Summary
إيصال الأدوية المحلية الغدد اللهاة من الفائدة في فهم بيولوجيا الغدة اللعابية وتطوير علاجات جديدة. نقدم بروتوكولا حقن ريترودوكتال محدثة ومفصلة، تهدف إلى تحسين دقة التسليم وإمكانية تكرار نتائج تجريبية. تطبيق المقدمة في هذه الوثيقة هو تقديم الجسيمات النانوية البوليمرية.
Abstract
اثنين من الأهداف المشتركة للمداواة الغدة اللعابية هي الوقاية والعلاج من خلل الأنسجة بعد أما المناعة الذاتية أو ضرر الإشعاع. بتسليم المركبات الحيوية النشطة محلياً الغدد اللعابية، يمكن تحقيق تركيزات الأنسجة أكبر بأمان مقابل الإدارة النظامية. وعلاوة على ذلك، قبالة النسيج المستهدف الحد من الآثار من خارج غدي تراكم المواد يمكن جذريا. وفي هذا الصدد، حقن ريترودوكتال الطريقة مستخدمة على نطاق واسع للتحقيق في الغدة اللعابية البيولوجيا والفيزيولوجيا المرضية. لقد ثبت الإدارة ريترودوكتال لعوامل النمو والخلايا الأولية وناقلات أدينوفيرال والأدوية جزيء صغير لدعم وظيفة الغدة في الإعداد للإصابة. وقد أظهرنا سابقا فعالية استراتيجية نانوحبيبات-siRNA ريترودوكتالي حقن للحفاظ على وظيفة الغدة بعد التشعيع. هنا، هو مفصل طريقة فعالة للغاية واستنساخه لإدارة المواد النانوية للغدة اللهاة مورين من خلال مجرى الهواء في وارتون (الشكل 1). تصف الوصول إلى تجويف الفم، وتحدد الخطوات اللازمة للقناة كانولاتي وارتون، مع مزيد من الملاحظات تخدم كالتحقق من جودة طوال فترة الإجراءات.
Introduction
وقد خلل الغدة اللعابية مسببات عديدة، بما في ذلك المتلازمة في سيورغن، فقدان المناعة الذاتية وساطة الأنسجة الافرازية الوظيفية، والإشعاع الناجم عن هيبوساليفيشن (هيام)، سكولا مشتركة للرأس والرقبة السرطان العلاج الإشعاعي1. فقدان وظيفة اللعاب بسبب أما الشرط عند الأفراد للإصابة الفموية والجهازية وتسوس الأسنان، والخلل في الجهاز الهضمي والبلع، والنطق والاكتئاب الكبرى1،،من23. كنتيجة لذلك، إلى حد كبير يعاني نوعية الحياة، مع تدخلات محدودة للتخفيف من الأعراض بدلاً من علاج4. للتحقيق في رواية العلاجات في فيفو، الاهتمام بإدارة المركبات النشطة بيولوجيا مباشرة الغدة اللعابية.
حقن ريترودوكتال وسيلة قيمة لتوصيل المركبات النشطة بيولوجيا مباشرة إلى الغدد اللعابية واختبار الفعالية في المرض والإصابة، أو في إطار التوازن أنسجة طبيعية. الغدد اللعابية الرئيسية الثلاثة هي النكفية (PG) واللهاة (SMG)، وتحت اللسان (SLG)، كل من فيها فارغة في تجويف الفم من خلال القنوات مطرح. تشريح الفاري إس أم جي تصاريح الوصول المباشر من خلال كانوليشن للقناة في وارتون، الموجودة في أرضية الفم تحت اللسان5. وبعد كانوليشن، ومذاوبة المخدرات يمكن أن تدار مباشرة إلى إس أم جي. في أعقاب تسليم ريترودوكتال، مقيد نشرها خارج غدي بالكبسولة الأنسجة المحيطة بها التي تنظم تبادل المواد مع المحيطة بهياكل6. إس أم جي وفي مجرى الهواء هي منظم على نحو مماثل في البشر، ويتم الوصول إليها بشكل روتيني أثناء الجراحة وسيالوندوسكوبي إس أم جي7. في البشر والفئران، جزء من الغرام بالمثل يمكن الوصول إليها عبر مجرى الهواء في ستينسين في الغشاء المخاطي الشدقى8.
في نماذج هيام مورين، استخدمت حقن ريترودوكتال إس أم جي لتقديم العلاجات بما في ذلك عوامل النمو والخلايا الأولية، ناقلات أدينوفيرال، السيتوكينات، والمركبات المضادة للأكسدة تعدل الاستجابة الخلوية للإصابة، وتقليل ما يترتب على ذلك الأنسجة الضرر5،9،10،11،12،13،14،،من1516. ويعد نجاح السريرية أبرز حقن ريترودوكتال إدارة ناقلات أدينوفيرال مباشرة التعبير عن قناة المياه (Aquaporin 1؛ AQP1) في المرضى بعد بالإشعاع ل سرطان الرأس والرقبة17.
سابقا، لدينا نمواً وأظهرت نجاعة نظام siRNA نانوحبيبات البوليمرية ريترودوكتالي حقن لحماية وظيفة الغدة اللعابية من هيام11،18،،من1920. وكامتداد لعملنا الماضية، هنا، نظهر لدينا بروتوكول لحقن SMG ريترودوكتال استخدام نانوحبيبات مسمى فلوريسسينتلي (NP) قادرة على تحميل وإيصال خلاف ذلك ضعيفة الذوبان المخدرات2221،، 23.
أننا قد المركبة NP من كوبوليمر ديبلوك تتألف من بولي (ستايرين-alt-هيدرازيد anhydride)-b-poly(styrene) (بسمة) من خلال إضافة عكسها سلسلة التجزئة (الطوافة) البلمرة، كما هو موضح سابقا21. من خلال تبادل المذيبات، هذه البوليمرات عفويا ذاتيا تجميع في الهياكل التي أرستها مذيل مع مسعور الداخلية وماء خارجي21. تتم تسمية مصادر القدرة النووية مع فلوروفوري الأحمر تكساس للسماح بتحقق التسليم التي أرستها في الغدد دون التضحية بالحيوان. يعيش تصوير الحيوان ويظهر SMG immunohistochemistry في ح 1 و 1 يوم بعد الحقن.
هذا تحديث واستنساخه cannulation البروتوكول ينبغي أن تمكن الآخرين من أجل تحقيق حقن ريترودوكتال. ونحن نتوقع أن يصبح هذا الأسلوب المكرر عاملاً حاسما في فيفو الدراسات والتنمية العلاجية24،25.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
كافة في فيفو الإجراءات المبينة أدناه بموافقة "اللجنة الجامعة" على "الموارد الحيوانية" في جامعة روتشستر، روتشستر، نيويورك.
1-إعداد
- استخدام أنابيب القسطرة داخل الجمجمة ز 32 مع اقحم الأسلاك، قطع 3 سم الأنابيب لتشكيل حد مشطوب الحواف، حوالي 45 درجة على محور طويل. التأكد من أن السلك أطول من الأنبوب 1 سم على الأقل.
- تحميل 50 ميليلتر من بسمة نانوحبيبات الحل (الشكل 1)، أو حقن مواد أخرى، في محقن هاملتون. لتقليل احتمالية الرضح الضغطي أثناء الحقن، إرفاق أنابيب القسطرة، مع ستيليت إزالتها، للمحاقن وطرد حجم القتلى.
- فحص الحل الحقن لضمان نانوحبيبات تماما ومذاوبة لمنع انسداد الأقنية بعد الإدارة.
- تحضير محلول الأتروبين عند 0.1 مغ/مل.
ملاحظة: نظراً لأن الأتروبين هي حساسة للضوء، ويحط على مر الزمن، هذا الحل ينبغي ي يوم الحقن، ومحمية من الضوء حتى تدار.
2-الوصول إلى وتصور نقطة دخول الأقنية
- وزن فئران C57/BL6 استخدام رصيد التحليلي.
- استخدام المحاقن 0.5 مل مع 29 x ½ "إبرة، تخدير الفئران مع إينترابيريتونيلي حقن المحلول الملحي عقيمة من 100 مغ/كغ xylazine الكيتامين و 10 مغ/كغ. للانتقال إلى الخطوة التالية عند الماوس لم يعد يستجيب للمنبهات، الذي يحدث عادة في غضون 5 إلى 10 دقيقة بعد الحقن.
ملاحظة: هذا الإجراء أيضا يمكن أداؤها تحت إيسوفلوراني، ولكن سيتطلب مخروط الآنف مخصصة التي تسمح بالوصول إلى تجويف الفم. - لمنع حدوث جفاف أثناء الإجراء، تطبيق مواد التشحيم للعيون ووضع الماوس في موقف معرضة في مرحلة مخصصة.
ملاحظة: للحفاظ على الظروف الملائمة للإجراء داخل الفم، أدوات ينبغي تطهيرها أو تعقيمها قبل كل استعمال. - فتح تجويف الفم بتأمين القواطع فكي علوي عبر شعاع معدنية، واستخدام عصابة مرنة لتطبيق التوتر النزولي خلف القواطع الفك السفلي (الشكل 2A).
- قم بمحاذاة الماوس تحت مجهر تشريح أن هو تصور قاعدة الفك.
- لتوسيع الفم، واستخدام مخصصة، منحنى ضام الصلب لتطبيق التوتر على الصعيد الثنائي للغشاء المخاطي الشدقى.
- تصور الحليمات اللهاة، فهم ورفع اللسان بلطف من الكلمة الفم باستخدام الملقط حادة.
ملاحظة: سوف تظهر نتوءات كنتوءات باهتة اثنين تحت اللسان (الشكل 2). - للتخفيف من التصور ومزيد من التلاعب داخل تجويف الفم، ضع القطن بين اللسان والغشاء المخاطي الشدقى.
3-الأقنية Cannulation وموضع الخط
- استخدام غرامة، فهم الملقط المنحنية، أنابيب القسطرة مع اقحم الأسلاك. للتحكم اليدوي الأمثل أثناء كانوليشن، محاذاة الأنبوب مع انحناء الملقط (الشكل 3A).
- باستخدام مجهر تشريح، نقل الملقط وسلك في مجال الرؤية.
ملاحظة: ينبغي أن بروز السلك من الأنبوب. - الضغط برفق في قاعدة واحدة الحليمة اللهاة باستخدام الأسلاك اقحم لإنتاج ثقب صغير، وسطحية، والأغشية المخاطية (0.076 مم) الذي سيسهل دخول لاحق من أنابيب القسطرة (0.25 مم). إذا تم مصادفة المقاومة، قص نصائح مشطوف جديدة في كل من أنابيب وأسلاك اقحم مع مقص تشريح حاد.
- عقب الدخول، سحب ستيليت، واستخدام مجهر تشريح، تأكيد وجود اللعاب في موقع الثقب. تجنب حركة قوية أو مفاجئة (أما الانسحاب أو الإدراج) من ستيليت قد يسبب نزيفا أو تعرض للخطر سلامة الأقنية.
- التراجع عن ستيليت داخل الأنابيب (الشكل 3B).
- للتأكد من أن أنابيب الحقن سوف تدخل في مجرى الهواء وارتون لفتح، إدراج الأنابيب التي تحتوي على ستيليت كدليل جامدة في ثقب تم إجراؤه من قبل (الشكل 2 ج).
ملاحظة: إذا لم تنجز بسرعة، قد تمنع تورم المحلية إعادة الإدراج. - لمنع الضغط الخلفي من انسداد الأقنية المطول، سحب الأنبوب. فحص للتأكد من أن فتحه، تظهر تحت المجهر، يتبين في الحليمة اللهاة. في حالة حدوث نزيف مرئية، إزالة ستيليت وريتيمبت من الخطوة 3.2 في الحليمات اللهاة المتعارضة.
- دون تحريك الماوس، إدارة الحقن داخل حل الأتروبين 1 مغ/كغ، لتقليل اللعاب أثناء الإجراء. انتظر 5-10 دقيقة.
- فهم نهاية الأنبوب المحاقن، وإدراج في فتحه استخدام مجهر تشريح (الشكل 3). إذا تم مصادفة المقاومة، قطع حد مشطوب الحواف طازجة إلى الأنبوب ويتم.
- مرة واحدة الأنابيب في مكان داخل الحليمة اللهاة، ببطء التقدم 3-5 ملم في القناة. الإفراج عن الأنبوب من الملقط.
- تحسين الختم بين الأنبوب والحليمة اللهاة، جاف الواجهة من النشاف برفق مع الشاش لمدة 1 دقيقة.
- فحص للتأكد من أن وضع الأنابيب لا تحول أثناء التجفيف.
4-حقن
- حقن المواد بمعدل 10 ميليلتر/دقيقة فحص للتأكد من أن الماوس لا يزال مخدراً ولا تظهر عليه بوادر للشدة (الشكل 2D).
ملاحظة: يتم أيضا التسامح مع حقن من 15-50 ميليلتر. يمكن أن يؤدي الحقن بكميات أكبر في الرضح الضغطي. - وبعد الحقن، الحفاظ على ضغط حقنه لمدة 5 دقائق لتحسين الاحتفاظ بالمواد داخل مجرى الهواء في وارتون و SMG (الشكل 4). فحص الحليمة اللهاة بشكل دوري التأكد من أن الأنابيب عدم الخروج من الفوهة الأقنية.
- استخدام الملقط غرامة، فهم وسحب الأنبوب بلطف من الحليمات اللهاة.
ملاحظة: من الطبيعي أن نلاحظ بعض خروج السائل من الحليمات. - إزالة ضام والقطن من تجويف الفم قبل تحريك الماوس من المرحلة.
ملاحظة: هذا الحيوان لا ينبغي أن تترك غير المراقب حتى قد وعيه كافية للحفاظ على ريكومبينسي القصية. وعلاوة على ذلك، تأكد من أن الماوس لا يقع مع الفئران الأخرى حتى شُفي تماما.
5-التحقق والتحليل
ملاحظة: في فيفو نظام التصوير (إيفيس) يمكن أن تستخدم لتقييم الاحتفاظ بجسيمات نانوية المسمى فلوريسسينتلي بعد الحقن (كما هو مبين ح 1 و 24 ساعة بعد الحقن في الشكل 5).
- أفضل تصور إشارة مضيئة داخل إس أم جي عن طريق الجلد، إزالة الفراء البطني تغمر جيه أما بالحلاقة أو استخدام مزيل الشعر كيميائية.
ملاحظة: في أعقاب القتل الرحيم، SMG الأنسجة يمكن أيضا أن تحصد ثابتة (بين عشية وضحاها في بارافورمالدهيد 4 ٪) والملون باستخدام إيمونوهيستوتشيميستري للتأكد من استمرار وجود NP المسمى فلوريسسينتلي يوم واحد عقب الحقن (الشكل 6).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
يمكن استخدام حقن ريترودوكتال لإدارة مصادر القدرة النووية إلى SMG مورين (الشكل 1). هنا، نحن نقدم 50 ميكروغرام "بسمة لأمان" المسمى مع فلوروفوري "الأحمر تكساس".
يسمح الموضع الصحيح للماوس سهلة الوصول والتصور للكلمة الفم (الشكل 2 أ-ب). يتم تعريف الحليمات اللهاة كنتوءات سمين اثنين تحت اللسان. وبعد كانوليشن (الشكل 2) وحقن الأتروبين، يمكن وضع أنابيب الحقن إلى الحليمات اللهاة (الشكل 2D).
لتسهيل كانوليشن، ثقب صغير في الحليمة اللهاة أولاً باستخدام ستيليت الأسلاك داخل أنابيب القسطرة (الشكل 3A). بمجرد القيام بذلك، ينبغي أن تراجع في ستيليت داخل الأنابيب لتكون بمثابة دليل جامدة بينما تتم افتتاح أكبر (الشكل 3B). ستيليت التي يبلغ قطرها مم 0.076، في حين أنابيب القسطرة قطر خارجي من 0.25 مم. بعد إنشاء هذا الانفتاح الأكبر، القسطرة قبل تحميلها الأنابيب، تعلق بحقنه الحقن، يمكن ثم الاسترشاد في الفوهة الأقنية (الشكل 3).
بعد الحقن، من المستحسن أن تكون معطلة المحاقن والإبقاء على الضغط الحقن. إذا لم يتم تطبيق الضغط، يكون التسليم الناجح، أن كان ذلك مع أقل كفاءة وإمكانية تكرار نتائج. ويتجلى هذا الحقن 50 ميليلتر من صبغة أزرق تولويدين 1% على المستوى الثنائي ومراقبة تلطيخ خفوتا في الغدة دون الحفاظ على الضغط بعد الحقن (الشكل 4).
للتحقق من إيصال NP، يمكن استخدامها في إيفيس للكشف عن إشارة مضيئة داخل الماوس، والذي هو لاتيراليزيد إلى حقن المنطقة ح 1 وظيفة الإدارة (الشكل 5). هذا النهج يمكن التأكيد دون يوثانيزينج الماوس، ويمكن أن تستمر طوليا حتى إشارة لم يعد يمكن كشفها26،27.
لتأكيد استمرار الحزب الوطني في الحقن التالية ح 24 إس أم جي، الغدد يمكن مقطوع، وعرضها من قبل تصوير فلوري. Aqp5 والمدينة Krt5 مارك الخلايا الافرازية والأقنية من SMG، على التوالي، وإظهار القدرة في كل الأقسام (الشكل 6).
الشكل 1 . رجعي حقن التخطيطي. عقب cannulation الأقنية وموضع الحقن، يتم حقن 50 ميليلتر من 1 ملغ/مل البوليمرية NP الحل إلى إس أم جي. يظهر الممثل انتقال إلكترون صورة مجهرية (TEM) مونوديسبيرسي (مؤشر polydispersity = 0.2) السكان NP. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 2 . الوراء خطوات الحقن. (أ) الوصول إلى تجويف الفم بفصل القواطع فكي علوي والفك السفلي. (ب) تصور الحليمات (محاصر) تحت اللسان في أرضية الفم، والذي وضع علامة على موقع مجرى الهواء في وارتون. (ج) استخدام قسطرة مع اقحم الأسلاك، كانولاتي برفق قاعدة الحليمة اللهاة. (د) وعقب كانوليشن، أنابيب القسطرة يمكن تبادلها مع أنابيب حقنه الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3 . فعالة لتحديد المواقع القسطرة وستيليت لمجرى هواء كانوليشن في وارتون. (أ) محاذاة الأنبوب مع انحناء الملقط، وخفض حد مشطوب الحواف على الأنابيب والأسلاك للثقب في البداية الحليمة تحت اللسان. (ب) سحب ستيليت داخل الأنبوب لجعل دليل جامدة لإدراج الأنبوب داخل الحليمة تحت اللسان. (ج) إدراج أنابيب القسطرة (ستيليت إزالة)، انضم إلى حقن حقنه، داخل الفوهة تم إجراؤه من قبل. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 4 . الاحتفاظ بحقنه الضغط التالية الحقن يحسن الاحتفاظ بالمواد- عقب حقن ريترودوكتال 50 ميليلتر من 1% تولويدين الأزرق، أما الإبقاء على الضغط حقنه لمدة 5 دقائق (حق إس أم جي-حقن الأولى) أو المحاقن سحبت فورا بعد الحقن (يسار إس أم جي-الحقنة الثانية). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 5 . تأكيدا للحقن بعد التسليم ريترودوكتال NP. (أ) في فيفو التصوير النظام (إيفيس) يظهر lateralization إشارة الفلورسنت الأحمر إلى جانب الحقن وظيفة الماوس ح 1 (يسار) المعالجة. (ب) إشارة إيفيس NP في 24 ساعة انخفض إلى حد كبير. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الرقم 6 . تأكيدا لاستمرار ريترودوكتال NP ح 24 وظيفة حقن. أ، ج. التحكم أونينجيكتيد SMG الملون ل Aqp5 و Krt5، وسم افرازية خلايا أسينار والأقنية، على التوالي. ب، د. في ريترودوكتال حقن NP SMG، وتظهر البقع Aqp5 و Krt5 مورفولوجية الغدة طبيعية ومصادر القدرة النووية في كل من أسيني ومجاري (مقياس أشرطة: 75 ميكرون). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
حقن ريترودوكتال أمر حاسم لإيصال الأدوية مترجمة إلى الغدة اللعابية. هذا الأسلوب له تطبيقات في فحص العوامل العلاجية للشروط بما في ذلك متلازمة شيغرن وهيام9،10،28. إيصال الأدوية مباشرة إلى إس أم جي عن طريق الحقن ريترودوكتال يوفر ميزة رئيسية على الإدارة النظامية في قدرتها على الحد من آثار خارج الهدف، بما في ذلك تنشيط محصنة ضد11. يمكنك أيضا تمكين القدرة على تحقيق أقصى قدر من إيصال الأدوية المحلية، دون تراكم في الأنسجة المحيطة التجارب العلاجية في مجموعة جرعة أوسع مما يمكن تحقيقه النظامية.
ونحن حاليا هذا البروتوكول، مع استكشاف الأخطاء وإصلاحها ونوعية تحقق الخطوات، كطريقة مفصلة ومحدثة لتسليم المواد البوليمرية متناهية الصغر عن طريق قناة وارتون في ل إس أم جي مورين20. على سبيل المثال، الاستخدام السليم لدليل سلك يسهل وضع قنية. وعلاوة على ذلك، باستخدام النشاف الجاف بدلاً من الغراء cyanoacrylate عقد القنية في مكانها أثناء الحقن، يتم تصغير خطر الصدمات المخاطية. هذا الأسلوب يمكن أن تستخدم لعلاج فئران مع مجموعة من المركبات، ويمكن أن يؤديها على مدى عدة أيام مع الماوس نفسها لتقييم تيميكورسي للإدارة تكرار11.
إفراز الغدة الطبيعي سيوفر إليه إزالة بسيط ومباشر للحمولة الزائدة، وعلى الرغم من أن هذه الاستراتيجية ينبغي أن يكون الأمثل لمختلف التطبيقات بالتحديد الدقيق لحقن مادة والمعايرة لجرعات الأتروبين. وفي هذه الحالة، تستمر NPs في إس أم جي لمالا يقل عن 24 ساعة. باستخدام مصادر الطاقة النووية قادرة على تحميل المخدرات أو المواد النانوية مماثلة، التطبيقات المستقبلية لهذا العمل وتشمل التغلب على حد الذوبان وإلا يحول دون اختبار وكلاء مسعور مع حقن ريترودوكتال20،21.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
Acknowledgments
البحث عنها في هذا المنشور أيده "المعهد الوطني للأسنان" والجمجمة البحوث (NIDCR) ومعهد السرطان الوطني (NCI) من "معاهد الصحة الوطنية في" إطار جائزة عدد R56 DE025098 و UG3 DE027695 و F30 CA206296. المحتوى هي المسؤولة الوحيدة عن المؤلفين ولا تمثل بالضرورة وجهات النظر الرسمية "المعاهد الوطنية للصحة". كما أيد هذا العمل 1206219 هيئة الهجرة واللاجئين في جبهة الخلاص الوطني والابتكار IADR في "منح الرعاية عن طريق الفم" (2016).
نود أن نشكر جافريتي جين لمساعدتها في إجراء تجارب إيفيس. نود أن نشكر بنتلي كارين للمدخلات والمساعدة في أداء م. نود أن نشكر "ونغ" Lun بي لمساعدته مع المدينة. نود أن نشكر اينغلس ماثيو لمساعدته في إعداد الشكل. ونود أن نشكر الدكتور الين سمولوك واميلي وو لقراءة نقدية لهذه المخطوطة.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Pilocarpine hydrochloride | Sigma Aldrich | P6503 | Pilocarpine |
| Student Vannas Spring Scissors | Fine Science Tools | 91500-9 | Spring Scissors for Tracheostomy |
| Sterile Saline Solution | Medline | RDI30296H | Saline |
| Dumont #7 Forceps | Fine Science Tools | 11274-20 | Curved Forceps |
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools | 11251-10 | Straight Forceps |
| Standard Pattern Forceps | Fine Science Tools | 11000-12 | Blunt Forceps |
| Fine Scissors- Tungsten Carbide | Fine Science Tools | 14568-09 | Dissection Scissors |
| Microhematocrit Heparinized Capillary Tubes | Fisher Scientific | 22362566 | Capillary tubes |
| Lubricant Eye Ointment | Refresh | N/A | Refresh Lacri-Lube |
| Goat polyclonal anti-Nkcc1 | Santa Cruz Biotech | SC-21545 | Nkcc1 Antibody |
| DAPI (4',6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride) | Thermo Fisher Scientific | D1306 | DAPI |
| GraphPad Prism | GraphPad | ver6.0 | Statistical Software |
| Cotton tipped applicator | Medline | MDS202000 | Applicator for eye ointment |
| 0.5cc Insulin Syringe, 29G x 1/2" | BD | 7629 | Syringe for intraperitoneal injection |
References
- Miranda-Rius, J., Brunet-Llobet, L., Lahor-Soler, E., Farre, M. Salivary Secretory Disorders, Inducing Drugs, and Clinical Management. International Journal Of Medical Sciences. 12 (10), 811-824 (2015).
- Acauan, M. D., Figueiredo, M. A. Z., Cherubini, K., Gomes, A. P. N., Salum, F. G. Radiotherapy-induced salivary dysfunction: Structural changes, pathogenetic mechanisms and therapies. Archives of Oral Biology. 60 (12), 1802-1810 (2015).
- Dirix, P., Nuyts, S., Vander Poorten, V., Delaere, P., Van den Bogaert, W. The influence of xerostomia after radiotherapy on quality of life. Supportive Care in Cancer. 16 (2), 171-179 (2008).
- Vissink, A., et al. Clinical management of salivary gland hypofunction and xerostomia in head-and-neck cancer patients: successes and barriers. International Journal of Radiation Oncology Biology Physics. 78 (4), 983-991 (2010).
- Delporte, C., et al. Increased fluid secretion after adenoviral-mediated transfer of the aquaporin-1 cDNA to irradiated rat salivary glands. Proceedings of the National Academy of Sciences. 94 (7), 3268-3273 (1997).
- Samuni, Y., Baum, B. J. Gene delivery in salivary glands: from the bench to the clinic. Biochimica et Biophysica Acta. 1812 (11), 1515-1521 (2011).
- Beahm, D. D., et al. Surgical approaches to the submandibular gland: A review of literature. International Journal of Surgery. 7 (6), 503-509 (2009).
- Zheng, C., Shinomiya, T., Goldsmith, C. M., Di Pasquale, G., Baum, B. J. Convenient and reproducible in vivo gene transfer to mouse parotid glands. Oral diseases. 17 (1), 77-82 (2011).
- Zheng, C., et al. Prevention of Radiation-Induced Salivary Hypofunction Following hKGF Gene Delivery to Murine Submandibular Glands. Clinical Cancer Research. 17 (9), 2842-2851 (2011).
- Okazaki, Y., et al. Acceleration of rat salivary gland tissue repair by basic fibroblast growth factor. Archives of Oral Biology. 45 (10), 911-919 (2000).
- Arany, S., Benoit, D. S., Dewhurst, S., Ovitt, C. E. Nanoparticle-mediated gene silencing confers radioprotection to salivary glands in vivo. Molecular Therapy. 21 (6), 1182-1194 (2013).
- Cotrim, A. P., Sowers, A., Mitchell, J. B., Baum, B. J. Prevention of irradiation-induced salivary hypofunction by microvessel protection in mouse salivary glands. Molecular Therapy. 15 (12), 2101-2106 (2007).
- Redman, R. S., Ball, W. D., Mezey, E., Key, S. Dispersed donor salivary gland cells are widely distributed in the recipient gland when infused up the ductal tree. Biotechnic & Histochemistry. 84 (6), 253-260 (2009).
- Grundmann, O., Fillinger, J. L., Victory, K. R., Burd, R., Limesand, K. H. Restoration of radiation therapy-induced salivary gland dysfunction in mice by post therapy IGF-1 administration. BMC Cancer. 10, 417-417 (2010).
- Limesand, K. H., et al. Insulin-Like Growth Factor-1 Preserves Salivary Gland Function After Fractionated Radiation. International Journal of Radiation Oncology Biology Physics. 78 (2), 579-586 (2010).
- Marmary, Y., et al. Radiation-induced loss of salivary gland function is driven by cellular senescence and prevented by IL-6 modulation. Cancer Research. , (2016).
- Baum, B. J., et al. Early responses to adenoviral-mediated transfer of the aquaporin-1 cDNA for radiation-induced salivary hypofunction. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (47), 19403-19407 (2012).
- Arany, S., et al. Pro-apoptotic gene knockdown mediated by nanocomplexed siRNA reduces radiation damage in primary salivary gland cultures. Journal of Cellular Biochemistry. 113 (6), 1955-1965 (2012).
- Benoit, D. S. W., Henry, S. M., Shubin, A. D., Hoffman, A. S., Stayton, P. S. pH-responsive polymeric siRNA carriers sensitize multidrug resistant ovarian cancer cells to doxorubicin via knockdown of polo-like kinase 1. Molecular pharmaceutics. 7 (2), 442-455 (2010).
- Malcolm, D. W., Varghese, J. J., Sorrells, J. E., Ovitt, C. E., Benoit, D. S. W. The Effects of Biological Fluids on Colloidal Stability and siRNA Delivery of a pH-Responsive Micellar Nanoparticle Delivery System. ACS Nano. , (2017).
- Baranello, M. P., Bauer, L., Benoit, D. S. Poly(styrene-alt-maleic anhydride)-based diblock copolymer micelles exhibit versatile hydrophobic drug loading, drug-dependent release, and internalization by multidrug resistant ovarian cancer cells. Biomacromolecules. 15 (7), 2629-2641 (2014).
- Wang, Y., et al. Fracture-Targeted Delivery of β-Catenin Agonists via Peptide-Functionalized Nanoparticles Augments Fracture Healing. ACS Nano. 11 (9), 9445-9458 (2017).
- Baranello, M. P., Bauer, L., Jordan, C. T., Benoit, D. S. W. Micelle Delivery of Parthenolide to Acute Myeloid Leukemia Cells. Cellular and Molecular Bioengineering. 8 (3), 455-470 (2015).
- Kuriki, Y., et al. Cannulation of the Mouse Submandibular Salivary Gland via the Wharton's Duct. Journal of Visualized Experiments. (51), e3074 (2011).
- Nair, R. P., Zheng, C., Sunavala-Dossabhoy, G. Retroductal Submandibular Gland Instillation and Localized Fractionated Irradiation in a Rat Model of Salivary Hypofunction. Journal of Visualized Experiments. (110), (2016).
- Wang, Y., Malcolm, D. W., Benoit, D. S. W. Controlled and sustained delivery of siRNA/NPs from hydrogels expedites bone fracture healing. Biomaterials. 139 (Supplement C), 127-138 (2017).
- Hoffman, M. D., Van Hove, A. H., Benoit, D. S. W. Degradable hydrogels for spatiotemporal control of mesenchymal stem cells localized at decellularized bone allografts. Acta Biomaterialia. 10 (8), 3431-3441 (2014).
- Nguyen, C. Q., Yin, H., Lee, B. H., Chiorini, J. A., Peck, A. B. IL17: potential therapeutic target in Sjogren's syndrome using adenovirus-mediated gene transfer. Laboratory Investigation. 91 (1), 54-62 (2011).
