Neuroscience

ラットモデル改良を使用して中枢性疲労の複数プラットフォームメソッド

Published: August 14, 2018 doi: 10.3791/57362

Weiyue Zhang*¹, Wei Zhang*¹, Ning Dai*¹, Chenxia Han², Fengzhi Wu¹, Xu Wang¹, Libo Tan¹, Jie Li¹, Feng Li¹, Qingjia Ren³

¹School of Traditional Chinese Medicine, Beijing University of Chinese Medicine, ²Department of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine, West China Hospital, Sichuan University, ³Institute of Tibetan Medicine, Tibetan Traditional Medical College

* These authors contributed equally

Summary

ここでは、変更されたを使用して中枢性疲労のラットのモデルを紹介するプロトコルを提案複数プラットフォームメソッド (MMPM)。

Abstract

この記事で紹介した修正中枢性疲労のモデルラット複数プラットフォームメソッド (MMPM)。[複数のプラットフォーム] は、水タンク下部の狭いプラットフォームとして設計されました。モデルラットしたタンクに入れ、コントラストの設定空のコントロールグループ連続 21 日間、1 日あたり 14 時間 (18:00-8:00) プラットフォームに立っていた。モデリングの最後に、モデルグループのラットは明らかな疲労出現を示した。モデルを評価するためにいくつかの行動試験を行い、オープンフィールドを含むテスト (OFT) 高架プラス迷路 (EPM) テスト、および徹底的なスイミング (ES) テスト。結果、不安、空間認知障害、悪い筋肉のパフォーマンスやモデルラットにおける提示拒否したボランティア活動中枢性疲労の診断を確定します。中央の神経伝達物質の変化では、結果も検証されます。結論としては、正常に再現された中枢性疲労と病気の病態を明らかにするモデルでは、今後の研究が役立つことがあります。

Introduction

疲労は、¹人の健康を脅かす主な要因のひとつです。過去数十年で様々な研究は、疲労は末梢発生しますが、一元的に駆動、常に感情と認知の障害が伴うことを証明しています。イタリアの生理学者 A. Mosso は最初、中枢性疲労²単語を提案しました。それは一般に限られた自主的な活動と中枢神経系 (CNS)³のインパルスの伝達の機能障害による認知障害として定義されます。末梢筋疲労と比べると、中枢性疲労は、中枢神経系だけでなく、結果として感情/行動の障害は、うつ病、不安、認知障害、記憶喪失を含む変更を強調しています。1 つの研究は、多くの要因が、過度の身体活動と精神的ストレスは非常に不可欠な⁴、中枢性疲労を引き起こすことができることを示しています。病因としてトリプトファンキヌレニン経路仮説⁵のような理論説明特定の経路の変化しかし、綿密な研究がまだ中枢性疲労の中央周辺の相関関係を明らかにするため必要です。

中枢性疲労のメカニズムはまだ明らかでは、効果的な動物モデルはさらなる研究のためとても重要です。既存の疲労モデルは大抵トレッドミル⁶と重量ロードスイミング⁷、精神的な要因に少し関心を持ってのような過度の運動による。中枢性疲労の開発シミュレート、するためには、私たちのグループは、MMPM でラットモデルを開発しました。モデリングプロセス中にラットのまま長時間睡眠時間の一部を含む複数のプラットフォームボックスの狭いプラットフォームの上に立って。過度の運動モデルとは異なり、MMPM モデルは、中枢性疲労の複雑な病態を考慮した精神的な要因として部分的な睡眠の剥奪を使用します。

モデル評価不安ムードと自主的な活動を決定するために OFT と EPM のテストを使用します。ES テストを実行して、末梢筋のパフォーマンスを測定します。さらに、我々はラットの脳を取るし、ドーパミン (DA) を検出/中央神経伝達物質の違いを観察する両方の hypothalamuses のセロトニン (5-HT) のコンテンツ。

以下に示すプロトコルモデル中枢性疲労による繰り返しの物理的な活動と人間の生活の一般的な条件を模倣、睡眠不足です。ただし、モデル期間を調整すると、それすること他の多くの分野でのような観察とストレスの睡眠の研究。将来的に研究、我々はこのモデルが中枢神経系の変更と中枢性疲労の病態メカニズムを明らかにするため、周辺システムとの接続を発見に役立つことを願っています。

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Protocol

すべての動物は、ガイドラインに従って中国の法律倫理的な使用や実験動物の世話によって維持されました。

1 前モデル準備

研究室の準備
1. 実験前に、少なくとも 30 分間 UV ランプを実行します。
2. 25 ± 3 ° C、相対湿度 30% 前後で研究室の温度を制御します。
3. 6:00 光の演習を切り、18:00 12/12 h 明暗サイクルを確立するためにそれをオフにします。
複数のプラットフォームボックス構造
1. 110 × 60 × 40 cm³のカバーなしの不透明なプラスチックタンクを構築します。
2. 15 円形プラットフォームを修正 (h = 8 cm、d = 6.5 cm) タンクの底部には、どの整然と配布 3 行で 5 つの列。スペースを残して十分な各プラットフォーム間約 10 cm の列と行の間の 13 cm。
3. タンクの側面の水の出口を設定して蛇口をインストールします。
4. それに掛かっているフードボックスとタンクの鉄金網カバーを作る。
グループ化と住宅ラット
注: 8 週齢, 体重約 200 210 g の Wistar 系雄ラットは実験で使用されます。ラットは、モデリングプロセスの間にグループに住んでいます。
1. マーカーペンとラットの尾根を数します。
2. ラットの重量を量る、非常に軽いまたは重いものを除外し、モデルと制御グループにランダムに残りの部分を分けます。
3. 優しくきれいなケージにラットを入れ、少なくとも 3 日間ラボに順応できるように。十分な水および食糧補給を提供します。

2. MMPM でモデリング

注: プロセスは、18:00 から開始、8:00 21 日以上、1 日あたりの 14 時間の合計は、次の日で終わります。干渉の要因を避けるためには、同一人物が同じ白衣を着用しながら、全体の実験を行う必要があります。10 ラットは実験で使用されます。

平らな面、例えば床にタンクを配置します。その後、ぬるま湯 (25 ± 3 ° C)、フラットのプラットフォームの下約 1 cm の約 7 cm でタンクを満たします。
1 日のタンクのすべてのラットの十分な食べ物や飲み物を準備します。フードボックスに飼料と水を入れ、表紙にハングアップします。
注: いくつかのスマートのラットはフードボックスの残りの部分を学ぶ。もしそうなら、タンクに戻ってそれらを運転します。
ケージのモデル群を取る、尾によってそれらをつかむし、タンクにそっと入れます。水の代わりに、水の恐怖をやる気にさせるプラットフォームのすべてのラットを起動します。すべてのラットが対照群のラットのまま十分な食べ物と水で元檻の中で、上に立つプラットフォームを取得するかどうかを確認します。
タンクをカバーします。傷害を避けるためにラットを監視します。ラットプラットフォーム上に登って 1 時間以上水に滞在場合、タンクからそれを拾うし、テストから削除します。
14 時間後のモデルラットのタンクを取り出すし、ドライヤーで髪を乾かします。それはフェードする場合ラットの尾をマークし直す。元檻にラットを戻り、十分な食料と水を提供します。
タンクの隅々をフラッシュします。タンクの 1 つの側面を昇格し、下水の流出に蛇口を開きます。
75% エタノールスプレーでタンクを殺菌、UV ライトにそれを公開します。

3. モデルの評価: 行動テスト

注: すべてのテストは、行動のラボで実行されます。ノイズと余分な光されていない場合、テスト中に妨害を避けるため。できれば、同じ人を使用して、各テストを実施します。暗いコートと手袋が画像処理でグレースケール認識するため必要です。OFT を実行最初のラットの行動で最も効果があり。

しばしば
1. それはワークステーションに正しく接続されているし、ボックスのすべての角をカバーを確認するオープンフィールドボックスの上のレコーダーを確認してください。ボックスに影を排除するために照明を調整します。
2. 元檻の中で行動の実験室にネズミを移動します。テストの前に少なくとも 1 時間を順応させます。
3. きれいにし排泄物やにおいが以前の実験から左がないことを確認し、75% エタノールとボックスをサニタイズします。
4. その裏でネズミをケージから取り外し、優しく、ボックスの中央の領域にそれを置きます。すぐにシュートをブロックしないようにボックスから腕を撤退します。
5. ラットの番号を入力して録音を開始します。カウントし、飼育、登山など、ラットの垂直活動の頻度を記録します。
6. 5 分後に録画を停止、アウトボックスのネズミを取る、ケージに戻る。
7. 3.1.3 - 3.1.6 すべてのラットがテストを完了するまでの手順を繰り返します。
EPM
1. OFT (ステップ 3.1.1 - 3.1.2) に関しては事前確認と馴化の手順に従います。
2. その裏でネズミをケージから取り外し、2 本の腕の接合部に軽くそれを置きます。左の開いている腕に向かってラットを土地し、迅速に残すシュートをブロックしないようにします。
3. ラットの番号を入力して録音を開始します。カウントし、異なる腕の入り口の頻度を記録します。ラットをテストで迷路を落とした場合、それを拾うし、迷路にそれを送り返します。データ分析のための詳細な情報を記録します。
4. 5 分後に録画を停止、ラットを取る、ケージに戻る。
5. 排泄物を削除し、元ラットの臭いを除去するために 75% エタノールで迷路を拭いてください。
6. 3.2.2 - 3.2.5 すべてのラットがテストを完了するまでの手順を繰り返します。
ES テスト
1. 暖かい (25 ± 3 ° C) 水の 80 cm で水泳タンク (70 × 30 × 110 cm³) を記入します。
  メモ: タンク内にサーモスタットがある場合水の温度には 37 ° C 前後、ラットの体温に似ているが設定する必要があります。ない場合は、部屋の温度を一定に保つ設定。
2. ピン各ラットのための負荷房し、その尾ルート優しくそれを結ぶ。負荷は、ラットの体重の 10% の重量を量る。
3. 尻尾をラットをつかむし、スイミングタンクにそれを投げます。ラットの密談、または壁にしがみつく、一線を画すと水に戻ってそれらを駆動します。
4. 開始時間時水と停止タイミングが使い果たされるときにネズミを投入する場合、10 以上の水の下に鼻、口と水から苦労する失敗としてことを s。
  注: 場合によっては、疲労や溺死突然発生します。必ず十分な実験者の記録し、同時に動物を保存します。
5. 他の人を中断することがなく水の枯渇ラットを削除します。自分の髪を乾燥、その番号をマークし直すとケージに戻ってそれらを送信します。
6. 1 つのグループが終了した後は、タンク内の水を変更します。すべてのラットが完了、スイミングタンクを空し、きれいエタノールと紫外線殺菌します。

4. モデルの評価: 中央神経伝達物質検出

意識まで 10% 抱水クロラール (3 mL/kg) の腹腔投与でラットを麻酔します。
ネズミの首をはねます。
後内側の線に沿って縦切開を行う、両サイドに頭蓋を開き、脳を公開します。頭蓋を裏返し、脳を取り外し、脳アイス袋にします。
分離し、周囲の組織との明確な境界を持つ脳の基底部にダイヤモンドの形をした領域である視床下部を削除します。生殖不能の管に配置し、液体窒素で凍結します。-80 ° C の冷却装置ですべてのサンプルを格納します。
高速液体クロマトグラフィー (HPLC)⁸を使用して視床下部で DA と 5 HT のコンテンツを検出します。

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Representative Results

MMPM を使用して中枢性疲労のモデルラットについて述べる。Wistar 系ラットを 24 は、コントロールグループと各グループの 12 のラットをモデルグループにランダムに分かれています。モデル装置は、水タンク下部 (図 1) に狭いプラットフォームとして設計されています。モデルラット 21 日 (図 2)、部分的な睡眠時間を含めて 1 日あたり 14 h のプラットフォームの上に立ちます。

行動テストは、ラットの感情的、物理的な変化を評価するためにモデリングした後実行されます。OFT 結果 (図 3) 制御グループと比較されたことを示しています (n = 10)、子育て運動とボランティア活動の平均速度が大幅に低下がある (p < 0.05、 p < 0.01) ラット (n = 10) とうちの待機時間の明らかな増加リング入り口 (p < 0.01)。EPM テスト (図 4) は、モデリングの 21 日に開かれた腕のエントリとオープン腕制御グループと比較して大幅に期間の頻度が減少したことを示しています (n = 10) (p < 0.05、 p < 0.01) 両方の増加があったものの、近くに腕のエントリと近い腕の期間の周波数 (p < 0.05)。ES テスト (図 5) の結果を示すモデルグループのスイミング期間 (n = 10) は対照群より有意に短かった (n = 10) (p < 0.001)。

次に、両方の hypothalamuses 中央神経伝達物質の違いを観察するの DA と 5 HT コンテンツを検出します。モデルグループで視床下部との 5 HT DA の比で DA が大幅に減少する (図 6) の結果 (n = 10) 制御グループと比較して (n = 10) (p < 0.05、 p < 0.01)、5-HT 含量が増加中有意 (p < 0.05)。

図 1: 複数のプラットフォームボックスのスケマティック。(A) 正面します。(B) 平面図です。[複数のプラットフォーム] は、底と側面の蛇口に固定 15 アクリルプラットフォームと体側プラスチックタンク (110 × 60 × 40 cm³) です。各プラットフォームは、支柱、円形フラットから構成されます (d = 6.5 cm) プラットフォームの柱上部よりも大きい。プラットフォーム (h = 8 cm) 3 つの行と 5 つの列で配布。隣接するプラットフォームは、列と行の 13 cm で 10 cm です。タンクは 15 ラットの最大を保持できます。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。

図 2: モデリングの写真。プラットフォームにラット立ってモデリングの 15 日だった。その乾燥した髪と潤んだ目は、明らかな疲労状態をお勧めします。

図 3: 分析の OFT 。垂直活動頻度の (A) の比較。± SEM を意味するようにデータが表示されます (n = 10)。不等分散と (F = 9.877, p = 0.006 < 0.05)、意義が独立したサンプルの t テストによって決定された t = 2.226, p = 0.049 < 0.05。(飼育) 垂直活動の頻度減少モデルラット (n = 10) 制御ラットと比較して (n = 10)。(B) の自主的な活動の平均速度に比較します。中央値 ± IQR としてデータを提示する (n = 10)。意義はマン-ホイットニーの U によって決定されたテスト、z =-2.685, p = 0.007 < 0.01。モデルラットで自発的な活動の平均速度は対照群と比較して減少します。(C) 比較外の待機時間にはリング入り口です。± SEM を意味するようにデータが表示されます (n = 10)。不等分散と (F = 5.748、 p = 0.028 < 0.05)、意義は、t-テストによって決定された t =-3.724, p = 0.03 < 0.01。うちの遅延リングモデルのラットの入学増加彼らは対照群に比較してリングに入る前に多くの時間を過ごすことを意味します。注: p< 0.05 (*)p <0.01 (*)p < 0.001 (*)。

図 4: EPM テストの分析(A) 腕が開いてエントリの頻度に比較します。± SEM を意味するようにデータが表示されます (n = 10)。等分散で (F = 0.982、 p = 0.348 > 0.05)、意義は、t-テストによって決定された t 2.710、 p = = 0.014 < 0.05。腕が開いてモデルラットにおけるエントリの頻度 (n = 10) 対照群と比較して減少 (n = 10)。腕が開いての期間に (B) を比較します。± SEM を意味するようにデータが表示されます (n = 10)。等分散で (F = 0.100、 p = 0.755 > 0.05)、意義は、t-テストによって決定された t = 3.304, p = 0.004 < 0.01。モデルラット減少の腕が開いて期間比較対照ラットにモデルラットが開かれた腕で短時間を意味します。近くに腕のエントリの周波数に (C) を比較します。± SEM を意味するようにデータが表示されます (n = 10)。等分散で (F = 0.141、 p = 0.712 > 0.05)、意義は、t-テストによって決定された t =-2.466, p = 0.024 < 0.05。モデルの近くに腕のエントリの頻度は対照群に比べ増加をラットします。近くに腕の期間に (D) 比較します。± SEM を意味するようにデータが表示されます (n = 10)。不等分散と (F = 4.796、 p = 0.042 < 0.05)、意義は、t-テストによって決定された t =-2.736, p = 0.0016 < 0.05。モデルラット増加近い腕期間はモデルのラットは近くに腕の多くの時間を過ごすことを意味制御ラットと比較してください。注: p < 0.05 (*)p <0.01 (*)p < 0.001 (*)。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。

図 5: 網羅的水泳テストの分析中央値 ± IQR としてデータを提示する (n = 10)、 pとして報告されますと < 0.05 (*) p < 0.01 (*) p < 0.001 (*)。意義はマン-ホイットニーの U によって決定されたテスト、z =-3.326, p = 0.001。モデルラットのスイミングの時間 (n = 10) は対照群より有意に短かった (n = 10)。

図 6: 中央神経伝達物質含量の分析。(A) DA コンテンツに比較します。± SEM を意味するようにデータが表示されます (n = 10)。等分散で (F 0.088、 p = 0.771 を = > 0.05)、意義は、t-テストによって決定された t = 3.717、 p = 0.002 < 0.01。両方 hypothalamuses の DA 量減少モデルラット (n = 10)、対照群と比較して (n = 10)。5 HT のコンテンツに (B) を比較します。± SEM を意味するようにデータが表示されます (n = 10)。不等分散と (F = 5.282、 p = 0.034 < 0.05)、意義は、t-テストによって決定された t =-2.997, p = 0.012 < 0.05。両方の hypothalamuses に 5 HT コンテンツは、ラット、対照群と比較して減少します。(C) 比の比較中央値 ± IQR としてデータを提示する (n = 10)。意義はマン-ホイットニーの U によって決定されたテスト、z =-3.175, p = 0.001。5 HT に DA の率は、対照群と比較してモデルラットにおける大幅低下します。注: p < 0.05 (*)p <0.01 (*)p < 0.001 (*)。

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Discussion

MMPM もともと睡眠剥奪⁹です。ラットに水槽に底面固定プラットフォームで起動されます。水の本能的な恐怖によって駆動される、ラットのままプラットフォームの上に立って、睡眠が発生しません。研究は、睡眠不足の別の時間は様々なラットの行動および認識減損¹⁰、否定的な感情の¹¹、中枢性疲労などの気分の変化をもたらすことを示しています。一部の研究者は、中枢性疲労を引き起こすことができる単一のプラットフォーム法 (SPM) による慢性的な睡眠不足、認識減損および社会の障害¹²を証明します。他の研究では、連続した日に断続的な剥奪は感情障害と中枢性疲労、エンドルフィン¹³と扱うことができることを示しています。私たちの以前の研究に比べて 5 日、14 日、21 日剥奪より中枢性疲労を誘発することを証明ではなく、感情のストレス関連障害¹⁴。中枢性疲労、睡眠不足と同様、立っている、狭い避難所スペース、退屈で繰り返し環境の長い時間を含む MMPM の多くの要因があります。睡眠不足と中枢性疲労の根本的な相関は、視床下部-下垂体-副腎 (HPA) 系のモノアミンの中で神経伝達物質の変化が重要な役割の異なるレベルに関連付けられます。

このプロトコルでは、MMPM を用いた中枢性疲労モデルを開発し、行動テストと神経伝達物質の検出と評価。まず、平均睡眠時間は 12.6 h、約 2.4 - 夜と昼間¹⁵時 9.6 8.2 h で h 4.2 Wistar ラットの自然のリズムを模倣するラボで 12/12 h ダーク/ライトサイクル (6:00-18:00) を作成します。モデルラットはコントラストのコントロール群と 21 日連続、1 日あたり 14 時間 (18:00-8:00) のために立つ複数のプラットフォームボックスに入れられます。実験の終わりは、モデルグループのラットはケージで退屈な髪、かすかな尾の色、潤んだ目、減らされた活動を含む、明らかな疲労様子を見せます。

行動テストの結果は、物理的および感情的な側面の両方に変更を表示します。OFT は探査動作と自主活動¹⁶評価する齧歯動物モデルの評価で広く使用されます。齧歯動物が接触の本能を持って、オープンフィールドに配置されます、一度がちな壁の近くにリングにすぐに移動します。同時に彼らは新しい環境に興味があるし、垂直飼育と水平方向の動きによって中央のエリアを探索する熱望しています。2 つの刺激の葛藤不安気分¹⁷が反映されます。OFT の結果では、その減少の平均速度に基づくモデルラットにおける減少のボランティア活動を示唆しています。また、飼育減少不安感情を意味する可能性があります、コントロール群に比較して大幅のモデルラットの頻度です。さらに、ラットはうちに入る前に多くの時間を過ごす傾向があるモデルはモデルラットの空間認知障害を示唆している探査で明らかな優先しないリングします。EPM テストは不安を評価する古典的なテストです。不安とラットは腕が開いて¹⁸の探索ではなく安全のため近くの腕に滞在する傾向があります。対照群と比較しての結果、モデルラットは近くに腕の中で、短い時間で開いて腕の中で多くの時間を過ごす、これは異なる腕の入り口周波数に対応、全体的のモデルラットにおける不安ムードを確認します。ES テストでのモデルラットのスイミング期間は疲労によって引き起こされる筋肉のパフォーマンスを示唆、対照群よりもはるかに短い。結論としては、不安、認知障害、筋肉のパフォーマンス、および限られた自主的な活動すべてを示す中枢性疲労モデルラットに表示されます。

中枢神経系、に関しては中央神経伝達物質内のすべての変更は、中枢性疲労をお勧めします。我々は、視床下部の 5 HT で DA コンテンツの大幅な減少と増加を見つけます。5 HT はモノアミン神経伝達物質 (TRP) アミノ酸のトリプトファンから合成されます。激しい活動は血液により無料 TRP を放出し 5 HT の生成を増加します。蓄積された 5-HT はその見返りに、貧しい筋肉測定¹⁹につながるロコモーターシステムの中央制御を抑制します。DA は、興奮性神経伝達物質、ロコモーター活動の初めに増加し、疲労²⁰の出現によって低下です。DA の 5 HT 相関し、励起抑制システム効果²¹ロコモーターシステムの中央制御のやり取りが。したがって、DA と 5 HT の比率の低下は、中枢性疲労の重要な指標です。

成功に不可欠なプロトコルのいくつかのメモがあります。まず、モデル期間と条件は Wistar ラットでテストされます。温度設定と睡眠時間¹⁴系統、性別ごとに異なります。第二に、ラットはケージの中で 6 匹のラットのグループで生活する必要があります、十分な食料や実験を通して水を提供します。モデリングの最初の 2 週間の間にラットはかなりイライラしている、タンクとケージの両方を戦うことがあります。それらを監視し、死から負傷したネズミを防ぐため。また、彼らは特に冬場の寒さを避けるために、タンクから削除された後にラットの髪を乾燥してください。

モデルは、中枢性疲労の設計は、その使用を拡大するための複雑な要素を追加することは不可能です。たとえば、海の波を模倣し、ナビゲーション疲労モデルを確立する試みで剥奪のパターンを変更するプラットフォームに振動モーターとスプリングをインストールします。モデル期間を調整すると、それは他の多くの分野で使用できます。動物モデル研究として研究はその限界があります。まず、モデルの予測的妥当性の証拠はありません。今後の研究で私たちはラットに抗疲労治療を実行し、モデルの妥当性を証明するために彼らの回復を評価します。また、モデルの現在の評価に焦点を当てより否定的な感情および中枢神経系の変化ただし、中枢性疲労は、学習難しさおよび社会的回避¹²としてマニフェストします。モリス水迷路のような行動テストと社会的相互作用のテストは病気のより包括的な理解を得ること、将来的に行うことができます。ここで紹介した中枢性疲労モデルは中枢性疲労の病態メカニズムを探る助けるかもしれないと思います。

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Disclosures

著者が明らかに何もありません。

Acknowledgments

この作品は、北京の自然科学財団 (No.7162124)、北京大学中国語医学新 ao 財団によって支えられました。

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
multiple platform sleep deprivation water tank	Customization,it is provided by the neuroimmunological laboratory of Beijing University of Chinese Medicine		110cm x 60cm x 40cm. There are 15 plastic small platforms at the bottom. The small platform is 6.5cm in diameter and 8cm high
Wistar rats	Beijing Weitong Lihua Experimental Animal Technology Company	license number SYXK (Beijing) 2016-0011	Use 32 Wistar healthy male rats ,8 week old (200-210 g)
Agilent 1100LC high performance liquid chromatograph	Agilent	G1379A, G1311A, G1313A , G1316A	G1379A, G1311A type chromatographic pump, G1313A automatic sampler, G1316A column temperature box
DECADE II SDC electrochemical detector	Dutch ANTEC company		glassy carbon electrode, Ag/AgCl reference electrode, workstations (Clarity CHS)
Biofuge Stratos high-speed refrigeration centrifuge	HERAEUS
VCX130 ultrasonic fracturing instrument	SONICS
ACS-ZEAS electronic scale	Phos technology development, Beijing.		The weight of the weighing rats can be accurate to 0.1g.
Open Field Box	Customization,it is provided by the neuroimmunological laboratory of Beijing University of Chinese Medicine		wooden box of open field 100 cm by 100 cm x 40 cm, inside wall and bottom as the gray.The bottom is divided into 25 equal area squares, each of which is 20cm x 20cm, and the 16 grids along the outer wall are the external ones, and the other 9 grids are central.The camera is mounted above the median.
Elevated Plus-maze	Beijing zhongshi dechuang technology development co. LTD.		The open arms and close arms of the cross are composed of 30cm x 5cm x 15cm, and the central area is 5cm x 5cm, with a camera mounted above the center and 45cm high.
rat swimming bucket.	Zhenhua biological instrument equipment co., LTD. Anhui,China.		The volume of plastic drum is 70cm x 30cm x 110cm, which is used for swimming in rats.
Thermometer	Shiya instrument co., LTD., changzhou,China.		Control water temperature
Small water pump	Xincheng technology co., LTD., chengdu,China.		Used for water tank and swimming behavior.
Ethovition3.0 behavioral software.	Nuldus,Netherlands		Measurement analysis of rat behavior videos.