Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biochemistry
Click here for the English version

Biochemistry

Påvisande av tvättmedel-känsliga samspelet mellan membranproteiner

Published: March 7, 2018 doi: 10.3791/57179
Automatic Translation
1, 1, 1
1Department of Biochemistry, Boston University School of Medicine

Summary

Vi beskriver ett protokoll för detektion av tvättmedel-känsliga samspelet mellan membranproteiner med bindande av sortering receptor, sortilin, till den första luminala loopen av glukos transporter protein, GLUT4, som exempel.

Abstract

Vår förmåga att utforska protein-protein interaktioner är nyckeln till att förstå regulatoriska anslutningar i cellen. Påvisande av protein-protein interaktioner i många fall är dock associerade med betydande experimentella utmaningar. I synnerhet interagerar sortering receptorer med deras protein Last i lumen av membran facken ofta i ett tvättmedel-känsliga sätt, göra co-immunoprecipitation av dessa proteiner oanvändbar. Bindande för den sortering receptor sortilin till glukostransportör GLUT4 kan tjäna som ett exempel på svag luminala interaktioner mellan membranproteiner. Här beskriver vi en snabb, enkel och billig analys för att validera samspelet mellan sortilin och GLUT4. För att har vi utformat och kemiskt syntetiserade myc-taggade peptiden motsvarar den potentiella sortilin-bindande epitop i luminala delen av GLUT4. Sortilin taggade med sex histidines var uttryckt i däggdjursceller och isolerad från cell lysates använder kobolt pärlor. Sortilin orörlig på pärlor var inkuberas med lösningen peptid vid olika pH-värden, och eluerat materialet analyserades av Western blotting. Denna analys kan lätt anpassas till studera andra tvättmedel-känsliga protein-protein interaktioner.

Introduction

GLUT4 är en glukos transporter protein som uttrycks huvudsakligen i fett-och skelettmuskler celler där det medierar effekten av insulin på postprandiellt blod glukos clearance1. Att vara en mycket stabil protein, är GLUT4 reglerat på posttranslationella nivå. I avsaknad av insulin, GLUT4 är i stort sett uteslutet från plasmamembranet (därav låg basal permeabilitet för glukos) och är lokaliserad främst inne i cellen i små insulin-lyhörd blåsor (IRVs) och trans-Golgi nätverk (TGN) som sannolikt kommer att representera IRV givare facket. Vid administrering av insulin, IRVs säkring med plasmamembranet och leverera GLUT4 till platsen för dess funktion. Detta ökar permeabiliteten i plasmamembranet för glukos, så att glukosupptag från blodet in i adipocyter och skelett myocyter stiger 10 till 40-fold. Efter insulin tillbakadragande, är GLUT4 internaliseras i tidig/sortering endosomes och sedan Hämtad till TGN där IRVs är åter bildade. Båda sortering steg i GLUT4 vägen, d.v.s. hämtning från de perifera tidig endosomes till perinukleära TGN och bildandet av IRVs om TGN givaren membran är aktiverade som den Vps10p familjemedlemmen, sortilin, som representerar en typ jag transmembrane protein och en sortering receptor. Enligt en modell, sortilin fungerar som en transmembrana byggnadsställning protein: den binder GLUT4 i lumen av endosomes och TGN och rekryterar retromer eller clathrin adaptrar till cytoplasmiska sida av den givare membran via dess C-terminus2, 3. Detta underlättar fördelningen av GLUT4 i vesikulär bärare som translocate GLUT4 mellan intracellulär fack.

Samspelet mellan den cytoplasmiska svansen av sortilin med retromer och olika adapter proteiner är väl dokumenterat. Bindningen av sortilin GLUT4 (och flera av dess andra protein ligander) har dock varit en utmaning för att bevisa. Försök att co-immunoprecipitate sortilin och GLUT4 har särskilt inte lyckats förmodligen på grund av hur tvättmedel-känsliga samspelet mellan dessa två proteiner. Som en typisk transportör protein, har GLUT4 dessutom 12 transmembrana domänerna och 6 luminala slingor någon kombination som potentiellt kan representera en sortilin-bindningsstället. På samma gång, en stor mängd indirekta bevis, såsom betydande Co lokalisering i cellen, cross-linking med membran-permeable DSP, och samspelet i jäst två hybridsystem föreslår att sortilin kan binda till GLUT4. Dessutom har använder den senare metoden i kombination med den alanin skanning mutagenes, vi tidigare konstaterat att domänen Vps10p av sortilin binder primärt till den första luminala öglan av GLUT4. Bevis på sådan interaktion i däggdjursceller har dock saknas. Här, vi har isolerat hans-taggade sortilin från transfekterade 3T3-L1 celler använder kobolt harts och visat att det kan interagera med kemiskt syntetiserade peptid motsvarar den första luminala öglan av GLUT4 vid pH 6 och pH 8 som liknar sur miljö i den endosomal lumen och neutral miljö i lumen av TGN membran. Ingen peptid bindning identifierades i kontroll experiment där extrakt som framställts av icke-transfekterade celler lästes på samma pärlor.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. hantering av peptiden

  1. Design och beställning av peptiden
    1. Välj den önska sekvensen av peptiden och lägga till en etikett, t ex myc epitop (EQKLISEED) på dess antingen N - eller C-terminus.
    2. Kontrollera den förutspådda lösligheten av peptiden i vatten med peptid löslighet kalkylator http://pepcalc.com/peptide-solubility-calculator.php. Om lösligheten är låg, försök lägga till en annan vattenlösliga tagg om du vill ändra kostnad balansen.
      Obs: Vi använde peptiden motsvarar första luminala slingan (fll) GLUT4 märkta med den myc epitop (fetstil) på N terminalen (Myc-fll-GLUT4): EQKLISEEDLNAPQKVIEQSYNATWLGRQGPGGPSSIPPGTLTTLWA som har ”bra” förutspådde löslighet i vatten .
    3. Beställ den anpassa peptiden med minst 75% renhet som är tillräcklig för analysen och be leverantören för löslighetstest. Separera ordningen i minst två portioner vid oförutsedda problem med upplösning peptiden.
      Obs: Myc-fll-GLUT4 beställdes i två portioner. Dess rapporterade löslighet i ultrarent vatten är ≤ 10 mg/mL.
  2. Upplösning peptiden
    Obs: Ultrarent vatten är bästa lösningsmedlet. Om peptiden inte verkar vara vattenlösliga, se http://www.genscript.com/peptide_solubility_and_stablity.html för instruktioner.
    1. Förbereda 100 x fungerande lösning av peptiden i ultrarent vatten eller i buffert val, med koncentrationen av 100 μg/mL.
    2. Separera lösningen i 50-100 µL portioner, och lagra dem vid-20 ° C.

2. hantering av celler

  1. Cellkultur
    1. Använda vildtyp (WT) celler som en negativ kontroll och celler som uttrycker målproteinet taggade med sex histidines (HisP).
      Obs: Vi använde 3T3 L1 före adipocyter stabilt transfekterade med Sortilin-myc/hans5.
    2. Odla cellerna i Dulbeccos modifierade Eagle Medium (DMEM) hög socker, kompletterad med 10% kalv bovint serum, glutamin (2 mM) och penicillin/streptomycin (5 μg/mL) vid 37 ° C i 10% CO2.
    3. Sitta fyra 10 cm rätter av celler, transfect två av dem med HisP och transfect de andra två med kontrollplasmid (WT). 48 h efter transfection, celler bör nå 80-90% konfluens.
  2. Beredning av den Cell Lysates
    1. Förbereda lyseringsbuffert (10 mM Hepes, 30 mM NaCl, 5% glycerol, 10 mM Imidazol, 0,5% Triton x-100 och proteas hämmare cocktail utan EDTA för isolering av hans-taggade proteiner, pH 7,4) och förvara den i 4 ° C:
    2. Tvätta cellerna tre gånger med 10 mL 1 x fosfatbuffrad saltlösning (PBS) vid 4 ° C.
    3. Sätta rätterna på is och tillsätt 500 µL lyseringsbuffert till varje maträtt. Skörda den cell lysates använda en cell-skrapa.
    4. Placera cellen lysate från varje maträtt i en olika 1,5 mL tub. Märk rören som WT-pH6, WT-pH8, HisP-pH6, HisP-pH8.
    5. Passera den cell lysates en spruta med en 26G nål fem gånger upp och ner, till komplett lysis.
    6. Centrifugera i cell lysates vid 16 000 x g under 10 minuter vid 4 ° C.
    7. Överföra supernatanterna till nya identiskt märkta rör.
    8. Analysera proteinkoncentration med BCA Protein Assay Kit eller andra kit.
    9. Använda lyseringsbuffert, utjämna proteinkoncentration av alla fyra lysates.
    10. Separera en liten (ca. 20 µL) alikvot av varje lysate och hålla den vid-20 ° C för möjliga kontroll experiment eller felsökning.

3. bindande av hans-taggade proteiner till HisPur kobolt pärlor

  1. Använda kommersiellt tillgängliga tvättbuffert eller förbereda en (50 mM Na2HPO4/NaH2PO4, 300 mM NaCl, 20 mM Imidazol, pH 8) och hålla det vid 4 ° C.
  2. Förbereda tvätta buffert med pH 6 av fnissande tvätta buffert pH 8 med HCl. Håll det vid 4 ° C.
  3. Snurra försiktigt flaskan av kobolt pärlor att göra homogen suspension.
  4. Fördela 40 µL av kobolt pärlor suspensionen i fyra 1,5 mL rör märkta som ovan (steg 2.2.4).
  5. Tillsätt 1 mL lyseringsbuffert till varje rör, Centrifugera rören vid 1000 x g i 5 s. Aspirera supernatanten och tillsätt 40 μL lyseringsbuffert till fast pärlor.
  6. Lägg till den cell-lysates till motsvarande rör.
  7. Inkubera rören för 90 minuter vid 4 ° C på en tube rotator på 20 rpm.
  8. Centrifugera rören vid 1000 x g för 5 s och samla supernatanten. Hålla supernatanten vid 4 ° C.
  9. Tillsätt 500 µL antingen pH 8 eller pH 6 tvättbuffert motsvarande rör och slamma pärlorna försiktigt.
  10. Centrifugera rören vid 1000 x g i 5 s och kassera supernatanterna.
  11. Upprepa steg 3.9 och 3.10 för fyra gånger.

4. bindande av peptiden till hans-märkta proteinet orörlig på pärlor

  1. Använda 100 x fungerande lösning av peptiden (steg 1.2.1), förbereda 1 x fungerande lösningar i antingen pH 6 eller pH 8 tvättbuffert (två 100 µL portioner för varje, 1 µg/mL).
  2. Tillsätt 100 μL 1 x peptid lösning till tvättade pärlorna med motsvarande pH.
  3. Inkubera pärlor i 30 minuter vid 4 ° C på en tube rotator på 20 rpm.
  4. Centrifugera rören vid 1 000 x g i 5 s, samla supernatanten och hålla det vid-20 ° C.
  5. Upprepa steg 3.9 och 3.10 för fyra gånger.
    Obs: För att minska möjliga bakgrund, kan följande steg ersätter steg 4.4 och 4.5.
  6. Ta fyra mikrokolonner med 30 μm porer, märka dem som i steg 2.2.4 och placera kolumnerna i samlingen rör.
  7. Efter slutförandet av steg 4,3, överföra inkubation blandningen i kolumner, låt lösningen att passera genom självtryck. Hålla flödet genom vid-20 ° C.
  8. Passera 500 µL tvättlösning med pH 6 eller pH 8 genom motsvarande kolumner av gravitationen. Kassera flödet genom.
  9. Upprepa steg 4,8 fyra gånger.
  10. Efter den sista tvättningen, Centrifugera kolumnerna vid 1 000 x g i 15 s.

5. eluering från kobolt pärlor

  1. Använd kommersiella Tricine prov buffert (200 mM Tris-HCl, 40% glycerol, 2% SDS, 0,04% Coomassie blå, pH 6,8) och lägga till β-merkaptoetanol till en slutlig koncentration på 2%.
  2. Tillsätt 40 µL av Tricine prov buffert (med β-merkaptoetanol) till tvättade pärlor och vortex provet.
  3. Värm proverna under 10 minuter vid 100 ° C, vortex proverna igen, och centrifugera rören vid 1 000 x g i 5 s.
    Obs: För att minska möjliga ospecifik bindning i elueringen, kan följande steg ersätter steg 5.1-5.3.
  4. Tillsätt 40 μl eluering Imidazol buffert (50 mM Na2HPO4/NaH2PO4, 300 mM NaCl, 0,25 M Imidazol) till den tvättade pärlor, vortex och inkubera rören i rumstemperatur i 20 min.
  5. Centrifugera rören vid 3 000 x g i 30 s, samla in supernatanten (eluerade prover) och överföra det till nya märkta rör.
  6. Tillsätt 40 μl Tricine prov buffert till varje rör, värmer proverna under 10 minuter vid 100 ° C, vortex och centrifugera rören vid 1 000 x g i 5 s.
    Obs: Om mikrokolonner används, Lägg eluering bufferten till tvättade pärlorna, inkubera i 20 min och samla elueringen genom centrifugering vid 8000 x g i 2 min.
    Obs: Prover kan förvaras vid-20 ° C tills elektrofores utförs.

6. elektrofores och Western blotting

Obs: Proverna är redo för separation av SDS-PAGE och efterföljande Western blotting. Följ protokollet av gelelektrofores (https://www.jove.com/science-education/5065/the-western-blot) med följande ändringar.

  1. Använda kommersiellt tillgängliga 10-20% Tricine gradient geler.
  2. På gel, lasta 20 µL av de eluerade proverna och 20 µL av lysates (steg 2.2.10). För felsökning, det rekommenderas att lasta 20 µL av obundet material (steg 3.8) och 10 ng av peptiden; före lastning, lägga lika stor mängd Tricine prov buffert till dessa prover.
  3. Utför elektrofores i kommersiella Tris/Tricine/SDS kör buffert (100 mM Tris, 100 mM Tricine, och 0,1% SDS, pH 8,3).
  4. Överföra materialet från gelen på ett 0,45 µm nitrocellulosa membran använda överföring buffert (25 mM Tris base, 192 mM glycin, pH 8,4) kompletteras med 20% metanol.
  5. Blockera membranet med 3% bovint serumalbumin (BSA) för 1 h i rumstemperatur. Med pre färgade molekylvikt märkpennor som guider, skär membranet horisontellt, blot den övre delen med en antikropp mot HisP och blot den nedre delen med en antikropp mot den myc epitop att identifiera myc-taggade peptiden.
    Obs: I vårt fall, skärning av membranet krävs inte eftersom både HisP och Myc-fll-GLUT4 kan upptäckas med en anti myc-antikropp.

7. analys av resultat

  1. Kvantifiera intensiteten i alla Western blot signaler använder ett bild Station eller ImageJ.
  2. Normalisera signalen från myc-taggade peptiden mot signalen från HisP på båda pH-värden.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Lysates utarbetades från 3T3 L1 celler stabilt transfekterade med Sortilin-myc/hans5 och från WT 3T3 L1 celler, som används som en negativ kontroll. Båda lysates var inkuberas med kobolt pärlor på pH 6 eller pH 8 och noggrant tvättas. Pärlor med immobiliserade proteiner inkuberades sedan i lösningen av Myc-fll-Glut4. Efter noggrann tvättar, var proteinerna bunden till pärlorna elueras med 0,25 M Imidazol. Proverna utsattes, tillsammans med den ursprungliga lysates, till SDS-PAGE i en 10-20% Tricine gradient gel följt av Western blotting med anti Myc-antikropp som tillåts för detektion av båda sortilin, myc/hans (110 kD) och Myc-fll-GLUT4 (5 kD) (figur 1) .

MYC-fll-GLUT4 (10 ng) lästes på den första lanen gel som referens. Renhet av peptiden är endast 75%, är föroreningar uppenbara (högre band). Ursprungliga cellen lysates från både WT och Sortilin-myc/His uttrycker celler innehåller flera band igen av anti myc antikroppen. Material isolerade från Sortilin-myc/His uttrycker celler är mycket renare. Förutom några mindre icke-specifika band, den har endast två myc-innehållande komponenter: Sortilin, myc/hans och Myc-fll-GLUT4. Kontaminerande peptider i första lane visas inte att binda till Sortilin-myc/hans. Negativ kontroll (WT eluatet) har huvudsakligen icke-specifika band.

GLUT4 passerar genom intracellulär fack, såsom endosomes och TGN, som har olika luminala pH, ville vi bedöma samspelet mellan GLUT4 med sortilin vid pH 6 och pH 8 (figur 2). Densitometry av resultat (visas inte) har inte avslöjat några väsentliga skillnader i förhållandet mellan Myc-fll-GLUT4 och Sortilin-myc/hans behålls på pärlor vid olika pH-värden. Således drar vi slutsatsen att GLUT4 har förmågan att interagera med sortilin i både endosomes och TGN.

Figure 1
Figur 1 . Samspelet mellan Sortilin-myc/hans med Myc-fll-GLUT4 på kobolt pärlor. Lysates beredd från WT 3T3-L1 celler och 3T3-L1 celler som stabilt uttrycker Sortilin-myc/hans (S) var passerade över kobolt pärlor, tvättas, inkuberas med Myc-fll-Glut4 vid pH 8, tvättas igen, och elueras med Imidazol-buffert. MYC-fll-Glut4 (10 ng) lästes på den första lanen som referens.

Figure 2
Figur 2 . Sortilin-myc/hans interagerar med Myc-fll-GLUT4 både pH 8 och pH 6. MYC-fll-Glut4 var inkuberas med material orörlig på pärlor vid pH 6 och pH 8, tvättas, och elueras med glycin prov buffert. Figuren har anpassats från Pan X., et al3.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Sortilin är en evolutionärt bevarade flera ligand protein receptor som är inblandad i båda signalering vid plasmamembranet och intracellulär sortering händelser6,7. Sökandet efter den autentiska sortilin ligander (varav vissa är luminala eller integrerad membranproteiner) är dock komplicerade samspelet mellan sortilin och några av dess bindande partner verkar vara känsliga för rengöringsmedel. Därför, en lätt och en omfattande strategi för att studera protein-protein interaktioner, co-immunoprecipitation, inte kan lätt tillämpas. Vissa forskargrupper har använt co-immunoprecipitation för att påvisa samspelet mellan sortilin och dess potentiella ligander8,9. Men dessa experiment har utförts antingen i 0,1% Triton eller 0,6% käkar som kastar tvivel i membran lösbarhet fullständighet.

Andra forskare studerat samspelet mellan sortilin och dess ligander av ytan plasmon resonans10,11. Även om ytan plasmon resonans är utan tvekan det bästa sättet att problemet, kräver det dyr utrustning och betydande mängder ren rekombinanta proteiner som är kostsamma och tidskrävande.

Här, beskriver vi en teknik som, i kombination med andra metoder, såsom cross-linking och jäst två hybrid-systemet, tyder starkt på att sortilin kan binda till GLUT4. Analysen är snabbt och enkelt och lätt kan anpassas till andra proteiner och peptider i olika storlekar.

Det finns några kritiska steg i denna analys. Den första är peptidens löslighet i vatten. En annan är valet av korrekt kontroll. Klart, en betydande mängd biologiskt material kan interagera med kobolt pärlor via endogena hans nå sekvenser eller icke-specifikt. Därför är det viktigt att immobilisera på de pärlor lysates WT celler och celler transfekterade med proteinet av intresse, i vårt fall Sortilin-myc/hans. I sådan en experimentell design, material bundna till pärlorna varierar i endast en protein, Sortilin myc/hans, så att en viss grad av bakgrunden bindningen av peptiden till kontroll pärlor kan tolereras. Fortfarande, bakgrunden bindningen av peptiden till pärlorna kan minskas genom att öka striktheten hos de slutliga tvätt steg. Användningen av mini kolumner för tvättning pärlorna kan minska bakgrund bindande ytterligare.

På grund av den ”GLUT4 vägen” ville vi adress bindningen av Myc-fll-GLUT4 till sortilin vid olika pH-värden. Vi inser att pH i lumen av tidig/sortering endosomes kan understiga 6. Dock stör pH lägre än 6 bindningen av hans-taggade proteiner till kobolt pärlor som kan betraktas som en begränsning i metoden.

Isolering av målproteinet på kobolt pärlor med hans epitop är att föredra framför andra affinitet reningssteg, såsom immunoprecipitation med specifika antikroppar, i fråga om avkastning och icke-specifik bindning. Ändå är det helt möjligt att isolering av målproteinet på några andra harts (helst, magnetiska pärlor) med ordentliga kontroller kommer att lyckas.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Författarna har något att avslöja.

Acknowledgments

Detta arbete stöds av forskningsanslag som DK52057 och DK107498 från NIH till K.V.K. X.P stöddes av den institutionella utbildningen grant 2T32DK007201 från NIH.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Protease inhibitor cocktail Sigma P8849 for use in purification of histidine tag protein
Phosphate-Buffered Saline  Corning 21-040-CV PBS
1mL Insulin Syringe U-100 BD 329652 26G x 1/2
BCA Protein Assay Kit Pierce 23228
Wash buffer Boston BioProducts BP-234 For His-tag protein purification
HisPur Cobalt Resin Thermo Scientific 89964
Tricine sample Buffer Bio-Rad 161-0739 with SDS, bMercaptaethanol should be added
Elution  Buffer Boston BioProducts BP-236 For His-tag protein purificationwith 250mM Imidazole
Mini-Protean Tris-Tricine precast gels 10-20%  Bio-Rad 456-3115 For seperation of peptide and small protein
Tris/Tricine/SDS running buffer  Bio-Rad 161-0744
Transfer Buffer Boston BioProducts BP-190 Add 20% methanol
Nitrocellulose membrane  0.45 mm Bio-Rad 1620115
Bovine Serum Albumin Sigma A9647 BSA
Anti Myc antibody Cell Signaling 2272 Rabbit
Peptide Genscipt customize ordering
Precision Plus Protein Dual color Standarts BioRad 161-0374

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Bogan, J. S. Regulation of glucose transporter translocation in health and diabetes. Annu Rev Biochem. 81, 507-532 (2012).
  2. Kandror, K. V., Pilch, P. F. The sugar is sIRVed: sorting Glut4 and its fellow travelers. Traffic. 12 (6), 665-671 (2011).
  3. Pan, X., Zaarur, N., Singh, M., Morin, P., Kandror, K. V. Sortilin and retromer mediate retrograde transport of Glut4 in 3T3-L1 adipocytes. Mol Biol Cell. 28 (12), 1667-1675 (2017).
  4. Kim, J., Kandror, K. V. The first luminal loop confers insulin responsiveness to the glucose transporter 4. Mol Biol Cell. 23 (5), 910-917 (2012).
  5. Shi, J., Kandror, K. V. Sortilin is essential and sufficient for the formation of Glut4-storage vesicles in 3T3-L1 adipocytes. Dev Cell. 9 (1), 99-108 (2005).
  6. Coutinho, M. F., Prata, M. J., Alves, S. A shortcut to the lysosome: the mannose-6-phosphate-independent pathway. Mol Genet Metab. 107 (3), 257-266 (2012).
  7. Willnow, T. E., Petersen, C. M., Nykjaer, A. VPS10P-domain receptors - regulators of neuronal viability and function. Nat Rev Neurosci. 9 (12), 899-909 (2008).
  8. Mazella, J., et al. The 100-kDa neurotensin receptor is gp95/sortilin, a non-G-protein-coupled receptor. J Biol Chem. 273 (41), 26273-26276 (1998).
  9. Ni, X., Morales, C. R. The Lysosomal Trafficking of Acid Sphingomyelinase is Mediated by Sortilin and Mannose 6-phosphate Receptor. Traffic. 7 (7), 889-902 (2006).
  10. Westergaard, U. B., et al. Functional organization of the sortilin Vps10p domain. J Biol Chem. 279 (48), 50221-50229 (2004).
  11. Nykjaer, A., et al. Sortilin is essential for proNGF-induced neuronal cell death. Nature. 427 (6977), 843-848 (2004).

Tags

Biokemi fråga 133 Sortilin GLUT4 membranproteiner cellbiologi protein-protein interaktioner tvättmedel-fri analys
Påvisande av tvättmedel-känsliga samspelet mellan membranproteiner
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Zaarur, N., Pan, X., Kandror, K. V.… More

Zaarur, N., Pan, X., Kandror, K. V. Detection of Detergent-sensitive Interactions Between Membrane Proteins. J. Vis. Exp. (133), e57179, doi:10.3791/57179 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter