Summary
Ostruzioni intestinali sono un blocco parziale o totale dell'intestino che può causare dolore addominale, nausea, vomito e impedendo il passaggio delle feci. Questa procedura per la creazione di intestinale parziale ha pilastri in topi è affidabile a studiare i meccanismi alla base di crescita delle cellule patologiche e morte nell'intestino.
Abstract
Ostruzioni intestinali, che ostacolare o bloccano il movimento peristaltico, possono essere causati da aderenze addominali e più gastrointestinale (GI) malattie tra cui escrescenze tumorali. Tuttavia, il cellulare che ritocca meccanismi coinvolti nella, e causato da, ostruzioni intestinali sono capiti male. Sono stati sviluppati diversi modelli animali di ostruzioni intestinali, ma il modello del mouse è più costo/tempo efficace. Il modello del mouse utilizza l'impianto chirurgico di un'ostruzione intestinale parziale (PO) che ha un alto tasso di mortalità se non viene eseguita correttamente. Inoltre, topi che riceve la chirurgia PO non riescono a sviluppare ipertrofia se un adeguato blocco non viene utilizzato o non correttamente inserito. Qui, descriviamo un protocollo dettagliato per la chirurgia di PO che produce ostruzioni intestinali affidabili e riproducibili con un tasso di mortalità molto bassa. Questo protocollo utilizza un anello di silicone chirurgicamente posizionati che circonda l'ileo che blocca parzialmente movimento digestivo nell'intestino tenue. Il blocco parziale rende l'intestino diventa dilatato a causa l'arresto del movimento digestivo. La dilatazione dell'intestino induce l'ipertrofia del muscolo liscio sul lato orale dell'anello che progressivamente si sviluppa più di 2 settimane fino a quando non causa la morte. Il modello di mouse PO chirurgico offre un modello in vivo di ipertrofico tessuto intestinale utile per lo studio delle mutazioni patologiche delle cellule intestinali, compreso le cellule muscolari lisce (SMC), cellule interstiziali di Cajal (ICC), PDGFRα+e di un neurone cellule durante lo sviluppo dell'ostruzione intestinale.
Introduction
Ostruzioni intestinali sono un blocco parziale o totale nell'intestino piccolo o grande che impedisce il movimento attraverso l' intestino1di cibo digerito, fluidi e gas. Dovuto l'ostruzione, il blocco induce le pareti intestinali per diventare ispessito, restringimento del lume2. Ostruzione intestinale può verificarsi a seguito di interventi chirurgici addominali o pelvici che causano la formazione di tessuto di aderenze addominali o da disturbi GI quali diverticolite, volvolo, Ernie, malattie infiammatorie croniche intestinali (morbo di Crohn), stenosi, invaginazione intestinale, stipsi, fecaloma, pseudo-ostruzione, cancri e tumori3,4,5. Ostruzioni intestinali in questi casi spesso portano all'ipertrofia della tunica fibre del intestino6.
PO del lume induce distensione intestinale e aumenta di spessore dello strato di muscolo liscio intorno l'ostruzione in risposta alla necessità di continuare la peristalsi funzionale7,8,9,10, 11,12,13. Modelli animali di PO intestinale sono stati sviluppati per studiare l'ipertrofia del muscolo liscio in topi7, ratti10, cavie11, cani12e gatti13 che costantemente sviluppare ipertrofia simile entro il strati di muscolatura intestinale.
Un modello murino di PO intestinale è il modo più efficace per generare e studiare ostruzioni intestinali in vivo. Ostruzioni del piccolo intestino sono effettuati nei topi utilizzando un anello di silicone inserito chirurgicamente che circondano l'ileo. I topi di PO hanno mostrato un aumento iniziale del numero di cellule (iperplasia) e un aumento in spessore di strato del muscolo (ipertrofia) dopo PO chirurgia8,15. SMC sono le cellule primarie di plastica che stanno crescendo all'interno strati di muscolo liscio in risposta alle condizioni ipertrofica14, ma altre cellule come ICC e le cellule PDGFRα+ che sono strettamente associati con SMC, inoltre vengono ripopolati. Precedentemente abbiamo riferito che i topi PO sviluppano ipertrofia nel piccolo intestino, in cui SMC sono dedifferenziate nelle cellule PDGFRα+ che sono altamente proliferative7,15,16. Al contrario, ICC sono degenerati e perso all'interno degli strati di muscolo liscio ipertrofico durante lo sviluppo di obsruction intestinale7. Un altro vantaggio importante del modello PO è la sua capacità di indurre i cambiamenti nel sistema nervoso enterico e propagare neurogene schemi motori. La propagazione principali modello neurogeno motore nelle piccole viscere del mouse è il complesso motore migrazione (MMC), che è neurogena e non necessita di ICC o elettrico onde lente17. Il modello PO può fornire chiare intuizioni come MMCs e nervi enterici sono stato rimodernati da ostruzione parziale.
Qui, vi proponiamo un protocollo murino per chirurgia intestinale PO utilizzando un anello di silicone. Topi che riceve la chirurgia PO attendibilmente producono ipertrofia in tunica fibre di piccolo intestino. All'interno del muscolo ipertrofico, SMC, ICC, PDGFRα+e cellule neuronali sono notevolmente ristrutturate.
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Protocol
Il seguente protocollo è stato approvato dal istituzionale Animal Care e utilizzare Committee (IACUC) presso l'Università del Nevada-Reno (UNR) animale risorse ed è conforme a tutti gli orientamenti etici istituzionali per quanto riguarda l'uso di animali di ricerca.
1. gli animali.
- Ottenere topi C57BL/6 maturo (4-6 settimane) peso compreso tra 20-30 g. House la colonia di topi di laboratorio in una struttura centralizzata animale alle risorse animali UNR.
2. parziale ostruzione chirurgia
Nota: Interventi sono eseguiti in una sala dedicata alle procedure chirurgiche. Tutti gli strumenti chirurgici sono sterilizzati in autoclave prima dell'intervento. Guanti e camici chirurgici sterili devono essere indossati per tutto il personale nella sala chirurgica in ogni momento.
- Preparazione per il mouse chirurgico
- Controllare il sistema di consegna anestetico per garantire l'approvvigionamento di ossigeno e isoflurano è adeguata per la procedura. Attivare la fornitura di ossigeno. Accendere il misuratore di portata gas e regolare a 500-1000 mL/min posto l'animale nella camera di induzione e sigillare la parte superiore.
- Accendere il vaporizzatore di isoflurane al 5% e monitorare l'animale fino a quando diventa recumbent. Passare il sistema di consegna anestetico per il cono di naso.
- Lavare la camera di induzione di qualsiasi residuo di gas con l'ossigeno, quindi disattivare la linea di camera di induzione, mantenendo la linea del naso a cono aperto.
- Rimuovere l'animale dalla camera e con attenzione unguento oftalmico sugli occhi dell'animale.
- Inserire il cono di naso su un pad caldo preriscaldato quando gas continua a fluire.
- Modificare il flusso di ossigeno a 100-200 mL/min, con 2-3% isoflurane. Se l'animale comincia a muoversi, gentlyrestrain l'animale con il cono di naso su fino al completamente anestetizzato nuovamente.
- Monitorare la respirazione e la risposta alla stimolazione durante la procedura e regolare la percentuale di isoflurane (2-5%), se necessario. Livello animale amputate viene monitorato dalla mancanza di riflesso pizzico punta prima che l'ambulatorio è effettuato.
- Iniettare la medicina del dolore (buprenorfina, 1 µ g/g di peso corporeo) intraperitonealmente lontano dal sito di incisione.
- Applicare la lozione di rimozione dei capelli sull'addome con un batuffolo di cotone pulito. Lasciare il sit di lozione per 3-5 min sul mouse, quindi rimuovere i capelli utilizzando tamponi di garza e cotone. Ripetere questo passaggio fino a quando tutti i capelli sono stato rimosso dall'addome del mouse.
- Pulire la pelle con etanolo al 70% utilizzando tamponi di garza e cotone. Applicare la soluzione swabsticks o povidone-iodio per pulire l'addome.
- Chirurgia di ostruzione parziale
- Drappo il sito chirurgico utilizzando carta sterile 25 x 50 cm con un 2,5 x 2,5 cm apertura centrale per l'area di chirurgia. Fissare il telo all'animale inserendo strisce sterile ai confini dell'apertura e della pelle.
- Fare un'incisione addominale di ~3.0 cm longitudinalmente usando un bisturi a lama n ° 15, garantendo che solo la pelle è incisa ed evitando il taglio nello strato musculoperitoneal in questo momento.
- Utilizzo di pinze e forbici chirurgiche, separare con cura la pelle dallo strato musculoperitoneal senza causare qualsiasi incisione al livello musculoperitoneal. Dopo gli strati sono stati sufficientemente separati (circa 1 cm x 4 cm), identificare la linea alba sul layer musculoperitoneal e taglio ~ 2 cm lungo la linea alba per esporre la cavità intraperitoneale utilizzando micro-pinze e le forbici.
- Accuratamente di individuare e identificare l'intestino cieco. Lentamente e delicatamente rimuovere l'intestino cieco dalla cavità intraperitoneale con micro-forcipe, portando colon prossimale e dell'ileo con il cieco all'esterno sul telo sterile. Immediatamente inumidire il tessuto intestinale con garza imbevuta salina sterile 0,9% e mantenere il tessuto esposto inumidito in ogni momento, mentre si trovano all'esterno della cavità addominale.
- Individuare e identificare il mesentere tra l'ileo e del colon prossimale. Fare un'incisione (~ 1 cm) parallela e appena sotto, l'ileo, nel mesentery ed evitare di tagliare qualsiasi sistema vascolare.
- Prendere un anello di silicone in autoclave (6 mm di lunghezza, 4 mm di diametro esterno, diametro interno 3,5 mm). Tagliare longitudinalmente per aprire il tubo e l'anello con micro-forcipe.
- Inserire un'estremità dell'anello aperto attraverso l'incisione nel tessuto del mesentery. Restituire l'anello a forma di anello completato portando un'estremità in contatto con un altro, con l'ileo circondato dall'anello.
- Assicurarsi che l'anello di silicone circonda completamente l'ileo, chiudere l'anello con sutura e posizionare con cura gli intestini indietro nella cavità intraperitoneale.
- Chiusura di chirurgia
- Eseguire un semplice sutura continua sul livello musculoperitoneal lungo la linea alba per chiudere il musculoperitoneal della ferita con una sutura assorbibile. Dopo la sutura è completa, togliere qualsiasi sanguinamento con 0,9% soluzione salina sterile imbevuto di garza.
- Per chiudere completamente la ferita, con una sutura in nylon separata, è necessario eseguire una semplice sutura continua sulla pelle.
- Al termine di entrambe le suture, pulire la ferita con nuovo swabstick o povidone-iodio.
- Intraperitonealmente iniettare antibiotici (gentamicina, 150 μL per topo basato sul peso corporeo di 20-30 g).
- Dopo il completamento della procedura, spegnere il vaporizzatore di isoflurano e permettere all'animale di respirare solo fluire ossigeno fino a quando iniziare a guadagnare la coscienza.
- Una volta che l'animale è sveglio, metti l'animale in una zona di recupero separato con supporto termico fino a completamente recuperato.
3. post-operazione osservazione.
- Dopo il completamento della chirurgia, spostare gli animali in un'incubatrice in una stanza di recupero dove temperatura e umidità è regolamentate. Monitorare gli animali postoperatorio ogni 15 min per la prima ora poi ogni 30 minuti per la seconda ora, mentre gli animali sono in incubatrice.
- Appena l'osservazione prescritto è completo, spostare gli animali alla propria gabbia individuale e monitorarli tutti i giorni per indicazioni cliniche di dolore18e per garantire che la ferita chirurgica è la guarigione correttamente senza segni di complicazioni ( deiscenza) presenti.
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Representative Results
L'ostruzione parziale (PO) è stata chirurgicamente indotta nei topi un mesi di vita inserendo un anello di silicone intorno l'ileo vicino allo sfintere ileocecale. Questo anello creato un blocco parziale nell'ileo. Le operazioni di intervento Sham (modo) inoltre sono stati effettuati senza un anello sul età/sesso abbinato topi e questi topi non hanno mostrato sintomi simili a quelli trovati nei topi del PO. Topi, rapidamente recupero da un intervento chirurgico PO entro poche ore. Essi non ha mostrato evidenti cambiamenti comportamentali o debolezza entro la prima settimana, ma dopo la prima settimana, hanno progressivamente cominciato a mostrare segni di PO: un addome dilatato e la produzione di pellet di meno e più piccolo fecale. PO di topi sono stati sacrificati alla chirurgia di alberino-PO giorni 8 e 13 insieme a topi di controllo SO. L'intestino tenue era parzialmente riempito e dilatato alla chirurgia post-PO 8 giorni e completamente riempito e dilatato alla chirurgia post-PO di 13 giorni, rispetto a topi (Figura 1A) in modo da controllare. Formazione di pellet fecali nel colon dei topi giorni post-PO chirurgia 8 e 13 è stata ridotta rispetto ai topi di controllo SO (Figura 1B). Tessuto ileale che era appena a monte dell'anello è stato dissecato e muscolo liscio è stato analizzato con ematossilina ed eosina (H & E). Strato del muscolo liscio era ipertrofico alla chirurgia post-PO 8 giorni e molto più in là ipertrofico alla chirurgia di 13 giorni post-PO (Figura 2). Inoltre abbiamo osservato cambiamenti in SMC, ICC, PDGFRα+e cellule neuronali all'interno la tunica di fibre nei topi PO attraverso l'uso di immunochimica. Ogni cella è stato etichettato con marcatori specifici del tipo di cella: MYH11 (SMC), KIT (ICC), PDGFRA (cellule PDGFRα+ ) e PGP 9.5 (cellule neuronali). SMC si trovano all'interno di tre strati di tessuto: muscolo longitudinale (LM), muscolo circolare (CM) e i mucosae di muscularis (MM) nell'ileo. SMC sono stati progressivamente crescendo a tassi crescenti in tutti e tre gli strati alla chirurgia di 8 e 13 giorni post-PO (Figura 3). Per quanto riguarda ICCs, loro sottopopolazioni si trovano nel plesso muscolare profondo (DMP) e la regione myenteric (MY) subserosal regione (SS). Tuttavia, ICC-DMP, ICC-MY e ICC-SS sono stati degenerati all'interno degli strati intra/intramuscolare (Figura 3). Simili alle sottopopolazioni ICC, sottopopolazioni di cellule PDGFRα+ (PαC) si trovano nel DMP, MY e SS. Nei topi di PO, PαC-DMP, il mio PαC e PαC-SS sono state ristrutturate in modo dinamico all'interno degli strati intramuscolari di topi PO: essi stavano crescendo alla chirurgia post-PO 8 giorni e degenerato alla chirurgia di 13 giorni post-PO (Figura 3). Infine, plesso mioenterico (MP), plesso submucosal (SP), neuroni subserosal (SS) e motoneuroni enterici (EMN) significativamente sono stati persi nelle regioni inter/intramuscolare di topi PO alla chirurgia di 8 e 13 giorni post-PO (Figura 3).
Figura 1. Ostruzione intestinale parziale indotto chirurgicamente in un modello murino. PO è stato indotto dalla chirurgia di PO. Topi di un mese di vita sono stati anestetizzati, loro addome è stato aperto da un'incisione, un anello di silicone è stato disposto che circondano l'ileo e l'apertura è stata chiusa da sutura. Topi che hanno subito la chirurgia hanno permesso di recuperare per 8 o 13 giorni. Età e sesso abbinato così topi sono stati azionati sopra nello stesso modo come topi PO tranne che non c'era alcun posizionamento di un anello. (A) lordo immagini del tratto di GI in topi che hanno subito PO o chirurgia SO. Le immagini sono dei topi a 8 e 13 giorni tratto di GI (B) di post-chirurgia dissecato dai topi in r. piccolo intestino a monte dell'anello è stato dilatato alla chirurgia giorni post-PO sia 8 e 13 e pellet fecali nel colon sono stati anche più piccole, sia 8 e 13 giorno post-PO chirurgia come rispetto ai topi di chirurgia post-SO 13 giorni dovuto l'anello di silicone parzialmente ostruttiva. Barre della scala sono 0,5 cm. per favore clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 2. Strato di muscolo liscio ha cambiato nel modello murino chirurgico. Rappresentante H & E colorazione di sezioni trasversali ileale da PO intestinale, così e nessun topo di funzionamento (NO). Muscolo liscio (SM) e strati di mucosa (Mu) sono più quelli a SO e nessun topo spesse in topi PO alla chirurgia giorni post-PO 8 e 13. Barre della scala sono 50 µm. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 3. Rimodellamento cellulare dinamico nell'ipertrofia del muscolo liscio indotta tramite l'ostruzione parziale intestinale. Scansione immagini di ipertrofiche ileale sezioni trasversali, da PO, così rappresentativo laser confocale e nessun topo. Immunohistochemically macchiando con gli anticorpi (rosso) di MYH11 (SMC), KIT (ICC), PDGFRA (cellule PDGFRα+ ) o PGP 9.5 (NC; cellule neuronali), co-colorato con DAPI (blu). SMC nella mucosa di muscularis (MM), muscolo circolare (CM) e strati di muscolo longitudinale (LM), così come le cellule PDGFRα+ nel plesso muscolare profondo (DMP), regione myenteric (MY) e subserosal regione (SS) stavano crescendo nell'ileo ipertrofica a 8 e 13 giorni post-PO chirurgia, mentre ICC nel plesso myenteric DMP, MY e SS, (MP), plesso submucosal (SP), subserosal NC (SS) e motoneuroni enterici (REM) sono stati degenerati. Barre della scala sono 50 µm. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 4. Risultati di anelli in silicone che sono troppo grande, troppo piccolo o fuori luogo sul colon. (A) senza ipertrofia del muscolo liscio si sviluppa nell'ileo se l'anello è troppo grande per causare l'ostruzione. L'anello fatto poco o nessun bloccaggio dell'ileo. (B) se l'anello è troppo piccolo, ischemia intestinale sviluppa nell'ileo. L'anello in un blocco quasi completo dell'ileo, che possa danneggiare il tessuto e portare a morte precoce prima che si sviluppi l'ipertrofia. (C) l'ipertrofia del muscolo liscio sviluppato nel colon a causa di un anello fuori luogo. L'anello sul colon è stato spostato in basso di lumenal contenuto (feci), che danneggiato sistema vascolare mesentere e ha causato un'emorragia massiccia nel colon. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
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Discussion
Abbiamo dimostrato che i topi che ricevono la chirurgia intestinale PO costantemente e riproducibile sviluppano ipertrofia della muscolatura liscia intestinale, che imita l'ostruzione intestinale umano. Ambulatori di ostruzione intestinale sono stati sviluppati per i diversi animali, tra cui7di topi, ratti10, cavie11, cane12 e gatti13. Il modello del mouse dell'ostruzione intestinale ha tempo, costo, dimensioni e fenotipici vantaggi rispetto ad altri modelli animali più grandi. Lo sviluppo dell'ipertrofia nei topi o ratti prende solo 10-14 giorni10, rispetto al 2-4 settimane in cavie, cani e gatti11,12,13. Costo per l'acquisto e il mantenimento di topi è anche un enorme vantaggio finanziario rispetto ad altri modelli. Inoltre, i topi sono piccolo e facile da gestire per la chirurgia di PO. La cosa più importante, che riceve la chirurgia PO progressivamente ed estesamente i topi sviluppano ipertrofia nel piccolo intestino mentre altri più grandi animali sviluppano meno vasto sviluppo.
Ci sono diversi fattori chiave da considerare quando si cerca di produrre l'ipertrofia affidabile attraverso chirurgia intestinale di PO. Diversi gruppi di ricerca hanno utilizzato gli anelli di varie dimensioni e collocato un anello in varie località lungo l'intestino per creare ostruzioni parziali7,9,10,11,12, 13,14. Tuttavia, un anello di silicone di dimensione ottimale dovrebbe essere utilizzato per i topi come un anello più grande crea poca o nessuna ostruzione nell'ileo dove ipertrofia solo parzialmente, o mai, sviluppato (Figura 4A). Al contrario, quando un anello era troppo piccolo, che ha generato vicino blocco completo dell'ileo che indotto da ischemia intestinale e/o danneggiato la mucosa causando sepsi, conducendo alla morte precoce entro una settimana (Figura 4B). Abbiamo usato un anello di silicone di una dimensione specifica (6 mm di lunghezza, 4 mm di diametro esterno, diametro interno 3,5 mm) su un mesi vecchi topi (Tabella materiali). Diverse dimensioni degli anelli devono essere testati e utilizzati per topi di diverse dimensioni per creare il blocco ottimo nell'ileo. Un altro fattore chiave è la posizione dell'anello sull'intestino. L'ileo, vicino alla valvola ileocecale, è il posto migliore per inserire l'anello al fine di produrre robustamente ostruzioni parziali. Altre regioni, come il digiuno o regioni differenti dell'ileo dalla valvola ileocecale, hanno avuto un simile anello collocato su di loro al fine di indurre l'ipertrofia7. Tuttavia, a causa della superficie serosal dell'intestino altamente essere lubrificata dal liquido peritoneale, un anello che si trova facilmente su queste parti dell'intestino si muove a causa della forza contrattile dell'intestino che spinge il materiale fecale. Come l'anello viene spinto giù per la lunghezza dell'intestino, taglia fuori arterie mesenteriche innervate nella regione myenteric dell'intestino, causando un'emorragia. Quando un anello viene inserito alla fine dell'ileo accanto alla valvola ileocecale, fisicamente viene impedito lo spostamento ulteriore dalla natura ingombrante dell'intestino cieco. Il cieco può essere facilmente posizionato ed tolto l'addome nella chirurgia al fine di individuare la regione di valvola ileocecal come intestino cieco si connette a ileo e del colon prossimale. L'ileo e del colon collegata all'intestino cieco sembrano abbastanza simili e un anello accidentalmente può essere posizionato su due punti prossimali invece l'ileo. Quando un anello era fuori luogo sul colon prossimale, come si è visto anche il digiuno, l'anello è stato spinto verso il basso e danneggiato le arterie mesenteriche, causando vaste hemorrhaging (Figura 4). Per evitare questa errata collocazione, ileo sempre dovrebbe essere correttamente localizzato e identificata prima che l'anello è messo in atto. L'ileo viene eseguito all'interno dell'intestino cieco mentre il colon viene eseguito in un lato del sacchetto cieco.
Questo protocollo di chirurgia PO è considerato come un importante intervento chirurgico per i topi. Tutti i materiali e gli strumenti chirurgici devono essere sterilizzati prima dell'uso, e la chirurgia deve essere eseguita in un ambiente pulito di una sala operatoria dedicata al fine di minimizzare la contaminazione, che può portare a un'infezione e infiammazione in topi. Inoltre, un farmaco di dolore dovrebbe essere fornito ai topi dopo la chirurgia. Abbiamo scelto di utilizzare una versione di lento rilascio di buprenorfina, che è efficace fino a 7-8 h22. Inoltre, dopo la chirurgia, i topi hanno difficoltà masticare e inghiottire cibo solido. Per fino alla post-chirurgia 5 giorni, i topi dovrebbero essere forniti con cibo ammorbidito (dieta solida con un po' acqua aggiunto per ammorbidire il cibo) e commutati alla normale dieta solida dopo 5 giorni.
La nostra chirurgia intestinale PO fornisce un modello di ipertrofia in vivo per ostruzione intestinale in cui SMC, ICC, e cellule PDGFRα+ sono anormalmente ristrutturate. Questo modello di PO è ideale anche per la comprensione come neuroni enterici vengono modificati dal PO e come le attività motorie principali sono interessati nel piccolo e grande intestino23. Queste cellule possono essere dinamicamente ristrutturate in condizioni patologiche, come pure sotto circostanze coltivate15,16. Abbiamo osservato che queste cellule nei topi SO si è comportato in modo un po' diverso rispetto ai topi normali senza operazione (Figura 2 e Figura 3). La maggior parte ostruzione intestinale in esseri umani si verifica da aderenze addominali sviluppati dopo la chirurgia, che porta a ipertrofia del muscolo liscio3,4,5,21. Dopo l'intervento chirurgico di SO, abbiamo anche trovato che SMC, ICC e PDGFRα+ cellule erano un po' ipertrofiche nel piccolo intestino, rispetto a nessun (Figura 3), suggerendo che la chirurgia si può indurre l'ipertrofia della muscolatura liscia intestinale. Se questo è il caso, quindi la chirurgia non è un completo controllo negativo per la chirurgia di PO. NO così come SO dovrebbe essere usato come un confronto all'intestino di PO.
In sintesi, abbiamo trovato un tempo/costo efficace, affidabile e ripetibile PO protocollo chirurgico in topi che genera robustamente ostruzioni intestinali. Durante lo sviluppo dell'ostruzione, SMC, ICC, PDGFRα+, così come le cellule di un neurone sono dinamicamente ristrutturate all'interno di vari strati di tessuto e locales. Questo modello in vivo l'ostruzione offerte nuove intuizioni per la nostra conoscenza di come fenotipiche modifiche si verificano in ostruito intestino a livello cellulare.
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Disclosures
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Acknowledgments
Gli autori vorrei ringraziare Benjamin J Weigler, D.V.M., pH.d. e Walt Mandeville, D.V.M (risorse animali & Campus frequentando veterinario, University of Nevada, Reno) per i loro servizi animale eccellente fornito per i topi, come pure la loro consiglio su procedure chirurgiche.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Surgical drape | Medical and veterinary supplies | SMS40 | 40”X100 yards |
| Underpad, econ, pro plus | Medical and veterinary supplies | MSC281224 | 17x24” |
| Iris scissors | Braintree scientific, Inc | SC-i-130 | |
| Iris scissors | Vantage | V95-304 | |
| Dumont electronic & jeweler tweezers | Dumont | 98-180-3 | |
| Braided absorbable suture | Covidien polysorb | SL-5687G | 5-0, polyglactin |
| Nylon non-absorbable mono filament | AD surgical | S-N618R13 | 6-0, nylon |
| Surgical blade | Dynarex | No.15 | |
| Needle holder | Jacobson microvascular | 36-1342TC | 8.5 inch |
| Scalpel handle | Flinn scientific | AB1049 | |
| Microsurgical scissor | WPI | 503305 | |
| Petrolatum ophthalmic ointment | Puralube VET | 3.5 g | |
| Fluriso (isoflurane) | Vetone | V1 502017 | 250 ml |
| Steri-strip reinforced skin closure | 3M | R1547 | |
| Surgical gloves | Medline | MSG2270 | |
| Ear loop face mask | The safety zone | RS700 | |
| Avant gauze non-woven sponges | Caring | PRM25444 | |
| Surgical cup | Admiral craft OYC-2 | 725-A42 | 2.5 oz |
| Swabstick | ChloraPrep | 260103 | 2% w/v Chlorhexidine Gluconate (CHG) and 70% v/v Isopropyl Alcohol (IPA) |
| Cotton tipped applicator | Puritan | 806-WC | |
| Buprenorphine | Zoo pharm | BZ8069317 | 1 mg/ml |
| Gentamycin sulfate | Vetone | G-6336-04 | 100 mg/ml |
| Fast acting gel cream remover | Veet | 8111002 | |
| Syringe | AHS | AH01T2516 | 1 ml with needle |
| Silicon ring | VWR | 60985-720 | 6 mm in length, 4 mm exterior diameter, 3.5 mm interior diameter |
| C57BL/6 mice | The Jackson Laboratory | 4-6 weeks old |
References
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