Summary
Iris neovascularization, en vanlig komplikasjon av iskemiske retinal sykdom, kan føre til sight-truende neovascular glaukom. Her beskriver vi en murine protokoll for inducing eksperimentelle iris neovascularization som kan brukes for noninvasive evaluering av angiogenese-modulerende stoffer.
Abstract
Vi beskriver en modell av punktering-indusert iris neovascularization som en generell modell for noninvasive evaluering av angiogenese. Modellen er også relevant for målretting neovascular grønn stær, en sight-truende komplikasjon av diabetisk retinopati. Denne metoden er basert på induksjon av iris vaskulær svar av en rekke selvtettende uveal punkteringer på BALB/c mus og utnytter postpartum modning av musen okulær blodkar. Musen pups gjennomgå uveal punkteringer fra postnatal dag 12,5, når pups naturlig åpner øynene, før postnatal dag 24,5. På grunn av gjennomsiktigheten av hornhinnen kan iris blodkar analyseres lett gjennom tiden noninvasive i vivo metoder. Videre kan halvgjennomsiktig iris BALB/c mus være flatmounted for detaljert immunohistologic analyse med minimal uspesifisert bakgrunn flekker. I denne modellen angiogenese er hovedsakelig drevet av den inflammatoriske og plasminogen aktivere systemer. Punktering-indusert modellen er først til å indusere iris neovascularization i små gnagere, og har fordelen at direkte noninvasive i vivo analyse av angiogenic prosessen. Videre kan modellen kombineres med angiogenic modulerende stoffer, som fremhever sitt potensial i studiet av angiogenese med en i vivo perspektiv.
Introduction
Iris, sammen med den ciliary kroppen og akkord, består av uvea, som er den mest vascularized vev i øyet. Iris blodkar er avgjørende i å opprettholde homeostase i fremre kammer av øyet. Som følge av rikelig anastomotisk forbindelser mellom arteries og årer gi iris blodkar næring og tilførsel av oksygen ikke bare til iris selv, men til hele anterior segment av øyet1.
Dannelsen av nye blodkar eller angiogenese fra pre eksisterende, er grunnleggende i fysiologiske prosesser, som utvikling og sårtilheling2. Angiogenese er fint regulert av en rekke kanoniske faktorer, som vaskulær endotelial vekstfaktor (VEGF) og plasminogen aktivator inhibitor (PAI), samt flere inflammatorisk faktorer, og en ubalanse i disse faktorene kan føre til patologisk angiogenese3.
I øyet er neovascularization årsaken til sight-truende sykdommer, som proliferativ diabetisk retinopati (PDR) og neovascular glaukom (NVG). I disse øyet sykdommer, fokal neovascularization ligger vanligvis i netthinnen vev, men ubalansen i provoserende og angiogenic faktorer i begge bakre og fremre okulær kamrene i øyet har blitt assosiert med rubeosis iridis, den kliniske termen for iris patologisk neoangiogenesis4. Disse patologi angir evnen til voksen iris gjennomgå angiogenese. I mus, okulær blodkar er umodne etter fødselen og fortsetter modning postpartum. Denne eiendommelighet utvikling er utnyttet i musemodell av oksygen-indusert retinopati, en modell som nærmere etterligner retinopati prematurity5klinisk tilstand. I tillegg angiogenese og betennelser spille en avgjørende rolle i sårheling mekanismer6, og sårtilheling selv har vært forbundet med angiogenese modeller7.
I denne studien beskriver vi en modell av punktering-indusert iris neovascularization. Uveal punkteringer utføres nær den ytre grensen for limbus, som induserer iris neovascularization ved å utløse sårheling systemet. På grunn av gjennomsiktigheten av hornhinnen iris blodkar kan være analysert lett i vivo noninvasive metoder. Punctured øynene fremviser en økning av vaskulær seng i iris, som har vært forbundet med en økning av plasminogen aktivering og provoserende markører8. Presentert modellen har stort potensial som et nytt verktøy å studere angiogenese og screening angiogenic forbindelser, og tillater direkte i vivo visualisering angiogenic prosesser.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
BALB/c musen pups av begge kjønn ble brukt i henhold til erklæringen for bruk av dyr i Ophthalmologic og visjon forskning og protokollene ble godkjent av Stockholms Committee for etisk dyr forskning. Mus ble i søppel, sammen med en mor som ammer, med 12 h dag/natt syklus, mat og vann, og overvåkes daglig.
Merk: For kirurgiske prosedyren, mus ble holdt under anestesi med flyktige isoflurane. Okulære salver er motløs under okulær prosedyrer, som de kan forstyrre behandlinger og stoffer som brukes. Om nødvendig for å hindre tørre øyne, kan en dråpe sterilt vanlig saltvann brukes. Om uveal punkteringer selvhelbredende, ble omsorg tatt under uveal punkteringer å sikre steriliteten med Kirurgiske instrumenter. Post-kirurgisk behandling inkludert hydration med vanlig saltvann subcutaneously, og analgesi med okulær aktuell administrasjon av tetracaine hydroklorid. Valpene fikk lov til å gjenopprette til sternal recumbency på en varmeputen de returneres til sykepleie mor, i en ren bur. Kull ble holdt med samme sykepleie mor å unngå stress.
1. anestesi
- Forberede anestesi induksjon kammeret, for å administrere isoflurane anestesi og sikre at en liten mus maske er også kombinert.
Merk: Utføre alle dyreforsøk med alle gjeldende etiske tillatelser. - Prefill induksjon kammeret med 3-4% flyktige isoflurane atmosfærisk luft.
Merk: Forskjellige bedøvende stoffer enn isoflurane kan brukes etter etiske tillatelser. Flyktige bedøvende prosedyrer bør fortsatte ventilert benk eller fume hette. - Plass et postnatal (P) 12,5 dager gamle BALB/c musen pup i induksjon kammeret. Bekrefte at anestesi apparatet er klar til å levere isoflurane til induksjon kammeret.
Merk: Mus pups er skjøre og best håndteres av scruff. Oppbevare pups sammen som en søppel eller med en mor som ammer å unngå stress. - Tillate pup å være fullt anesthetized.
- Forsiktig, plukke opp musen pup av scruff.
Merk: Holde induksjon kammeret stengt på alle tider for trygg og stabil induksjon. - Overføre musen til gnager masken. Pass på å bytte bedøvende strømmen fra induksjon kammeret til masken når du flytter musen.
- Utføre en tå knipe for å bekrefte anestesi.
2. punktering prosedyre under kirurgisk Stereoscope
- Plasser musen i laterale recumbency posisjon. Bekreft masken er godt posisjonert så musen øyet i synsfeltet til stereoscope.
- Forsiktig rotere mus hodet så øyet vender mot stereoscope.
Merk: Klart fokus på øyet skal oppnås under stereoscope. En forstørrelse på 16 X anbefales for posisjonering, mens 40 X skal brukes til å utføre den kirurgiske prosedyren. Hvis etiske tillater tillater det, kan trimming spissen av kinnskjegg lette visualisering av øyet. - Bruker små knytte tang, nøye stikke det pup øyet ved å bruke press på øyelokkene dorsal og ventrale for øyet.
- Holde en mild, men fast på det pup øye lokk, med liten tang.
Merk: Det anbefales å utføre øye protrusion og lokk holder med det ikke-dominante hånden, som den dominerende siden bør følge fremgangsmåten punktering. - Bruk stereoscope for å finne den hornhinnen limbus. Albino BALB/c limbus kan lett identifiseres av den sirkulære vaskulær plexus bakenfor hornhinnen.
- Med en 0,25 mm diameter (30 G) skrå nål, utføre en liten uveal punktering, nær bakre limbal grensen på uvea. Bruk bare spissen av nålen og halvt skråkant (tilsvarende 0,5 mm), punktering av uvea. Hvis gjort riktig, de uveal punkteringer er selvtettende, men intraokulært injeksjon av studien stoffer kan administreres gjennom samme punktering såret.
Merk: Hvis med musen okulær anatomi, utføres uveal punktering mellom ciliary kropp og ora-serrata. Må utvises ved utføring av uveal punktering å unngå rupturing linsen. - Utfør andre uveal punktering i motsatt for øyet fra webområdet for første punktering. Optimalisere avstanden og plasseringen av punkteringer; vurdere 12 og 6 o'clock punkteringer, med 12 o'clock blir så dorsal som mulig.
- Gjenta uveal punkteringer hver fire dager før P24.5. Før hver påfølgende uveal punktering, overvåke dyr status betale spesielt merke til tilstedeværelsen av traumatisk cataract på grunn av linsen skade under uveal punktering, eller åpenbar redusert okulær press. Mål for utføring gjenta punkteringer på samme posisjoner som tidligere punkteringer for optimal effekter.
3. noninvasive i Vivo overvåking
- Før punktering eller injeksjoner på hver eksperimentelle dag, bedøve musen som utførte ovenfor.
- Med musen i laterale recumbency posisjon, forsiktig stikke øyet.
- Fokus på iris blodkar med kirurgisk stereoscope.
- Ta et bilde av iris blodkar med et kamera montert på den kirurgiske stereoscope.
Merk: Selv om ikke nødvendig, inducing meiose kan være nyttig å normalisere iris området per dyr. Vurdere etiske tillatelser når du velger en meiose-inducing agent. Forsiktig fokus er iris blodkar vil lette videre kvantitativ analyse. En størrelsesorden 40 X anbefales.
4. postoperativ pleie
- Fjern BALB/c valp fra gnager masken, og forsiktig overføre den til en varmeputen lagvis med en kirurgisk mat.
- Bruke en dråpe 1% tetracaine løsning på punktert øyne.
Merk: Andre smertestillende løsninger kan brukes etter etiske tillatelser. - Hydrat dyret med en subcutaneous injeksjon av 200 µL av sterile vanlig saltvann.
- Tilbake valp til sykepleie mor i ren mus bur.
- Overvåke gjenopprettingsprosessen. Pup kunne deambulate og gå tilbake til søppel.
5. øye Enucleation
- Euthanize dyret av cervical forvridning. Utføre enucleation og disseksjon under en stereoscope for bedre visualisering av prosedyren.
Merk: Forskjellige euthanasia prosedyrer kan brukes. Anbefales til etiske tillatelser. - Dra fra hverandre øyelokkene for å forbedre eksponering for øyet.
- Gjør et lite kutt (ca 0,5 cm) nær canthus av øyet lokkene med buet Bonn øye saks.
- Bruke utsatt periocular plass for å sette mikro knytte tang bak (under) verden i bane.
- Ta tak i vevet rundt øyet og trekk forsiktig oppover. Unngå holder på øyeeplet, bruk det omringer tissues nærmere til øye-kontakt.
- Sett inn buet Bonn øye saksen bak øyet verden i bane.
- Skjære gjennom omkringliggende vev til øyet slippes fra kontakten.
Merk: Denne disseksjon teknikken holder øye anatomi og fordeler påfølgende analyse. - Gå til fjerning av overflødig vev fra øyet. Fjerning av overflødig vev kan utføres etter bestemmer, foretrekkes.
Merk: BALB/c mus er melanin mangelfull, derfor, å øke kontrasten, en mørk bakgrunn anbefales å lette disseksjon prosedyren. - Kort skyll hele-øyet i en Petriskål fylt med sterilt fosfat-bufret saltvann (PBS).
- Overføre øyet til en 2 mL tube som inneholder 1,5 mL 4% bufret formalin løsning.
- Fastsette øye for 6 h ved romtemperatur.
Merk: Fikse gir stivhet av vev og forenkler Disseksjon av iris. Fikse tid bør testes og justert for forskjellige programmer.
6. Iris disseksjon prosedyre under Stereoscope
- Fjern etappe, den stabiliserende løsningen fra røret med en 1,5 mL plast Pasteur pipette (eller lignende), og skyll øyet tre ganger med frisk PBS.
- Sett fast øyet i glatt tørt underlag (disseksjon stand) med det fremre kammeret vendt oppover.
- Med en skrå 30 G nål, utføre innlastingspunkt bakenfor limbus.
- Holder anterior segment med små knytte tang, sett inn ett tips Clayman-Vannas rett saks i åpningen opprettet.
Merk: Det anbefales å kontrollere tang med ikke-dominante hånd og saks med dominerende. - Mens rotere øyet med knytte tang, klipper du rundt limbus fjerne den bakre delen av øyet.
Merk: Utfører delvis kutt vil tillate indre spissen av saksen fortsette i vevet og sterkt forenkler prosessen. - Plasser anterior segment vender nedover, utsette linsen.
- Fjerne linsen nøye ved å flytte det med liten tang og trekke oppover.
Merk: En skrå nål kan brukes å punktere og linsen. - Plasser anterior segment med hornhinnen vender ned og kuttet vinkelrett synsfelt.
- Forsiktig ta vevet bakenfor ciliary kropp med lite knytte tang.
- Med Clayman-Vannas rett saks, fortsette å trimme bare anterior ciliary kropp å fjerne trabekulært meshwork og isolere iris. Bekrefte at fjernes trabekulært meshwork; iris skal flytte i hornhinnen.
- Nøye overføre den fremre eyecup med små knytte tang, holde hornhinnen, til en 96-brønns plate som inneholder 200 µL av PBS.
- Fortsett å holde hornhinnen brønnen og dissekere iris av rødme med PBS med en pipette.
Merk: Hvis iris restene tilhenger til hornhinnen, noen trabekulært meshwork kan være nåtid og skråkant på en 30 G nål kan brukes til å fortrenge iris. - Fjerne hornhinnen fra 96-brønnen med små knytte tang, og holde isolert iris i brønnen for videre analyse.
- Lagre frittflytende iris prøver på 4 ° C.
Merk: Til tross for å være fast, langsiktig lagring av irsk frittflytende prøvene er ikke anbefalt.
7. mulig eksperimentelle Read-Outs
- For å visualisere blodkar i dissekert iriser, bruke frittflytende hele-mount immunohistochemistry flekker metoder for markører som Platederivert endothelial celle vedheft molekyl (PECAM) -1 eller isolectin B4. Alternativt bruke hele kroppen perfusjon med vaskulære flekker, som lysstoffrør-merket molekylvekt dextrans.
- Bruke i vivo noninvasive bilder å utføre i sili flat-montering og kvantifisere full iris blodkar med passende programvare.
Merk: Blodkar kan kvantifiseres, både i vivo og i vitro, bruke densitometry eller med blodkar analyse programvare9. - Behandle hele øyeeplet nucleic syrer og utvinning, etterfulgt av PCR eller immunoblotting metoder, utføre molekylær analyse av punkterte øynene.
Merk: Molekylære analyse av vev er best utført med ikke-fast vev, men Disseksjon av ikke-fast iris er ekstremt utfordrende, og bruk av hele øyet har gjort statistisk signifikant resultatene i tidligere studier8.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Albino BALB/c musen pups på P12.5 ble utsatt for uveal punkteringer, gjentas hver fjerde dag (eksperimentell dag 0, 4, 8, 12), til P24.5. P27.5, mus var euthanized og iriser dissekert omhyggelig (eksperimentell dag 15). Bilder av musen øyne ble tatt med et kamera festet til en kirurgisk stereoscope før hver punktering serien i hver eksperimentelle dag å vurdere noninvasive evaluering av iris vaskulær respons. Uveal punkteringer indusere vaskulær svar fra iris ved å utløse sårheling systemet (figur 1). Åpenhet av hornhinnen og melanin dårlig BALB/c mus, økt iris blodkar er lett synlig fra experimental dag 4 (P16.5) og forsterker gjennom hele protokollen. Immunohistochemistry bilder for PECAM-1 betegne en økning i total blodkar i iriser punktert øyne sammenlignet med kontrollene (figur 2).
Figur 1: Noninvasive overvåking av punktering-indusert iris angiogenese. Representant bilder av dagen 0, 4, 8, 12 og 15 kontroll og punctured øyne. Iris vaskulær svaret er tydelig fra dag 4 og utover i punktert øynene. Skala bar = 1 mm. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2: Iris vaskulær respons i punktering-indusert øyne. Illustrasjon bilder av PECAM-1 flekker fra dag 15 iriser, vises som full visning og forstørret område (torget), fra kontroll punktert øyne. Skala bar = 400 µm (øverst). 200 µm (nederst). Merk økningen av vaskulær filialer i punktert iriser. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
I stede protokollen vises en ny metode for induksjon av iris vaskulær svar fra uveal punktering. Punktering utløser sår helbredelse mekanismer og fremmer vaskulær svar i iris10,11. Dette er i tråd med okulær patologi, som PDR og NVG, der forsterket angiogenic svar fra netthinnen i den bakre delen av øyet kulminere i klinisk tilstand rubeosis iridis, en økt endometrial blodkar i iris12 ,13.
Hornhinnen er avascular og har en særegen kollagen struktur som resulterer i åpenhet. I tråd med dette er angiography av anterior segment av øynene for visualisering av iris blodkar oppnåelig ved direkte visualisering av iris blodkar med i vivo noninvasive metoder13,14. Tidligere dyr modeller av iris neovascularization stole på store øyne dyr der komplekse tiltak var utført15,16,17, eller intraokulært injeksjon av bestemt angiogenic stoffer 18 , 19. i denne metoden, bruk av pigment mangelfull BALB/c mus gjør direkte observasjon av iris blodkar i vivo, og tillater noninvasive kvantifisering av iris neovascularization i mus, noe som gir et nytt verktøy for å studere i vivo angiogenese.
Videre kan presentert metoden for musen iris disseksjon analyse av punktering-indusert iris neovascularization med vaskulær spesifikke indikatorer. Her, iris fartøyer ble illustratively farget med PECAM-1 antistoffer og visualisert ved fluorescens mikroskopi. Frittflytende, hele-mount immunostai-protokoller er lett oppnås og ganske rutinemessig. I tillegg kan perfusjon metoder for blodårene utføres i denne modellen. Vaskulær spesifikk farging gir vurdering av iris blodkar struktur og dermed kvantifisering av bruker-basert eller programvare analyse av iris neovasculature9. Som beskrevet tidligere8,20, ble illustrasjon av iris neovasculature vurdert på dag 15 post-puncture-induksjon. Likevel kan effekter på iris endometrial blodkar observeres så tidlig som i dag 4 post-puncture-induksjon, antyder at evaluering av punktering-indusert iris neovascularization modellen kan gjennomføres på forskjellige tidspunkt, basert på spesifikke eksperimentell krav.
Det er bemerkelsesverdig å si at denne protokollen gir noen utfordringer, spesielt knyttet til størrelsen på en mus øyne i forhold til andre dyremodell. Ekstrem forsiktighet bør utvises under utføring av uveal punktering prosedyren, for å unngå linsen berører eller skade på øyet. Observasjon av okulære tilstand er paramount, og dyr viser eksperimentelle-relaterte katarakt eller nedgang i okulær press burde være utelukket og riktig euthanized. Musen iriser er ekstremt skjøre og litt tacky. Riktig disseksjon og isolasjon av vev presenterer et avgjørende skritt for protokollen. En riktig separasjon fra den trabekulært meshwork er nødvendig for forskyvning av iris fra fremre kammer. Videre, på grunn av skjørhet, iris isolasjon krever fiksering av vev, som hemmer nedstrøms molekylær analyse. Men har en molekylær analyse unfixed hele-øyeblikk vært anvendt til presentert metoden8.
Oppsummert presenterer beskrevet protokollen en roman punktering-indusert iris neovascularization musemodell. Denne modellen har fordelen at i vivo noninvasive direkte visualisering av angiogenese. I tillegg gjengir bruk av små gnagere presentert modellen attraktive for studier av rubeosis iridis, som unngår bruk av store øyne dyr og ledsaget etiske begrensning. Videre kan fremgangsmåten kombineres med injeksjon av pro - eller anti-angiogenic stoffer gjennom den selvtettende punktering, styrke dens nytte som en ny modell av i vivo angiogenese.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne ikke avsløre.
Acknowledgments
Forfatterne takker Linnea Tankred og Diana Rydholm for dyr.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Bonn eye scissors | Bausch & Lomb | 23060 | |
| Clayman-Vannas curved scissors | Bausch & Lomb | E3383 C | |
| Clayman-Vannas straight scissors | Bausch & Lomb | E3383 S | |
| Objective adapter for camera | Handcrafted | N/A | Or any system that allows adapting a camera to the microscope |
| Heating Pad 100-110 watts | Non Applicable | N/A | Available in pet/veterinarian stores |
| Hypodermic 30g beveled needle | KDM GmBH germany | 911914 | |
| Iphone 4S | Apple | Non Applicable | Or other high resolution image acquistion device |
| Isoflurane | Baxter | KDG 9623 | |
| McPherson tying forceps | Bausch & Lomb | E1815 S | |
| Micro tying forceps | Bausch & Lomb | 63140 | |
| Minims tetracaine hydrochloride | Bausch & Lomb | N/A | 1 % (w/v) Eye Drops |
| Neutral-buffered formalin | Bioreagens | 0018-40 | |
| Normal saline solution | Fresenius Kabi | 210352 | 0.9 % (w/v) NaCl in injectable water |
| Phosphate-buffered saline | ThermoFisher Scientific | 10010023 | Balanced and buffered PBS pH 7.4 |
| Petri dish 10 cm | Starstedt | 83.3902 | |
| Petri dish 3 cm | Starstedt | 83.3900 | |
| Safe Seal Tube 2.0 mL | Starstedt | 72.685.200 | Or any eppendorf style tubes |
| TC plate 96-well | Starstedt | 83.3924 | |
| Transfer pipette 3.5 mL | Starstedt | 86.1171 | Or any other Pasteur pipette style |
| Univentor 400 anesthesia unit | Univentor Limited | N/A | Or equivalent flow regulator with induction chamber and mask for volatile anesthesia |
| Wild M650 surgical microscope | Wild Heerbrugg | N/A | Or other surgical or magnifying stereoscope |
References
- Morrison, J. C., Van Buskirk, E. M. Anterior collateral circulation in the primate eye. Ophthalmology. 90 (6), 707-715 (1983).
- Dreyfuss, J. L., Giordano, R. J., Regatieri, C. V. Ocular Angiogenesis. J Ophthalmol. 2015, 892043 (2015).
- Breuss, J. M., Uhrin, P. VEGF-initiated angiogenesis and the uPA/uPAR system. Cell Adh Migr. 6 (6), 535-615 (2012).
- Rodrigues, G. B., et al. Neovascular glaucoma: a review. Int J Retina Vitreous. 2, 26 (2016).
- Stahl, A., et al. The mouse retina as an angiogenesis model. Invest Ophth Vis Sci. 51 (6), 2813-2826 (2010).
- DiPietro, L. A. Angiogenesis and wound repair: when enough is enough. J Leukocy Biol. 100 (5), 979-984 (2016).
- Eming, S., Brachvogel, B., Odorisio, T., Koch, M. Regulation of angiogenesis: Wound healing as a model. Prog Histochem Cytoc. 42 (3), 115-170 (2007).
- Beaujean, O., Locri, F., Aronsson, M., Kvanta, A., André, H. A novel in vivo model of puncture-induced iris neovascularization. PloS One. 12 (6), e0180235 (2017).
- Zudaire, E., Gambardella, L., Kurcz, C., Vermeren, S. A Computational Tool for Quantitative Analysis of Vascular Networks. PloS One. 6 (11), (2011).
- Dorrell, M., Uusitalo-Jarvinen, H., Aguilar, E., Friedlander, M. Ocular neovascularization: basic mechanisms and therapeutic advances. Surv Ophthalmol. 52 Suppl 1, S3-S19 (2007).
- Kvanta, A. Ocular angiogenesis: the role of growth factors. Acta Ophthalmol. 84 (3), 282-288 (2006).
- Salman, A. G. Intrasilicone Bevacizumab Injection for Iris Neovascularization after Vitrectomy for Proliferative Diabetic Retinopathy. Ophthalmic Res. 49 (1), 20-24 (2013).
- Jeong, Y. C., Hwang, Y. H. Etiology and Features of Eyes with Rubeosis Iridis among Korean Patients: A Population-Based Single Center Study. PloS One. 11 (8), e0160662 (2016).
- Speier, S., Nyqvist, D., Köhler, M., Caicedo, A., Leibiger, I. B., Berggren, P. -O. Noninvasive high-resolution in vivo imaging of cell biology in the anterior chamber of the mouse eye. Nat Protoc. 3 (8), 1278-1286 (2008).
- Stefansson, E., Landers, M. B., Wolbarsht, M. L., Klintworth, G. K. Neovascularization of the Iris - an Experimental-Model in Cats. Invest Ophth Vis Sci. 25 (3), 361-364 (1984).
- Nork, T. M., Tso, M., Duvall, J., Hayreh, S. S. Cellular Mechanisms of Iris Neovascularization Secondary to Retinal Vein Occlusion. Arch Ophthalmol-Chic. 107 (4), 581-586 (1989).
- Hjelmeland, L. M., Stewart, M. W., Li, J. W., Toth, C. A., Burns, M. S., Landers, M. B. An Experimental-Model of Ectropion Uveae and Iris Neovascularization in the Cat. Invest Ophth Vis Sci. 33 (5), 1796-1803 (1992).
- Tolentino, M. J., Miller, J. W., Gragoudas, E. S., Chatzistefanou, K., Ferrara, N., Adamis, A. P. Vascular endothelial growth factor is sufficient to produce iris neovascularization and neovascular glaucoma in a nonhuman primate. Arch Ophthalmol-Chic. 114 (8), 964-970 (1996).
- Paula, J. S., et al. Rabbit Rubeosis Iridis Induced by Intravitreal Latex-derived Angiogenic Fraction. Curr Eye Res. 36 (9), 857-859 (2011).
- Takei, A., Ekström, M., et al. Gene Transfer of Prolyl Hydroxylase Domain 2 Inhibits Hypoxia-inducible Angiogenesis in a Model of Choroidal Neovascularization. Sci Rep. 7, 42546 (2017).
