Summary
Lokalen Drug-Delivery, die submandibulären Drüsen ist Interesse an Verständnis Speicheldrüse Biologie und für die Entwicklung neuer Therapeutika. Wir präsentieren Ihnen eine aktualisierte und detaillierte Retroductal Injektion Protokoll, entworfen, um Lieferung Genauigkeit und experimentelle Reproduzierbarkeit zu verbessern. Die enthaltenen Anwendung ist die Lieferung von Polymeren Nanopartikel.
Abstract
Zwei gemeinsame Ziele der Speicheldrüse Therapeutika sind Vorbeugung und Heilung von Gewebe Dysfunktion nach entweder autoimmune oder Strahlung Verletzung. Durch die Bereitstellung von bioaktiver Verbindungen, die lokal auf die Speicheldrüsen, können mehr Gewebe Konzentrationen sicher im Vergleich zu systemischen Verabreichung erreicht werden. Darüber hinaus können Effekte aus extra glanduläre Anhäufung von Material aus Zielgewebe drastisch reduziert werden. In diesem Zusammenhang ist Retroductal Injektion eine weit verbreitete Methode für die Untersuchung von Speicheldrüse Biologie und Pathophysiologie. Retroductal Gabe von Wachstumsfaktoren, Primärzellen, adenovirale Vektoren und niedermolekulare Medikamente hat sich gezeigt, zur Unterstützung der Drüse Funktion in der Umgebung der Verletzung. Wir haben zuvor gezeigt, die Wirksamkeit einer Retroductally eingespritzt Nanopartikel-SiRNA Strategie zur Drüse Funktion nach Bestrahlung aufrecht zu erhalten. Hier ist eine sehr effektive und reproduzierbare Methode Nanomaterialien an der murinen mandibulären Drüse durch Wharton Leitung Verwaltung detailliert (Abbildung 1). Wir beschreiben den Zugriff auf die Mundhöhle und die notwendigen Schritte zur cannulate Wharton gelegt werden, mit weiteren Beobachtungen dienen als Qualitätskontrollen während des Verfahrens zu skizzieren.
Introduction
Speicheldrüse Dysfunktion hat viele Ursachen, einschließlich Sjögren Syndrom, eine Autoimmun vermittelte Verlust von sekretorischen Funktionsgewebe und Strahlung induzierte endodontischen (RIH), eine gemeinsame Sequella von Kopf und Nacken Krebs Strahlentherapie1. Speichel Funktionsverlust aufgrund entweder Bedingung prädisponiert zu mündlichen und systemische Infektion, Karies, Verdauungs- und schlucken Dysfunktion, Sprachstörungen und schweren Depressionen1,2,3Personen. Infolgedessen leidet der Lebensqualität erheblich, mit Interventionen zur Linderung der Symptome, anstatt Heilung4begrenzt. Um neuartige Therapien in Vivozu untersuchen, ist es von Interesse, bioaktive Verbindungen, die direkt auf die Speicheldrüse zu verwalten.
Retroductal Injektion ist eine wertvolle Methode, um liefern bioaktive Verbindungen direkt an die Speicheldrüsen und die Wirksamkeit zu testen, bei Krankheit, Verletzung, oder unter normalem Gewebe Homöostase. Die drei großen Speicheldrüsen sind der Parotis (PG), der mandibulären (SMG) und der Sublingual (SLG), alle welche leer in die Mundhöhle durch Ausscheidungsorgane Kanäle. Die Anatomie der Murine SMG ermöglicht direkten Zugang durch Kanülierung der Wharton Kanal, befindet sich in dem Boden der Mundhöhle unter der Zunge5. Anschluss an die Kanülierung SOLVATISIERTE Drogen kann direkt an die SMG verabreicht werden. Nach Retroductal Lieferung beschränkt sich extra glanduläre Diffusion durch die umliegenden Gewebe Kapsel regelt den Austausch von Material mit den umliegenden Strukturen6. Die SMG seinen Kanal sind beim Menschen ähnlich strukturiert und werden routinemäßig bei SMG Chirurgie und Sialoendoscopy7aufgerufen. In Mensch und Maus ist das PG ebenfalls über Stensen Rohr in die bukkale Schleimhaut8erreichbar.
In murinen Modellen der RIH wurde SMG Retroductal Injektion zur liefern Therapeutika wie Wachstumsfaktoren, Primärzellen, adenovirale Vektoren, Zytokine und antioxidativen Verbindungen zu modulieren die zelluläre Reaktion auf eine Verletzung, und reduzieren Sie die daraus resultierenden Gewebe Schaden5,9,10,11,12,13,14,15,16. Die wichtigste klinische Erfolg Retroductal Injektion ist die Verwaltung von adenoviralen Vektor direkten Ausdruck von einem Wasserkanal (Aquaporin-1; AQP1) bei Patienten nach der Strahlentherapie bei Kopf-Hals-Krebs-17.
Zuvor haben wir entwickelt und gezeigt, die Wirksamkeit eines Retroductally injiziert Polymeren Nanopartikel-SiRNA-Systems zum Schutz der Speicheldrüse Funktion von RIH11,18,19,20. Als Erweiterung unserer bisherigen Arbeit zeigen hier, wir, unser Protokoll für Retroductal SMG Injektion mittels eindringmittel beschrifteten Nanopartikel (NP) laden und liefern sonst schwerlösliche21,22, Medikamente 23.
Wir haben die NP aus einem Diblock Copolymers bestehend aus Poly (Styrol-Alt-Maleinsäure anhydride)-b-poly(styrene) (PSMA) durch reversible Addition Kette Fragmentierung (FLOß) Polymerisation, wie zuvor beschrieben21. synthetisiert. Durch lösungsmittelaustausch zusammensetzen selbst dieser Polymere spontan in Micelle NP Strukturen mit einem hydrophoben innen- und hydrophilen außen21. Die NPs sind mit Texas-rot Fluorophore, die Überprüfung der NP-Lieferung in den Drüsen zu gestatten, ohne das Tier gekennzeichnet. Live Animal Imaging und SMG Immunohistochemistry zeigt sich bei 1 h und 1 Tag nach der Injektion.
Dies aktualisiert und reproduzierbare Kanülierung Protokoll sollte damit andere Retroductal Injektion zu erreichen. Wir erwarten, dass diese raffinierte Technik für in Vivo Studien und therapeutische Entwicklung24,25von entscheidender Bedeutung.
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Protocol
Alle in-Vivo -Verfahren unten beschriebenen stimmten die Universität vom Tier Ressourcen an der University of Rochester, Rochester, NY.
1. Vorbereitung
- Schneiden Sie 32G intrakraniellen Katheter Schlauch mit Draht 3 cm des Schlauches eine abgeschrägte Ende, ca. 45° zur Längsachse zu bilden. Bestätigen Sie, dass der Draht mindestens 1 cm länger als die Röhre.
- Laden Sie 50 µL PSMA Nanopartikel Lösung (Abbildung 1), oder einem anderen Injektionsmaterial in eine Hamilton-Spritze. Verringerung der Wahrscheinlichkeit von Barotrauma beim Einspritzen, befestigen Sie den Katheter Schlauch mit der Mandrin entfernt, an der Spritze und vertreiben Sie Totvolumen zu.
- Überprüfen Sie die Injektionslösung um sicherzustellen, dass die Nanopartikel voll SOLVATISIERTE duktale Behinderung nach der Verabreichung zu verhindern ist.
- Bereiten Sie Atropin Lösung 0,1 mg/ml.
Hinweis: Da Atropin lichtempfindlich ist und nimmt im Laufe der Zeit, diese Lösung sollte am Tag der Injektion, und lichtgeschützt bis verabreicht.
(2) den Zugriff auf und Visualisieren von duktalen Einstiegspunkt
- Wiegen Sie C57/BL6 Mäuse mit einer Analysenwaage.
- Mit einer 0,5 mL Spritze mit 29 x ½" Nadel, Betäuben Sie Mäuse mit einem intraperitoneal injizierten steriler Kochsalzlösung von 100 mg/kg Ketamin und 10 mg/kg Xylazin. Fahren Sie mit dem folgenden Schritt fort, wenn die Maus reagiert nicht mehr auf Reize, die in der Regel innerhalb von 5 bis 10 min nach der Injektion auftritt.
Hinweis: Dieses Verfahren auch unter Isofluran durchgeführt werden, sondern erfordert eine benutzerdefinierte bugnase, die Zugriff auf die Mundhöhle ermöglicht. - Um Trockenheit während des Verfahrens zu verhindern, gelten Sie Schmiermittel für Augen und platzieren Sie den Mauszeiger in Bauchlage auf einer benutzerdefinierten Bühne.
Hinweis: Um angemessene Bedingungen für Intra-orale Verfahren beizubehalten, Werkzeuge sollten nicht desinfiziert oder vor jedem Gebrauch sterilisiert. - Öffnen der Mundhöhle durch die Sicherung der Oberkiefer-Schneidezähne über einen metallischen Strahl, und verwenden Sie eine elastisches Band, nach unten gerichtete Spannung hinter den Unterkiefer Schneidezähne (Abbildung 2A) anzuwenden.
- Richten Sie die Maus unter dem sezierenden Mikroskop, so dass die Unterseite des Kiefers visualisiert wird.
- Um den Mund zu verbreitern, verwenden Sie einen benutzerdefinierte, geschwungenen Stahl Retraktor Spannung die bukkale Schleimhaut auf bilateraler Ebene zuweisen.
- Um die submandibulären Papillen zu visualisieren, greifen Sie und heben Sie vorsichtig die Zunge aus dem Boden der Mundhöhle mit stumpfen Pinzette.
Hinweis: Die Papillen erscheinen als zwei blasse Ausbuchtungen unter der Zunge (Abb. 2 b). - Um die Visualisierung und weitere Manipulation in der Mundhöhle zu erleichtern, legen Sie Baumwolle zwischen der Zunge und die bukkale Schleimhaut.
(3) duktale Kanülierung und Linie Platzierung
- Mit feinen, greifen gebogenen Pinzette Katheter Schlauch mit der Draht-Einschub. Richten Sie für eine optimale manuelle Steuerung während Kanülierung den Schlauch mit der Krümmung der Zange (Abb. 3A).
- Bewegen Sie mit dem sezierenden Mikroskop die Zange und Draht in das Blickfeld.
Hinweis: Das Kabel sollte aus den Rohren herausragt. - Sanft Druck in den unteren Teil einer mandibulären Papille mit dem Draht eingelassen um eine kleine, oberflächlich, Schleimhaut Punktion (0,076 mm Durchmesser) zu produzieren, die später den Katheter Schlauch (0,25 mm Durchmesser) ermöglichen wird. Wenn Widerstand gestoßen ist, schneiden Sie frische abgeschrägte Tipps, Schläuche und Kabel Einschub mit scharfen sezierenden Schere.
- Zurückziehen Sie nach dem Einstieg der Mandrin, und bestätigen Sie das sezierenden Mikroskop das Vorhandensein von Speichel auf die Einstichstelle. Vermeiden Sie kraftvoll oder plötzliche Bewegung (Rückzug oder einfügen) der das Stilett, das möglicherweise dazu führen, dass Blutungen oder duktale Integrität.
- Ziehen Sie das Stilett innerhalb der Schläuche (Abb. 3 b).
- Um sicherzustellen, dass die Injektion Schläuche in Wharton Kanal öffnen passt, legen Sie Schläuche, enthält das Stilett als starre Leitfaden in der zuvor erstellten Punktion (Abbildung 2 C).
Hinweis: Wenn nicht rasch durchgeführt werden, kann lokale Schwellung Wiedereinfügen verhindern. - Um Gegendruck von längeren duktale Obstruktion zu verhindern, zurückziehen der Schläuche. Überprüfen Sie um sicherzustellen, dass eine Öffnung, unter Mikroskopie, sichtbar in der mandibulären Papille gesehen werden kann. Wenn sichtbare Blutung auftritt, entfernen Sie das Stilett und erneut ab Schritt 3.2 auf der gegnerischen mandibulären Papillen.
- Verwalten Sie, ohne die Maus zu bewegen, intraperitoneale Injektion von 1 mg/kg Atropin Lösung, Speichelfluss während des Verfahrens zu reduzieren. Warten Sie ca. 5-10 Minuten.
- Fassen Sie das Ende der Spritze Schlauch, und legen Sie in der Öffnung das sezierenden Mikroskop (Abbildung 3). Wenn Widerstand gestoßen ist, schneiden Sie eine frischen abgeschrägte Ende Schlauch und Reattempt.
- Sobald der Schlauch innerhalb der mandibulären Papille ist, langsam vorwärts 3-5 mm in den Kanal. Lassen Sie den Schlauch aus der Zange.
- Um die Dichtung zwischen der Rohrleitung und der mandibulären Papille zu verbessern, trocknen Sie die Schnittstelle durch sanft abtupfen mit Gaze für 1 min.
- Überprüfen Sie um sicherzustellen, dass die Position des Schlauches während der Trocknung nicht verschoben hat.
4. Injektion
- Material mit einer Rate von 10 µL/min. Inspect zu bestätigen, dass die Maus sediert bleibt und keine Zeichen der Bedrängnisses (Abb. 2D zeigt) zu injizieren.
Hinweis: Injektionen von 15-50 µL sind gut verträglich. Injektion von größeren Mengen kann Barotrauma führen. - Behalten Sie im Anschluss an die Injektion Spritze Druck für 5 min um die Beibehaltung des Materials innerhalb Whartons Luftkanal und SMG (Abbildung 4) zu verbessern. Überprüfen Sie die submandibulären Papille regelmäßig, um sicherzustellen, dass die Schläuche die ductal Öffnung nicht beendet wird.
- Mit feinen Pinzette, fassen und vorsichtig den Schlauch vom mandibulären Papillen zurücktreten.
Hinweis: Es ist normal, einige Flüssigkeit Austritt aus den Papillen zu beobachten. - Entfernen Sie die Aufrollvorrichtung und Baumwolle aus der Mundhöhle vor dem Bewegen der Maus von der Bühne.
Hinweis: Das Tier sollte nicht unbeaufsichtigt gelassen werden bis es ausreichend Bewusstsein zur Aufrechterhaltung der sternalen liegen wiedererlangt hat. Darüber hinaus stellen Sie sicher, dass die Maus nicht mit anderen Mäusen bis vollständig erholt untergebracht ist.
5. Überprüfung und Analyse
Hinweis: Eine in-Vivo Imaging System (IVIS) kann verwendet werden zur Aufbewahrung von eindringmittel beschrifteten Nanopartikel nach Injektion (wie gezeigt 1 h und 24 h nach der Injektion in Abbildung 5) zu beurteilen.
- Um Fluoreszenzsignal innerhalb der SMG durch die Haut sichtbar zu machen, entfernen Sie das ventrale Fell über die SMGs entweder durch rasieren oder mit einem chemischen Enthaarungsmittel.
Hinweis: Nach Euthanasie, SMG Gewebe kann auch geerntet werden, wurde behoben (Übernachtung in 4 % Paraformaldehyd) und gebeizt verwenden Immunohistochemistry zur Bestätigung der Persistenz von eindringmittel beschrifteten NP einen Tag nach der Injektion (Abbildung 6).
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Representative Results
Retroductal Injektion einsetzbar, NPs auf der murinen SMG (Abbildung 1) zu verwalten. Hier liefern wir 50 µg PSMA NPs mit Texas Red Fluorophore beschriftet.
Die richtige Platzierung der Maus ermöglicht einfachen Zugang und Visualisierung von dem Boden der Mundhöhle (Abbildung 2A-B). Die submandibulären Papillen sind als zwei fleischigen Ausbuchtungen unter der Zunge gekennzeichnet. Im Anschluss an die Kanülierung (Abbildung 2) und Atropin Injektion kann Spritze Schlauch in die submandibulären Papillen (Abb. 2D) platziert werden.
Zur Erleichterung der Kanülierung erfolgt eine kleine Panne in der mandibulären Papille zunächst über die Draht-Mandrin innerhalb der Katheter Schlauch (Abb. 3A). Sobald dies erledigt ist, sollte der Mandrin zurückgezogen werden, innerhalb der Schläuche, als eine starre Führung zu dienen, während eine größere Öffnung (Abb. 3 b) gebildet wird. Das Stilett hat einen Durchmesser von 0,076 mm, während der Katheter Schlauch einen Außendurchmesser von 0,25 mm hat. Nach der Errichtung dieses größere Öffnung kann die vorinstallierte Katheter, Schläuche, befestigt an der Injektionsspritze dann in der ductal Öffnung (Abbildung 3) geführt werden.
Nach der Injektion es wird empfohlen, die Spritze immobilisiert werden und Einspritzdruck gepflegt. Wenn der Druck nicht angewendet wird, werden Lieferung erfolgreich, wenn auch mit weniger Effizienz und Reproduzierbarkeit. Dies zeigt sich durch die Injektion von 50 µL 1 % Toluidin blauer Farbstoff bilateral und Einhaltung schwächere Färbung in der Drüse gepflegt drucklos nach der Injektion (Abbildung 4).
Überprüfen Sie NP-Lieferung, lässt die IVIS Fluoreszenzsignal innerhalb der Maus, zu erkennen, die der injizierten Region 1 h Post Verwaltung (Abbildung 5) lateralisierten ist. Dieser Ansatz ermöglicht die Bestätigung ohne euthanizing die Maus und längs bis Signal nicht mehr nachweisbar26,27fortgesetzt werden kann.
Um NP Persistenz in der SMG 24 h folgende Injektion zu bestätigen, können durch Fluoreszenz-Bildgebung Drüsen geschnitten, und betrachtet werden. Aqp5 und Krt5 IHC sekretorische und duktale Zellen von der SMG bzw. Markieren, und zeigen NPs in beiden Fächern (Abbildung 6).
Abbildung 1 . Retrograde Injektion schematische. Nach duktale Kanülierung und Spritze Platzierung ist der SMG 50 µL Polymeren NP-Lösung 1 mg/mL injiziert. Repräsentative Transmission Electron Schliffbild (TEM) zeigt Monodisperse (Polydispersität Index = 0,2) NP Bevölkerung. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 2 . Retrograde Injektion Schritte. (A) Zugang der Mundhöhle durch die Trennung der Oberkiefer und Unterkiefer Schneidezähne. Visualisieren Sie (B) die Papillen (boxed) unter die Zunge auf dem Boden der Mundhöhle, die markieren den Standort der Wharton Kanal. Cannulate (C) mit einem Katheter mit Draht eingelegten, sanft die Basis der mandibulären Papille. (D) nach Kanülierung, der Katheter Schlauch ausgetauscht werden mit Spritze Schlauch Klicken Sie bitte hier, um eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 3 . Effektive Positionierung der Katheter und Mandrin für Wharton Kanal Kanülierung. (A) richten Sie den Schlauch mit der Krümmung der Zange und schneiden Sie eine abgeschrägte Ende auf Schläuche und Kabel, um zunächst die sublinguale Papille Punktion. Zurückziehen Sie (B) , das Stilett innerhalb der Schläuche, eine starre Anleitung zum Einfügen des Schlauch innerhalb der sublingualen Papille zu machen. Einfügen Sie (C) Katheter Schlauch (Mandrin entfernt), mit Injektionsspritze, innerhalb der zuvor gemachte Öffnung verbunden. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 4 . Pflege Spritze Druck folgenden Injektion verbessert materielle Aufbewahrung. Nach Retroductal Injektionen von 50 µL 1 % Toluidin blau Spritze Druck blieb entweder für 5 min (rechts SMG - ersten Injektion) oder die Spritze wurde unmittelbar nach der Injektion (Links SMG - zweite Injektion) zurückgezogen. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 5 . Bestätigung der Lieferung Post Injektion Retroductal NP. (A) In vivo Imaging System (IVIS) zeigt die Lateralisierung des roten Fluoreszenzsignal auf die behandelten (linken) Seite der Maus 1 h Post Injektion. (B) NP IVIS Signal bei 24 h hat sich deutlich verringert. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 6 . Bestätigung der Retroductal NP Persistenz 24 h Post Injektion. A, C. Uninjected Kontrolle gebeizt SMG für Aqp5 und Krt5, Markierung sekretorischen acinar und duktale Zellen, beziehungsweise. B, D. In Retroductal NP injiziert SMG, Aqp5 und Krt5 Flecken zeigen normale Drüse Morphologie und NPs in Azini und Kanälen aufgegriffen (Skalieren Bars: 75 µm). Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
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Discussion
Retroductal Injektion ist entscheidend für lokalisierte Drug-Delivery, die Speicheldrüse. Diese Technik findet Anwendung in screening-Therapeutika für Bedingungen einschließlich der Sjögren-Syndrom und RIH9,10,28. Direkte Medikamentenabgabe in der SMG durch Retroductal Injektion bietet einen entscheidenden Vorteil gegenüber systemischen Verabreichung in seinem Potential, Ziel-Effekte, darunter Immunaktivierung11zu verringern. Die Fähigkeit, lokale Medikamentenabgabe ohne Anreicherung im umgebenden Gewebe zu maximieren können auch therapeutische Tests in einer breiteren Strecke der Dosis als systemisch erreicht werden konnte.
Wir präsentieren dieses Protokolls, mit Fehlerbehebung und Qualität überprüfen Schritte, wie eine detaillierte und aktualisierte Methode der murinen SMG20Polymere Nanomaterialien durch Wharton Leitung anzubieten. Beispielsweise erleichtert die ordnungsgemäße Verwendung der eine drahtführung Kanüle Platzierung. Darüber hinaus wird um die Kanüle in Position zu halten, während der Injektion mit trocken abtupfen statt Cyanacrylat-Klebstoffe, das Risiko der Schleimhaut Trauma minimiert. Diese Methode kann zur Behandlung von Mäusen mit einer Reihe von Verbindungen und kann über mehrere Tage mit der gleichen Maus, ein Timecourse von wiederholter Anwendung11bewerten durchgeführt werden.
Normale Drüse Sekret wird einen einfache und unkomplizierte Zollabfertigung Mechanismus für überschüssige Nutzlast bieten, obwohl diese Strategie durch sorgfältige Auswahl der eingespritzten Substanz und Titration von Atropin Dosierung für verschiedene Anwendungen optimiert werden soll. In diesem Fall bestehen NPs in der SMG für mindestens 24 h. Mithilfe von NPs in der Lage, Medikament laden oder ähnliche Nanomaterialien, zukünftige Anwendungen dieser Arbeit gehören Sie Überwindung der Löslichkeitsgrenze, die sonst verhindern würden Tests Hydrophobierungsmitteln mit Retroductal Einspritzung20,21.
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Disclosures
Die Autoren haben nichts preisgeben.
Acknowledgments
Forschung berichtet in dieser Publikation wurde durch das nationale Institut des Dental und Craniofacial Forschung (NIDCR) und das National Cancer Institute (NCI) der National Institutes of Health Award Anzahl R56 DE025098, UG3 DE027695 und F30 CA206296 unterstützt. Der Inhalt ist ausschließlich in der Verantwortung der Autoren und nicht unbedingt die offizielle Meinung der National Institutes of Health. Diese Arbeit wurde auch von der NSF-DMR-1206219 und der IADR-Innovation in Oral Care Award (2016) unterstützt.
Wir möchten Jayne Gavrity Danke für ihre Unterstützung bei der Durchführung von IVIS Experimenten. Wir möchten Danke Karen Bentley für ihren Input und Unterstützung bei der Durchführung von EM. Wir möchten Pei-Lun Weng danken für Unterstützung mit IHC. Wir möchten danken Matthew Ingalls für seine Unterstützung bei der Vorbereitung der Figur. Wir möchten Dr. Elaine Smolock und Emily Wu für kritische Lektüre des Manuskripts danken.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Pilocarpine hydrochloride | Sigma Aldrich | P6503 | Pilocarpine |
| Student Vannas Spring Scissors | Fine Science Tools | 91500-9 | Spring Scissors for Tracheostomy |
| Sterile Saline Solution | Medline | RDI30296H | Saline |
| Dumont #7 Forceps | Fine Science Tools | 11274-20 | Curved Forceps |
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools | 11251-10 | Straight Forceps |
| Standard Pattern Forceps | Fine Science Tools | 11000-12 | Blunt Forceps |
| Fine Scissors- Tungsten Carbide | Fine Science Tools | 14568-09 | Dissection Scissors |
| Microhematocrit Heparinized Capillary Tubes | Fisher Scientific | 22362566 | Capillary tubes |
| Lubricant Eye Ointment | Refresh | N/A | Refresh Lacri-Lube |
| Goat polyclonal anti-Nkcc1 | Santa Cruz Biotech | SC-21545 | Nkcc1 Antibody |
| DAPI (4',6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride) | Thermo Fisher Scientific | D1306 | DAPI |
| GraphPad Prism | GraphPad | ver6.0 | Statistical Software |
| Cotton tipped applicator | Medline | MDS202000 | Applicator for eye ointment |
| 0.5cc Insulin Syringe, 29G x 1/2" | BD | 7629 | Syringe for intraperitoneal injection |
References
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