Summary
여기, 선물이 수정 사용 하 여 중앙 피로의 쥐 모델을 소개 하는 프로토콜 여러 플랫폼 메서드 (MMPM).
Abstract
이 문서에서는, 우리는 수정 사용 하 여 중앙 피로의 쥐 모델을 도입 여러 플랫폼 메서드 (MMPM). 여러 플랫폼 상자는 물 탱크 바닥에 좁은 플랫폼으로 설계 되었습니다. 모델 쥐 탱크에 투입 되었고 빈 제어 그룹 대비 설정 연속 된 21 일 동안 하루 14 h (18시-8:00)에 대 한 플랫폼에 서 서. 모델링의 끝에, 모델 그룹에서 쥐 명백한 피로 모습을 보여주었다. 모델을 평가 하기 위해 여러 가지 행동 테스트를 수행 했습니다, 오픈 필드를 포함 하 여 테스트 (자주)는 높은 플러스 미로 (EPM) 테스트, 그리고 철저 한 수영 (ES) 테스트. 결과 그 불안, 공간 인식 장애, 불 쌍 한 근육 성능과 거부 자발적인 활동 모델 쥐에 중앙 피로의 진단을 확인 보여주었다. 중앙 신경 전달 물질의 변화는 또한 결과 확인합니다. 결론적으로, 모델은 성공적으로 중앙 피로, 시뮬레이션 및 모델 미래 연구는 질병의 병 적인 메커니즘을 공개 도움이 될 수 있습니다.
Introduction
피로1인간의 건강 위협 하는 주요 요인 중 하나 이다. 지난 수십 년간에서 다양 한 연구는 피로 주변 실행 하지만 중앙 기반, 그리고 항상 감정과 인지 장애와 함께 입증 해야 합니다. 이탈리아 생리학자 A. Mosso 먼저 단어 중앙 피로2제안. 그것은 제한 된 자발적인 활동 및 중앙 신경 조직 (CNS)3의 충 동 장애 때문 인지 장애로 일반적으로 정의 된다. 주변 근육 피로와 비교해, 중앙 피로 CNS, 필연적인 감정/행동 장애, 우울증, 불안, 인지 장애, 그리고 기억 상실을 포함 하 여에 있는 변화를 강조 합니다. 한 연구는 많은 요인은 과도 한 신체 활동 및 정신적인 스트레스는 매우 필수적인4중앙 피로 일으킬 수 보여줍니다. 병 인에 관해서는 트립토판 kynurenine 통로 가설5 같은 이론 설명; 특정 경로에 변화 그러나, 더 깊이 있는 연구는 여전히 중앙 피로의 중앙 주변 상관 관계를 공개 해야 합니다.
중앙 피로의 기본 메커니즘은 아직 불분명로 효과적인 동물 모델 추가 연구에 대 한 확실히 중요 하다. 기존 피로 모델은 주로 러닝6 과 체중 로드 수영7, 정신적 요인에 작은 우려와 같은 과도 한 운동에 의해 유발 됩니다. 더 나은 중앙 피로의 개발 시뮬레이션, 우리의 그룹은 MMPM 쥐 모델 개발. 모델링 하는 동안 쥐의 수 면 시간 부분을 포함 하 여 긴 시간에 대 한 다중 플랫폼 상자에서 좁은 플랫폼에 서 서 남아 있습니다. 과도 한 운동 모델에서 다른 MMPM 모델 중앙 피로의 복잡 한 병 인을 고려 하 여 정신적인 요인으로 부분 수 면 부족을 사용합니다.
모델 평가 대 한 우리는 불안 분위기와 자발적인 활동을 결정 하는 자주 및 EPM 테스트를 사용 합니다. ES 시험 주변 근육 성능을 측정 하기 위해 수행 됩니다. 또한, 우리 쥐의 뇌를가지고 고 도파민 (DA) 감지 / 중앙 신경 전달 물질의 차이 관찰 하 두 hypothalamuses에서 세로토닌 (5-HT) 콘텐츠.
프로토콜 아래는 모델 중앙 피로 반복된 신체 활동 및 수 면, 인간의 인생에서 일반적인 상태를 흉내 낸의 부족에 의해 유도 된 설계 되었습니다. 그러나, 모델 기간을 조정 하 여 그것은 사용할 수 있습니다 다른 많은 분야에서 처럼 수 면 관측 및 스트레스 연구에서. 미래에 연구, 우리이 모델 더 CNS 변화와 중앙 피로의 pathogenesis 메커니즘을 주변 시스템과 그들의 연결을 발견 도움이 될 것입니다 바랍니다.
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Protocol
모든 동물 지침에 따라 중국 입법에 윤리적인 사용 및 실험실 동물 들에 의해 유지 되었다.
1. 사전 모델링 준비
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실험실 준비
- 실험 전에 적어도 30 분 동안 UV 램프를 실행 합니다.
- 실험실 온도 25 ± 3 ° C, 상대 습도 30%의 주위에 통제 한다.
- 6:00 빛 연구소에 돌아서 18:00 12 h/12 h 명암 주기 설정 하에 그것을 해제.
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여러 플랫폼 상자 건설
- 110 × 60 × 40 cm3의 표지 없이 불투명 한 플라스틱 탱크를 생성 합니다.
- 15 원형 플랫폼 수정 (h = 8 m, d = 6.5 c m)는 탱크의 바닥에 어떤 질서에 세 개의 행과 다섯 개의 열 배포. 열과 행 13 cm 10 cm이 약 각 플랫폼 사이 두고 충분 한 공간.
- 탱크의 측면 쪽에 물 출구를 설정 하 고 수도 꼭지를 설치.
- 그것에 걸려 음식 상자와 탱크에 대 한 철 철사 그물 세공 커버를 확인 합니다.
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그룹화 및 주택 쥐
참고: 8 주 정도, 무게 약 200-210 g의 Wistar 남성 쥐 실험에 사용 됩니다. 쥐는 모델링 과정 그룹에 살고 있습니다.- 마커 펜으로 쥐의 꼬리 뿌리를 번호.
- 쥐 무게, 매우 가벼운 또는 무거운 것 들을 제외 하 고 모델 및 제어 그룹으로 나머지를 임의로 분할.
- 부드럽게 깨끗 한 연습장에 쥐를 넣어 하 고 적어도 3 일 동안 연구실에 적응 하도록 허용. 충분 한 물과 식량 공급을 제공 합니다.
2입니다. 모델링 MMPM
참고: 과정 18시 시작 하 고 8 시 다음 날, 21 일 이상, 하루 14 h의 총에 끝납니다. 방해 요소를 방지 하려면 동일한 사람이 동일한 실험실 외 투를 입고 있는 동안 전체 실험을 수행 하는 데 필요한입니다. 10 Wistar 쥐 실험에 사용 됩니다.
- 평평한 표면, 예를 들면, 바닥에 탱크를 배치 합니다. 다음 따뜻한 (25 ± 3 ° C) 물, 플랫 플랫폼 아래 약 1 ㎝의 약 7 cm로 탱크를 채우십시오.
- 1 일에 대 한 탱크에 있는 모든 쥐에 대 한 충분 한 음식과 음료를 준비 합니다. 사료와 물을 음식 상자에 넣고 덮개에 걸어.
참고: 일부 스마트 쥐 음식 상자에 배워야 했다. 만약 그렇다면, 탱크에 다시 그들을 드라이브. - 감 금 소에서 모델 그룹 쥐를가지고, 그들을 잡아, 꼬리 그리고 탱크에 부드럽게 넣어. 그들의 공포 물의 동기를 플랫폼 대신 물에 모든 쥐를 시작 합니다. 모든 쥐 쥐 제어 그룹의 충분 한 음식과 물을 함께 원래 그들의 감 금 소에 체류 하는 동안에, 서 서 플랫폼을 얻을 다는 것을 확인 하십시오.
- 탱크 커버. 실수로 부상을 피하기 위해 쥐를 모니터링 합니다. 쥐 플랫폼에 등반 하지 않고 1 시간 이상 물에 유지, 탱크에서 그것을 선택 하 고 테스트에서 그것을 제거.
- 14 h, 후 모델 쥐 탱크 중 고 건조 기를 가진 그들의 머리를 건조. 그것은 퇴색 하는 경우 쥐의 꼬리를 다시 표시 합니다. 그들의 원래 감 금 소에는 쥐를 반환 하 고 충분 한 음식과 물을 함께 그들을 제공.
- 탱크의 구석구석을 플러시. 탱크의 한쪽을 상승 하 고는 하 수를 유출 하는 수도 꼭지를 엽니다.
- 75% 에탄올 스프레이 탱크를 소독 하 고 UV 빛에 노출.
3. 모델: 행동 테스트
참고: 모든 테스트 행동 실험실에서 수행 됩니다. 잡음과 여분의 빛 허용 되지 않습니다 테스트 하는 동안 방해를 피하기 위해. 가능 하면 같은 사람을 사용 하 여 각 테스트를 실시. 어두운 코트와 장갑은 그레이 스케일 이미지 처리에 인식 필요 합니다. 자주 수행 먼저 쥐 행동에 최소 영향.
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자주
- 워크스테이션에 올바르게 연결 되어 있고 상자의 모든 코너 커버 확인을 열기 필드 상자에 레코더를 확인 합니다. 상자에서 그림자를 제거 하기 위해 조명을 조정 합니다.
- 그들의 원래 장에 행동 실험실에 쥐를 이동 합니다. 그들이 테스트를 하기 전에 적어도 1 시간에 대 한 적응 수 있습니다.
- 깨끗 하 고 아무 배설물 또는 냄새 이전 실험에서 왼쪽을 75% 에탄올과 상자를 청소.
- 그 뒤로 여 케이지에서 쥐를 제거 하 고 부드럽게 상자의 중앙 영역에 그것을 넣어. 신속 하 게 차단 주사를 하지 상자에서 무기를 후퇴.
- 쥐의 숫자를 입력 하 고 녹음을 시작 합니다. 계산 하 고 양육 하 고 등반을 포함 하 여 쥐의 수직 활동의 주파수를 기록 합니다.
- 5 분 후 녹음을 중지 하 고 상자에 쥐를 데리고 감 금 소에 그것을 반환 합니다.
- 단계 3.1.3-3.1.6 모든 쥐 테스트 완료 될 때까지 반복 합니다.
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EPM
- 자주 (단계 3.1.1 ~ 3.1.2)를 사전 확인 하 고 새 환경 순응 단계를 수행 합니다.
- 그것의 뒤에 의해 감 금에서 쥐를 제거 하 고 부드럽게 두 팔의 접합 부분에 그것을 넣어. 왼쪽된 오픈 팔 쪽으로 쥐 고 신속 하 게 두고 총을 차단할 수 없습니다.
- 쥐의 숫자를 입력 하 고 녹음을 시작 합니다. 계산 하 고 다른 팔 입구의 주파수를 기록 합니다. 쥐 테스트에 미로에서 떨어지면, 그것을 데리 고 미로 다시 보낼. 데이터 분석에 대 한 자세한 정보를 기록 합니다.
- 5 분 후 녹음을 중지 하 고, 쥐를가지고 한 감 금 소를 반환 합니다.
- 배설물을 제거 하 고 75% 에탄올 전 쥐의 냄새를 제거 하는 미로 닦아냅니다.
- 단계 3.2.2-3.2.5 모든 쥐 테스트 완료 될 때까지 반복 합니다.
-
ES 시험
- 80 cm (25 ± 3 ° C) 따뜻한 물로 수영 탱크 (70 × 30 × 110 c m3)를 채우십시오.
참고: 경우 탱크에는 온도, 물 온도 설정 되어야 합니다 약 37 ° C, 쥐의 체온에 비슷합니다. 그렇지 않으면, 그것을 일정 하 게 유지 하는 실내 온도에 그것을 설정 합니다. - 핀 각 쥐 움 큼에 대 한 부하를 만들고 그것의 꼬리에 그것을 부드럽게 넥타이. 부하 쥐의 체중의 10% 무게.
- 꼬리는 쥐를 잡아 고 수영 탱크에 그것을 던져. 쥐 모이 또는 벽에 집착 하는 경우 떨어져 그들을 설정 하 고 다시 물으로 그들을 드라이브.
- 타이밍을 시작 쥐 중지 타이밍 모두 소진 되 면 물에 넣으면 순간에는 입과 코 이상 10 물 아래와 물 투쟁 실패로 설명 된다 s.
참고: 때때로, 피로 익사 발생 갑자기. 기록 하 고 동시에 동물을 저장할 충분 한 경험을가지고 해야 합니다. - 다른 사람을 방해 하지 않고 물 소진된 쥐를 제거 합니다. 그들의 머리를 건조 하 고 다시 그들의 숫자를 표시 한 케이지로 다시 보내.
- 한 그룹 완료 후 탱크에 물의 변경 합니다. 모든 쥐, 완료 후 수영 탱크, 빈 하 고 깨끗 하 고 에탄올 및 자외선 소독.
- 80 cm (25 ± 3 ° C) 따뜻한 물로 수영 탱크 (70 × 30 × 110 c m3)를 채우십시오.
4. 모델 평가: 중앙 신경 전달 물질 검출
- 그것은 의식이 될 때까지 10 %chloral 하이드 레이트 (3 mL/kg)의 복 막 내 주입으로 쥐를 anesthetize.
- 쥐 목을 벨.
- -중간 라인을 따라 절 개를 경도, 양쪽 모두에 두개골을 열고 고 뇌를 노출 시킵니다. 두개골을 넘겨, 두뇌, 제거 하 고 얼음 가방에 두뇌를 넣어.
- 하 고 주변 조직으로 명확한 경계는 두뇌의 중앙 부분에 다이아몬드 모양 지역 이다 시상 하 부를 제거 합니다. 무 균 튜브에 그것을 배치 하 고 액체 질소 동결. -80 ° C 냉장고에서 모든 샘플을 저장 합니다.
- 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)8를 사용 하 여 시상 하 부에 다와 5-HT의 콘텐츠를 검색.
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Representative Results
우리는 MMPM를 사용 하 여 중앙 피로의 쥐 모델을 설명 합니다. 24 Wistar 쥐 임의로 제어 그룹 및 각 그룹에 12 쥐 모델 그룹으로 나누어집니다. 모델 장치는 물 탱크 하단 (그림 1)에 좁은 플랫폼으로 설계 되었습니다. 모델 쥐 21 일 (그림 2)에 대 한 부분적인 수 면 시간을 포함 하 여 하루 14 h에 대 한 플랫폼에 서 서.
행동 테스트 쥐에 감정적이 고 심리적인 변화를 평가 하기 위해 모델링 후 수행 됩니다. 자주 결과 (그림 3), 컨트롤 그룹에 비해 보여줍니다 (n = 10), 기르는 운동 및 자발적인 활동의 평균 속도에 상당한 감소 (p < 0.05, p < 0.01) 모델 쥐에서 (n = 10), 및 밖의 대기 시간에 있는 명백한 증가 반지 입구 (p < 0.01). EPM 테스트 (그림 4) 모델링의 21 일 오픈 팔 항목 및 기간 제어 그룹에 비해 크게 오픈 팔의 두 주파수 감소 보여줍니다 (n = 10) (p < 0.05, p < 0.01) 둘 다에서 증가 하는 동안, 가까운 팔 항목 및 기간에 가까운 팔의 주파수 (p < 0.05). ES 시험 (그림 5)의 결과 모델 그룹의 수영 기간을 보여줍니다 (n = 10) 컨트롤 그룹 보다 훨씬 짧습니다 (n = 10) (p < 0.001).
다음으로, 우리 감지 다 5-HT 콘텐츠 중앙 신경 전달 물질의 차이 관찰 하 두 hypothalamuses에. 시상 하 부와 5-ht 다의 비율에 다 모델 그룹에서 크게 감소 (그림 6) 쇼 결과 (n = 10) 컨트롤 그룹에 비해 (n = 10) (p < 0.05, p < 0.01) 5-HT 콘텐츠 증가 하는 반면, 크게 (p < 0.05).
그림 1: 다중 플랫폼 상자의 도식. (A) 앞 볼. (B) 최고 볼 수 있습니다. 여러 플랫폼 상자는 바닥과 측면 사이드에 수도 꼭지에 고정 15 아크릴 플랫폼 coverless 플라스틱 탱크 (110 × 60 × 40 cm3). 각 플랫폼의 기둥과 원형 평면 구성 (d = 6.5 c m) 기둥 가기 보다는 더 큰 플랫폼. 플랫폼 (h = 8 cm)에 3 개의 행과 다섯 개의 열 배포. 인접 한 플랫폼은 10 cm에서 열과 행에 13 cm 떨어져 있습니다. 탱크 15 쥐의 최대를 저장할 수 있습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2: 모델링의 사진. 플랫폼에서 쥐 서 모델링의 15 날에 했다. 그것의 건조 머리카락과 희미 한 눈 분명 한 피로 상태를 좋습니다.
그림 3: 분석의 자주. (A) 수직 활동의 주파수의 비교. ± SEM을 의미 하는 대로 데이터 표시 됩니다 (n = 10). 부동 한 차이와 (F 9.877, p = 0.006 = < 0.05), 의미는 독립 표본 t-검정에 의해 결정 되었다 t 2.226, p = 0.049 = < 0.05. (양육) 수직 활동의 주파수 모델 쥐에서 감소 (n = 10) 제어 쥐와 비교 (n = 10). 자발적인 활동의 평균 속도에 (B) 비교. 데이터 평균 ± IQR로 제공 됩니다 (n = 10). 의미는 맨-휘트니 U에 의해 결정 되었다 테스트, z =-2.685, p = 0.007 < 0.01. 모델 쥐에서 자발적 활동의 평균 속도 제어 쥐에 비해 감소합니다. (C) 비교 밖의 대기 시간에 반지 입구. ± SEM을 의미 하는 대로 데이터 표시 됩니다 (n = 10). 부동 한 차이와 (F = 5.748, p = 0.028 < 0.05), 의미 t-검정에 의해 결정 되었다 t =-3.724, p = 0.03 < 0.01. 밖의 대기 시간 반지 입구 증가 모델 쥐, 즉 제어 쥐에 비해 밖으로 반지를 입력 하기 전에 더 많은 시간. 참고: p< 0.05 (*); < p0.01 (*); p < 0.001 (*).
그림 4: EPM 테스트의 분석 (A) 오픈 팔 항목의 주파수에 비교. ± SEM을 의미 하는 대로 데이터 표시 됩니다 (n = 10). 동등한 차이와 (F 0.982, p = 0.348 = > 0.05), 의미는 t-검정에 의해 결정 되었다 t 2.710, p = 0.014 = < 0.05. 모델 쥐에서 오픈 팔 항목의 주파수 (n = 10) 감소 제어 쥐와 비교 (n = 10). 오픈 팔에서 시간에 (B) 비교. ± SEM을 의미 하는 대로 데이터 표시 됩니다 (n = 10). 동등한 차이와 (F 0.100, p = 0.755 = > 0.05), 의미는 t-검정에 의해 결정 되었다 t = 3.304, p = 0.004 < 0.01. 모델 쥐 감소의 오픈 팔 기간 모델 쥐 오픈 팔에 적은 시간을 보낼 컨트롤 쥐와 비교. (C) 가까운 팔 항목의 주파수에 비교. ± SEM을 의미 하는 대로 데이터 표시 됩니다 (n = 10). 동등한 차이와 (F 0.141, p = 0.712 = > 0.05), 의미는 t-검정에 의해 결정 되었다 t =-2.466, p = 0.024 < 0.05. 모델에 가까운 팔 항목의 주파수 제어 쥐에 비해 증가 쥐. (D)에 가까운 기간에 비교. ± SEM을 의미 하는 대로 데이터 표시 됩니다 (n = 10). 부동 한 차이와 (F = 4.796, p = 0.042 < 0.05), 의미는 t-검정에 의해 결정 되었다 t =-2.736, p = 0.0016 < 0.05. 모델 쥐 증가에 가까운 팔 기간 모델 쥐 가까운 팔에 더 많은 시간을 보낼 컨트롤 쥐와 비교. 참고: p < 0.05 (*); < p0.01 (*); p < 0.001 (*). 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 5: 완전 한 수영 테스트의 분석 데이터 평균 ± IQR로 제공 됩니다 (n = 10), p 로 보고 < 0.05 (*) p < 0.01 (*) p < 0.001 (*). 의미는 맨-휘트니 U에 의해 결정 되었다 테스트, z =-3.326, p = 0.001. 모델 쥐의 수영 시간 (n = 10) 제어 쥐 보다 훨씬 짧습니다 (n = 10).
그림 6: 중앙 신경 전달 물질 콘텐츠 분석. 다 내용에 (A) 비교. ± SEM을 의미 하는 대로 데이터 표시 됩니다 (n = 10). 동등한 차이와 (F = 0.088 p 0.771 = > 0.05), 의미 t-검정에 의해 결정 되었다 t = 3.717, p = 0.002 < 0.01. 두 hypothalamuses 다 콘텐츠 모델 쥐에서 감소 (n = 10), 제어 쥐와 비교 (n = 10). (B) 비교 5-HT 내용에. ± SEM을 의미 하는 대로 데이터 표시 됩니다 (n = 10). 부동 한 차이와 (F = 5.282, p = 0.034 < 0.05), 의미는 t-검정에 의해 결정 되었다 t =-2.997, p = 0.012 < 0.05. 모두 hypothalamuses에 5-HT 콘텐츠 컨트롤 쥐와 비교 모델 쥐에서 감소. (C) 비율 비교입니다. 데이터 평균 ± IQR로 제공 됩니다 (n = 10). 의미는 맨-휘트니 U에 의해 결정 되었다 테스트, z =-3.175, p = 0.001. 5-ht 다의 비율 통제 쥐와 비교 모델 쥐에 크게 감소 합니다. 참고: p < 0.05 (*); < p0.01 (*); p < 0.001 (*).
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Discussion
MMPM 원래 수 면 박탈9에 대 한 설계 되었습니다. 쥐 플랫폼 바닥에 고정 물 탱크에 착수 한다. 물의 본능적 인 두려움에 의해 구동, 쥐 플랫폼에 서 서 유지 하 고 아니 수 면 발생 합니다. 연구는 수 면 부족의 다른 시간 쥐 행동 및 인식 장애10, 부정적인 감정을11및 중앙 피로 포함 하 여, 분위기에 다양 한 변화를 이끌어 보여줍니다. 일부 연구 자들은 단일 플랫폼 메서드 (SPM) 만성 수 면 부족은 중앙 피로 일으킬 수 있다, 인식 및 사회 장애12증명. 다른 연구는 감정 장애 및 엔 돌핀13로 대우 될 수 있다 중앙 피로, 연속적인 일에 간헐적인 부족 발생할 수 있습니다 보여줍니다. 비해 5 일 및 14 일, 21 일 중앙 피로 유도 하는 부족을 증명 하는 우리의 이전 연구 보다는 압박 하 관련 된 정서 장애14. 많은 요인 MMPM의 중앙 피로 서, 좁은 쉼터 공간, 지루하고 반복 된 환경, 뿐만 아니라 수 면 부족의 긴 시간을 포함 하 여 발생할 수 있습니다. 수 면 부족과 중앙 피로 기본 상관관계 hypothalamic-뇌 하 수 체-부 신 (HPA) 축 가운데 어느 monoamine 신경 전달 물질 변화 핵심 역할을 할 수 다른 수준에 연결할 수 있습니다.
이 프로토콜에서 우리 MMPM를 사용 하 여 중앙 피로 모델을 개발 하 고 행동 테스트 및 신경 전달 물질 검출 평가. 첫째, 우리는 누구의 평균 수 면 시간은 12.6 h, 약 2.4-밤, 낮158.2 9.6 h에 h 4.2 Wistar 쥐의 자연적인 circadian 리듬 모방을 실험실에서 12 h/12 h 명암 주기 (6시-18:00)를 만듭니다. 다음 모델 쥐에 보관 됩니다 14 h (18시-8:00)에 서 서 여러 플랫폼 상자 21 일 연속 하루 대비 설정 제어 그룹으로. 실험의 끝에, 모델 그룹에서 쥐 감 금 소의 둔 한 머리, 희미 한 꼬리 색, 희미 한 눈, 그리고 활동을 감소를 포함 하 여 명백한 피로 모습, 보여.
행동 테스트의 결과 신체적, 정서적 측면에서 변화를 보여 줍니다. 자주 탐사 동작 및 자발적인 활동16평가 하는 설치류 모델 평가에 널리 사용 됩니다. 설치류는 thigmotaxis의 본능, 즉, 그들은 오픈 필드에 배치 됩니다, 일단 그들은 이동 하는 경향이 빠르게 벽 근처 밖으로 반지로. 동시에 그들은 새로운 환경에 대해 궁금해 하 고 양육 하는 수직 및 수평 움직임에 의해 중앙 지역을 탐험 하는 열망. 두 가지 동기의 충돌17불안 분위기 반영합니다. 자주의 결과 그들의 감소 평균 속도에 따라 모델 쥐에서 거부 자발적인 활동을 제안 합니다. 또한, 감소 불안 감정을 암시 수 있습니다 제어 쥐에 비해 크게 모델 쥐에서 양육의 주파수. 또한, 밖으로 들어가기 전에 더 많은 시간을 할애 하는 경향이 쥐 모델 탐사, 공간 인식 장애 모델 쥐에서 제안에 아무 명백한 특혜와 반지. EPM 테스트 불안을 평가 하기 위해 클래식 테스트가입니다. 불안으로 쥐 오픈 팔18탐험 대신 안전을 위해 가까운 팔에 머물 경향이 있다. 컨트롤 쥐와 비교 하는 결과 쇼 모델 쥐 더 많은 시간 가까운 무기와 더 적은 시간에 두 팔을 벌려 고이 다른 무기의 입구 주파수 평행 전반적인 모델 쥐에서 불안 분위기를 확인 합니다. ES 시험 모델 쥐의 수영 기간에서는 컨트롤 쥐, 피로 의해 발생 하는 불 쌍 한 근육 성능 제안 보다 훨씬 짧은입니다. 결론적으로, 불안, 인지 장애, 불 쌍 한 근육 성능, 그리고 제한 된 자발적인 활동 모델 쥐, 모든 나타내는 중앙 피로에 나타납니다.
CNS에 관해서는 중앙 신경 전달 물질에 모든 변경 내용을 중앙 피로 제안. 우리 시상 하 부의 5-HT에 다 내용에 상당한 감소와 증가 찾으십시오. 5-HT monoamine 신경 전달 물질 (TRP) 아미노산 트립토판에서 합성 이다. 강렬한 활동 더 많은 무료 TRP; 혈액으로 방출 하 여 5-HT 세대 증가 누적된 5-HT, 가난한 근육 porformance19선도 코 모터 시스템의 중앙 통제를 멈출. 다는 고르기가 신경 전달 물질로 코 모터 활동의 시작에 증가 하 고 피로20의 외관에 의해 상품입니다. 다 고 5-HT 상관 작용 흥분 억제 시스템으로 그 효과 코 모터 시스템21의 중앙 제어. 따라서, 5-ht 다의 비율에서 드롭 중앙 피로의 중요 한 지표 이다.
성공에 중요 한 프로토콜의 몇 가지 노트가 있습니다. 첫째, 모델 기간 및 조건 남성 Wistar 쥐로 테스트 됩니다. 온도 설정 및 수 면 기간 긴장 및 남녀14사이 다. 둘째, 쥐에, 최대 6 쥐 그룹에 살아야 하 고 충분 한 음식 및 물 실험을 통해 제공. 모델링의 첫 2 주 동안 쥐 매우 초조 하 고 탱크와 감 금 소에 싸울 수 있습니다. 그들을 감시 유지 하 고 죽음에서 부상된 쥐를 방지 합니다. 또한, 특히 겨울을 피하기 위해 차가운 조건에에서, 탱크에서 제거한 후 쥐 머리를 말리는 것을 기억 하십시오.
모델은 중앙 피로 설계 되었습니다, 그것은 그것의 사용을 확대 하려면 복잡 한 요소를 추가할 수입니다. 예를 들어 우리 설치 진동 모터와 스프링 바다에서 파도 모방 하 여 탐색 피로 모델을 확립 하려고 부족 패턴을 변경할 플랫폼을 한다. 모델 기간을 조정 하 여 다른 많은 분야에서 사용할 수 있습니다. 동물 모델 연구, 연구의 한계는 있다. 첫째, 모델의 예측 타당성 있는 증거가 있다. 미래 연구에서 쥐에 항 피로 치료를 수행 하 고 모델의 타당성을 증명 하기 위해 그들의 회복을 평가 해야 합니다. 게다가, 모델의 현재 평가에 초점을 맞추고 더 부정적인 감정과 CNS 변경; 그러나, 중앙 피로 또한 학습 난이도 사회적 회피12로 명시 한다. 와 행동 테스트 모리스 물 미로 같은 질병의 보다 포괄적인 이해를 얻기 위해 미래에 사회적 상호 작용 테스트를 수행할 수 있습니다. 여기 소개 하는 중앙 피로 모델 중앙 피로의 병 적인 메커니즘을 탐구 하는 데 도움이 수 있습니다 바랍니다.
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Disclosures
저자는 공개 없다.
Acknowledgments
이 작품은 베이징의 자연 과학 재단 (No.7162124), 그리고 중국 의학의 베이징 대학에 대 한 티베트 ao 재단에 의해 지원 되었다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| multiple platform sleep deprivation water tank | Customization,it is provided by the neuroimmunological laboratory of Beijing University of Chinese Medicine | 110cm x 60cm x 40cm. There are 15 plastic small platforms at the bottom. The small platform is 6.5cm in diameter and 8cm high | |
| Wistar rats | Beijing Weitong Lihua Experimental Animal Technology Company | license number SYXK (Beijing) 2016-0011 | Use 32 Wistar healthy male rats ,8 week old (200-210 g) |
| Agilent 1100LC high performance liquid chromatograph | Agilent | G1379A, G1311A, G1313A , G1316A | G1379A, G1311A type chromatographic pump, G1313A automatic sampler, G1316A column temperature box |
| DECADE II SDC electrochemical detector | Dutch ANTEC company | glassy carbon electrode, Ag/AgCl reference electrode, workstations (Clarity CHS) | |
| Biofuge Stratos high-speed refrigeration centrifuge | HERAEUS | ||
| VCX130 ultrasonic fracturing instrument | SONICS | ||
| ACS-ZEAS electronic scale | Phos technology development, Beijing. | The weight of the weighing rats can be accurate to 0.1g. | |
| Open Field Box | Customization,it is provided by the neuroimmunological laboratory of Beijing University of Chinese Medicine | wooden box of open field 100 cm by 100 cm x 40 cm, inside wall and bottom as the gray.The bottom is divided into 25 equal area squares, each of which is 20cm x 20cm, and the 16 grids along the outer wall are the external ones, and the other 9 grids are central.The camera is mounted above the median. | |
| Elevated Plus-maze | Beijing zhongshi dechuang technology development co. LTD. | The open arms and close arms of the cross are composed of 30cm x 5cm x 15cm, and the central area is 5cm x 5cm, with a camera mounted above the center and 45cm high. | |
| rat swimming bucket. | Zhenhua biological instrument equipment co., LTD. Anhui,China. | The volume of plastic drum is 70cm x 30cm x 110cm, which is used for swimming in rats. | |
| Thermometer | Shiya instrument co., LTD., changzhou,China. | Control water temperature | |
| Small water pump | Xincheng technology co., LTD., chengdu,China. | Used for water tank and swimming behavior. | |
| Ethovition3.0 behavioral software. | Nuldus,Netherlands | Measurement analysis of rat behavior videos. |
References
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