Summary
Une procédure pour l’élevage des mouches stables (Stomoxys calcitrans) est présentée. La procédure utilise des matériaux disponibles localement pour les composants de l’alimentation, de matériel et de fournitures.
Abstract
Les mouches stables, Stomoxys calcitrans, sont des ravageurs importants des animaux, les humains, animaux de compagnie et la faune dans le monde entier. Durant les dernières 20 années +, changements dans les pratiques agronomiques a entraîné de graves flambées de mouches stables dans plusieurs pays. Ces flambées perturbé la production animale et humaine loisirs aboutissant à des demandes de la population pour accroître les efforts de recherche et de la gestion de cet organisme nuisible. Une procédure simple et peu coûteuse pour l’élevage des mouches stables pour des études en laboratoire est présentée. La procédure utilise des fournitures, des équipements et des composants de l’alimentation disponible localement. La procédure peut être adaptée pour l’élevage des autres mouches muscoid dont mouche faciale (Musca autumnalis), mouche des cornes (Haematobia irritans) et mouche domestique (Musca domestica). La procédure produit puparia mouche stable, avec une moyenne de 12,5 mg et environ 35 % des œufs à la survie des adultes. Environ 3000 mouches sont produites dans chaque casserole.
Introduction
Les mouches stables, Stomoxys calcitrans (L.), sont des mouches hématophages dont les piqûres douloureuses perturbent le comportement de pâturage du bétail, causent des douleurs et souffrances aux animaux de compagnie et perturbent les activités récréatives humaines dans le monde entier. Immatures mouches stables se développent dans la fermentation de matière végétale, souvent contaminé par des déchets animaux. Cultures et modification des pratiques agronomiques ont produit des graves éclosions de mouches stables dans des résidus de cultures, légumes en Australie1, canne à sucre au Brésil2et ananas au Costa Rica,3. Bien que seulement 14 mouches stables par animal sont considérés comme le seuil économique4, observations de plus de 2 000 mouches par animal ont été faites au cours de récentes éclosions5. Ces niveaux d’infestation réduire la productivité hôte à près de zéro et peut causer la mortalité6. À la suite de flambées associées sur le plan agronomique, mouches stables reçoivent le regain d’intérêt et demande des colonies de laboratoire a augmenté de façon spectaculaire.
En ce qui concerne tous les holometamorphic insectes, mouches stables obtenir tous les éléments nutritifs nécessaires à sa croissance durant le stade immature ou larvaire. Par conséquent, un élément important d’un système d’élevage est l’alimentation larvaire ou le substrat. Les larves de mouches stables ont été observés dans un large éventail de substrats dans la zone7 et ils dépendent de la communauté microbienne du substrat8,9. Substrats naturels de larves sont principalement composées de décomposition ou de fermentation matériel végétatif souvent contaminés par des déchets azotés.
Pour l’élevage de laboratoire, des substrats de larves mouches stables sont généralement composées d’un matériau végétal et une source d’azote supplémentaire. Nombreux matériaux ont été utilisés pour un regime de larve mouche stable. La première alimentation larvaire a imité substrats naturels et inclus la fermentation paille d’avoine et de10,du fumier de cheval ou vache11. Sources de glucides incluent blé bran12,13,14, luzerne repas12,13,14 , et une formulation commerciale développée par Chemical Specialties Manufacturers Association (CSMA, 33 % du son de blé, farine de luzerne de 27 %, 40 % de levure granulés)13,14,15,16. Sources d’azote comprennent de suspension de levure12, de farine de poisson et de bicarbonate d’ammonium17. Gonflement des matériaux inertes figurent souvent dans les régimes dont avoine coques12, bagasse13, vermiculite16, copeaux de bois13,18 et granulés coques d’arachides14.
Des principaux objectifs de l’élevage de laboratoire sont de produire un produit qui est aussi physiologiquement similaire à « type sauvage » que possible, afin que des expériences en laboratoire produira des résultats reflétant celles des populations naturelles. Cela nécessite que l’élevage et la sélection être minimisé pour maintenir génétique, diversité et ressources nutritionnelles être comparables à ceux dans le domaine. Les objectifs secondaires sont à minimiser le travail et les dépenses. Une composante majeure de la réduction des dépenses est l’utilisation de composants d’alimentation disponibles localement. La mouche stable SYSTEME présenté d’élevage a été développée afin d’atteindre ces objectifs.
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Protocol
1. oeuf Collection (Figure 1)
- Préparer une tasse mentionnÃ, placez un bout de tissu en ~ 500 mL bécher rempli d’eau tiède (environ 40 ° C). Chevaucher les côtés de la coupe et fixez avec un élastique. Plier l’extrémité libre de la toile de retour sur le dessus de la coupe.
- Place coupe mentionnà en cage de mouches de 8 à 10 jours de vieux pour la femelle gravide ~ 2 h stable vole sera pondent leurs oeufs sur la toile.
- Retirer mentionnà tasse de cage et rinçage oeufs hors de la toile mentionnà dans une petite casserole avec pissette de lavage.
2. préparer la moule d’élevage larvaire
-
Préparer le support (quantités pour 1 pan d’élevage)
- Combiner le son de blé (500 g), de copeaux de bois (200 g) et de farine de poisson (115 g) dans la casserole en plastique plat 10 L et bien mélanger.
- Ajouter le bicarbonate d’ammonium (50 g) à l’eau (~ 25 ° C, 1 600 mL) et mélanger jusqu'à dissolution.
- Ajouter la solution de l’eau aux ingrédients secs et remuer pour n’assurer aucune matière unwetted. Niveau moyen à pan, mais ne pas compresser.
-
Ajouter les oeufs de mouche stables
- Faire un sillon peu profond au milieu de la longueur de la casserole.
- Déposer 1 mL d’oeufs de mouche stables (~ 8 000 oeufs) dans le sillon avec la pipette de l’oeuf (Figure 2).
NOTE : Pipette oeuf fait en coupant une pipette graduée en plastique au point désiré, insérant 100 mesh écran et pipette collant ensemble. - Couvrir les oeufs d’une mince couche de médium pour empêcher la dessiccation.
- Couvrir la casserole avec taie d’oreiller, fermer avec un élastique et une étiquette. Posez les poêlons individuels en salle larvaire (23 ± 2 ° C, 30 à 50 % d’humidité relative et 12:12 [DL] h photopériode).
Remarque : Le développement larvaire prend 10 à 14 jours suivant la date de la ponte.
3. traitement nymphe, les larves se déplacent jusqu’au bord du milieu 7 à 9 jours après la ponte et Pupariate par jours 13 ou 14
- Scoop puparia, principalement située sur les bords de la casserole sous la croûte qui se forme sur la surface du milieu, dehors et placé dans une casserole propre.
- Remplissez la cuve, avec puparia, entre ½ et ¾ pleine d’eau. Briser les agrégats de puparia et moyennes. Les composants bran et protéines de blé du milieu évier tout en puparia > 1 jour vieux flotteur19.
- Enlever les matières flottantes, puparia et certaines composantes moyennes avec une passoire et laver à travers une série de tamis (#5, #7, #12, #20) pour éliminer le milieu reste. Le tamis #12 recueille le puparia et le #20 garde des déchets solides de pénétrer dans le drain. Lavage puparia entre tamis avec un pulvérisateur de l’évier.
- Rincez puparia, dans le tamis #12, dans une casserole propre. Remplir le bac à ½ plein d’eau. Versez puparia flottant dans une passoire et laisser les excès d’eau s’écouler.
- Transfert égouttés puparia à écran de séchage avec ventilateur et laisser à sec (Figure 3).
4. plateau nymphe, une méthode Alternative pour la collecte Puparia est une étagère Pupal18
NOTE : Le plateau est issu d’un morceau de coupe en plastique de l’extrémité d’un pan de plat 10 L (10,2 cm de hauteur x 10,2 cm de large x 31,9 cm de long).
- Préparer le milieu comme décrit en 2.1. Support conique dans le moule de ~2.5 cm profond sur un bout de ~7.5 cm profond sur l’autre.
-
Poser le plateau sur le milieu dans la partie peu profonde de la moule d’élevage et ruban pour éviter les larves de ramper à côté de l’étagère (Figure 4).
- Saturer l’éponge (~14.5 x 9,0 x 4,5 cm3, cellulose régénérée) et l’envelopper dans un chiffon gorgés d’eau (30,5 x 42 cm2, coton) et la place sur le plateau environ un demi pouce du milieu.
-
Ajouter les oeufs comme indiqué au point 2.2 et procédez comme ci-dessus.
- Vérifier quotidiennement les casseroles pour vous assurer que l’éponge reste humide.
- Rinçage puparia du plateau, éponge et chiffon dans un plat propre casserole et versez dans une passoire 14 jours après la ponte.
5. contrôle de la qualité
- Peser tous le puparia produite dans casserole (poids total).
- Isoler puparia 100, peser et placé dans une boîte de Pétri de 9 cm.
- Nombre et sexe adultes ~ 5 – 8 jours plus tard afin de déterminer le taux d’émergence et sex-ratio. Stocker Pétri avec des adultes a émergé dans un congélateur pour le comptage à une date ultérieure si nécessaire. Les mouches sont sexés par la forme de leurs yeux et de la largeur de la plaque fronto-orbital20 ou sous faible grossissement, les organes génitaux.
- Poids total record, poids de 100 puparia et le nombre de levées mâles et femelles adultes.
6. préparation de sang
- Recueillir le sang de bovin fraîche d’un abattoir local dans des seaux de 19 L contenant 70 g de citrate de sodium dihydraté tribasique dans 500 mL d’eau. Remuez vigoureusement pendant 5 à 10 min de sang et retournés au laboratoire.
- Souche sang à travers une passoire pour éliminer des caillots et partitionné en conteneurs de 2 L, étiquette avec la date de la collection et le magasin dans un congélateur (-20 ° C).
- Conteneur de retirer du congélateur et le placer dans le réfrigérateur 2 jours avant nécessaire. Sang peut être utilisé pour environ 2 semaines une fois décongelés et stockés au congélateur jusqu'à 1 an.
7. adult Maintenance
- Préparer les cages, fond de cage de ligne avec du papier de boucher pour faciliter le nettoyage.
- Placer 50 g des pupes de mouches à secs stables (~ 3 500) dans chaque cage. Eclose adultes quelques heures à quelques jours après la transformation pupale.
- Place un sang frais imbibés serviette féminine sur le dessus de chaque cage pour se nourrir. Commence à se nourrir dans les 24h d’eclosion adulte et répéter tous les jours jusqu'à un jour avant la ponte (9 à 10 jours après la levée).
- Après la ponte (section 1), placez la cage dans le congélateur pendant 4 à 8 h et puis nettoyer en retirant le papier, le rinçage des excréments sur les côtés et le plancher avec de l’eau chaude et frotter toutes les surfaces avec un détergent à lessive et eau de Javel. Rincer les cages à l’eau chaude et laisser pour sécher.
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Representative Results
Les larves pupariate 10 – 14 jours et les adultes émergent de 14 à 16 jours après la ponte. Générationnel, oeuf d’oeuf, est ~ 24 jours. Données d’élevage pour mai 2013 à janvier 2017 avec trois différents agents gonflants et deux colonies sont présentées à la Figure 5. Cottonwood a donné le meilleur rendement, 3867 ±1442 (
± écart-type) pesant 12,5 mg 1,6 avec 74 ±19 % éclosion de nymphes pour la colonie établie laboratoire produisant 2 872 ±1294 mouches adultes. Sex-ratio était légèrement biaisé vers les femelles 0.97:1 (mâle : femelle, 77 141 mouches sexés de 1 184 casseroles). Oeuf à la survie des adultes est d’environ 36 %. Malheureusement, les copeaux de peuplier est devenus plus difficiles à obtenir, nous forçant à utiliser fréquemment les copeaux de pin. Bien que la production avec le pin est plus faible, ~ 1 700 adultes par pan, taille est légèrement plus grande, 13 mg.
En utilisant la méthode de pupes plateau, environ 85 % des larves migrent sur le plateau, le puparia sont plus propres et la plupart du milieu recueilli sur le plateau est facilement enlever par flottation. Cette méthode peut également être utilisée pour surveiller le taux de développement larvaire lors de la comparaison des méthodes d’élevage. L’inconvénient est que les casseroles doivent être surveillés quotidiennement afin de s’assurer que les éponges restent humides.
Le coût actuel de composants moyennes est 1,17 $/ pan ou 0,39/1 000 $ des mouches stables produit (tableau 1).
| Composant | Quantité | Coût/Pan |
| Son de blé | 500 g | 0,35 $ |
| Copeaux de bois | 200 g | 0,06 $ |
| Farine de poisson | 115 g | 0,27 $ |
| Eau (≈25 ° C) | 1 600 mL | |
| Bicarbonate d’ammonium | 50 g | 0,48 $ |
Tableau 1 : Stable fly alimentation larvaire. Combiner les ingrédients secs, à l’exclusion de bicarbonate d’ammonium et bien mélanger. Ajouter le bicarbonate d’ammonium dans l’eau et mélanger jusqu'à dissolution. Ajouter la solution de bicarbonate d’ammonium pour faire sécher les ingrédients et mélanger pour n’assurer aucune matière unwetted. Quantité pour un pan.
Figure 1 : matériaux utilisés pour la collecte des œufs de mouche stables. Egging coupe, presser la pissette et petite casserole pour la réception des oeufs. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
Figure 2 : oeufs appliquées au milieu préparé en Pan. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
Figure 3 : appareil utilisé pour le séchage puparia. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
Figure 4 : larve pan d’élevage avec étagère pupal. Notez l’accumulation de puparia au-dessus d’et autour de la toile. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
Figure 5 : Résumé des données d’élevage. Nombre moyen de puparia par pan (A), poids puparia (B) et le nombre d’adultes par cuve (C) pour stable fly de mai 2013 à janvier 2017, à l’aide de trois agents gonflants, de copeaux de peuplier, de copeaux de pin et de vermiculite et de deux colonies d’élevage . La colonie de laboratoire a été élevée en permanence dans notre laboratoire pour une dizaine d’années. La colonie PL a été établie à partir des mouches sauvages prélevés à une laiterie dans Lancaster Co., NE, é.-u., à l’automne 2014. Barres d’erreur représentent des écarts-types. N représente le nombre de plateaux sur lesquels reposent les données. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
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Discussion
Les mouches stables se trouve dans une large variété de substrats dans la nature et peuvent être élevés dans de nombreux types de médias dans le laboratoire. Nous avons utilisé des copeaux de bois et de la vermiculite comme agents gonflants. La vermiculite a bien fonctionné, mais fait séparation puparia d’élevage moyennement difficile et était cher (~$0.60/pan). Peut-être à cause de la rigueur supplémentaire de séparation puparia du milieu, eclosion était également plus faible avec la vermiculite, 57 % contre 75 % pour les copeaux de bois. Copeaux de peuplier ont été comparables à la vermiculite, mais parfois difficile à se procurer. Éléments les plus importants semblent être matériel végétatif ou cellulosique à fermenter et à maintenir un « ouverte » ou aérée moyenne et ammoniacal azote21,22. Les larves de mouches stables ne se trouvent pas dans la pure bouse, préférant âgé bouse mélangée à des matières végétales. Avec ces pensées à l’esprit, élevage procédures décrites ici peuvent être adaptées aux matériaux disponibles localement pour développer des procédures peu coûteux pour l’élevage des mouches stables.
Mouches élevées à l’aide de ces méthodes sont comparables en taille à mouches de terrain recueillie. Longueur de l’aile est en corrélation avec le corps de mouche stable poids23. Parce que les ailes de mouches sauvages sont souvent effilochés, nous utilisons la longueur de la cellule discale-medial comme un indicateur de longueur de l’aile. La longueur moyenne de la cellule discale-medial de 249 mouches élevés avec cette méthode était 2.49 ±0, 15 mm (gamme 1,96 – 2,81) alors que celui des 3 713 mouches collectées sur des pièges collants au cours de l’été 2011 et 2012 près de Ithaca, NE 2.52 ±0.21 mm (gamme 1,80 – 3.58) (données non publiées). Poids de puparia élevé avec cette méthode est plus élevé que celui rapporté pour précédent élevage protocoles14,24 et survie, oeuf à l’adulte, est plus élevé que les 5 % observés dans la zone25.
Méthodes semblables peuvent être utilisées pour l’élevage des autres mouches muscoid y compris les mouches domestiques, mouches des cornes et des mouches de visage. Larves de mouche et la mouche des cornes visage nécessitent un support de fumier de bovin frais. Moyen de mouche maison faite de 470 g veau feed, son de blé 500 g et 1 600 mL d’eau (environ 25 ° C). Comme des mouches stables, la mouche des cornes adultes se nourrissent de sang. Face à la mouche et la mouche domestique adultes peuvent être nourris avec un mélange sec de lait en poudre et le sucre. Face à la mouche et la mouche domestique adultes également besoin d’une source d’eau. Nous utilisons des bouteilles en plastique de 100 mL avec une mèche dentaire en passant par le couvercle.
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Disclosures
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Acknowledgments
Nous tenons à remercier Anthony Weinhold et les nombreux étudiants qui ont travaillé avec nous pendant des années pour le support technique ainsi que des suggestions pour améliorer notre insecte procédures d’élevage.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Diamalt | Premier Malt Products, Inc., Saddle Brook, NJ | 2540 | |
| CSMA Fly media | Purina Animal Nutrition, Arden Hills, MN | 5S6Z | |
| Thin Maxi Pad | The Tranzonic Co., Cleveland, OH, USA | 5001M | |
| Calf Manna | MannaPro, Chesterfield, MO, USA | Manna Pro | |
| Ammonium Bicarbonate | Spectrum Chemical Manufacturing Corp, Gardena, CA | A1125 | |
| Wheat bran, Coarse | Siemer Milling Company, Teutopolis, IL | ||
| Wood shavings | Tractor Supply Company, Brentwood, TN | 502770699 | |
| Fishmeal | Consumer Supply Distributing, North Sioux City, SD | F1550 | |
| Adult cages | All Aluminum Window Company, Lincoln, Ne | Custom | 45 × 45 × 45 cm, 18 × 16 mesh aluminum screen, stockinette access |
| 9 × 28 cm black cotton cloth | Robert Kaufman Fabrics, Los Angeles, CA | K040-114 | Egging cloth |
| 10 L plastic dish pans | Rubbermaid, Saratoga Springs, NY | FG2951ARWHT | Larval pans |
| Stockinette, Cotton, 12 inch x 25 yard roll | Tex-Care Medical Company, Burlington, NC | 91311-225 |
References
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