skrivefærdigheder 53%, trods 93% grundskolen tilmelding priser4. Côte d'Ivoire er verdens primære kilde af kakao, og der er en anslået 1,3 millioner barn arbejdere i kakao landbrugssektoren5. Men lidt er kendt om virkningen af børnearbejde på hjernens udvikling og læring, specifikt at lære at læse. Anvender de nyeste værktøjer i kognitiv neurovidenskab, dvs bærbare neuroimaging metoder, kan give værdifuld indsigt i børns læringsresultater. For eksempel, kan feltet neuroimaging med fNIRS giver mulighed for identifikation af udviklingsforstyrrelser perioder hvor målrettede uddannelsesprogrammer eller indgreb kan have maksimal indvirkning på børns læringsresultater.

fNIRS neuroimaging er velegnet til felt forskning. Svarende til funktionel magnetisk resonans imaging (fMRI), fNIRS måler hjernens hæmodynamiske svar6. FNIRS bruger dog en serie af light emitting optodes og lys detektorer i stedet skaber elektromagnetiske felter. Der er ingen begrænsninger på metal i eller i nærheden af test-område, og ingen elektrisk afskærmning er nødvendigt, som er tilfældet for electroencefalografi (EEG). En afgørende fordel ved fNIRS er dens portabilitet (dvs. nogle systemer kan passe i en kuffert) og brugervenlighed. fNIRS er også let at bruge med børn; barnet sidder komfortabelt i en stol under eksperimentet og fNIRS ordningen tolererer bevægelse godt sammenlignet med fMRI. Sammenlignet med fMRI, fNIRS også indeholder separate foranstaltninger deoxygenated (HbR) og iltet hæmoglobin (HbO) under optagelsen, sammenlignet med fMRI, som giver en kombineret blod ilt niveau tæthed (fed) foranstaltning. fNIRS har overlegen tidsmæssige opløsning til fMRI: prøvetagning priser kan variere mellem ~ 7-15 Hz. fNIRS har god rumlig opløsning: fNIRS' dybde af optagelse i den menneskelige cortex er mindre end fMRI, måling ca 3-4 cm i dybden, som er velegnet til at studere kortikale funktioner, især hos spædbørn og børn, der har tyndere kranier end voksne3,7,8,9,10.

Dette felt neuroimaging protokol skitserer overvejelser for rejser med og oprette en bærbar neuroimaging laboratory i lav-ressource sammenhænge. Protokollen fremhæver også den væsentlige karakter af meningsfulde, langsigtet samarbejde med lokale videnskab partnere og måder, hvorved denne fremgangsmåde tjener til at opbygge lokale videnskab kapacitet. Neuroimaging protokol for indsamling og analyse af fNIRS hjerne data fra et batteri af sprog, læsning og kognitive opgaver, godtgøres, herunder anbefalinger til oprettelse kulturelt passende informeret samtykke procedurer for imaging forskning. Mens denne protokol er udviklet til kognitiv Udviklingsforskning med grundskolen alderen børn i landdistrikterne Côte d'Ivoire, protokollen er yderst relevant for ethvert felt neuroimaging undersøgelse i udfordrende, lav-ressource miljøer, og kan tilpasses for roman sammenhænge.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Alle metoder beskrevet her er blevet godkendt af institutionelle Review Board (IRB) af University of Delaware.

1. mobile laboratorium Transport og opsætning

  1. Rejser med fNIRS udstyr
    1. Transport fNIRS udstyr.
      Bemærk: fNIRS udstyr kan transporteres som checket bagage på en større internationale flyselskab, men det er bydende nødvendigt at bekræfte med givent luftfartsselskabet. Udstyr restriktioner kan variere efter oprindelse eller destination land. Alternativt, fNIRS udstyr kan leveres.
    2. Ved procedurer for import eller rejser med fNIRS udstyr til modtagerlandet, og hvis det er relevant, opnå passende importdokumenterne godkendelse.
    3. Forberede inspektioner.
      Bemærk: Myndigheder (f.eks. Transportation Security Administration) forbeholder sig ret til at inspicere indchecket bagage. Skrøbelige fNIRS fiberoptik kan blive beskadiget under kontrol. Sørge for passende dokumentation til at ledsage alt udstyr.
  2. Væsentlige laboratorieudstyr i feltet
    1. Forberede klimaforhold i feltet.
      Bemærk: Temperatur og luftfugtighed betingelser i feltet kan variere betydeligt fra laboratorium indstilling og kan påvirke udstyr funktion og lang levetid, samt deltager komfort under eksperimenter. Elektronik opererer i høj luftfugtighed betingelser, generelt er over 60%, mere modtagelige for korrosion som overdreven fugt kan slå sig ned på dele og reagerer med metal komponenter. Luftfugtighed i en indendørs lab (f.eks, inde i en universitetsbygning) er normalt mellem 30-50%. Fugtighed i det sydlige Elfenbenskysten kan være 80-95%. Oprette en bærbar klimaanlæg med lavt effektforbrug krav.
    2. Sikre tilstrækkelig elektrisk forsyning. Da strømforsyningen findes i landdistrikterne indstillinger muligvis ikke eller fungerer muligvis kun periodisk eller med utilstrækkelig effekt, størrelse brug bærbare solenergi generatorer til magten små til medium elektronik. Gøre tilgængelig en dieselgenerator som nødstrøm. Ansætte en lokale elektriker, der er fortrolig med strømforsyningen udfordringer i landdistrikterne sammenhænge.
    3. Forberede et egnet laboratorium struktur med minimal setup tid som en stor tilpassede telt med uigennemsigtige og vandtæt tag og vægge.
      Bemærk: Faciliteter (f.eks. klasselokale på lokale skole) er usandsynligt, at være til rådighed, eller give vandtæt og stille test plads.
  3. Opsætning af den bærbare laboratorium (figur 1)
    1. Samle den mobile laboratorium (f.eks, tilpassede telt). Sikre, at laboratoriet er stor nok til at rumme siddepladser for deltager på et skrivebord, opholdsområde for to eksperimentatorer, stimulus præsentation computer, fNIRS data indsamling computer, fNIRS bærbar enhed, tre-dimensionelle (3D) digitizer og bærbare klimaanlægget.

Figure 1
Figur 1. Skemaer. (A) skematisk af laboratoriet setup. (B) forberede deltageren til dataindsamling. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

2. lokale forskerhold og videnskab partnere

  1. Investere i dannelsen af videnskabelige samarbejder og giver muligheder inden for forskningsrammeprogrammet til lokale forskere.
  2. Etablere samarbejde med lokale videnskabelige institutioner med henblik på integrering. Vinder anerkendelse fra jævnaldrende på lokalt plan er vigtigt at kommunikere eventuel forskning at finde i regionen.
  3. Konsultere relevante lokale myndigheder, før nogen forskningsaktiviteter til at modtage tilladelse og licens til at operere. Stifte med etiske klageprocedurer i mållandet, og foretage passende accommodations hvis ingen formelle videnskabelige prøvelsesproceduren er på plads.
    Bemærk: For eksempel, direkte kommunikation med og godkendelse fra repræsentanter i Ministeriet for videregående uddannelse og forskning (eller sammenlignelige regeringsorgan) kan gøres i stedet for en etisk gennemgang procedure.

3. informeret samtykke og barn samstemmende udtalelse

  1. Udvikle en godkendelsesprocedure, der er kulturelt passende og sikrer, at deltagerne, deres familier og lokalsamfund er informeret om forskning og deres beslutning om at deltage i undersøgelsen.
  2. Anmeld lokale told- og historie i typisk protokol udvikling og omfatter medlemmer af gruppen med hvem forskningen skal gennemføres.
    1. Sørg for at opnå et klart samtykke fra lokale leder(e) (fx landsbyhøvding, Fællesskabet ældster, osv.), før du fortsætter med forskning.
      Bemærk: Dette kan udtrykkes, af en forfædres velsignelse eller af ethvert andet betalingsmiddel, der er typiske for Fællesskabet. Efter samtykke fra landsbyhøvding, kan skikke omfatte overhældning af vin på jorden og spørge forfædre til at godkende og velsigne forskningsaktiviteterne.
  3. På det mere formelle plan, indhente samtykke af forælder og pædagog grupper, som er ansvarlig for at træffe beslutning om børns deltagelse i skoleaktiviteter godkendt. Eksempelvis gruppen forældre-lærer («Comité de Gestion d'Ecoles - COGES» i Elfenbenskysten) er en vigtig aktør i det nationale primære uddannelsessystem består af medlemmer udpeget af elevs forældre at forsvare deres interesser i beslutningsprocessen og i alle andre aspekter i forbindelse med uddannelse af deres børn.
  4. Godkende alle forskningsaktiviteter af lokale myndigheder, for eksempel, det ivorianske ministerium for uddannelse eller Ministeriet for videregående uddannelse og forskning. Det land, som projektet vil tage sted i kan ikke have en formel procedure for etisk godkendelse gennem en IRB. Kontrollere reglerne for at sikre at de korrekte protokoller for at opnå etisk godkendelse for forskning bliver fulgt.
    Bemærk: På tidspunktet for at opnå godkendelse, Côte d'Ivoire ikke havde en formel IRB review-proces. I stedet for dette fortsatte forskerholdet ved at udarbejde dokumentation stil med et IRB program til at indsende til Undervisningsministeriet. Flere møder blev arrangeret med Undervisningsministeriet, Ministeriet for videregående uddannelse, og forskning embedsmænd hvor forskerholdet præsenterede den foreslåede forskning planlægger at alle tjenestemænd, efterfulgt af gruppediskussion og spørgsmål og svar sessioner. Etisk godkendelse blev opnået direkte fra undervisningsministeriet i form af et signeret dokument gives tilladelse til at gennemføre forskning med børn på særlige skoler. Denne undersøgelse modtog etisk godkendelse fra University of Delaware IRB.
  5. Forklare forskning formål i enkle ord deltagende børn i en samstemmende udtalelse barn. Lokalsamfundet kan meget værdi en barnets lydighed, hvor sagen et barn kan samstemmende udtalelse til at deltage eller fortsat deltager i en undersøgelse trods deres uvilje mod at gøre det på grund af kulturelle forventninger. Sikre at samstemmende omhyggeligt kommunikerer frivillig deltagelse i forskningen.
  6. Klart at definere hvordan forskningen vil gavne deltagerne og hvis de får kompensation for deres deltagelse i forskningen. Sikre, at erstatningen er passende, både kulturelt og for deltagerne.
  7. Gennemføre alle samtykke og samstemmende udtalelse procedurer i det lokale eller foretrukne sprog af deltager af en uddannet medlem af forskerholdet, der også er medlem af sprog og kulturel gruppe.

4. fNIRS hovedbunden placering og måling

  1. Indsamle hoved målinger
    1. Direkte deltager til at sidde på en stol, og forklare processen forventes under hovedet måling.
    2. Ved hjælp af en standard målebånd, måle afstande mellem: (1) nasion og inion omkring hovedet, (2) nasion og inion over toppen af hovedet gennem midterlinjen centrale (Cz)11, og (3) afstanden mellem venstre og højre øre tragus over toppen af hoved gennem Cz.
  2. Placeringen af fNIRS cap og optodes på deltagerens hoved 3 , 8 , 9 , 12
    1. Placere fNIRS optode indehaveren cap på deltagerens hoved, tilpasse fælles landbrugspolitik til internationale 10-20-systemet for hovedbunden steder11. Sikre, at fælles landbrugspolitik holdning er ens for alle deltagere. Justere punkter på fælles landbrugspolitik (f.eks. sonden indehaveren) med hovedbunden positioner.
      Bemærk: center For eksempel, forreste del af fælles landbrugspolitik på hovedet til frontopolar (FP) position. Denne holdning svarer til 10% af nasion-inion over top afstand dorsal til nasion holdning.
    2. Sikre fælles landbrugspolitik med en rem og sikre, at deltageren er komfortable.
  3. 3D digitizer måling
    1. Når fælles landbrugspolitik er i position, pålægge deltageren at sidder stadig i stilling for at opnå en 3D digitizer måling af nøglen 10-20 system hovedbunden positioner11 og hver optode sted indehaveren.
    2. Arrangere 3D digitizer udstyr. Sted en sensor på deltageren 's hoved på Cz og anbragt forsvarligt (dvs. ved hjælp af en elastik eller hår tilbehør), og Placer den anden blok sensor bag deltageren. Lad deltageren blive siddende i en stol med ryggen til en tabel. Placer den anden sensor på tabellen direkte bag deltagerens hoved. Sikre, at hverken sensor bevægelse i løbet af få 3D digitizer måling.
    3. Åbn Brainstorm software13 på data indsamling computer. Sørg for 3D digitizer system er i kommunikation med Brainstorm software gennem passende COM-porten.
    4. Flytte 3D digitizer stylus til hver sondens placering og på tværs af nøglen 10-20 system positioner (nasion, inion, venstre øre, højre øre, Cz). Få positionsdata via funktionen Brainstorm på data indsamling computer på hver placering.
  4. Placere lys udsender optodes og detektorer på hovedbunden
    1. Efter 3D digitizer data er indsamlet, direkte deltager til at sidde komfortabelt foran stimulus præsentation computer.
    2. Ved hjælp af fNIRS indbyggede software, vælge det sonde arrangement, der svarer til eksperiment designet. fNIRS sonder kan placeres for at dække hele hovedet (dvs. fuld hoved dækning), eller alternativt, en array kan placeres over generelle områder af interesse. For eksempel anvendes denne protokol en 10 x 3 sonde array (30 sonder arrangeret i 3 rækker af 10 sonder). Denne sonde arrangement var placeret for at inddæmme overlay venstre hjernehalvdel sprogområder samt deres højre hjernehalvdel homologe og frontallappen (figur 2).
    3. Sikre, at hver enkelt sonde (emitter og detektor) er nummererede og nummereringssystemet svarer til sonde arrangement kort.
    4. Ved hjælp af optode i fNIRS indbygget software som en vejledning, placere hvert optode i den relevante optode åbning på fælles landbrugspolitik. Optode kort viser placeringen af hver optode i matrixen (f.eks. 10 x 3).
    5. Flytte alle hår ud af den måde at sikre direkte kontakt mellem spidsen af optode og deltagerens hovedbunden.
    6. Efter at alle optodes er i position, kontrollere for signalkvalitet ved hjælp af fNIRS system indbygget software.
    7. Justere individuelle sonder som nødvendigt, indtil tilstrækkeligt signalkvalitet opnås. Når alle optodes signal kvalitetskontrol har bestået, fortsætte med eksperimentelle opgaver.

5. eksperimentelle opgaver

  1. Designe hver neuroimaging opgave med et passende antal forsøg og betingelser i overensstemmelse med forskningsmål. Forstå at neuroimaging opgaver vil variere afhængigt af forskning mål. For eksempel, tre opgaver blev brugt i denne protokol: (1) et sprog forarbejdning og læsning opgave, (2) en RIM dom opgave, og (3) en kognitiv fleksibilitet opgave.
    Bemærk: Procedure (og repræsentative resultater) af rim dom opgave er fremhævet.
  2. Placer Larmen-Aflyser Hovedtelefon på deltagerens hoved, at være opmærksomme på ikke at blande sig med fNIRS sonde placering. Sikre at hovedtelefonerne vil levere auditive tale stimuli til deltageren, samt blokere enhver omgivende støj.
    Bemærk: Laboratorietest typisk foregår i en forsvarlig svækkede rum. Feltet laboratorietest giver ikke samme grad af støjbekæmpelse, og Larmen-Aflyser Hovedtelefon kan sikre rolige test vilkår for alle deltagere.
  3. Instruere deltager står over for computerskærmen og fiksere på korset i midten af skærmen, og forbliver stadig under eksperimentet. Præsentere alle eksperimentelle opgaver på en computerskærm.
  4. RIM dom opgave
    1. Pålægge deltageren til at lytte til de ord par præsenteret fonetisk via hovedtelefoner. Spørge deltageren til at angive, om ordet par rimede eller ej (fx 'kat'-'hat' eller 'kat'-'log ') med en knap Tryk på tastaturet.
    2. I dette eksempel, bruge en-hændelse relateret design. Lad deltagerne komplet 12 ikke-rimende og 12 rimede forsøg adskilt af rystede Inter stimulus intervaller på mellem 8 og 17 s.
      Bemærk: Opgaver skal oprettes på en måde, der er egnet til deltageren. I undersøgelsen henvises til her, forskere undersøger sproglige, kognitive, og læsning udvikling hos børn, der var meget dårlige læsere. Læsning neuroimaging opgave udviklet med ord, der ville være passende for et barn med minimal læsefærdigheder. Samt, blev børn udvalgt til neuroimaging paradigme baseret på point, som på en vurdering af læsning.
  5. Dim lys og begynder at optage deltager på den indbyggede videokamera.
  6. Begynder fNIRS dataregistrering på fNIRS kommando computer, og påbegynde opgaver på stimulus præsentation computer.
  7. Overvåge deltager ydeevne i hele alle opgaver. Give pauser mellem opgaver og kører.
  8. Sikre at udløse fra eksperimentelle stimuli præsentation computer er modtaget af fNIRS kommando computer.
  9. I slutningen af alle opgaver, stop video og fNIRS dataindsamling.

6. efter eksperimentel opgave målinger

  1. Fjern hver optode fra optode indehaveren cap.
  2. Uden at forstyrre position af optode indehaver cap på deltagerens hoved, direkte deltager til at sidde i stand til at opnå en anden 3D digitizer måling.
  3. Gentag 3D digitizer målingen som i fNIRS hovedbunden placering og måling afsnit 4 til at sikre, at enhver forstyrrelse af hovedbunden sonde holdning under eksperimentet kan påvises ved at sammenligne to position filerne.
  4. Fjern optode holder hætten fra deltagerens hoved.
  5. I slutningen af forsøget, give deltagerne en lille gave (f.eks. bøger og skoleartikler) og anerkendelser af forskerholdet for deres deltagelse.

7. plan for formidling af Data

  1. Del forskningsresultaterne med community-medlemmer og relevante lokale myndigheder til deres endelige oversættelse til politikken for de undersøgte spørgsmål.
    Bemærk: Deltagerne må ikke ydes direkte fra eksperimentet.
  2. Lave planer for opfølgende besøg til de deltagende lokalsamfund. Forbered rapporter og værktøjer, lokale undervisere kan bruge. For eksempel, bør nogen vurderinger lavet på lokale sprog gøres tilgængelige for skolen embedsmænd i regionen. Forberede de medlemmer af forskerholdet, der taler det lokale sprog til at mødes med lokale ledere til at kommunikere undersøgelsesresultater.
  3. Lave planer om at udgive undersøgelsesresultater i regionale akademiske tidsskrifter og i sproget i regionen, hvis det er relevant. For eksempel bør undersøgelsesresultater udbredes i fransk, hvis forskning blev gennemført i fransktalende lande.
  4. Lave planer om at mødes med og levere rapporter om undersøgelsesresultater for grenen regering, der gives godkendelse for forskningsprogrammet.

8. backup af Data

  1. Sikre, at data er eksporteret og sikkerhedskopieret til flere transportabel skrap drev, som internetadgang til online datalagring er usandsynligt, at være til rådighed. Overfør dataene til online datalagring, som tilstrækkelig internetforbindelse er tilgængelig.

9. dataanalyse

Bemærk: Flere data analyse pakker findes for fNIRS14. Statistiske parametrisk kortlægning for nær-infrarød spektroskopi (NIRS-SPM)15 , Homer216 (udbredt) og fNIRS værktøjskasse 17,18 (ny og at vinde popularitet) bruges til fNIRS dataanalyse. Denne protokol anmeldelser data analysemetoder ved hjælp af NIRS-SPM, men det er til skøn af forsker at vælge foretrukne metode til analyse.

  1. Analysere data fra fNIRS system ved hjælp af NIRS-SPM, Version 415,19. Denne værktøjskasse til neuroimaging suite SPM8 (http://www.fil.ion.ucl.ac.uk/spm) analyserer NIRS data med en generelle lineære model baseret analyse tilgang og giver mulighed for oprettelsen af aktivering kort med super-opløsning lokalisering.
  2. Datakonvertering til HbO og HbR
    1. Bruge modificerede øl-Lambert ligningen (med NIRS-SPM) til at konvertere ekstinktionen værdier koncentration for ændringer i HbO og HbR svar.
  3. Data forbehandling
    1. Bruge en af flere muligheder, der findes til forbehandling fNIRS data.
      Bemærk: Huppert et al. 17 foreslå meget strenge metoder for forskellige kilder til støj16. Disse omfatter egenvektor funderet reduktion af motion artefakter, bandpass filtrering teknikker og egenvektor funderet reduktion af rumlige kovariansen for fysiologiske forstyrrelser i data (fx respiration, blodtryk, puls). De deler også en grundig kommentar til støjkilder i fNIRS forskning og konsekvenser for statistisk analyse. FNIRS forskeren skal undersøge forbehandling applikationer, der er mest relevante for en given undersøgelse. Nedenfor er en analyse metode modelleret efter Worsely og Friston20 og Jang et al. 19 er præsenteret.
    2. Nedbrydes ændringer i HbO og HbR koncentrationer ved hjælp af en Wavelet-Minimum beskrivelse længde (MDL) detrending algoritme for at fjerne globale tendenser som følge af vejrtrækning, blodtryk variation, hjerte eller deltager bevægelse artefakter og til forbedre signal-støj-forholdet19.
    3. Anvende et low-pass filter med formen af funktionen hæmodynamiske svar med data og brug af Worsely og Friston20 precoloring metode til at fjerne tidsmæssige korrelationer.
  4. Model generation og statistisk analyse
    1. Generere modeller for HbO og HbR indeholdende eksperimentelle regressors convolved med den tilsvarende hæmodynamiske svar funktion med tid derivater21.
      Bemærk: Funktionen hæmodynamiske svar kan have større variation i højere kortikale regioner og på tværs af deltagerne. Disse typer af variation kan rummes i analysemodeller ved at udvide HRF til også at omfatte tidsmæssige derivater. Bruge en tidsmæssig derivat model forskelle i tid til peak hæmodynamiske svar21.
    2. Brug NIRS-SPM til at skabe modeller for HbO og HbR med modsatte polaritet, således at en betydelig model passer til HbO viser øget koncentration og til HbR faldt koncentrationen5,18.
    3. Oprettet eksperimentelt relevante t-test eller F-test kontraster til at teste for effekten af en (eller flere) regressors (givet matrixen design) på graduering af fNIRS gang seriedata.
  5. Visualisering af resultater
    1. Udføre fysisk registrering af NIRS kanaler til Montreal neurologiske Institute (MNI) plads ved hjælp af data fra en 3D digitizer.
    2. Bruge registrerede fNIRS data til at oprette aktivering kort over HbO, HbR og samlede hæmoglobin (THb) baseret på den generelle lineære model og solens tube formel rettelse22,23.
    3. Indlæse aktivering kort på en passende hjernen skabelon. For eksempel, giver de seneste Haskins Pediatric hjernen Atlas en standardiseret skabelon for børn mellem 6-12 år af alder24.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Sondens positionsdata indhentet af 3D digitaliseringsenheden (figur 2) kan visualiseres på en standard hjernen skabelon. Registrere fNIRS kanaler til MNI plads ved hjælp af NIRS-SPM stand-alone registrering funktion25. Den rumlige registreringsfunktion genererer MNI koordinater, anatomiske etiketter og Brodmann områder maksimalt repræsenteret af hver kanal.

Figure 2
Figur 2. Dataindsamling. (A) placering af fNIRS cap på deltagerens hoved og samling af positionsdata ved hjælp af 3D digitaliseringsenheden. (B) internationale 10-20 system bruges til at guide placeringen af fælles landbrugspolitik på deltagerens hoved. (C) geografisk lokalisering algoritme plotting x, y, z koordinere data på skabelonen MNI hjernen. Billedet genereret under stand-alone NIRS registrering ved hjælp af 3D digitizer data i NIRS-SPM15,19,25. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Sonden positionsdata kan også visualiseres over cortex overflade skabelon eller anatomiske Mr skabelon bruger Brainstorm software (figur 3).

Figure 3
Figur 3. fNIRS sonder. fNIRS sonder visualiseret på (A) overfladen af cortex og (B) MNI anatomiske Mr skabelon. Venstre, er dorsale og rigtige synspunkter fremlagt. Billeder genereres ved hjælp af Brainstorm software13. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Her, er repræsentative data fra Rim dom opgave vist (figur 4). Deltagerne afsluttet to ens struktureret kørsler af denne opgave. Hvert løb indeholdt 13 forsøg; rimede og ikke-rimende forsøg var tilfældigt bestilt.

Figure 4
Figur 4. Opgave design. Rimer dom opgave ordning er vist. Deltagerne løbende set på en fiksering tværs mens du jævnligt lytter til franske rimende eller ikke rimede ord par. Opgaven blev afsluttet i to kørsler, hver bestående af 13 forsøg. 13 rimede og 13 ikke-rimende forsøg blev tilfældigt præsenteret. Hvert forsøg varede 3 s; 1 s pr. ord med en 1 s ISI. Rystede præsentation af hviletid mellem forsøg, som varede 8-17 s. venligst klik her for at se en større version af dette tal.

3D positionsdata og eksperimentelle design data blev kombineret med fNIRS tidsserier data (figur 5) til analyse for at kortlægge eksperiment-relaterede betydelig neurale aktivering mønstre på en standard hjernen skabelon (figur 6). Repræsentative Enkeltfag data og resultater er vist i figur 5 og figur 6.

Figure 5
Figur 5. Repræsentative tidsserier data fra en fNIRS kanal. (A) rå tidsserier data svarende til hele opgaven længde (RIM dom opgave; første run), ikke normaliseret. (B) filtreret tidsserier data ved hjælp af wavelet detrending. Rimede og ikke-rimende forsøg er angivet med solid og stiplede box-bil, henholdsvis. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Dette emne viste større aktivering i den venstre hjernehalvdel Superior tidsmæssige Gyrus (STG) under rimede forsøg sammenlignet med resten (baseline fiksering på tværs). Gennemsnit HbO og HbR Svar nemlig rimede forsøg viser en kanonisk hæmodynamiske svar: øge HbO koncentrationer og tilsvarende faldende HbR koncentrationer efter stimulus præsentation.

Figure 6
Figur 6. Repræsentative single-emne resultater. (A) større aktivering er observeret for rimede forsøg versus baseline (fiksering cross) i den venstre hjernehalvdel, overliggende den bageste del af den overlegne tidsmæssige gyrus (STG). Billedet genereres under NIRS resultater trin ved hjælp af NIRS-SPM15,19,25. (B) gennemsnit event-relaterede bølgeformer for HbO (rød) og HbR (blå) under rimede forsøg (rimede ord par stimuli). Billedet genereret ved hjælp af Xu Cui plot gennemsnitlige funktion26. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Enkelt-emne resultaterne varierede mellem deltagere (Se figur 7). Denne individuelle variation kan afspejle underliggende funktionelle forskelle eller udviklingsmæssige forskelle i organiseringen af specifikke hjernen netværk. For eksempel, emne 1 viste større aktivering i regionen venstre ringere frontal gyrus under ikke-rimende versus rimede forsøg; mens emnet 2 viste større aktivering i regionen venstre STG under den samme eksperimentelle kontrast (ikke-rimende versus rimede forsøg).

Figure 7
Figur 7. Repræsentative single-emne resultater fra to forskellige deltagere for identiske kontrast. Større aktivering for ikke-rimende versus rimede forsøg i den venstre hjernehalvdel er vist i både A og B. (A) emne 1 viste større aktivering i den venstre ringere frontal gyrus. (B) emne 2 viste større aktivering den venstre superior tidsmæssige gyrus. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Dette papir præsenteret et felt neuroimaging protokol egnet til lav-ressource sammenhænge i fjerntliggende steder. Centrale forud for dette felt neuroimaging protokol er første gang muligheden for at studere hjernefunktion og dens udvikling i understudied (eller aldrig-før studerede) sammenhænge. Kritiske trin i denne protokol omfatter rejser med og at oprette et mobilt laboratorium egnet til kvalitet dataindsamling i tropiske klimaer uden elektricitet eller tilgængelige faciliteter. Denne protokol giver en generel vejledning til at danne stærke partnerskaber med lokale videnskabelige, uddannelsesmæssige, og statslige institutioner, og vi fremhæve den gensidige videnoverførsel, der opstår, når succesfulde langsigtede partnerskaber er dannet mellem lokale og besøgende forskere. Retningslinjer for udviklingen af kulturelt passende informeret samtykke procedurer og testprotokoller drøftes med henblik på at inkorporere flere kulturelle perspektiver i forskningsmetoder. Endelig, denne protokol giver detaljerede trin for området dataindsamling og dataanalyse.

Lokale videnskab Engagement og muligheder for kapacitetsopbygning:

En af de vigtigste udfordringer, som lokale, især yngre, forskere i Côte d'Ivoire står over for, når de fuldfører deres undersøgelser er manglen mulighed for praktisk forskningserfaring med erfarne forsker mentorer og/eller internationale samarbejdspartnere. Med henblik herpå bør forskere gør alle bestræbelser på at etablere robust samarbejde med lokale forskere fra relevante disciplinære baggrunde og omfatter praktikanter på alle niveauer (bachelor, kandidat, ph.d.). Praktikanter kan udnytte den indsigt, erfaringer fra denne erfaring til at arbejde selvstændigt og yderligere forskning. Denne oplevelse kan også være et springbræt til at bygge deres kapacitet som forskere og udvikle deres konkurrenceevne på internationalt plan i skrivning af forskningsforslag og papirer og ansøger om tilskud. Et forskerhold, undtagen lokale forskere kan har en reduceret chance for succes, som lokale forskere vil bedst kender de lokale sociale og kulturelle værdier og systemer, de lokale sprog, der tales ud over den geografiske viden om området. Deres bidrag er derfor meget vigtigt for at forstå de lokale realiteter og designe kulturelt passende protokoller for de succesrige forskningsprojekter.

Kulturelt relevant forskningsmetoder:

Udviklingen af informeret samtykke protokoller til at forske i landdistrikterne indstillinger specifikt i Côte d'Ivoire er kritisk og manglende evne til at vedtage den passende fremgangsmåde kan hæmme succesfuld opnåelse af forskning selv om velmenende og videnskabeligt solide27,28,29,30,31. Generelt, i landdistrikterne indstillinger i Elfenbenskysten, beder en landsbyboer at læse en samtykkeerklæring og underskrive det kan bryde enhver tillid til bygning mellem forskeren og deltageren. I virkeligheden, kan den opfattede formalitet af denne procedure skabe en psykologisk afstand og en følelse af usikkerhed i deltagerens sind. Dette kan resultere i en klar eller Uudtrykt uvilje til at samarbejde. Denne holdning kan forklares af mange faktorer, herunder en lang tradition for oral tradition hvor kommunikation er mere mundtlig end skrevet og høje priser af analfabetisme, der kan findes i target Fællesskaber. Samfundene i landdistrikterne indstillinger har tillid til deres chef og stole på sine beslutningsbeføjelser. Derfor indeholder protokollen præsenteret samtykke fra chefen for village på fællesskabsplan. Det er velsagtens mere kulturelt vigtigere end enkelte samtykke. Derudover deltagere og community-medlemmer kan have haft begrænset eller ingen eksponering for neuroimaging teknologi eller computere. Forskere skal derfor tage i betragtning at PIC-proceduren, og instruktioner, kan blive misforstået. Funktionen af fNIRS systemet bør meddeles i lægmand vilkår og passende sprog nemt forståeligt af barn deltagere og community-medlemmer, som kan have haft meget begrænset eksponering for teknologi. Disse betragtninger kan stærkt påvirke komfort og selvtillid af alle Fællesskabets medlemmer involveret i et felt neuroimaging forskningsprojekt.

Protokollen præsenteres her også fremhævet betydningen af deling forskningsresultater med community-medlemmer og offentlige partnere. Partnerskaber bygget på fortsat dialog bistand i eventuel oversættelse af forskningsresultater til politik. Det er bydende nødvendigt at arrangere post data indsamling felt besøg for at udbrede forskningsresultater og levere rapporter og eventuelt dele alle værktøjer, der førte fra undersøgelsen (fx vurderinger på lokale sprog). Deltagende lokalsamfund i landdistrikterne indstillinger kan aldrig ellers modtage oplysninger om undersøgelse er afsluttet og resultaterne i betragtning manglende Internetservice og/eller computere. Ligeledes kan forskere i landet har begrænset adgang til akademisk tidsskrift abonnementer og dårlig internetforbindelse på regionale universiteter. Offentliggjorte resultater bør deles i et regionalt forum og stilles til rådighed i et tilgængeligt sprog.

Begrænsninger og potentielle udfordringer:

Dette felt neuroimaging protokol bør ændres for at passe til de planlagte data indsamling steder. Protokollen præsenteres her er blevet udviklet for forskning med grundskolen alderen børn i landdistrikterne Cote d'Ivoire. De metoder, der er skitseret her kan dog ikke være egnede, specielt med hensyn til informeret samtykke procedurer, i andre lande eller endog andre regioner i Côte d'Ivoire. Forskere, der har til formål at gennemføre felt neuroimaging skal først omhyggeligt forskning lokale skikke og inddrage lokale perspektiver i undersøgelsen design. Derfor skal et forskerhold, der arbejder på undersøgelse designs omfatte medlemmer fra de lokale kulturelle grupper.

Feltet neuroimaging har begrænsning i forhold til laboratoriemetoder. Vigtigere, er kontrol af omgivelserne betydeligt reduceret i feltet. Feltet neuroimaging forskere bør planlægge udvidede data samlingen ture. Tropisk regn, risikoen for at pådrage tropesygdomme, civile strejker og politiske uro kan betydeligt påvirke forskningsplaner. Forskere skal sikre sikkerhedsniveauer i regionen er tilstrækkelige og kontrollere for opdateringer til alle situationer, der kan påvirke sikkerhedsniveauer. Løbende kommunikation mellem teammedlemmer, specielt med hensyn til sikringsniveauer, kan afbøde potentielle risici.

Fremtidige ansøgninger og relevans i forhold til eksisterende metoder:

Brugen af dette felt billeddiagnostisk metode kan anvendes til evaluering af virkningen af tidlige risiko på spædbørns- og udvikling i indstillinger for global sundhed. Forskere er begyndt at bruge denne fremgangsmåde for at undersøge barnets udvikling i landdistrikterne Gambia og en urban slumkvarter i Bangladesh32. I en slumkvarterer i Dhaka bruger forskere fNIRS til at undersøge, hvordan faktorer såsom ernæring og sanitet bidrage til vækst og hjerne udvikling33. I landdistrikterne Gambia, har forskerne brugt fNIRS til at undersøge kognitive funktion af spædbørn, og har vist, at fNIRS er en levedygtig afbildningsværktøj i ressource-fattige indstillinger34,35. Sådan arbejde lover at afsløre ny indsigt i udviklingen af børn i udviklingslandene, der er uforholdsmæssigt hårdt ramt af underernæring og dårlige sanitære forhold. Bærbare neuroimaging teknologier fortsætter med at blive mere tilgængelig og anvendelig for forskning i lav-ressource miljøer, hvilket understreger behovet for strenge metoder for feltet neuroimaging.

Konklusion:

Bærbare neuroimaging systemer med mulighed for funktion på batteri-leverede strøm er for nylig blevet tilgængelige. Da disse teknikker er relativt nye, vil forskud til batterisystemer give løbende forbedringer. Forskelligartede samfund af internationale forskere udvikle forskningsprogrammer ved hjælp af disse værktøjer vil utvivlsomt optimere mobilt laboratorium indstillinger for at give øget kontrol over omgivelserne. Meningsfulde engagement mellem internationale og lokale forskere og lokalsamfundene kan sikre, at medlemmer af undersøgelse befolkninger har aktive roller i udviklingen af forskningsprogrammer og repræsentere deres Fællesskabernes interesser. Kun sådan samarbejdsbaseret og integreret forskerhold ville være godt positioneret til at anvende feltet neuroimaging metoder til at studere alle menneskelige hjerne udvikling, og afsløre både teoretisk og praktisk-relevante oplysninger til formål at forstå mest presserende barn udviklingsspørgsmål.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne har ikke noget at oplyse.

Acknowledgments

Denne forskning blev muliggjort gennem Jacobs Foundation tidlige karriere stipendium til K. Jasinska (Fellowship nummer: 2015 118455). Forfatterne også ønsker at anerkende Axel Blahoua, Fabrice Tanoh, Ariane Amon, Brice Kanga og Yvette Foto for deres bistand til dataindsamling og felt støtte. En særlig tak til de familier og børn af Moapé, Ananguié, Affery og Becouefin for deres deltagelse i dette forskningsprogram og landsbyer varm gæstfrihed.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
LIGHTNIRS Main Unit Pack 120V Shimadzu 292-34000-42 Component of the fNIRS system
HOLDER ASSY, ALL- CAP Shimadzu 594-07618-01 Component of the fNIRS system
LIGHTNIRS connection cable Shimadzu 567-10976-11 fNIRS system component
Fiber set for LIGHTNIRS, 1m (8 sets) Shimadzu 567-11350-01 fNIRS system component
Dell Latitude Laptop Shimadzu (from Dell) 220-97322-00 Master computer to run fNIRS applications
PATRIOT SEU (System Electronics Unit) POLHEMUS 1A0453-001 PATRIOT System component
Power Supply POLHEMUS 2C0809 PATRIOT System component
Power Supply cord POLHEMUS 17500B-BLK PATRIOT System component
RS-232 null modem cable POLHEMUS 1C0288 PATRIOT System component
USB cable POLHEMUS 1C0289 PATRIOT System component
RX2 Sensor 10' cable POLHEMUS 4A0492-20 PATRIOT System component
TX2 Source 10' cable POLHEMUS 4A0506-20 PATRIOT System component

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Dawson, G., Ashman, S. B., Carver, L. J. The role of early experience in shaping behavioral and brain development and its implications for social policy. Dev Psychopathol. 12 (4), 695-712 (2000).
  2. Blair, C., Raver, C. C. Poverty, Stress, and Brain Development: New Directions for Prevention and Intervention. Acad Pediatr. 16 (3 Suppl), S30-S36 (2016).
  3. Jasińska, K. K., Petitto, L. A. How age of bilingual exposure can change the neural systems for language in the developing brain: A functional near infrared spectroscopy investigation of syntactic processing in monolingual and bilingual children. Dev Cogn Neurosci. 6c, 87-101 (2013).
  4. Statistics, U. I. f Côte d'Ivoire. , (2017).
  5. University, T. 2013/14 Survey Research on Child Labor in West African Cocoa Growing Areas. , School of Public Health and Tropical Medicine. (2015).
  6. Cui, X., Bray, S., Bryant, D. M., Glover, G. H., Reiss, A. L. A quantitative comparison of NIRS and fMRI across multiple cognitive tasks. Neuroimage. 54 (4), 2808-2821 (2011).
  7. Quaresima, V., Bisconti, S., Ferrari, M. A brief review on the use of functional near-infrared spectroscopy (fNIRS) for language imaging studies in human newborns and adults. Brain Lang. 121 (2), 79-89 (2012).
  8. Jasińska, K. K., Berens, M. S., Kovelman, I., Petitto, L. A. Bilingualism yields language-specific plasticity in left hemisphere's circuitry for learning to read in young children. Neuropsychologia. 98, 34-45 (2016).
  9. Jasińska, K. K., Petitto, L. A. Development of neural systems for reading in the monolingual and bilingual brain: new insights from functional near infrared spectroscopy neuroimaging. Dev Neuropsychol. 39 (6), 421-439 (2014).
  10. Petitto, L., et al. The "Perceptual Wedge Hypothesis" as the basis for bilingual babies' phonetic processing advantage: new insights from fNIRS brain imaging. Brain Lang. 121 (2), 130-143 (2012).
  11. Jasper, H. H. Report of the Committee on Methods of Clinical Examination in Electroencephalography. Electroencephalogr Clin Neurophysiol. 10 (2), 370-371 (1958).
  12. Shalinsky, M. H., Kovelman, I., Berens, M. S., Petitto, L. A. Exploring Cognitive Functions in Babies, Children & Adults with Near Infrared Spectroscopy. Journal of visualized experiments. (29), (2009).
  13. Tadel, F., Baillet, S., Mosher, J. C., Pantazis, D., Leahy, R. M. Brainstorm: a user-friendly application for MEG/EEG analysis. Comput Intell Neurosci. 2011, 879716 (2011).
  14. Tak, S., Ye, J. C. Statistical analysis of fNIRS data: A comprehensive review. Neuroimage. 85, Part 1 (0), 72-91 (2014).
  15. Ye, J. C., Tak, S., Jang, K. E., Jung, J., Jang, J. NIRS-SPM: statistical parametric mapping for near-infrared spectroscopy. Neuroimage. 44 (2), 428-447 (2009).
  16. Huppert, T. J. T. J., Diamond, S. G. S. G., Franceschini, M. A. M. A., Boas, D. A. D. A. HomER: a review of time-series analysis methods for near-infrared spectroscopy of the brain. Appl Opt. 48 (10), D280-D298 (2009).
  17. Huppert, T. J. Commentary on the statistical properties of noise and its implication on general linear models in functional near-infrared spectroscopy. Neurophotonics. 3 (1), 010401 (2016).
  18. Rosso, A. L., et al. Neuroimaging of an attention demanding dual-task during dynamic postural control. Gait Posture. 57, 193-198 (2017).
  19. Jang, K. E. K. E., et al. Wavelet minimum description length detrending for near-infrared spectroscopy. Journal of Biomedical Optics. 14 (3), 034004-034004 (2009).
  20. Worsley, K. J., Friston, K. J. Analysis of fMRI time-series revisited--again. Neuroimage. 2 (3), 173-181 (1995).
  21. Friston, K. J., Josephs, O., Rees, G., Turner, R. Nonlinear event-related responses in fMRI. Magn Reson Med. 39 (1), 41-52 (1998).
  22. Sun, J. Y. Tail Probabilities of the Maxima of Gaussain Random-Fields. The Annals of Probability. 21 (1), 34-71 (1993).
  23. Sun, J. Y., Loader, C. R. Simultaneous Confidence Bands for Linear-Regression and Smoothing. The Annals of Statistics. 22 (3), 1328-1345 (1994).
  24. Molfese, P. J., Glen, D., Mesite, L., Pugh, K., Cox, R. Organization of Human Brain Mapping. , Honolulu Hawaii. (2015).
  25. Singh, A. K., Okamoto, M., Dan, H., Jurcak, V., Dan, I. Spatial registration of multichannel multi-subject fNIRS data to MNI space without MRI. Neuroimage. 27 (4), 842-851 (2005).
  26. Cui, X. Handy programs to visualize NIRS data (6): plotAverage. , Available from: http://www.alivelearn.net/?p=1533 (2013).
  27. Krosin, M. T., Klitzman, R., Levin, B., Cheng, J., Ranney, M. L. Problems in comprehension of informed consent in rural and peri-urban Mali, West Africa. Clinical Trials. 3, (2006).
  28. Leach, A. An evaluation of the informed consent procedure used during a trial of a Haemophilus influenzae type B conjugate vaccine undertaken in The Gambia, West Africa. Soc Sci Med. 48, (1999).
  29. Molyneux, C. S., Peshu, N., Marsh, K. Understanding of informed consent in a low-income setting: three case studies from the Kenyan Coast. Soc Sci Med. 59, (2004).
  30. Oduro, A. R. Understanding and retention of the informed consent process among parents in rural northern Ghana. BMC Med Ethics. 9 (1), 1-9 (2008).
  31. Tindana, P. O., Kass, N., Akweongo, P. The Informed Consent Process in a Rural African Setting:: A Case Study of the Kassena-Nankana District of Northern Ghana. IRB. 28 (3), 1-6 (2006).
  32. Lloyd-Fox, S., et al. fNIRS in Africa & Asia: an Objective Measure of Cognitive Development for Global Health Settings. The FASEB Journal. 30 (1 Supplement), (2016).
  33. Storrs, C. Nature News. , Nature Publishing Group. (2018).
  34. Lloyd-Fox, S., et al. Functional near infrared spectroscopy (fNIRS) to assess cognitive function in infants in rural Africa. Sci Rep. 4, 4740 (2014).
  35. Papademetriou, M. D., et al. Optical imaging of brain activation in Gambian infants. Adv Exp Med Biol. 812, 263-269 (2014).

Tags

Neurovidenskab sag 132 fNIRS felt metoder neuroimaging kognition neurovidenskab barnets udvikling globale færdigheder sprog læsning Elfenbenskysten Sahara
Neuroimaging felt metoder ved hjælp af funktionelle nær infrarød spektroskopi (NIRS) Neuroimaging at studere globale børns udvikling: landdistrikter Sahara
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Jasińska, K. K., Guei, S.More

Jasińska, K. K., Guei, S. Neuroimaging Field Methods Using Functional Near Infrared Spectroscopy (NIRS) Neuroimaging to Study Global Child Development: Rural Sub-Saharan Africa. J. Vis. Exp. (132), e57165, doi:10.3791/57165 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter