Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biochemistry
Click here for the English version

Biochemistry

Påvisning af vaskemiddel-følsomme interaktioner mellem Membranproteiner

Published: March 7, 2018 doi: 10.3791/57179
Automatic Translation
1, 1, 1
1Department of Biochemistry, Boston University School of Medicine

Summary

Vi beskriver en protokol til påvisning af vaskemiddel-følsomme interaktioner mellem Membranproteiner med binding af den sortering receptor, sortilin, til den første luminale loop af glucose transporter protein, GLUT4, som eksempel.

Abstract

Vores evne til at udforske protein-protein interaktioner er nøglen til at forstå lovgivningsmæssige forbindelser i cellen. Påvisning af protein-protein interaktioner i mange tilfælde er imidlertid forbundet med betydelig eksperimentelle udfordringer. Især interagere sortering receptorer med deres protein last i lumen af membran rum ofte i et vaskemiddel-følsomme mode, at co-immunoprecipitation af disse proteiner ubrugelige. Binding af den sortering receptor sortilin til glukose transporter GLUT4 kan tjene som et eksempel på svage luminale interaktioner mellem Membranproteiner. Her beskriver vi en hurtig, enkel og billig assay for at validere samspillet mellem sortilin og GLUT4. For det, har vi designet og kemisk syntetiseret myc-tagged peptid svarende til den potentielle sortilin-bindende epitop i den luminale del af GLUT4. Sortilin markeret med seks histidiner var udtrykt i pattedyrceller, og isoleret fra cellelysater ved hjælp af kobolt perler. Sortilin immobiliseret på perlerne var inkuberes med peptid løsning på forskellige pH-værdier, og det eluted materiale blev analyseret af Western blotting. Denne analyse kan være let tilpasses til at studere andre vaskemiddel-følsomme protein-protein interaktioner.

Introduction

GLUT4 er en glucose transporter protein, som er udtrykt overvejende i fedt og skeletmuskulatur celler hvor det medierer effekten af insulin på post prandial blod glukose clearance1. At være en meget stabil protein, er GLUT4 reguleret på en posttranslationelle niveau. I mangel af insulin, GLUT4 er stort set udelukket fra plasma membran (dermed lav basal permeabilitet for glukose) og er lokaliseret hovedsageligt inde i cellen i små insulin-responderende vesikler (IRVs) og trans-Golgi netværk (TGN), der er tilbøjelige til at repræsentere IRV donor rum. Efter insulin administration, IRVs fuse med plasma membran og levere GLUT4 til webstedet fungerer. Dette øger permeabilitet af plasma membran for glukose, så at glukoseoptagelse fra blodet ind i adipocytter og skelet myocytes stiger 10 til 40-fold. Efter insulin tilbagetrækning, er GLUT4 internaliseret i begyndelsen/sortering endosomes og derefter hentes til TGN hvor IRVs er igen dannet. Begge sortering trin i GLUT4 pathway, dvs hentning fra de perifere tidlige endosomes til perinuclear TGN og dannelsen af IRVs på TGN donor membraner er aktiveret af Vps10p familiemedlem, sortilin, som repræsenterer en type jeg transmembrane protein og en sortering receptor. Efter en model, sortilin virker som en transmembrane stillads protein: det binder GLUT4 i lumen af endosomes og TGN og rekrutter retromer eller clathrin adaptere til den cytoplasmatiske side af donor membran via sine C-terminus2, 3. Dette letter fordelingen af GLUT4 i vesikulære luftfartsselskaber, der translocate GLUT4 mellem intracellulære rum.

Samspillet mellem den cytoplasmatisk hale af sortilin og retromer og forskellige adapter proteiner har været veldokumenteret. Men bindingen af sortilin til GLUT4 (og flere af sine andre protein ligander) har været udfordrende for at bevise. Forsøg på at co-immunoprecipitate sortilin og GLUT4 har især ikke været vellykket sandsynligvis på grund af samspillet mellem disse to proteiner vaskemiddel-følsomme karakter. GLUT4 har desuden som en typisk transporter protein, 12 transmembrane domæner og 6 luminale sløjfer enhver kombination heraf kan potentielt repræsentere en sortilin bindingssted. På samme tid, en stor mængde af indirekte beviser, som væsentlig fælles lokalisering i cellen, cross-linking med membran-gennemtrængelige DSP og samspillet i gær to hybridsystem tyder på, at sortilin kan bindes til GLUT4. Derudover konstateret benytter metoden med sidstnævnte i en kombination med alanin scanning mutagenese, vi tidligere, at domænet Vps10p af sortilin binder primært til den første luminale loop af GLUT4. Imidlertid har bevis på sådan en interaktion i pattedyrceller manglet. Her, vi har isoleret hans-mærket sortilin fra transfekteret 3T3-L1 celler ved hjælp af kobolt harpiks og demonstreret, at det kan interagere med kemisk syntetiseret peptid svarende til den første luminale loop af GLUT4 på pH 6 og pH 8, der ligner sure miljø i den endosomal lumen og neutral miljø i lumen af TGN membraner. Ingen peptid bindende blev opdaget i kontrol eksperimenter hvor ekstrakt fremstillet af ikke-transfekteret celler blev indlæst på de samme perler.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. håndtering af peptid

  1. Design og bestilling af peptid
    1. Vælg den ønskede sekvens af peptid, og tilføje et mærke, som myc epitop (EQKLISEED) på sin enten N - eller C-terminus.
    2. Tjek den forudsagte opløseligheden af peptid i vand, ved hjælp af peptid opløselighed lommeregner http://pepcalc.com/peptide-solubility-calculator.php. Hvis opløseligheden er lav, prøve at tilføje en anden vandopløselige tag for at ændre afgift balancen.
      Bemærk: Vi brugte peptid svarende til den første luminale loop (fll) af GLUT4 markeret med myc epitop (fed skrift) på N-terminus (Myc-fll-GLUT4): EQKLISEEDLNAPQKVIEQSYNATWLGRQGPGGPSSIPPGTLTTLWA, der har "gode" forudsagt Opløselighed i vand .
    3. Bestil den brugerdefinerede peptid med mindst 75% renhed, som er tilstrækkelig for analysen, og bede udbyderen til opløselighed test. Adskille rækkefølgen i mindst to delprøver i tilfælde af uforudsete problemer med opløse peptid.
      Bemærk: Myc-fll-GLUT4 blev bestilt i to delprøver. Dens rapporterede Opløselighed i ultrarent vand er ≤10 mg/mL.
  2. Opløse peptid
    Bemærk: Ultrarent vand er de bedste opløsningsmiddel. Hvis peptid ikke synes at være vandopløselige, se http://www.genscript.com/peptide_solubility_and_stablity.html for instruktioner.
    1. Forberede 100 x brugsopløsning af peptid i ultrarent vand eller buffer af valg, med koncentration på 100 μg/mL.
    2. Adskille løsningen i 50-100 µL delprøver, og gemme dem på-20 ° C.

2. håndtering af celler

  1. Cellekultur
    1. Bruge vildtype (WT) celler som en negativ kontrol, og celler, der udtrykker target proteinet markeret med seks histidiner (HisP).
      Bemærk: Vi brugte 3T3 L1 pre adipocytter stabilt transfekteret med Sortilin-myc/hans5.
    2. Vokser celler i Dulbeccos modificerede Eagle Medium (DMEM) høj sukker, suppleret med 10% kalv bovint serum, Glutamin (2 mM) og penicillin/streptomycin (5 μg/mL) ved 37 ° C i 10% CO2.
    3. Sidde fire 10 cm retter af celler, transfect to af dem med HisP og transfect de andre to med kontrol plasmid (WT). 48 timer efter Transfektion celler bør nå 80-90% confluency.
  2. Forberedelse af cellelysater
    1. Forberede lysisbuffer (10 mM Hepes, 30 mM NaCl, 5% glycerol, 10 mM imidazol, 0,5% Triton X-100 og protease hæmmer cocktail uden EDTA til isolering af hans markeret proteiner, pH 7,4) og holde det på 4 ° C:
    2. Vaske cellerne tre gange med 10 mL af 1 x fosfatbufferet saltopløsning (PBS) ved 4 ° C.
    3. Sætter retterne på isen og tilføje 500 µL af lysisbuffer til hver tallerken. Høste cellelysater ved hjælp af en celle skraber.
    4. Placere cellen lysate fra hvert fad i en anden 1,5 mL tube. Label rør som WT-pH6, WT-pH8, HisP-pH6, HisP-pH8.
    5. Passere cellelysater gennem en sprøjte med en 26G kanyle fem gange op og ned til komplet lysering.
    6. Centrifugeres cellelysater ved 16.000 x g i 10 min. ved 4 ° C.
    7. Overføre analysere nye ens mærket rør.
    8. Analysere proteinkoncentration ved hjælp af BCA Protein Assay Kit eller andre kit.
    9. Bruger lysisbuffer, udligne proteinkoncentration af alle fire lysates.
    10. Adskille en lille (ca. 20 µL) delprøve af hver lysate og holde det på-20 ° C for mulige kontrol eksperimenter og/eller problemer med at skyde.

3. bindende af hans markeret proteiner til HisPur kobolt perler

  1. Bruge kommercielt tilgængelige wash buffer eller forberede en (50 mM Na2HPO4/NaH2PO4, 300 mM NaCl, 20 mM imidazol, pH 8) og holde det ved 4 ° C.
  2. Forberede wash buffer med pH 6 af fnisen wash buffer pH 8 med HCl. holde det ved 4 ° C.
  3. Forsigtigt swirl flaske af kobolt perler at gøre homogen suspension.
  4. Dispensere 40 µL af kobolt perler suspension i fire 1,5 mL rør markeret som ovenfor (trin 2.2.4).
  5. Der tilsættes 1 mL af lysisbuffer til hvert rør og rør på 1000 x g der centrifugeres i 5 s. aspirat supernatanten, og tilføje 40 μL lysisbuffer til udlignede perler.
  6. Tilføj cellelysater tilsvarende rør.
  7. Inkuber rør til 90 min. ved 4 ° C på en tube rotator på 20 rpm.
  8. Centrifugeres rør ved 1000 x g for 5 s og indsamle supernatanten. Holde supernatanten ved 4 ° C.
  9. Tilføje 500 µL af enten pH 8 eller pH 6 wash buffer til tilsvarende rør og genopslæmmes perlerne forsigtigt.
  10. Centrifugeres rør ved 1000 x g i 5 s og kassér analysere.
  11. Gentag trin 3.9 og 3.10 for fire gange.

4. binding af peptid til hans-mærkede Protein immobiliseret på perlerne

  1. Ved hjælp af 100 x brugsopløsning af peptid (trin 1.2.1), forberede 1 x arbejder løsninger i enten pH 6 eller pH 8 vaskebuffer (to 100 µL delprøver for hver, 1 µg/mL).
  2. Tilsæt 100 μL af 1 x peptid løsning til de vasket perler med tilsvarende pH.
  3. Inkuber perler i 30 min. ved 4 ° C på en tube rotator på 20 rpm.
  4. Centrifugeres rør på 1.000 x g for 5 s, indsamle supernatanten og holde det på-20 ° C.
  5. Gentag trin 3.9 og 3.10 for fire gange.
    Bemærk: For at reducere mulige baggrund, følgende trin kunne erstatte trin 4.4 og 4.5.
  6. Tage fire mikro kolonner med 30 μm porer og mærke dem som i trin 2.2.4 Anbring kolonnerne i indsamling rør.
  7. Efter afslutningen af trin 4.3, overføre inkubation blandingen i kolonnerne, tillade løsning til at passere gennem ved hjælp af tyngdekraften. Holde strømmen gennem ved-20 ° C.
  8. Passere 500 µL af wash buffer med pH 6 eller pH 8 gennem tilsvarende kolonner ved hjælp af tyngdekraften. Kassér flow gennem.
  9. Gentag trin 4.8 fire gange.
  10. Efter den sidste vask, centrifugeres kolonner ved 1.000 x g i 15 s.

5. eluering fra kobolt perler

  1. Brug kommercielle Tricine prøvebuffer (200 mM Tris-HCl, 40% glycerol, 2% SDS, 0,04% Coomassie blå, pH 6,8) og tilføje β-mercaptoethanol til den endelige koncentration af 2%.
  2. Tilføje 40 µL af Tricine prøvebuffer (med β-mercaptoethanol) vasket perler og vortex prøven.
  3. Varme prøver i 10 min. ved 100 ° C, vortex prøver igen, og der centrifugeres rør på 1.000 x g for 5 s.
    Bemærk: For at reducere mulige uspecifik bindende i eluering, følgende trin kunne erstatte trin 5.1-5.3.
  4. Tilføje 40 μL eluering imidazol Buffer (50 mM Na2HPO4/NaH2PO4, 300 mM NaCl, 0,25 M imidazol) til den vasket perler, vortexes og inkuberes rør ved stuetemperatur i 20 min.
  5. Centrifugeres rør på 3.000 x g for 30 s, indsamle supernatanten (elueret prøver) og overføre det til nye mærket rør.
  6. Tilføje 40 μL af prøvebuffer Tricine til hver tube, opvarme prøverne til 10 min. ved 100 ° C, vortex og centrifugeres rør på 1.000 x g for 5 s.
    Bemærk: Hvis der benyttes mikro kolonner, tilføje eluering buffer til de vasket perler, Ruger i 20 min. og indsamle eluering ved centrifugering ved 8.000 x g i 2 min.
    Bemærk: Prøver kan opbevares ved-20 ° C, indtil elektroforese udføres.

6. elektroforese og Western blotting

Bemærk: Prøverne er klar til adskillelse af SDS-PAGE og efterfølgende Western blotting. Følge protokollen af gelelektroforese (https://www.jove.com/science-education/5065/the-western-blot) med følgende ændringer.

  1. Bruge kommercielt tilgængelige 10-20% Tricine gradient geler.
  2. På gelen, indlæse 20 µL af eluted prøver og 20 µL af lysates (trin 2.2.10). For problemer med skydning, anbefales det at indlæse 20 µL af ubundne materiale (trin 3.8) og 10 ng af peptid; inden lastning, tilsættes lige mængde Tricine prøvebuffer disse prøver.
  3. Bære, elektroforese i kommercielle Tris/Tricine/SDS kører buffer (100 mM Tris, 100 mM Tricine, og 0,1% SDS, pH 8.3).
  4. Overføre materiale fra gel på et 0,45 µm nitrocellulose membran ved hjælp af overførsel buffer (25 mM Tris base, 192 mM glycin, pH 8.4) suppleret med 20% methanol.
  5. Blokere membran med 3% bovint serumalbumin (BSA) i 1 time ved stuetemperatur. Ved hjælp af pre farves molekylvægt markører som guider, skære membranen vandret, duppes den øverste del med et antistof mod HisP og duppes den nederste del med et antistof mod myc epitop til at identificere den myc-tagged peptid.
    Bemærk: I vores tilfælde, skæring af membranen kræves ikke da både HisP og Myc-fll-GLUT4 kan opdages med en anti-myc antistof.

7. analyse af resultater

  1. Kvantificere intensiteten af alle vestlige skamplet signaler bruger et billede Station eller ImageJ.
  2. Normalisere signalet fra den myc-tagged peptid mod signal fra HisP på begge pH værdier.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Lysates blev udarbejdet fra 3T3 L1 celler stabilt transfekteret med Sortilin-myc/hans5 og fra WT 3T3 L1 celler, bruges som en negativ kontrol. Begge lysates blev inkuberet med kobolt perler på pH 6 eller pH 8 og grundigt vasket. Perler med immobiliserede proteiner blev derefter inkuberes i løsningen af Myc-fll-Glut4. Efter omhyggelig vasker, blev proteiner bundet til perlerne elueret med 0,25 M imidazol. Prøverne blev udsat, sammen med den oprindelige lysates til SDS-PAGE i en 10-20% Tricine gradient gel efterfulgt af Western blotting med anti-Myc-antistof, der er tilladt til påvisning af både sortilin-myc/hans (110 kD) og Myc-fll-GLUT4 (5 kD) (figur 1) .

MYC-fll-GLUT4 (10 ng) blev indlæst på den første lane gel som en reference. Renheden af peptid er kun 75%, er forureninger tilsyneladende (højere bands). Oprindelige cellelysater fra både WT og Sortilin-myc/hans udtrykker celler indeholder flere bands er anerkendt af den anti-myc antistof. Materiale isoleret fra Sortilin-myc/hans udtrykker celler er meget renere. Ud over nogle mindre uspecifikke bands, det har kun to myc-holdige komponenter: Sortilin-myc/hans og Myc-fll-GLUT4. Kontaminerende peptider i den første lane synes ikke at binde sig til Sortilin-myc/hans. Negativ kontrol (WT eluatet) har overvejende uspecifikke bands.

Som GLUT4 passerer gennem intracellulære rum, såsom endosomes og TGN, der har forskellige luminale pH, ønskede vi at vurdere samspillet mellem GLUT4 med sortilin på pH 6 og pH 8 (figur 2). Densitometri af resultater (ikke vist) har ikke afsløret væsentlige forskelle i forholdet mellem Myc-fll-GLUT4 og Sortilin-myc/hans bevaret på perler på forskellige pH-værdier. Vi konkluderer således, at GLUT4 har evnen til at interagere med sortilin i både endosomes og TGN.

Figure 1
Figur 1 . Samspillet mellem Sortilin-myc/hans med Myc-fll-GLUT4 på kobolt perler. Lysates forberedt fra WT 3T3-L1 celler og 3T3-L1 celler stabilt udtrykker Sortilin-myc/hans (S) blev forbigået kobolt perler, vasket, inkuberes med Myc-fll-Glut4 ved pH 8, vaskes igen, og elueret med imidazol buffer. MYC-fll-Glut4 (10 ng) blev indlæst på den første lane som reference.

Figure 2
Figur 2 . Sortilin-myc/hans interagerer med Myc-fll-GLUT4 på både pH 8 og pH 6. MYC-fll-Glut4 blev inkuberet med materiale immobiliseret på perler på pH 6 og pH 8, vasket, og elueret med glycin prøvebuffer. Tallet er blevet tilpasset fra Pan X., mfl3.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Sortilin er en evolutionær bevarede multi ligand protein receptor, der er involveret i begge signalering på plasma membran og intracellulære sortering begivenheder6,7. Søg efter den autentiske sortilin ligander (hvoraf nogle er luminale eller integreret membranproteiner) er imidlertid komplicerede som samspillet mellem sortilin og nogle af dets bindende partnere synes at være følsomme over for vaske-og rengøringsmidler. Derfor, en let og en udbredt metode til at undersøge protein-protein interaktioner, co-immunoprecipitation, ikke kan anvendes umiddelbart. Nogle forskergrupper har brugt co-immunoprecipitation til at vise interaktion mellem sortilin og dens potentielle ligander8,9. Men disse eksperimenter er blevet udført enten 0.1% Triton eller i 0,6% CHAPS, som kaster tvivl i fuldstændigheden af membran oploesning.

Andre forskere undersøgt samspillet mellem sortilin og dens ligander af overflade plasmon resonans10,11. Selv om overflade plasmon resonans er velsagtens den bedste tilgang til problemet, kræver det dyrt udstyr og betydelige mængder af ren rekombinante proteiner, som er dyrt og tidskrævende.

Her, beskriver vi en teknik, der i kombination med andre metoder, som danne tvaerbindinger, og gær to hybridsystem, anbefaler kraftigt, at sortilin kan bindes til GLUT4. Analysen er nemt og hurtigt og let kan tilpasses til andre proteiner og forskellige størrelser af peptider.

Der er et par vigtige skridt i denne analyse. Den første er den peptid Opløselighed i vand. En anden er udvælgelsen af passende kontrol. Klart, en betydelig mængde af biologisk materiale, der kan interagere med kobolt perler via endogene hans-reach sekvenser eller ikke-specifikt. Derfor er det vigtigt at immobilisere på perler lysates WT celler og celler transfekteret med protein af interesse, i vores tilfælde Sortilin-myc/hans. I sådan en eksperimentelle design, materiale bundet til perlerne vil variere i kun én protein, Sortilin-myc/hans, således at en vis grad af baggrunden binding af peptid til kontrol perler kan tolereres. Stadig, baggrund bindingen af peptid til perlerne kan reduceres ved at øge strengheden af de endelige vaske trin. Brug af mini kolonner til at vaske perlerne kan nedsætte baggrund bindende endnu længere.

På grund af karakteren af "GLUT4 pathway" ønskede vi at adresse bindingen af Myc-fll-GLUT4 til sortilin på forskellige pH-værdier. Vi indser at pH i lumen af tidlige/sortering endosomes kan falde under 6. Dog forstyrrer pH lavere end 6 binding af hans markeret proteiner til kobolt perler, som kan betragtes som en begrænsning af metoden.

Isolering af target proteinet på kobolt perler ved hjælp af hans epitop er at foretrække frem for andre affinitet rensning trin, som immunoprecipitation med specifikke antistoffer, med hensyn til udbytte og ikke-specifik binding. Stadig, det er helt muligt at isolation af target proteinet på nogen andre harpiks (helst, magnetiske perler) med ordentlig kontrol vil vise sig vellykket.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne har ikke noget at oplyse.

Acknowledgments

Dette arbejde blev støttet af forskningsbevillinger DK52057 og DK107498 fra NIH til K.V.K. X.P blev støttet af den institutionelle uddannelse grant 2T32DK007201 fra NIH.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Protease inhibitor cocktail Sigma P8849 for use in purification of histidine tag protein
Phosphate-Buffered Saline  Corning 21-040-CV PBS
1mL Insulin Syringe U-100 BD 329652 26G x 1/2
BCA Protein Assay Kit Pierce 23228
Wash buffer Boston BioProducts BP-234 For His-tag protein purification
HisPur Cobalt Resin Thermo Scientific 89964
Tricine sample Buffer Bio-Rad 161-0739 with SDS, bMercaptaethanol should be added
Elution  Buffer Boston BioProducts BP-236 For His-tag protein purificationwith 250mM Imidazole
Mini-Protean Tris-Tricine precast gels 10-20%  Bio-Rad 456-3115 For seperation of peptide and small protein
Tris/Tricine/SDS running buffer  Bio-Rad 161-0744
Transfer Buffer Boston BioProducts BP-190 Add 20% methanol
Nitrocellulose membrane  0.45 mm Bio-Rad 1620115
Bovine Serum Albumin Sigma A9647 BSA
Anti Myc antibody Cell Signaling 2272 Rabbit
Peptide Genscipt customize ordering
Precision Plus Protein Dual color Standarts BioRad 161-0374

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Bogan, J. S. Regulation of glucose transporter translocation in health and diabetes. Annu Rev Biochem. 81, 507-532 (2012).
  2. Kandror, K. V., Pilch, P. F. The sugar is sIRVed: sorting Glut4 and its fellow travelers. Traffic. 12 (6), 665-671 (2011).
  3. Pan, X., Zaarur, N., Singh, M., Morin, P., Kandror, K. V. Sortilin and retromer mediate retrograde transport of Glut4 in 3T3-L1 adipocytes. Mol Biol Cell. 28 (12), 1667-1675 (2017).
  4. Kim, J., Kandror, K. V. The first luminal loop confers insulin responsiveness to the glucose transporter 4. Mol Biol Cell. 23 (5), 910-917 (2012).
  5. Shi, J., Kandror, K. V. Sortilin is essential and sufficient for the formation of Glut4-storage vesicles in 3T3-L1 adipocytes. Dev Cell. 9 (1), 99-108 (2005).
  6. Coutinho, M. F., Prata, M. J., Alves, S. A shortcut to the lysosome: the mannose-6-phosphate-independent pathway. Mol Genet Metab. 107 (3), 257-266 (2012).
  7. Willnow, T. E., Petersen, C. M., Nykjaer, A. VPS10P-domain receptors - regulators of neuronal viability and function. Nat Rev Neurosci. 9 (12), 899-909 (2008).
  8. Mazella, J., et al. The 100-kDa neurotensin receptor is gp95/sortilin, a non-G-protein-coupled receptor. J Biol Chem. 273 (41), 26273-26276 (1998).
  9. Ni, X., Morales, C. R. The Lysosomal Trafficking of Acid Sphingomyelinase is Mediated by Sortilin and Mannose 6-phosphate Receptor. Traffic. 7 (7), 889-902 (2006).
  10. Westergaard, U. B., et al. Functional organization of the sortilin Vps10p domain. J Biol Chem. 279 (48), 50221-50229 (2004).
  11. Nykjaer, A., et al. Sortilin is essential for proNGF-induced neuronal cell death. Nature. 427 (6977), 843-848 (2004).

Tags

Biokemi sag 133 Sortilin GLUT4 Membranproteiner cellebiologi protein-protein interaktioner vaskemiddel-fri assay
Påvisning af vaskemiddel-følsomme interaktioner mellem Membranproteiner
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Zaarur, N., Pan, X., Kandror, K. V.… More

Zaarur, N., Pan, X., Kandror, K. V. Detection of Detergent-sensitive Interactions Between Membrane Proteins. J. Vis. Exp. (133), e57179, doi:10.3791/57179 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter