Summary
Iris kärlnybildning, en vanlig komplikation av ischemisk retinal sjukdom, kan leda till synhotande neovaskulära glaukom. Här beskriver vi ett murina protokoll för att inducera experimentella iris kärlnybildning som kan användas för noninvasiv utvärdering av angiogenes-modulerande ämnen.
Abstract
Vi beskriver en modell av punktering-inducerad iris kärlnybildning som en generell modell för noninvasiv utvärdering av angiogenes. Modellen är också relevanta för inriktning neovaskulära glaukom, en synhotande komplikation av diabetesretinopati. Denna metod bygger på induktion av iris vaskulär respons av en rad självtätande uveal punkteringar på BALB/c-möss och tar fördel av postpartum mognaden av mus okulär kärlsystemet. Musungar genomgå från postnatal dag 12,5, när valparna naturligtvis öppnar deras ögon, tills postnatal dag 24,5 uvealt punkteringar. På grund av insyn i hornhinnan, kan iris vaskulatur analyseras enkelt genom tiden av noninvasiv i vivo metoder. Halvtransparent iris BALB/c-möss kan dessutom vara flatmounted för detaljerade immunohistologic analys med minimal ospecifika bakgrundsfärgning. I denna modell, angiogenes drivs i huvudsak av inflammatorisk och plasminogen Aktivera system. Punktering-inducerad modellen är först att inducera iris kärlnybildning i små gnagare, och har fördelen att direkt noninvasiv i vivo analys av angiogena processen. Modellen kan dessutom kombineras med angiogena modulerande ämnen, vilket understryker dess potential i studien av angiogenes med ett in-vivo -perspektiv.
Introduction
Iris, ciliarkroppen och åderhinnan, består av Uveaen, som är den mest vaskulariserad vävnaden i ögat. Iris kärlsystemet är nödvändigt att upprätthålla homeostas i främre kammaren i ögat. Till följd av riklig anastomotic anslutningar mellan artärer och vener ge iris blodkärl näring och syretillförseln inte bara på Iris själv, utan till hela främre segmentet av ögat1.
Bildandet av nya blodkärl eller angiogenes från redan befintliga, är grundläggande i fysiologiska processer, såsom utveckling och sårläkning2. Angiogenes är fint reglerad av en mängd kanoniska faktorer, såsom vaskulär endotelial tillväxtfaktor (VEGF) och plasminogen aktivator inhibitor (PAI), samt flera inflammatoriska faktorer, och en obalans av dessa faktorer kan leda till patologisk angiogenes3.
I ögat är kärlnybildning orsaken till synhotande sjukdomar, såsom proliferativ diabetesretinopati (PDR) och neovaskulära glaukom (NVG). I dessa ögonsjukdomar, den fokala kärlnybildning ligger vanligen i näthinnans vävnader, men obalansen i inflammatoriska och angiogena i båda bakre och främre okulär kamrarna i ögat har associerats med rubeosis iridis, den klinisk term för iris patologiska neoangiogenesis4. Dessa patologier ange vuxen iris förmåga att genomgå angiogenes. Hos möss, okulär kärlsystemet är omogna efter födseln och fortsätter mognad postpartum. Denna egenhet av utveckling utnyttjas i musmodell av syre-inducerad retinopati, en modell som nära härmar retinopati på grund av prematuritet5kliniska tillstånd. Dessutom angiogenes och inflammation spelar en central roll i sårläkning mekanismer6och sårläkning själv har associerats med angiogenes modeller7.
I denna studie beskriver vi en modell av punktering-inducerad iris kärlnybildning. Uveal punkteringar utförs nära den yttre gränsen för limbus, som framkalla iris kärlnybildning genom att utlösa den sårläkning system. På grund av insyn i hornhinnan, iris vaskulatur kan analyseras enkelt i vivo av noninvasiva metoder. Punkterad ögon presenterar en ökning av vaskulär säng i iris, som har förknippats med en ökning av plasminogen aktivering och inflammatoriska markörer8. Den presenterade modellen har stor potential som ett nytt verktyg att studera angiogenes och screening angiogena föreningar, och tillåter direkt i vivo visualisering av angiogena processer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
BALB/c musungar oavsett kön användes i enlighet med uttalandet om användning av djur i Oftalmologiskt och Vision Research, och protokollen godkändes av Stockholms kommittén för etisk djur forskning. Möss var inrymt i kullar, tillsammans med den ammande modern, med en 12 h dag/natt cykel, fri tillgång till mat och vatten, och övervakas dagligen.
Obs: För det kirurgiska ingreppet, möss hölls under anestesi med flyktiga isofluran. Okulär salvor avskräcks under okulär förfaranden, eftersom de kan störa behandlingar och ämnen som används. Om det behövs för att förhindra torr-eye, kan en droppe steril normal koksaltlösning tillämpas. Även uvealt punkteringar är självläkande, lagts omsorg under uveal punkteringar att säkerställa steriliteten med kirurgiska instrument. Efter kirurgisk behandling ingår återfuktning med normal saltlösning subkutant, och analgesi med topikal okulär tetrakain hydroklorid. Valparna var tillåtna att återställa till sternala koordinationsrubbning på en värmedyna innan de returneras till den ammande modern, i en ren bur. Kullar hölls med samma ammande mamma att undvika stress.
1. anestesi
- Förbereda anestesi induktion kammaren, att administrera isofluran bedövningsmedel och se till att en liten mus mask är också tillsammans.
Obs: Utför alla djurförsök i samförstånd med alla tillämpliga etiska tillstånd. - Prefill induktion kammaren med 3-4% flyktiga isofluran i Atmosfärisk luft.
Obs: Olika bedövningsmedel substanser andra än isofluran får användas, enligt etiska tillstånd. Flyktiga anestetika förfaranden bör ske en ventilerad bänk eller rök huva. - Placera en postnatal (P) 12,5-dag-gammal BALB/c mus pup i induktion kammaren. Bekräfta att anestesi apparaten är redo att leverera isofluran till induktion kammaren.
Obs: Musungar är ömtåliga och bäst hanteras av kragen. Hålla pups tillsammans som en kull eller med den ammande modern att undvika stress. - Låt pup till vara helt sövd.
- Försiktigt, plocka upp mus pup av kragen.
Obs: Håll induktion kammaren stängd på alla gånger för säker och stabil induktion. - Flytta musen till gnagare masken. Se till att växla bedövningsmedel flödet från induktion kammaren till masken när du flyttar musen.
- Utföra en tå nypa för att bekräfta anestesi.
2. punktera förfarande under kirurgiska stereoskop
- Placera musen i sidled koordinationsrubbning position. Bekräfta att masken är väl positionerat så möss är i synfältet av stereoskop.
- Försiktigt rotera mus huvudet så ögat är vänd mot stereoskop.
Obs: Tydligt fokus i ögat bör uppnås under stereoskop. För positionering, rekommenderas en förstoring på 16 X, medan 40 X bör användas för att utföra ingreppet. Om etiska tillstånd tillåter det, kan trimning spetsen på morrhåren underlätta visualiseringen av ögat. - Använder små kopplingsförbehåll pincett, noggrant sticker pup's öga genom att tillämpa press nedåt på ögonlocken dorsala och ventrala för ögat.
- Hålla en skonsam men bestämda tag i pup's ögonlocket, med liten pincett.
Obs: Det rekommenderas att utföra ögat utstick och locket håller med den icke-dominanta handen, som den dominerande handen bör utföra punktering procedur. - Använd stereoskop för att hitta korneal limbus. Albino BALB/c limbus kan lätt identifieras av cirkulär vaskulär plexus posteriort hornhinnan.
- Med ett 0,25 mm diameter (30 G) avfasad nål, utföra en liten uveal punktering, nära den bakre limbala gränsen av Uveaen. Använd endast spetsen av nålen och inte mer än halva avfasningen (motsvarar 0,5 mm), punktera Uveaen. Om genomförs korrekt, de uveal punkteringar är självtätande, ändå intraokulär injektion av studien ämnen kan administreras genom samma punktering såret.
Obs: Om upplevt med musen okulär anatomi, körs uveal punkteringen mellan ciliarkroppen och ora serrata. Försiktighet måste iakttas när de utför uveal punkteringen att undvika spricker linsen. - Utföra andra uveal punkteringen i motsatt platsen för ögat från den första punktionsstället. Optimera avstånd och positionen för punkteringar; överväga 12 och klockan 6 punkteringar, med klockan 12 varelse som dorsal som möjligt.
- Upprepa förfarandet för uveal punkteringar varje fyra dagar tills P24.5. Före varje efterföljande uveal punktering, övervaka djurens status särskilt uppmärksamma förekomsten av traumatisk katarakt på grund av linsen skador under uveal punktering, eller uppenbart minskat intraokulärt tryck. Målet för verkställande upprepade punkteringar på samma positioner som tidigare punkteringar för optimal effekt.
3. noninvasiv in Vivo övervakning
- Innan punktering eller injektioner varje experimentella dag, söva musen som framförs ovan.
- Med musen i sidled koordinationsrubbning position, och sticker försiktigt ut ögat.
- Fokusera på iris kärlsystemet med den kirurgiska stereoskop.
- Ta en bild av den iris kärlsystemet med en kamera som monteras på den kirurgiska stereoskop.
Obs: Även om inte nödvändigt, förmå meios kan vara bra att normalisera iris yta per djur. Tänk etiska tillstånd när du väljer en meios-inducerande agent. Noga med tyngdpunkt på iris vaskulatur kommer att underlätta ytterligare kvantitativ analys. En magnitud på 40 X rekommenderas.
4. postoperativ vård
- Ta bort BALB/c pup från gnagare masken och försiktigt föra över den till en värmedyna skiktad med en kirurgisk matta.
- Applicera en droppe av 1% tetrakain lösning till punkterad ögon.
Obs: Andra smärtstillande lösningar kan användas, enligt etiska tillstånd. - Hydrate djuret med en subkutan injektion med 200 µL sterilt normal koksaltlösning.
- Returnera pup till den ammande modern i en ren mus bur.
- Övervaka återhämtningsprocessen. Valpen bör kunna deambulate och återgå till kullen.
5. eye Enucleation
- Avliva djuret av cervikal dislokation. Utföra enucleation och dissektion under ett stereoskop för bättre visualisering av förfarandet.
Obs: Olika dödshjälp förfaranden kan användas. Det rekommenderas att strikt följa etiska tillstånd. - Dra isär ögonlocken för att förbättra exponering för ögat.
- Gör ett litet snitt (ca 0.5 cm) nära Cantus av ögonlocken med böjda Bonn ögat sax.
- Använda exponerade periokulära utrymme för att infoga micro kopplingsförbehåll pincett bakom (under) världen i omloppsbana.
- Ta tag i vävnaden som omger ögat och dra försiktigt uppåt. Undvika hålla fast ögongloben, Använd omgivande vävnader närmare att ögonhålan.
- Infoga böjda Bonn ögat saxen bakom ögat världen i omloppsbana.
- Skär genom omgivande vävnader tills ögat frigörs från uttaget.
Obs: Denna dissektion teknik underhåller ögat anatomi och gynnar efterföljande analys. - Fortsätt till avlägsnande av främmande vävnad från ögat. Avlägsnande av främmande vävnad kan utföras efter fastställande, om föredrog.
Obs: BALB/c-möss är melanin bristfällig, därför att öka kontrasten, en mörk bakgrund rekommenderas att underlätta dissektion förfarande. - Kort skölj hela-ögat i en petriskål fylld med steril fosfatbuffrad koksaltlösning (PBS).
- Överför ögat till en 2 mL tub som innehåller 1,5 mL 4% buffrad-formalin lösning.
- Fixa ögat för 6 h i rumstemperatur.
Obs: Fastställande ger styvhet av vävnad och underlättar dissektion av iris. Fastställande av tid bör testas och anpassas för olika tillämpningar.
6. Iris dissektion förfarandet enligt stereoskop
- Ta bort fixativ lösningen från röret med en 1,5 mL plast Pasteur-pipett (eller liknande) och skölj ögat tre gånger med färska PBS.
- Placera fast ögat i en torr yta (dissektion stand) med främre kammaren uppåt.
- Med en avfasad 30 G nål, utföra en startpunkt posteriort om limbus.
- Håller det främre segmentet med små kopplingsförbehåll pincett, in ett tips Clayman-Vännäs rak sax i öppningen tidigare skapat.
Obs: Det rekommenderas att kontrollera tången med den icke-dominanta handen, och sax med dominerande. - Samtidigt vrida ögat med kopplingsförbehåll tången, skär runt limbus ta bort det bakre segmentet av ögat.
Obs: Utföra partiella nedskärningar gör att saxen att fortsätta i vävnaden och kraftigt inre spets underlättar processen. - Placera det främre segmentet nedåt, utsätta linsen.
- Ta bort objektivet försiktigt genom att greppa den med liten pincett och dra uppåt.
Obs: En avfasad nål kan användas för att punktera och dra linsen. - Placera det främre segmentet med hornhinnan nedåt och skär vinkelrätt mot synfältet.
- Försiktigt ta vävnad posteriort ciliarkroppen med små kopplingsförbehåll tången.
- Med Clayman-Vännäs rak sax, fortsätta att trimma bara anterior ciliary kroppen ta bort trabekelverket och isolera iris. Bekräfta att det trabekulära nätverket tas bort; iris ska flytta i hornhinnan.
- Försiktigt överför främre ögonmusslan med små kopplingsförbehåll tången, hålla hornhinnan, till en plattan med 96 brunnar innehållande 200 µL av PBS.
- Fortsätt att hålla hornhinnan i brunnen och dissekera iris genom att spola med PBS med en pipett.
Obs: Om den iris förblir anhängare till hornhinnan, vissa trabekelverket kan vara närvarande och fasning av en 30 G nål kan användas för att hjälpa undantränger iris. - Ta bort hornhinnan från 96-brunnen med små kopplingsförbehåll tången, och hålla isolerade iris i brunnen för ytterligare analys.
- Lagra friflytande iris prover vid 4 ° C.
Obs: Trots slusspris långtidsförvaring av iris fritt flytande prov rekommenderas inte.
7. möjliga experimentella Läs-outs
- För att visualisera blodkärlen i de dissekerade iris, använda fritt flytande hela-mount immunohistokemi färgning metoder för markörer såsom trombocyter endotelceller vidhäftning molekyl (PECAM) -1 eller isolectin B4. Alternativt använda hela kroppen perfusion med vaskulär färgning, såsom lysrör-märkt hög molekylvikt dextrans.
- Använda i vivo noninvasiv bilder för att utföra i silico platt montering och kvantifiera full iris kärlsystemet med lämpligt bildprogram.
Obs: Vaskulatur kan kvantifieras, både i vivo och in vitro-, använder densitometry eller med vaskulatur analys programvara9. - Bearbeta hela ögongloben för nukleinsyror och protein utvinning, följt av PCR eller immunoblotting metoder, utföra molekylär analys av punkterade ögonen.
Obs: Molekylär analys av vävnader utförs bäst med icke-fasta vävnad, men dissekering av icke-fast iris är extremt utmanande och användningen av hela ögat har återges statistiskt signifikanta resultat i tidigare studier8.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Albino BALB/c musungar på P12.5 utsattes för uveal punkteringar, upprepas varje fjärde dag (experimental dag 0, 4, 8, 12), till P24.5. Vid P27.5, möss var euthanized och Iris dissekeras noggrant (experimental dag 15). Bilder av mus ögon togs med en kamera ansluten till en kirurgisk stereoskop före varje punktering serie i varje experimentella dag att bedöma noninvasiv utvärdering av iris vaskulär svar. Uveal punkteringar inducera en vaskulär respons från iris genom att utlösa den sårläkning systemet (figur 1). På grund av insyn i hornhinnan och melanin-brist BALB/c möss, ökad iris kärlsystemet är lätt synlig från experimentell dag 4 (P16.5) och intensifieras under hela protokollet. Immunohistokemi bilder för PECAM-1 betecknar en ökning av övergripande kärlsystemet i iris punkterad ögon jämfört med kontroller (figur 2).
Figur 1: icke-invasiv övervakning av punktering-inducerad iris angiogenes. Representativa bilder av dag 0, 4, 8, 12 och 15 i kontroll och punkterade ögon. Iris vaskulär respons märks från dag 4 och framåt i punkterad ögon. Skalstapeln = 1 mm. vänligen klicka här för att visa en större version av denna siffra.
Figur 2: Iris vaskulär respons i punktering-inducerad ögon. Illustrativa bilder av PECAM-1 färgning från dag 15 iris, visas som helbild och förstoras området (torg), från kontroll och punkterade ögon. Skalstapeln = 400 µm (överst); 200 µm (nederst). Observera ökningen av vaskulär filialer i punkterad Iris. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
I detta protokoll presenteras en ny metod för induktion av iris vaskulär respons av uveal punktering. Punkteringen utlöser såret läkande mekanismer och främjar vaskulär svaren i iris10,11. Detta är i samförstånd med okulär sjukdomar, såsom PDR och NVG, där förvärras angiogena svaren från näthinnan i bakre segmentet av ögat kulminera i tillståndet rubeosis iridis, en ökad vaskularisering av iris12 ,13.
Hornhinnan är avaskulär och äger en säregen kollagen struktur vilket resulterar i öppenhet. I linje med detta, kan angiografi av främre segmentet av ögat för visualisering av iris vaskulatur uppnås genom direkt visualisering av iris blodkärl med i vivo noninvasiva metoder13,14. Tidigare modeller av iris kärlnybildning förlitat sig på stor-eyed djur var komplexa kirurgiska ingrepp utförs15,16,17, eller av intraokulär injektion av specifika angiogena ämnen 18 , 19. i denna metod, användning av pigment bristfällig BALB/c-möss möjliggör direkt observation av iris kärlsystemet i vivo, och tillåter noninvasiv kvantifiering av de iris kärlnybildning hos möss, vilket ger ett nytt verktyg för att studera invivo angiogenes.
Dessutom tillåter den presenterade metoden för mus iris dissektion analys av punktering-inducerad iris kärlnybildning med vaskulär specifika markörer. Här iris fartyg var prestationsmått målat med PECAM-1-antikroppar och visualiseras av fluorescensmikroskopi. Friflytande, hela-mount immunfärgning protokoll är lätt uppnås och ganska rutinmässig. Dessutom kan perfusionen metoder för blodkärlen utföras i denna modell. Vaskulär specifik färgning ger bedömning av iris blodkärl struktur och därmed kvantifiering av användaren-baserad eller programvara analys, iris neovasculature9. Som tidigare beskrivits8,20bedömdes illustrationen av iris neovasculature på dag 15 post-puncture-induktion. Dock kan effekter på iris vaskularisering observeras så tidigt som dag 4 efter-puncture induktion, vilket tyder på att utvärderingen av punktering-inducerad iris kärlnybildning modellen kunde utföras vid olika tidpunkter, baserat på specifika experimentella krav.
Det är anmärkningsvärt att detta protokoll presenterar några utmaningar, särskilt relaterad till storleken på en möss ögon i förhållande till andra djurmodell. Extrem försiktighet bör iakttas vid körning uveal punktering förfarandet, för att undvika lins inslag eller skada på ögat. Observation av okulär tillstånd är paramount, och djur som uppvisar experimental-relaterade grå starr eller okulär tryckfall bör uteslutas och lämpligt euthanized. Mus Iris är extremt ömtåliga och något klibbig. Ordentlig dissektion och isolering av vävnad presenterar en annan kritiska steg för protokollet. Ett rätt avskiljande från det trabekulära nätverket krävs för förskjutning av iris från främre kammaren. Dessutom, på grund av bräcklighet, iris isolering kräver fixering av vävnad, vilket försämrar nedströms molekylär analys. Dock har en molekylär analys av ofixerade hela-öga framgångsrikt tillämpats den presenterade metod8.
Sammanfattningsvis presenterar beskrivs protokollet en ny punktering-inducerad iris kärlnybildning musmodell. Denna modell har fördelen av att i vivo noninvasiv direkt visualisering av angiogenes. Dessutom återger användningen av smågnagare den presenterade modellen attraktiva för studier av rubeosis iridis, eftersom det undviker användningen av stora-eyed djur och åtföljs etiska begränsning. Förfarandet kan dessutom kombineras med injektion av pro - eller anti-angiogena ämnen genom den självtätande punktering, förbättra dess användbarhet som en ny modell för i vivo angiogenes.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har något att avslöja.
Acknowledgments
Författarna tackar Linnea Tankred och Diana Rydholm för djurhållning.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Bonn eye scissors | Bausch & Lomb | 23060 | |
| Clayman-Vannas curved scissors | Bausch & Lomb | E3383 C | |
| Clayman-Vannas straight scissors | Bausch & Lomb | E3383 S | |
| Objective adapter for camera | Handcrafted | N/A | Or any system that allows adapting a camera to the microscope |
| Heating Pad 100-110 watts | Non Applicable | N/A | Available in pet/veterinarian stores |
| Hypodermic 30g beveled needle | KDM GmBH germany | 911914 | |
| Iphone 4S | Apple | Non Applicable | Or other high resolution image acquistion device |
| Isoflurane | Baxter | KDG 9623 | |
| McPherson tying forceps | Bausch & Lomb | E1815 S | |
| Micro tying forceps | Bausch & Lomb | 63140 | |
| Minims tetracaine hydrochloride | Bausch & Lomb | N/A | 1 % (w/v) Eye Drops |
| Neutral-buffered formalin | Bioreagens | 0018-40 | |
| Normal saline solution | Fresenius Kabi | 210352 | 0.9 % (w/v) NaCl in injectable water |
| Phosphate-buffered saline | ThermoFisher Scientific | 10010023 | Balanced and buffered PBS pH 7.4 |
| Petri dish 10 cm | Starstedt | 83.3902 | |
| Petri dish 3 cm | Starstedt | 83.3900 | |
| Safe Seal Tube 2.0 mL | Starstedt | 72.685.200 | Or any eppendorf style tubes |
| TC plate 96-well | Starstedt | 83.3924 | |
| Transfer pipette 3.5 mL | Starstedt | 86.1171 | Or any other Pasteur pipette style |
| Univentor 400 anesthesia unit | Univentor Limited | N/A | Or equivalent flow regulator with induction chamber and mask for volatile anesthesia |
| Wild M650 surgical microscope | Wild Heerbrugg | N/A | Or other surgical or magnifying stereoscope |
References
- Morrison, J. C., Van Buskirk, E. M. Anterior collateral circulation in the primate eye. Ophthalmology. 90 (6), 707-715 (1983).
- Dreyfuss, J. L., Giordano, R. J., Regatieri, C. V. Ocular Angiogenesis. J Ophthalmol. 2015, 892043 (2015).
- Breuss, J. M., Uhrin, P. VEGF-initiated angiogenesis and the uPA/uPAR system. Cell Adh Migr. 6 (6), 535-615 (2012).
- Rodrigues, G. B., et al.
- Stahl, A., et al. The mouse retina as an angiogenesis model. Invest Ophth Vis Sci. 51 (6), 2813-2826 (2010).
- DiPietro, L. A. Angiogenesis and wound repair: when enough is enough. J Leukocy Biol. 100 (5), 979-984 (2016).
- Eming, S., Brachvogel, B., Odorisio, T., Koch, M. Regulation of angiogenesis: Wound healing as a model. Prog Histochem Cytoc. 42 (3), 115-170 (2007).
- Beaujean, O., Locri, F., Aronsson, M., Kvanta, A., André, H. A novel in vivo model of puncture-induced iris neovascularization. PloS One. 12 (6), e0180235 (2017).
- Zudaire, E., Gambardella, L., Kurcz, C., Vermeren, S. A Computational Tool for Quantitative Analysis of Vascular Networks. PloS One. 6 (11), (2011).
- Dorrell, M., Uusitalo-Jarvinen, H., Aguilar, E., Friedlander, M. Ocular neovascularization: basic mechanisms and therapeutic advances. Surv Ophthalmol. 52 Suppl 1, S3-S19 (2007).
- Kvanta, A. Ocular angiogenesis: the role of growth factors. Acta Ophthalmol. 84 (3), 282-288 (2006).
- Salman, A. G. Intrasilicone Bevacizumab Injection for Iris Neovascularization after Vitrectomy for Proliferative Diabetic Retinopathy. Ophthalmic Res. 49 (1), 20-24 (2013).
- Jeong, Y. C., Hwang, Y. H. Etiology and Features of Eyes with Rubeosis Iridis among Korean Patients: A Population-Based Single Center Study. PloS One. 11 (8), e0160662 (2016).
- Speier, S., Nyqvist, D., Köhler, M., Caicedo, A., Leibiger, I. B., Berggren, P. -O. Noninvasive high-resolution in vivo imaging of cell biology in the anterior chamber of the mouse eye. Nat Protoc. 3 (8), 1278-1286 (2008).
- Stefansson, E., Landers, M. B., Wolbarsht, M. L., Klintworth, G. K. Neovascularization of the Iris - an Experimental-Model in Cats. Invest Ophth Vis Sci. 25 (3), 361-364 (1984).
- Nork, T. M., Tso, M., Duvall, J., Hayreh, S. S. Cellular Mechanisms of Iris Neovascularization Secondary to Retinal Vein Occlusion. Arch Ophthalmol-Chic. 107 (4), 581-586 (1989).
- Hjelmeland, L. M., Stewart, M. W., Li, J. W., Toth, C. A., Burns, M. S., Landers, M. B. An Experimental-Model of Ectropion Uveae and Iris Neovascularization in the Cat. Invest Ophth Vis Sci. 33 (5), 1796-1803 (1992).
- Tolentino, M. J., Miller, J. W., Gragoudas, E. S., Chatzistefanou, K., Ferrara, N., Adamis, A. P. Vascular endothelial growth factor is sufficient to produce iris neovascularization and neovascular glaucoma in a nonhuman primate. Arch Ophthalmol-Chic. 114 (8), 964-970 (1996).
- Paula, J. S., et al. Rabbit Rubeosis Iridis Induced by Intravitreal Latex-derived Angiogenic Fraction. Curr Eye Res. 36 (9), 857-859 (2011).
- Takei, A., Ekström, M., et al. Gene Transfer of Prolyl Hydroxylase Domain 2 Inhibits Hypoxia-inducible Angiogenesis in a Model of Choroidal Neovascularization. Sci Rep. 7, 42546 (2017).
