Summary
Iris neovascularization, en almindelig komplikation af iskæmisk retinal sygdom, kan føre til sight-truende neovaskulær glaukom. Her, beskriver vi en murine protokol for at fremkalde eksperimentelle iris neovascularization, der kan bruges til noninvasive evaluering af angiogenese-modulerende stoffer.
Abstract
Vi beskriver en model af punktering-induceret iris neovascularization som en generel model for noninvasiv evaluering af angiogenese. Modellen er også relevante for målretning neovaskulær glaukom, en sight-truende komplikation af diabetisk retinopati. Denne metode er baseret på induktion af iris vaskulære svar af en række selvstændige forsegling uveal punkteringer på BALB/c mus og drager fordel af postpartum modningen af musen okulær Vaskulaturen. Musen pups gennemgå uveal punkteringer fra postnatal dag 12,5, når hvalpene naturligvis åbne deres øjne indtil postnatal dag 24,5. På grund af gennemsigtigheden af hornhinden, kan iris Vaskulaturen analyseres nemt gennem tiden af noninvasive i vivo metoder. Derudover kan BALB/c mus halvgennemsigtig iris være flatmounted for detaljerede immunohistologic analyse med minimal uspecifikke baggrund farvning. I denne model, angiogenese er primært drevet af de inflammatoriske og plasminogen aktivering systemer. Punktering-induceret modellen er først til at fremkalde iris neovascularization i små gnavere, og har fordelen, at direkte noninvasive i vivo analyse af angiogene proces. Modellen kan desuden kombineres med angiogene modulerende stoffer, der fremhæver dens potentiale i studiet af angiogenese med en i vivo perspektiv.
Introduction
Iris, corpus ciliare og årehinden, består den uvea, som er den mest vaskulariserede væv af øjet. Iris Vaskulaturen er afgørende for opretholdelsen af homøostase i det forreste kammer i øjet. Som følge af rigelige Anastomotiske forbindelser mellem arterier og vener leverer iris blodkar næringsstoffer og forsyning af ilt ikke kun iris, sig selv, men det hele forreste segment for øje1.
Dannelsen af nye blodkar, eller angiogenese fra allerede eksisterende, er grundlæggende fysiologiske processer, såsom udvikling og sårheling2. Angiogenese er reguleret fint af en lang række kanoniske faktorer, såsom vaskulær endotel vækstfaktor (VEGF) og plasminogen aktivator inhibitor (PAI), samt flere provokerende faktorer, og en ubalance af disse faktorer kan føre til patologiske angiogenese3.
I øjet er neovascularization årsag til sight-truende sygdomme, såsom proliferativ diabetisk retinopati (PDR) og neovaskulær glaukom (NVG). I disse okulær sygdomme, den fokale neovascularization findes almindeligt i retinal væv, men ubalance i inflammatoriske og angiogene faktorer i begge posterior og anterior okulære afdelinger i øjet har været forbundet med rubeosis iridis, den Klinisk udtryk for iris patologiske neoangiogenesis4. Disse patologier angive voksen iris evne til at gennemgå angiogenese. I mus, okulær Vaskulaturen er umodne efter fødslen og fortsætter modning postpartum. Denne ejendommelighed af udvikling udnyttes i musemodel af ilt-induceret retinopati, en model, der nøje efterligner den kliniske tilstand af retinopati prematurity5. Derudover angiogenese og inflammation spiller en central rolle i sårheling mekanismer6, og sårheling, selv har været forbundet med angiogenese modeller7.
I denne undersøgelse beskriver vi en model af punktering-induceret iris neovascularization. Uveal punkteringer er udført nær den ydre grænse for limbus, som inducerer iris neovascularization ved at udløse sårheling system. På grund af gennemsigtigheden af hornhinden, iris Vaskulaturen kan være analyseret nemt i vivo af noninvasive metoder. Punkteret øjnene præsentere en stigning af vaskulære seng i iris, som har været forbundet med en stigning af plasminogen aktivering og inflammatoriske markører8. Den præsenterede model har stort potentiale som et nyt værktøj til at studere angiogenese og screening angiogene forbindelser, og giver mulighed for direkte i vivo visualisering af angiogene processer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
BALB/c mus unger af begge køn blev brugt i overensstemmelse med erklæringen om brug af dyr i Ophthalmologic og Vision forskning, og protokollerne, der blev godkendt af Stockholms udvalg for etiske Animal forskning. Mus blev opstaldet i kuld, sammen med den ammende mor, med en 12-timers dag/nat cyklus, fri adgang til mad og vand, og overvåges dagligt.
Bemærk: For den kirurgiske procedure, mus blev holdt under anæstesi med flygtige isofluran. Okulær salver er afskrækket under okulær procedurer, som de kan forstyrre behandlinger og stoffer, der anvendes. Hvis det er nødvendigt, for at forhindre tør-eye, kan en dråbe af sterile normale saltopløsning anvendes. Selvom uveal punkteringer er selvhelende, blev pleje taget under uveal punkteringer at sikre sterilitet med kirurgiske instrumenter. Post-kirurgiske behandling indgår hydrering med normal saltopløsning subkutant, og analgesi med okulær aktuel administration af tetracain hydrochlorid. Hvalpene fik lov til at inddrive til brystbenet recumbency på en varmepude før den returneres til den ammende mor, i en ren bur. Kuld blev holdt med den samme ammende mor til at undgå stress.
1. anæstesi
- Forberede bedøvelse induktion kammer, til at administrere isofluran bedøvelsesmiddel og sikre, at en lille mus maske er også koblet.
Bemærk: Udfør alle dyreforsøg i overensstemmelse med alle gældende etiske godkendelser. - Prefill induktion kammer med 3-4% flygtige isofluran i atmosfærisk luft.
Bemærk: Forskellige bedøvende stoffer andre end isofluran kan bruges, ifølge etiske godkendelser. Flygtige bedøvelsesmiddel procedurer bør foretages på en ventileret bænk eller aftræk hood. - Placer en postnatale (P) 12,5 dage gamle BALB/c mus pup i salen, induktion. Bekræfte, at apparatet anæstesi er klar til at levere isofluran til induktion kammer.
Bemærk: Mus unger er skrøbelige og bedst håndteres af harmoniske. Holde unger sammen som et kuld eller med ammende mor til at undgå stress. - Tillad hvalp at være fuldt bedøvede.
- Forsigtigt, afhente mus pups af harmoniske.
Bemærk: Hold induktion kammeret lukket på alle tidspunkter for sikker og stabil induktion. - Overføre musen til den gnaver maske. Sørg for at skifte den bedøvende flow fra induktion kammer til masken, når du flytter musen.
- Udføre en tå knivspids for at bekræfte anæstesi.
2. punktere Procedure under kirurgiske Stereoskopet
- Placer musen i laterale recumbency position. Bekræfte masken er godt positioneret så musen øjet er i Stereoskopet synsfelt.
- Forsigtigt dreje musen hovedet så øjet vender mod Stereoskopet.
Bemærk: Klart fokus i øjet bør opnås under Stereoskopet. For positionering, anbefales 16 X forstørrelse, mens 40 X bør anvendes til at udføre den kirurgiske procedure. Hvis etiske godkendelser tillader det, kan trimning spidsen af knurhår lette visualisering af øjet. - Ved hjælp af små koblingssalg pincet, omhyggeligt Rage den pup øje ved at anvende pres på øjenlågene dorsal og ventral at øjet.
- Holde en blid, men fast fat i den pup øjenlåg, med lille pincet.
Bemærk: Det anbefales at udføre øje fremspring og låg holder med den ikke-dominerende hånd, som den dominerende hånd bør udføre proceduren punktering. - Brug Stereoskopet til at lokalisere den hornhinde limbus. Albino BALB/c limbus kan let identificeres af den cirkulære vaskulære plexus posteriort for hornhinden.
- Med en 0,25 mm diameter (30 G) skrå nål, udføre en lille uveal punktering, nær den bageste limbal grænse af uvea. Brug kun spidsen af nålen, og ikke mere end halvdelen (svarende til 0,5 mm), facet punktere uvea. Hvis udført korrekt, de uveal punkteringer er selvstændige forsegling, men intraokulært injektion af undersøgelse stoffer kan blive administreret gennem den samme punktering sår.
Bemærk: Hvis med musen okulær anatomi, udføres den uveal punktering mellem ciliare og ora serrata. Pleje skal tages mens de udfører den uveal punktering at undgå brud linsen. - Udføre den anden uveal punktering i den modsatte site af øjet fra webstedet første punktering. Optimere afstand og position punkteringer; overveje 12 og 6 klokken punkteringer, med 12 klokken bliver så dorsale som muligt.
- Gentag proceduren uveal punkteringer hver fire dage indtil P24.5. Før hver efterfølgende uveal punktering, overvåge dyrs status med særlig vægt på tilstedeværelsen af traumatisk katarakt på grund af linsen skader under uveal punktering eller indlysende formindsket okulære pres. Målet for udførelse af gentagne punkteringer på de samme holdninger som tidligere punkteringer for optimal effekt.
3. noninvasive in Vivo overvågning
- Punktering eller af injektioner hver eksperimenterende dag, bedøver musen som udført ovenfor.
- Med musen i laterale recumbency stilling, stikke forsigtigt øjet.
- Fokus på iris Vaskulaturen med den kirurgiske Stereoskopet.
- Tage et billede af iris Vaskulaturen med et kamera monteret på den kirurgiske Stereoskopet.
Bemærk: Selvom ikke nødvendigt, inducerende meiose kan være nyttigt at normalisere iris areal pr. dyr. Overveje etiske tilladelser, når du vælger en meiose-fremkaldende agent. Omhyggelig fokus af iris Vaskulaturen vil lette yderligere kvantitative analyser. En størrelsesorden af 40 X anbefales.
4. postoperativ pleje
- Fjerne BALB/c hvalpen fra den gnaver maske, og forsigtigt overføre det til en varmepude lag med en kirurgisk mat.
- Påfør en dråbe af 1% tetracain løsning til punkteret øjne.
Bemærk: Andre smertestillende løsninger kan bruges, ifølge etiske godkendelser. - Hydrat dyret med en subkutan injektion af 200 µL sterilt normale saltopløsning.
- Returnere pup til den ammende mor i en ren mus bur.
- Overvåge opsving oparbejde. Hvalpen skal kunne deambulate og vende tilbage til kuldet.
5. øjne Enucleation
- Aflive dyret af cervikal dislokation. Udføre enucleation og dissektion under en Stereoskopet for bedre visualisering af proceduren.
Bemærk: Forskellige eutanasi procedurer kan bruges. Det anbefales at strengt til etiske godkendelser. - Trække fra hinanden øjenlåg for at forbedre eksponering for øjet.
- Gør et lille snit (ca 0,5 cm) nær øjenkrog af øjet låg med buede Bonn øje saks.
- Bruge den udsatte periocular plads til at indsætte mikro koblingssalg pincet bag (under) kloden i kredsløb.
- Få fat i vævet omkring øjet og træk forsigtigt opad. Undgå bedrift på øjeæblet, bruge det omgivende væv tættere til øjenhulen.
- Indsæt den buede Bonn øje saks bag øjet globe i kredsløb.
- Skære igennem de omkringliggende væv indtil øjet er frigivet fra soklen.
Bemærk: Denne dissektion teknik fastholder øje anatomi og gavner efterfølgende analyse. - Fortsæt til fjernelse af fremmed væv fra øjet. Fjernelse af fremmed væv kan udføres efter fastsættelse, hvis det foretrækkes.
Bemærk: BALB/c mus er melanin mangelfuld, derfor, at øge kontrasten, en mørk baggrund anbefales at lette dissektion procedure. - Kort Skyl det hele-øje i en petriskål fyldt med steril fosfatbufferet saltopløsning (PBS).
- Overføre øjet til en 2 mL rør indeholdende 1,5 mL 4% buffered formalin løsning.
- Fix øje i 6 timer ved stuetemperatur.
Bemærk: Fastsættelse af giver stivhed af væv og letter dissektion af iris. Fastsaettelse tidspunkt bør afprøves og justeres til forskellige applikationer.
6. Iris dissektion Procedure under Stereoskopet
- Fjerne den Fikseringsvæske løsning fra røret med en 1,5 mL plastik Pasteur pipette (eller lignende), og skyl øjet tre gange med frisk PBS.
- Placer det faste øje i en glat tør overflade (dissektion stand) med forkammeret vender opad.
- Med en skrå 30 G kanyle, udføre en posterior til limbus indgangspunkt.
- Holder den forreste segment med små koblingssalg pincet, indsætte et tip Clayman-markriyor lige saks i indledningen oprettet tidligere.
Bemærk: Det anbefales at kontrollere pincet med ikke-dominerende hånd og saks med dominerende. - Mens roterende øjet med koblingssalg pincet, skåret omkring limbus at fjerne den bageste segment af øjet.
Bemærk: Udfører delvis nedskæringer vil tillade den indre spids saks fortsat i vævet og høj grad letter processen. - Placer den forreste segment vender nedad, udsætter linsen.
- Fjern linsen omhyggeligt ved at snuppe det med lille pincet og trække opad.
Bemærk: En skrå nål kan bruges til at punktere og trække linsen. - Placer den forreste segment med hornhinden vender nedad og snit vinkelret på synsfelt.
- Forsigtigt grab væv posteriort for ciliare med den lille koblingssalg pincet.
- Med Clayman-markriyor fortsætte lige sakse, trimme lige foran corpus ciliare til at fjerne trabekelværket og isolere iris. Bekræfte, at trabekelværket er fjernet; iris bør bevæge sig i hornhinden.
- Omhyggeligt overføre den forreste øjestykket med den lille koblingssalg pincet, holde hornhinden, til en 96-brønd plade der indeholder 200 µL af PBS.
- Fortsat holde hornhinden i brønden og dissekere iris ved gennemskylning med PBS med en pipette.
Bemærk: Hvis iris forbliver tilhænger at hornhinden, nogle trabekelværket kan være nutid og facet af 30 G nål kan bruges til at hjælpe med at fortrænge iris. - Fjern hornhinden fra 96-brønd med de små koblingssalg pincet, og holde den isolerede iris i godt for yderligere analyse.
- Gemme frit svævende iris prøver ved 4 ° C.
Bemærk: På trods af at være fast, langsigtet opbevaring af iris frit svævende prøver kan ikke anbefales.
7. mulig eksperimentelle udlæsning
- For at visualisere blodkar i dissekeret iris, bruge frit svævende hele-mount Immunhistokemi farvning metoder til markører som trombocyt endotel celle vedhæftning molekyle (PECAM) -1 eller isolectin B4. Alternativt kan du bruge hele kroppen perfusion med vaskulære farvning, såsom fluorescerende-mærket høj molekylvægt dextrans.
- Brug i vivo noninvasive billeder til at udføre i siliciummangan fladskærms-montering og kvantificere fuld iris Vaskulaturen med passende billedbehandlingsprogrammer.
Bemærk: Vaskulaturen kan kvantificeres, både i vivo og in vitro-, ved hjælp af densitometri eller med Vaskulaturen analyse software9. - Behandle hele øjeæblet nukleinsyrer og proteiner udvinding, efterfulgt af PCR eller immunoblotting metoder til at udføre molekylære analyser af punkteret øjne.
Bemærk: Molekylær analyse af væv er bedst udføres med ikke-faste væv, men dissektion af ikke-fast iris er ekstremt udfordrende, og brugen af hele øjet har afsagt statistisk signifikante resultater i tidligere undersøgelser8.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Albino BALB/c mus unger på P12.5 blev udsat for uveal punkteringer, gentaget hver fjerde dag (eksperimentel dag 0, 4, 8, 12), indtil P24.5. På P27.5, mus blev aflivet og iris dissekeret omhyggeligt (eksperimentel dag 15). Billeder af mus øjne blev taget med et kamera, der er knyttet til en kirurgisk Stereoskopet før hver punktering serie i hver eksperimenterende dag at vurdere noninvasive evaluering af iris vaskulære svar. Uveal punkteringer fremkalde en vaskulær svar fra iris ved at udløse sårheling system (figur 1). På grund af gennemsigtighed af hornhinden og melanin-mangelfuld BALB/c musene, øget iris Vaskulaturen er let synlig fra eksperimentelle dag 4 (P16.5) og intensiverer hele varigheden af protokollen. Immunhistokemi billeder til PECAM-1 betegne en stigning i samlede Vaskulaturen i iris af punkteret øjne i forhold til kontrol (figur 2).
Figur 1: Noninvasive overvågning af punktering-induceret iris angiogenese. Repræsentative billeder af dag 0, 4, 8, 12 og 15 i kontrol og punkteret øjne. Iris vaskulære svar er klart fra dag 4 og fremefter i punkteret øjne. Skalalinjen = 1 mm. venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: Iris vaskulære svar i punktering-induceret øjne. Illustrative billeder af PECAM-1 farvning fra dag 15 iris, vises som fuld visning og forstørret område (firkantet), fra kontrol og punkteret øjne. Skalalinjen = 400 µm (top); 200 µm (nederst). Bemærk stigning vaskulære grene i punkteret iris. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
I denne protokol præsenteres en roman metode til induktion af iris vaskulære svar af uveal punktering. Punktering udløser sår helbredende mekanismer og fremmer vaskulære svar i iris10,11. Dette er i overensstemmelse med okulær patologier såsom PDR og NVG, hvor forværret angiogene svar fra nethinden i det bageste segment af øjet kulminerer i den kliniske tilstand af rubeosis iridis, en øget vascularization af iris12 ,13.
Hornhinden er avascular og besidder en ejendommelig kollagen struktur medførende gennemsigtighed. I overensstemmelse hermed er angiografi af de forreste segment af øjet til visualisering af iris Vaskulaturen opnåelige ved direkte visualisering af iris blodkar med i vivo noninvasive metoder13,14. Tidligere animalsk modeller af iris neovascularization stolet på store-eyed dyr hvor komplekse kirurgiske indgreb var udført15,16,17, eller ved intraokulært injektion af specifikke angiogene stoffer 18 , 19. i denne metode, brug af pigment mangelfuld BALB/c mus giver mulighed for direkte observation af iris Vaskulaturen i vivo, og tillader noninvasive kvantificering af iris neovascularization i mus, hvilket giver et nyt værktøj til at studere in vivo angiogenese.
Endvidere giver metoden præsenteres for musen iris dissektion analyse af punktering-induceret iris neovascularization med vaskulære specifikke markører. Her, iris fartøjer var illustrere farves med PECAM-1 antistoffer og visualiseret ved Fluorescens mikroskopi. Frit svævende, hele-mount immunfarvning protokoller er let opnås og temmelig rutinemæssig. Derudover kan perfusion metoder til blodkar udføres i denne model. Vaskulære specifik farvning grants vurdering af iris blodkar struktur og dermed kvantificering af bruger-baseret eller software analyse, iris neovasculature9. Som tidligere beskrevet8,20, blev illustration af iris neovasculature vurderet på dag 15 post-puncture-induktion. Ikke desto mindre, kan observerede virkninger på iris vascularization så tidligt som i dag 4 post-puncture-induktion, tyder på, at evaluering af punktering-induceret iris neovascularization model kunne være gennemført på forskellige tidspunkter, baseret på specifikke eksperimentelle krav.
Det er bemærkelsesværdigt, at denne protokol giver nogle udfordringer, især relateret til størrelsen af en mus øjne i forhold til andre dyr model. Stor forsigtighed bør tages mens udføre uveal punktering-procedure for at undgå linse rører eller skader på øjet. Observation af okulær betingelse er paramount, og dyr visning eksperimentel-relaterede grå stær eller trykfaldet i okulær bør udelukkes og passende euthanized. Musen iris er ekstremt skrøbelig og lidt tacky. Ordentlig dissektion og isolation af væv præsenterer en anden afgørende skridt for protokollen. En korrekt adskillelse fra trabekelværket er nødvendig for forskydning af iris fra den forreste kammer. Desuden kræver iris isolation på grund af skrøbelighed, fiksering af væv, som forringer downstream Molekylær analyse. En molekylær analyse af en ikke fastbundet hele-eye har imidlertid været anvendt med succes til præsenteret metode8.
Sammenfattende præsenterer beskrevet protokollen en roman punktering-induceret iris neovascularization musemodel. Denne model har fordelen, at i vivo noninvasive direkte visualisering af angiogenese. Derudover gør brugen af små gnavere præsenteres modellen attraktiv for studier af rubeosis iridis, da det undgår brug af store-eyed dyr og ledsaget etiske restriktioner. Proceduren kan desuden kombineres med injektion af pro - eller anti-angiogene stoffer gennem den selvstændige forsegling punktering, forbedre sin nytte som en ny model for i vivo angiogenese.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ikke noget at oplyse.
Acknowledgments
Forfatterne takke Linnea Tankred og Diana Rydholm for husdyrhold.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Bonn eye scissors | Bausch & Lomb | 23060 | |
| Clayman-Vannas curved scissors | Bausch & Lomb | E3383 C | |
| Clayman-Vannas straight scissors | Bausch & Lomb | E3383 S | |
| Objective adapter for camera | Handcrafted | N/A | Or any system that allows adapting a camera to the microscope |
| Heating Pad 100-110 watts | Non Applicable | N/A | Available in pet/veterinarian stores |
| Hypodermic 30g beveled needle | KDM GmBH germany | 911914 | |
| Iphone 4S | Apple | Non Applicable | Or other high resolution image acquistion device |
| Isoflurane | Baxter | KDG 9623 | |
| McPherson tying forceps | Bausch & Lomb | E1815 S | |
| Micro tying forceps | Bausch & Lomb | 63140 | |
| Minims tetracaine hydrochloride | Bausch & Lomb | N/A | 1 % (w/v) Eye Drops |
| Neutral-buffered formalin | Bioreagens | 0018-40 | |
| Normal saline solution | Fresenius Kabi | 210352 | 0.9 % (w/v) NaCl in injectable water |
| Phosphate-buffered saline | ThermoFisher Scientific | 10010023 | Balanced and buffered PBS pH 7.4 |
| Petri dish 10 cm | Starstedt | 83.3902 | |
| Petri dish 3 cm | Starstedt | 83.3900 | |
| Safe Seal Tube 2.0 mL | Starstedt | 72.685.200 | Or any eppendorf style tubes |
| TC plate 96-well | Starstedt | 83.3924 | |
| Transfer pipette 3.5 mL | Starstedt | 86.1171 | Or any other Pasteur pipette style |
| Univentor 400 anesthesia unit | Univentor Limited | N/A | Or equivalent flow regulator with induction chamber and mask for volatile anesthesia |
| Wild M650 surgical microscope | Wild Heerbrugg | N/A | Or other surgical or magnifying stereoscope |
References
- Morrison, J. C., Van Buskirk, E. M. Anterior collateral circulation in the primate eye. Ophthalmology. 90 (6), 707-715 (1983).
- Dreyfuss, J. L., Giordano, R. J., Regatieri, C. V. Ocular Angiogenesis. J Ophthalmol. 2015, 892043 (2015).
- Breuss, J. M., Uhrin, P. VEGF-initiated angiogenesis and the uPA/uPAR system. Cell Adh Migr. 6 (6), 535-615 (2012).
- Rodrigues, G. B., et al. Neovascular glaucoma: a review. Int J Retina Vitreous. 2, 26 (2016).
- Stahl, A., et al. The mouse retina as an angiogenesis model. Invest Ophth Vis Sci. 51 (6), 2813-2826 (2010).
- DiPietro, L. A. Angiogenesis and wound repair: when enough is enough. J Leukocy Biol. 100 (5), 979-984 (2016).
- Eming, S., Brachvogel, B., Odorisio, T., Koch, M. Regulation of angiogenesis: Wound healing as a model. Prog Histochem Cytoc. 42 (3), 115-170 (2007).
- Beaujean, O., Locri, F., Aronsson, M., Kvanta, A., André, H. A novel in vivo model of puncture-induced iris neovascularization. PloS One. 12 (6), e0180235 (2017).
- Zudaire, E., Gambardella, L., Kurcz, C., Vermeren, S. A Computational Tool for Quantitative Analysis of Vascular Networks. PloS One. 6 (11), (2011).
- Dorrell, M., Uusitalo-Jarvinen, H., Aguilar, E., Friedlander, M. Ocular neovascularization: basic mechanisms and therapeutic advances. Surv Ophthalmol. 52 Suppl 1, S3-S19 (2007).
- Kvanta, A. Ocular angiogenesis: the role of growth factors. Acta Ophthalmol. 84 (3), 282-288 (2006).
- Salman, A. G. Intrasilicone Bevacizumab Injection for Iris Neovascularization after Vitrectomy for Proliferative Diabetic Retinopathy. Ophthalmic Res. 49 (1), 20-24 (2013).
- Jeong, Y. C., Hwang, Y. H. Etiology and Features of Eyes with Rubeosis Iridis among Korean Patients: A Population-Based Single Center Study. PloS One. 11 (8), e0160662 (2016).
- Speier, S., Nyqvist, D., Köhler, M., Caicedo, A., Leibiger, I. B., Berggren, P. -O. Noninvasive high-resolution in vivo imaging of cell biology in the anterior chamber of the mouse eye. Nat Protoc. 3 (8), 1278-1286 (2008).
- Stefansson, E., Landers, M. B., Wolbarsht, M. L., Klintworth, G. K. Neovascularization of the Iris - an Experimental-Model in Cats. Invest Ophth Vis Sci. 25 (3), 361-364 (1984).
- Nork, T. M., Tso, M., Duvall, J., Hayreh, S. S. Cellular Mechanisms of Iris Neovascularization Secondary to Retinal Vein Occlusion. Arch Ophthalmol-Chic. 107 (4), 581-586 (1989).
- Hjelmeland, L. M., Stewart, M. W., Li, J. W., Toth, C. A., Burns, M. S., Landers, M. B. An Experimental-Model of Ectropion Uveae and Iris Neovascularization in the Cat. Invest Ophth Vis Sci. 33 (5), 1796-1803 (1992).
- Tolentino, M. J., Miller, J. W., Gragoudas, E. S., Chatzistefanou, K., Ferrara, N., Adamis, A. P. Vascular endothelial growth factor is sufficient to produce iris neovascularization and neovascular glaucoma in a nonhuman primate. Arch Ophthalmol-Chic. 114 (8), 964-970 (1996).
- Paula, J. S., et al. Rabbit Rubeosis Iridis Induced by Intravitreal Latex-derived Angiogenic Fraction. Curr Eye Res. 36 (9), 857-859 (2011).
- Takei, A., Ekström, M., et al. Gene Transfer of Prolyl Hydroxylase Domain 2 Inhibits Hypoxia-inducible Angiogenesis in a Model of Choroidal Neovascularization. Sci Rep. 7, 42546 (2017).
