Summary
Здесь мы представляем протокол для получения 3D-культура систем самостоятельного монтажа подмостей пептид содействовать дифференциации Дедифференцированная человека суставной хондроцитов в хрящевой ткани.
Abstract
Описан полезным методом для культивирования клеток в самостоятельной сборки нановолокно трехмерные (3D) леску. Эта культура система воссоздает среду, которая тесно имитирует структурной особенности-поляризованных ткани. Кроме того особую внутреннюю нановолокно структура леса делает прозрачным для визуального света, который позволяет для легкой визуализации образца при микроскопии. Это преимущество во многом был использован для изучения миграции клеток, Организации, распространение и дифференциации и таким образом любое развитие их конкретной клеточной функции путем пятнать с конкретными красителей или зондов. Кроме того в этой работе, мы описываем хорошую производительность этой системы легко изучить redifferentiation расширенной человека суставной хондроцитов в хрящевой ткани. Клетки были инкапсулируются в самостоятельной сборки пептид подмостей и культивировали при определенных условиях для содействия chondrogenesis. Трехмерные культур показали хорошие жизнеспособность в течение 4 недель эксперимента. Как и ожидалось, образцы искусственного с хондрогенном индукторов (по сравнению с-индуцированной управления) окрашенных сильно положительный толуидиновый синий, (который пятна гликозаминогликанов (GAGs), которые весьма присутствуют в внеклеточного матрикса хряща) и выразили конкретные молекулярные маркеры, включая коллагена типа I, II и X, по данным западной помарке анализа. Этот протокол является простой для выполнения и может использоваться в исследовательских лабораториях, отраслей промышленности и для образовательных целей в лабораторных курсах.
Introduction
На протяжении многих десятилетий культуры mammalian клетки выполнена в экспериментальных условиях, с использованием систем классический двухмерный (2D) культуры из-за практических и экономических проблем независимо от не физиологические аспекты. Хотя эта система культура помогает изучить и понять наиболее молекулярных и клеточных механизмов, мы знаем сегодня, что новые парадигмы культуры клеток необходимо изучить более сложные сотовых систем. Таким образом трехмерные (3D) культуры системы необходимо воссоздать микроокружения, биофизически, биомеханической и биологически более похож на что из натуральных тканей. В последние годы, 3D культуры системы, в целом, стали более распространенными среди исследователей и промышленности так, как они представляют новую модель исследования или скрининга в ячейки, которые могут расти в пространстве, создать к ячейке или взаимодействия клеток матрица, миграция и в конечном итоге дифференцироваться в конкретной ячейке линий.
Общая цель этой методологии должна воссоздать в vitro сотовой микроокружения, ближе к микроокружения в естественных условиях . В частности синтетические эшафот самостоятельной сборки пептида (ПСП) является типом биоматериала с уникальными свойствами; Он образует сеть нанометрового размера поры, сделанные из слабого взаимодействия среди пептидов с механическим и структурные свойства аналогичных те из природных внеклеточной матрицы. Другими словами, рациональность за использование этого материала, что он создает поистине 3D-среды, которая идеально подходит для получения псевдо 3D тканей или органа подразделения. Однако, самое главное, контекст 3D позволяет 3D структуры для получения новых биологических функций, которые обычно не присутствуют в 2D культуры платформы, такие как свойства, относящиеся к ткани архитектуры, явления массового переноса, клетки кучность и в конечном итоге Морфогенез ткани, которые являются ключевыми факторами в будущих исследований и развития функциональных тканей и органов1,2. Кроме того преимуществом ПСП над их естественными партнерами (коллаген, Matrigel) является, что они очень стабильны при комнатной температуре и не требуют особых условий для пост-производства, распределения и хранения3,4, 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 , 14 , 15. ПСП прост в обращении, когда это необходимо; 3D гели можно получить просто путем увеличения ионной силы или корректировка pH нейтралитета1,2. Наконец по методике, описанной здесь был широко используются в vitro содействовать обслуживания, роста и дифференцировки целого ряда типов клеток, в том числе хондроцитов, гепатоциты, эндотелиальные клетки, остеобласты, нейрональные клетки также как эмбриональные и соматических стволовых клеток3,4,5,6,,78,9,10, 11 , 12 , 13 , 14 , 15. в настоящей работе, мы описывают использование 3D-культура системы различать человека расширение суставной хондроцитов (Хач) в хрящевой ткани как описано11.
Здесь описан метод в культуре клеток в 3D-системы с помощью ПСП. В этом синтетических биоматериала клетки сначала смешиваются с раствором пептид, который впоследствии наведено для самостоятельной сборки, создание сети нанометрических размеров вокруг клетки и поэтому создание действительно 3D окружающей среды (рис. 1). Важно учитывать, что сотовой поведение зависит от значения матрицы жесткости (т.е., распространение, миграции и дифференциации). Таким образом общие методологические управления заключается в культуре клеток на вершине пептида леску с теми же значениями жесткости (культура в двух измерениях).
Protocol
1. самостоятельной сборки пептид лески (ПСП) подготовка
- Готовят 0,5% раствор пептида RAD16-я в 20% (w/v) сахарозы, в микро пластиковых пробирок. Sonicate пептид решение для 20 мин в ультразвуковой ванне при максимальной мощности и при комнатной температуре (RT) для обеспечения равномерного смешивания.
Примечание: Объем раствора должен быть подготовлен будет зависеть количество инкапсуляции желаемого. RAD16-я пептиды не страдают от деградации в этих условиях sonication. - Разбавьте раствор пептид, подготовленную на этапе 1.1 с необходимым объемом 10% (w/v) сахарозы для получения желаемой конечной концентрации.
Примечание: Важным фактором учитывать является корректировка первоначальной пептид концентрации, поскольку окончательный матрицы жесткости будет зависеть от этого параметра. RAD16-я пептид решение должно быть 2 x больше сосредоточены чем желаемой конечной концентрации 3D конструкции. Как правило, последний RAD16-я концентрация пептида используется находятся между 0,15-0,5% (w/v). - Поместите микро пластиковых пробирок, содержащий решение пептида в ультразвуковой ванне на RT для 20 мин для обеспечения равномерного смешивания.
Примечание: Решение пептид, если не используется сразу, может храниться несколько месяцев при 4 ° C.
2. ячейки подвеска подготовка
- Центрифуга суспензию клеток (полученный после лечения трипсин) 60 x g и RT на 5 мин.
- Удалить супернатант с помощью пипетки Пастера подключен к вакуумной линии и приостановить Пелле клеток в 3 – 5 мл 10% (w/v) сахарозы с помощью микропипеткой. Перейти к подсчитать ячейки, используя счетчик ручной или автоматический клеток.
Примечание: 10% (w/v) сахарозы решение является изотонические и неионогенных среду, которая позволяет для поддержания клеток и избегает пептид гелеобразования в процессе смешивания. - Центрифуга суспензию клеток на 60 x g и RT на 5 мин удалить супернатант и приостановить клетки Пелле снова в необходимый объем 10% (w/v) сахарозы для получения двойной концентрации желаемого окончательный клеток (желательно примерно в 4 х 106 клеток / Мл).
- Поместите нужное количество вставок тканевой культуры в каждой скважине 6-ну плиты (одна накладка на инкапсуляция).
- Sonicate пептид раствор, приготовленный на шаге 1 на максимальной мощности и RT на 5 мин.
- Пипетка и место 40 мкл суспензии клеток (полученные в 2.3) для каждого инкапсуляции желаемого плюс примерно 10 – 15% дополнительного объема в стандарт микро пластиковых пробирок.
3. 3D клеток Инкапсуляция в ПСП
- Смешать равные количества RAD16-я решение в 10% сахарозы (w/v) (40 мкл в инкапсуляция) с равным объемом суспензию клеток (40 мкл в инкапсуляция) подготовила в шаге 2 для получения суспензию клеток в желаемой пептид концентрация (в 10%-ая сахароза). Смешайте закупорить медленно вверх и вниз, примерно в 10 раз. Избегайте образования пузыря во время смешивания.
Примечание: Этот шаг имеет решающее значение и должны выполняться очень внимательно, так как клетки находятся в враждебных условиях из-за низкого pH пептида (примерно 3,5 – 4,0). - С помощью микропипеткой, тщательно Загрузите 80 мкл суспензии в каждой вставки.
- Добавьте 0,5 мл культуры средств массовой информации в нижней части скважины для мокрой вставки мембраны, позволяя СМИ диффузии содействовать пептид самостоятельной сборки и формирования гидрогеля. Пусть пептида гель для примерно 20 минут в кабинете потока.
Примечание: Манипуляции образцов во время установки может закончиться в гель ломать. - Очень медленно 40 мкл среднего для вставки и дайте ему скользить вниз по внутренней стене гель.
Примечание: Как правило, загрузка этого тома должно занять от 20 – 30 с. - Место пластину в инкубатор (37 ° C, 5% CO2, увлажненные атмосфера) за 20 мин. Этот шаг и последовательных средних дополнения будет способствовать выщелачивания сахарозы и уравновешивания клеток с питательной среды.
- 60 мкл среднего, к внутренней стенке вставки, что позволяет течь вниз по стене. Аспирационная среднего колодец, который богат сахарозы, и добавить 0,5 мл свежей среды.
- Добавьте 60 мкл средне медленно вставки и место пластину в инкубатор (37 ° C, 5% CO2, увлажненные атмосфера) 10 мин.
- Аспирационная среднего хорошо и добавить 2,5 мл свежей среды в колодец. Добавьте 200 мкл среды в insert. Место пластину в инкубатор (37 ° C, 5% CO2, увлажненные атмосфера) для поддержания клеток в надлежащих условиях.
- Изменение среднего каждый день. Удалите старый среднего из нижней части колодца. Добавьте 2,5 мл свежей среды хорошо и 200 мкл для вставки.
Примечание: Если дифференцировки клеток, конкретных вызывающих СМИ будут добавлены культур, что приводит к нужной ячейки типа обязательств (см. ниже, дифференциация клеток).
4. клетки жизнеспособность в 3D-ПСП
- Примечание: Assay жизнеспособности клетки известен как Live/Dead — жизнеспособность/цитотоксичность пробирного также.
- В 15 мл трубку, подготовить необходимый объем свежего раствора 2 мкм Флуорексон утра и 2 мкм ethidium Антуану-1 (EthD-1) в PBS, vortexing за 10 с. хранить в темноте.
Примечание: Громкость для каждого образца будет зависеть также размер согласно следующее: 2 мл для каждой скважины 6-multiwell плиты; 1 мл раствора для каждой хорошо 12-multiwell пластины и 0,5 мл для каждой скважины 24-multiwell пластины. - С помощью микропипеткой, промойте образцы 3D-ПСП 3 раза с 2 мл PBS и затем замазывают раствором, приготовленным на шаге 4.1. Проинкубируйте ее на RT 40 мин в темноте.
- С помощью микропипеткой, промойте конструкции с 2 мл PBS 5 раз.
- Визуализируйте образцы под микроскопом флуоресценции, используя 10 X или 20 кратным увеличением.
5. клеточная дифференцировка
- Культура клетки (37 ° C, 5% CO2, увлажненные атмосфера) в хондроцитов базальной среднего (CBM) с ростом добавки.
Примечание: Подготовка среды описан в инструкции производителей (см. Таблицу материалов). - Побудить клеточная дифференцировка в день 2 с хондрогенном в средних содержащие рекомбинантный человека преобразование фактор роста b1 [TGFb1] (10 нг/мл), L-Аскорбиновая кислота 2-фосфат [AA2P] (25 мкг/мл) и дексаметазона (100 Нм).
- Сохранение культуры за 4 недели в инкубаторе с атмосферой увлажненной при 37 ° C и 5% CO2. Изменение среднего хондрогенном каждый день.
6. толуидиновый синий окрашивание (ТБ)
- Мыть дважды, добавляя и удаляя 2 мл PBS с микропипеткой 3D-ПСП культур. Их исправить, добавив 2 мл 2% (w/v) p-формальдегида в PBS на 2 ч в рт.
- Мыть дважды с 2 мл 0,1% тритон X-100 в PBS (PBST).
- Проинкубируйте с 2 мл 0,05% ТБ в воде в течение 20 мин на RT.
- Промойте несколько раз (по крайней мере 3 раза) 2 мл PBS до тех пор, пока решение PBS удалены ясно.
- Анализ образцов путем визуального осмотра под стереоскопическим микроскопом по11,,1314.
Примечание: ТБ образует комплексы с анионными гликоконъюгаты в внеклеточного матрикса, например протеогликанов (PG) и гликозаминогликанов (GAG), которые являются главным образом выделяется клетками хондроцитов как. Позитивные примеры запятнаны синий.
7. Западная помарка
Примечание: Процедура, используемая в этом протоколе была ранее описана в ссылка11.
- Лизируйте 3D-конструкции в RIPA буфера содержащий ингибитор протеазы коктейль, закупорить.
- Подготовить гель акриламида требованиям гель объем (конкретные гель работает оборудование) и запустите lysates клетки для 90 мин 150 V16.
Примечание: Гель акриламида обычно готовится в концентрации 7,5 – 10% (w/v), в зависимости от молекулярной массы белка. - Передача белки, содержащиеся в гель в мембраны винилидена фторид (PVDF), применяя 40 V 2 h на RT.
- Инкубируйте в отдельном контейнере с достаточным объемом для покрытия мембраны PVDF мембрану в РТ за 2 ч в блокирующем буфере (4% (w/v) обезжиренного сухого молока в PBST).
- Проинкубируйте мембрану в РТ за 1 ч с первичных антител в конечной концентрации 1 мг/мл в PBST. Смотрите таблицу материалов.
- Добавление вторичного антитела в концентрации 1 мг/мл. Смотрите в таблице материалов.
- Подготовьте мембраны для обнаружения hP с Хемилюминесцентный субстрат16. Смотрите таблицу материалов.
- Возьмите хемилюминесцентный изображения16.
Representative Results
В настоящей работе простой и быстрый протокол к культуре клеток в 3D с использованием ПСП описан для получения достоверных количественных и качественных данных. ПСП создает 3D микроокружения с уникальными свойствами, которые позволяют культивируемых клеток под желаемых условий перейти к ячейке обслуживания, распространения или дифференциация3,4,5,6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12. в нашей группе, несколько исследований были проведены с использованием клеток-предшественников человека жировой ткани производных (hAPC), Расширенный человеческого суставной хондроцитов (Хач) и нормальный кожный фибробластов (hNDF) культуры, расширения и дифференцировать их в ткани хряща10,,1112. Здесь мы описываем 3D культуры и повторного дифференцировку в хрящевой ткани, расширенный Хач как описано11. Следовательно мы инкапсуляции клетки в 3D-ПСП и культуры их в хондрогенном среде индукции, как описано на рисунке 1 (и в протоколе). После 24 часов образцы были оценены для жизнеспособности с Live/мертвые жизнеспособность/цитотоксичность Assay. Результаты показывают, что несколько процентов клеток были мертвы (красный) после 5 дней инкапсуляции и почти нет мертвых клеток наблюдалось после 4 недель культуры (рис. 2). Далее мы окрашенных их осаждения Глюкозаминогликан (GAG) на внеклеточного матрикса, используя толуидиновый синий, окрашивания метода. Как и ожидалось, индукции группа ответила правильно лечения, показаны сильное окрашивание (рис. 2).
Наконец молекулярные маркеры chondrogenesis и гипертрофия маркеров, в том числе коллагена типа I, II и X, были проанализированы Вестерн-блот (рис. 3). Коллаген типа I (COL1) наблюдалось в 2D и 3D систем, но нижняя полоса ~ 130 кДа (представляющий обработанные Зрелые COL1 белка, чтобы быть собраны в внеклеточного матрикса) наблюдалось только в 3D. Этот результат ясно указывает, что клетки проходят дифференциацию в трех измерениях действовать более физиологическим способом. Удивительно коллаген типа II (COL2) был обнаружен - как однодиапазонный ожидаемых молекулярный вес настоящему на внеклеточная матрица - только в 3D конструкций, культивируемых в хондрогенном условиях. Наконец, коллаген типа X (COL10) был обнаружен в 2D и 3D конструкций, культивируемых в хондрогенном условиях, указав определенную степень гипертрофии после 4 недель культуры.
Рисунок 1: Схематическое представление ячейки инкапсуляции в 3D-ПСП. Схематическое представление hACh инкапсуляции описан для получения клеток, беспорядочно рассеяны в 3D-ПСП. 1. самостоятельной сборки пептид подготовка леса (ПСП); 2. ячейки подвеска подготовки; и 3. 3D-клеточной инкапсуляции в ПСП. Обратите внимание, что схема показывает только шаги 3.1 по 3.4.
Рисунок 2: производительность и хондрогенном дифференциация в 3D-ПСП культур клеток. Пятнать жизнеспособность клеток выступала на 5 дней и 4 недель культуры, обнаруженные под микроскопом флуоресцентные (живой клетки в зеленых и мертвых клеток в красном). Масштаб баров = 200 µm. приверженность Генеральной chondrogenesis оценены толуидиновый синий окрашивание (сульфатированных гликозаминогликанов в голубом) 3D-ПСП конструкций искусственного контроля и хондрогенном средствами массовой информации. Масштаб баров = 500 мкм. Этот рисунок был изменен с Recha-Санчо L. et al. 11. пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 3: коллаген I, II и X выражение hACh переживает chondrogenesis. Хач, культивируемых в монослое 2D и 3D-ПСП, после 4 недель в хондрогенном средств массовой информации и контроля были оценены для выражения коллаген типа I (COL1), коллаген типа II (COL2) и коллаген типа X (COL10). Было использовано выражение актина как внутреннего контроля. Этот рисунок был изменен с Recha-Санчо L. et al. 11. пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Discussion
Ранее наша группа и другие описали использование трехмерных (3D) культуры платформ с разнообразной клетки систем3,4,5,6,,78 ,9,10,11,12,13,14,15. В настоящей работе, мы опишем простой и надежный способ получения 3D культуры систем, которые применимы к любому типу клеток млекопитающих, включая любой тип функциональных клеток эмбриона или взрослых стволовых клеток, или в конечном итоге, неблагополучных клетки изолированы от биопсии или опухоли и т. д.. Кроме того самостоятельно, если стволовые клетки эмбриона или взрослый происхождения они бы лучше потенциала приверженность линии в 3D среде, чем в классической 2D культуры блюда10,11,12, 13,14,15. Таким образом культура клетки в этой системе приведет к дифференциации в функциональных тканей как структуры, которые могут быть использованы в различных приложениях, от репаративной или регенеративной биомедицины фармакологические и токсикологические платформ.
Мы показали ясно выигрыш в функции клеток, потому что сотовой микроокружения похож на что из натуральных тканей с точки зрения структуры matrix и биомеханических, биофизических и биологических параметров. Тем не менее как система становится более сложной, количество параметров, которые должны быть регулируется также увеличивается, которая включает в себя необходимость внешней поддержки платформы (например, активный перфузии системы, чтобы избежать переноса массы явлений связанных вопросов ). Трехмерно культивируемых клеток лучше с точки зрения регулирования основных мероприятий, например, миграция, пролиферации и дифференцировки. Они могут стать сложными сетями, позволяя расширение сотовый помех, который является на сегодняшний день является необходимым следствием роста и дифференциации в 3D. Тот факт, что соки можно создать условия в vitro похож на те представляет белков внеклеточного матрикса, является преимуществом, поскольку рациональное исследование эффекта производится для каждого компонента, добавлены к эшафоту (фактор роста, полисахарид или сигнализации пептид) может легко осуществляться.
Явные преимущества использования ПСП, по сравнению с другими природных лесов, такие как коллаген типа I и Matrigel, являются следующие: 1) ПСП является синтетическим биоматериала с минимальным отклонением от партии до серийного производства; 2) ПСП имеет способность функционализированных с конкретными пептид мотивами; и 3) ПСП представляет низкая способность к биологическому разложению в пробирке, которая разрешает сохранение 3D конструкции с же биофизические, биомеханика и структурные свойства с течением времени. Однако, ограничение использования соки по сравнению с другими леса находится на этапе инкапсуляции, где клетки находятся в враждебного окружения из-за низкого pH. Таким образом это важный шаг в описанных методологии. Кроме того важно установить концентрацию ПСП для каждого типа конкретной ячейки перед началом любого эксперимента. Это важно, на самом деле, когда клетки культивировали на или в эти биоматериалы, поскольку каждый тип ячейки будут представлены оптимальные биомеханические условия роста.
Наконец мы считаем, что дизайн и изготовление этого типа биоматериала эшафот повысит разработка моделей 3D ткани более физиологических и надежной для фармацевтической промышленности развивать лучше терапевтические подходы для Регенеративная медицина, рак или любого медицинского лечения.
Disclosures
Авторы не имеют ничего сообщать.
Acknowledgments
Исследования, проведенного авторами в части поддержали грантов от Европейского союза седьмой рамочной программы (FP7/2007-2013) под Грант соглашение № 229239 и от АО Фонд, разведочных исследовательских совместных исследований программы острый Хрящ травмы/поражения/дефекта (CRP ACI) в рамках проекта биоактивные и Biomimetic подмости для регенерации хряща (BIOCART).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Human articular chondrocytes (Ach) | Lonza | CC-2550 | |
| RAD16-I peptide solution (PuraMatrix) | Corning | 354250 | |
| Sucrose (tissue culture grade) | Sigma | S0389 | |
| Cell culture inserts (0.4 µm pore, 12 mm diameter) | Millipore | PICM01250 | |
| Chondrocyte Basal Medium (CBM) | Lonza | CC-3217 | |
| SingleQuots of Growth Supplements | Lonza | CC-4409 | |
| Live/Dead Viability/Cytotoxicity Kit | Invitrogen | L3224 | |
| Fetal bovine serum (FBS) | Lonza | DE14-801F | |
| Dexamethasone | Sigma | D8893 | |
| L-ascorbic acid 2-phosphate (AA2P) | Sigma | A8960 | |
| Human transforming growth factor-β1 (TGF-β1) | Millipore | GF111 | |
| RIPA buffer | Sigma | R0278 | |
| Protease inhibitor cocktail | Roche | 11836153001 | |
| Polyvinylidene difluoride (PVDF) membrane | Invitrogen | LC 2005 | |
| SuperSignal West Pico Chemiluminescent Substrate | Thermo Scientific | 34080 | |
| Anti-Actin | SCBT | sc-1615 | |
| Anti-Collagen I | Abcam | ab138492 | |
| Anti-Collagen II | Abcam | ab3092 | |
| Anti-Collagen X | Abcam | ab182563 | |
| Antigoat IgG-HRP | Abcam | ab97100 | |
| Anti-mouse IgG-HRP | Abcam | ab97023 | |
| Anti-rabbit IgG-HRP | Abcam | ab97051 |
References
- Aggeli, A., et al. Responsive gels formed by the spontaneous self-assembly of peptide into polymeric β-sheet tapes. Nature. 386, 259-262 (1997).
- Semino, C. E. Can we build artificial stem cell compartments? Journal of Biomedicine and Biotechnology. 3, 164-169 (2003).
- Kisiday, J., et al. Self-assembling peptide hydrogel fosters chondrocyte extracellular matrix production and cell division: implications for cartilage tissue repair. Proceedings of the National Academy of Sciences, USA. 99, 9996-10001 (2002).
- Narmoneva, D. A., Vukmirovic, R., Davis, M. E., Kamm, R. D., Lee, R. T. Endothelial cells promote cardiac myocyte survival and spatial reorganization: implications for cardiac regeneration. Circulation. 110, 962-968 (2004).
- Genové, E., Shen, C., Zhang, S., Semino, C. E. The effect of functionalized self-assembling peptide scaffolds on human aortic endothelial cell function. Biomaterials. 26, 3341-3351 (2005).
- Garreta, E., Genové, E., Borrós, S., Semino, C. E. Osteogenic differentiation of mouse embryonic stem cells and mouse embryonic fibroblasts in a three-dimensional self-assembling peptide scaffold. Tissue Engineering. 12, 2215-2228 (2006).
- Sieminski, A. L., Semino, C. E., Gong, H., Kamm, R. D. Primary sequence of ionic self-assembling peptide gels affects endothelial cell adhesion and capillary morphogenesis. Journal of Biomedical Materials Research Part A. 87 (2), 494-504 (2008).
- Semino, C. E. Self-assembling peptides: from bio-inspired materials to bone regeneration. Journal of Dental Research. 87 (2008), 606-616 (2008).
- Hernández Vera, R., et al. Interstitial fluid flow intensity modulates endothelial sprouting in restricted Src-activated cell clusters during capillary morphogenesis. Tissue Engineering Part A. 15 (1), 175-185 (2009).
- Castells-Sala, C., Martínez-Ramos, C., Vallés-Lluch, A., Monleón Pradas, M., Semino, C. In vitro development of bioimplants made up of elastomeric scaffolds with peptide gel filling seeded with human subcutaneous adipose tissue-derived progenitor cells. Journal of Biomedical Materials Research Part A. 103 (11), 3419-3430 (2015).
- Recha-Sancho, L., Semino, C. E. Heparin-based self-assembling peptide scaffold reestablish chondrogenic phenotype of expanded de-differentiated human chondrocytes. Journal of Biomedical Materials Research Part A. 104 (7), 1694-1706 (2016).
- Bussmann, B. M., et al. Chondrogenic potential of human dermal fibroblasts in a contractile, soft, self-assembling, peptide hydrogel. Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 10 (2), E54-E62 (2016).
- Recha-Sancho, L., Moutos, F. T., Abellà, J., Guilak, F., Semino, C. E. Dedifferentiated Human Articular Chondrocytes Redifferentiate to a Cartilage-Like Tissue Phenotype in a Poly (ε-Caprolactone)/Self-Assembling Peptide Composite Scaffold. Materials. 9 (6), 472 (2016).
- Recha-Sancho, L., Semino, C. E. Chondroitin Sulfate and Decorin based self-assembling scaffolds for cartilage tissue engineering. PlosOne. 11 (6), e0157603 (2016).
- Aloy-Reverté, C., Moreno-Amador, J. L., Nacher, M., Montanya, E., Semino, C. E. Use of RGD-Functionalized Sandwich Cultures to Promote Redifferentiation of Human Pancreatic Beta Cells After In Vitro Expansion. Tissue Engineering Part A. , (2017).
- Kurien, B. T., Scofield, R. H.
