Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Bioengineering
Click here for the English version

Bioengineering

Retroductal nanopartikel injektion til Murine submandibulære kirtel

Published: May 3, 2018 doi: 10.3791/57521
Automatic Translation
1, 2, 1, 1, 2, 3, 1
1Department of Biomedical Engineering, University of Rochester, 2Department of Otolaryngology Head and Neck Surgery, University of Rochester Medical Center, 3Center for Oral Biology, University of Rochester Medical Center

Summary

Lokale medicinafgivelse til de submandibulære kirtler er af interesse i forståelse spytkirtel biologi og for udviklingen af nye lægemidler. Vi præsenterer en opdateret og detaljerede retroductal injektion protokol, designet til at forbedre leveringen nøjagtighed og eksperimenterende reproducerbarhed. Programmet præsenteres heri er levering af polymert nanopartikler.

Abstract

To fælles mål af spytkirtel therapeutics er forebyggelse og helbredelse af væv dysfunktion efter enten autoimmun eller stråling skader. Ved at levere lokalt bioaktive stoffer til spytkirtlerne, kan større væv koncentrationer opnås sikkert versus systemisk administration. Derudover off målvæv kan effekter fra ekstra glandulær ophobning af materiale drastisk reduceres. I denne henseende er retroductal injektion en almindeligt anvendt metode for at undersøge både spytkirtel biologi og patofysiologi. Retroductal administration af vækstfaktorer, primærelementer, adenoviral vektorer og lille molekyle narkotika har vist sig at støtte kirtel funktion i fastsættelsen af skade. Vi har tidligere vist effekten af en retroductally indsprøjtet nanopartikel-siRNA strategi at opretholde kirtel funktion efter bestråling. Her, en yderst effektiv og reproducerbar metode til at administrere nanomaterialer til murine submandibulære kirtel gennem Whartons kanalen er detaljeret (figur 1). Vi beskriver adgang til mundhulen og skitsere de nødvendige skridt til at cannulate Wharton kanalen, med yderligere observationer tjener som kvalitetskontrol under hele proceduren.

Introduction

Spytkirtel dysfunktion har mange etiologies, herunder Sjögrens syndrom, en autoimmun medieret tab af funktionelle sekretoriske væv og stråling induceret hyposalivation (RIH), en fælles sequella på hoved og hals kræft strålebehandling1. Tab af spyt funktion på grund af enten tilstand disponerer enkeltpersoner til mundtlige og systemisk infektion, huller i tænderne, fordøjelsessystemet og synke dysfunktion, tale værdiforringelse og store depression1,2,3. Som et resultat, lider livskvalitet væsentligt, med indgreb begrænset til palliation af symptomer i stedet kur4. For at undersøge nye behandlingsformer i vivo, er det af interesse at administrere bioaktive stoffer direkte til spytkirtel.

Retroductal injektion er en værdifuld metode til at levere bioaktive stoffer direkte til spytkirtlerne og teste effekten i sygdom, skade, eller under normale væv homøostase. De tre store spytkirtler er parotideale (PG), de submandibulære (SMG) og sublinguale (SLG), alle som Tom ind i mundhulen gennem ekskretionsorganerne kanaler. Anatomi af murin SMG tillader direkte adgang gennem cannulation af Whartons kanalen, ligger i gulvet i munden under tungen5. Efter cannulation, solvated medicin kan administreres direkte til SMG. Efter retroductal levering, ekstra glandulær diffusion er begrænset af den omkringliggende væv kapsel, som regulerer udvekslingen af materiale med omgivende strukturer6. SMG og dens kanalen er ligeledes struktureret i mennesker, og rutinemæssigt adgang til under SMG kirurgi og sialoendoscopy7. I mennesker og mus er PG ligeledes tilgængelige via Stensens kanal i buccale slimhinde8.

I murine modeller af RIH, er SMG retroductal injektion blevet brugt til at levere therapeutics herunder vækstfaktorer, primærelementer, adenoviral vektorer, cytokiner og antioxidant forbindelser at modulere den cellulære reaktion på skade, og reducere den resulterende væv skader5,9,10,11,12,13,14,15,16. Den mest bemærkelsesværdige kliniske succes af retroductal injektion er administrationen af adenoviral vektor til direkte udtryk for en vand kanal (Aquaporin 1; AQP1) hos patienter efter stråling for hoved og hals kræft17.

Tidligere har vi udviklet og vist effekten af en retroductally indsprøjtet polymere nanopartikel-siRNA system at beskytte spytkirtel funktion fra RIH11,18,19,20. Som en forlængelse af vores tidligere arbejde, her, vise vi vores protokol for retroductal SMG injektion ved hjælp af en fluorescently mærket nanopartikel (NP), som er i stand til at indlæse og levere ellers tungtopløselige stoffer21,22, 23.

Vi har syntetiseret NP fra diblock copolymer bestående af poly (styren-alt-maleinsyre anhydride)-b-poly(styrene) (PSMA) via reversible tilføjelse kæde fragmentering (TØMMERFLÅDE) polymerisering, som tidligere beskrevet21. Gennem udveksling af opløsningsmidler samles disse polymerer spontant selvstændige til micelle NP strukturer med en hydrofobe interior og hydrofile udvendige21. De nationale parlamenter er mærket med Texas-rød fluorophore at tillade kontrol af NP levering i kirtler uden at ofre dyr. Levende dyr imaging og SMG Immunhistokemi er vist på 1 t og 1 dag efter injektionen.

Denne opdaterede og reproducerbare cannulation protokol skal gøre det muligt for andre at nå retroductal injektion. Vi forventer, at denne raffineret teknik vil blive afgørende for i vivo undersøgelser og terapeutiske udvikling24,25.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Alle i vivo procedurer skitseret nedenfor blev godkendt af universitetet Udvalget om dyret ressourcer på University of Rochester, Rochester, NY.

1. forberedelse

  1. Brug 32G intrakraniel kateter slanger med wire inset, skåret 3 cm af slangen til at danne en skrå ende, ca 45° med den lange akse. Bekræfte, at ledningen er mindst 1 cm længere end slangen.
  2. Indlæse 50 µL af PSMA nanopartikler løsning (figur 1), eller andet materiale, injektion, i en Hamilton sprøjte. For at reducere sandsynligheden for barotrauma under injektion, fastgør slangen kateter med stylet fjernet, at sprøjten og udvise dødvolumen.
  3. Inspicere injektion løsning for at sikre nanopartikel er fuldt solvated at forhindre duktalt obstruktion efter administration.
  4. Forberede atropin løsning på 0,1 mg/mL.
    Bemærk: Fordi atropin er lysfølsomt og nedbryder over tid, denne løsning bør være lavet dagen af injektion, og beskyttet mod lys indtil administreres.

2. adgang til og visualisere duktalt indgangspunkt

  1. Veje C57/BL6 mus ved hjælp af en Analysevægt.
  2. Ved hjælp af en 0,5 mL sprøjte med 29G x ½" nål, bedøver mus med en intraperitoneal injiceres steril saltvandsopløsning af 100 mg/kg ketamin og 10 mg/kg xylazin. Gå videre til det følgende trin, når musen ikke længere reagerer på stimuli, der normalt forekommer inden for 5-10 min efter injektionen.
    Bemærk: Denne procedure kan også udføres under isofluran, men vil kræve en brugerdefineret næsen kegle, der tillader adgang til mundhulen.
  3. For at forhindre tørhed under proceduren, anvende smøremiddel til øjne og placere musen i en udsat position på en brugerdefineret scene.
    Bemærk: For at opretholde passende betingelser for intra mundtlig procedure, værktøjer skal desinficeres eller steriliseres før hver brug.
  4. Åbne mundhulen ved at sikre den maxillary fortænder over en metalbjælke, og brug en elastik til at anvende nedadgående spænding bag den mandibular fortænder (figur 2A).
  5. Justere musen under dissekere mikroskopet, så bunden af kæben er visualiseret.
  6. For at udvide munden, skal du bruge en brugerdefineret, buede stål retractor for at anvende spænding bilateralt buccale slimhinden.
  7. For at visualisere de submandibulære papiller, forstå og forsigtigt løfte tungen fra gulvet i munden ved hjælp af stump pincet.
    Bemærk: Papiller vises som to bleg fremspring under tungen (figur 2B).
  8. For at lette visualisering og yderligere manipulation i mundhulen, lægge bomuld mellem tunge og buccale slimhinden.

3. duktalt Cannulation og linje placering

  1. Bruger fine, forstå buet pincet, kateter slanger med wire indsatser. For optimal manuel kontrol under cannulation, justere slanger med krumning af pincet (figur 3A).
  2. Brug dissekere mikroskop, flytte pincet og ledning ind i synsfeltet.
    Bemærk: Wire bør fremspringende fra slangen.
  3. Forsigtigt lægge pres ind i bunden af en submandibulære papilla ved hjælp af wire indsat for at producere en lille, overfladiske, slimhinde punktering (0.076 mm diameter) der vil lette senere indrejse af kateter slangen (0,25 mm i diameter). Hvis er stødt på modstand, skæres friske afskårne tips på både rør og ledning inset med skarpe dissekere saks.
  4. Efter posten, trække stylet, og bruger den dissekere mikroskop, bekræfte tilstedeværelsen af spyt på webstedet punktering. Undgå kraftig eller pludselige bevægelser (enten tilbagetrækning eller indsættelse) af de stylet, der kan forårsage blødning eller kompromittere duktalt integritet.
  5. Trække stylet i slangen (figur 3B).
  6. For at sikre, at injektion slanger vil passe ind i Whartons kanalen åbner, Indsæt slanger som indeholder stylet som en stiv guide i den tidligere foretaget punktering (fig. 2 C).
    Bemærk: Hvis ikke udføres hurtigt, lokal hævelse kan forhindre genindførelse.
  7. For at forhindre modtryk fra langvarig duktalt obstruktion, trække slangen. Undersøg for at kontrollere, at en åbning, synlig under mikroskopi, kan ses i de submandibulære papilla. Hvis synlige blødning opstår, fjerner stylet og reattempt fra trin 3.2 på de modsatte submandibulære papiller.
  8. Uden at bevæge musen, administrere intraperitoneal injektion af 1 mg/kg atropin løsning, til at reducere spytsekretion under proceduren. Vent 5-10 min.
  9. Forstå slutningen af sprøjten slangen, og Indsæt i blænde ved hjælp af den dissekere mikroskop (figur 3 c). Hvis er stødt på modstand, skæres en friske afskårne ende til slanger og reattempt.
  10. Når slangen er på plads inden for de submandibulære papilla, langsomt forhånd 3-5 mm ind i kanalen. Slip slangen fra pincet.
  11. For at forbedre tætning mellem slangen og submandibulære papilla, tørre grænsefladen af forsigtigt duppe med gaze for 1 min.
  12. Inspicér for at bekræfte, at placeringen af slangen ikke har flyttet sig under tørringen.

4. indsprøjtning

  1. Injicere materiale med en hastighed på 10 µL/min. inspicere at bekræfte, at musen er stadig bedøvet og ikke viser tegn på angst (figur 2D).
    Bemærk: Injektioner af 15-50 µL er veltolereret. Injektion af større mængder kan medføre barotrauma.
  2. Efter injektionen, opretholde sprøjte pres for 5 min til at forbedre opbevaring af materiale i Whartons kanalen og SMG (figur 4). Inspicere de submandibulære papilla jævnligt for at sikre, at slangen ikke afslutter den duktalt blænde.
  3. Bruger fine pincet, forstå og forsigtigt trække slangen fra de submandibulære papiller.
    Bemærk: Det er normalt at observere nogle væske afstigning fra papiller.
  4. Fjerne retractor og bomuld fra mundhulen før flytte musen fra scenen.
    Bemærk: Dyret må ikke efterlades uden opsyn indtil den har genvundet tilstrækkelig bevidsthed for at opretholde brystbenet recumbency. Endvidere sørge for, at musen ikke ligger med andre mus indtil fuldt tilbagebetalt.

5. kontrol og analyse

Bemærk: En i vivo Imaging System (IVIS) kan bruges til at vurdere fastholdelse af fluorescently mærket nanopartikler efter injektion (som vist 1 h og 24 timer efter injektion i figur 5).

  1. For at bedre visualisere fluorescerende signal inden for SMG gennem huden, fjerne den ventrale pels overliggende SMGs enten ved barbering eller ved hjælp af en kemisk rigtige spørgsmål.
    Bemærk: Efter eutanasi, SMG væv kan også høstes, fast (overnatning i 4% PARAFORMALDEHYD) og farves ved hjælp af Immunhistokemi at bekræfte persistens af fluorescently mærket NP én dag efter indsprøjtning (figur 6).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Retroductal injektion kan bruges til at administrere NPs til den murine SMG (figur 1). Her leverer vi 50 µg PSMA NPs mærket med Texas rød fluorophore.

Korrekt placering af musen tillader facile adgang og visualisering af gulvet i munden (figur 2A-B). De submandibulære papiller er identificeret som to kødfulde fremspring under tungen. Efter cannulation (figur 2 c) og atropin injektion, sprøjte slange kan placeres i de submandibulære papiller (figur 2D).

For at lette cannulation, er en lille punktering i de submandibulære papilla først lavet ved hjælp af wire stylet i kateteret slangen (figur 3A). Når dette er gjort, bør stylet trækkes tilbage inden for slangen til at tjene som en stiv guide, mens en større åbning er lavet (figur 3B). Stylet har en diameter af 0.076 mm, mens kateteret slangen har en ydre diameter på 0,25 mm. Efter oprettelsen af denne større åbning, pre-belæsset kateteret slanger, knyttet til injektion sprøjten, kan derefter blive guidet ind i den duktalt blænde (figur 3 c).

Efter injektionen, anbefales det, at sprøjten være immobiliseret og indsprøjtning pres opretholdes. Hvis trykket ikke er installeret, vil levering være vellykket, omend med mindre effektivitet og reproducerbarhed. Dette er påvist ved at indsprøjte 50 µL 1% toluidin blå farvestof bilateralt og observere svagere farvning i kirtel uden vedligeholdt pres efter injektion (figur 4).

For at kontrollere NP levering, kan IVIS bruges til at registrere fluorescerende signal inden for mus, som er lateralized til injiceres region 1 h post administration (figur 5). Denne tilgang gør det muligt for bekræftelse uden euthanizing musen og kan fortsættes på langs, indtil signalet er ikke længere kan påvises26,27.

For at bekræfte NP persistens i SMG 24 h følgende injektion, kan kirtler være i snit, og set af fluorescerende billeddannelse. Aqp5 og Krt5 IHC markere sekretoriske og duktalt celler af SMG, henholdsvis, og Vis NPs i begge rum (figur 6).

Figure 1
Figur 1 . Retrograd injektion skematisk. Efter duktalt cannulation og sprøjte placering, 50 µL af 1 mg/mL polymere NP opløsning indsprøjtes i SMG. Repræsentative transmissions elektron Mikrograf (TEM) viser monodisperse (polydispersity indeks = 0,2) NP befolkning. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 2
Figur 2 . Retrograd indsprøjtning skridt. (A) adgang til mundhulen ved at adskille den maxillary og mandibular fortænder. (B) visualisere papiller (boxed) under tungen på gulvet i munden, som markerer placeringen af Whartons kanalen. (C) ved hjælp af et kateter med wire inset, forsigtigt kanyleres i bunden af de submandibulære papilla. (D) efter cannulation, kateter slangen kan udveksles med sprøjten slangen venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 3
Figur 3 . Effektiv positionering af kateter og stylet for Whartons kanalen cannulation. (A) tilpasse slanger med krumning af pincet, og skære en skrå ende på slanger og ledninger til i første omgang punktere den sublinguale papilla. (B) oprulles stylet i slangen til at gøre en stiv guide indsætte slangen inden for den sublinguale papilla. (C) Indsæt kateter slanger (stylet fjernet), sluttede sig til injektion sprøjte, inden for de tidligere foretaget blænde. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 4
Figur 4 . Opretholde sprøjte pres følgende injektion forbedrer materiale opbevaring. Efter retroductal injektioner af 50 µL af 1% toluidin blå, sprøjte pres blev enten opretholdt i 5 min. (ret SMG - første injektion) eller sprøjten blev trukket tilbage umiddelbart efter injektion (venstre SMG - anden injektion). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 5
Figur 5 . Bekræftelse af retroductal NP levering post injektion. (A) In vivo Imaging System (IVIS) viser lateralization af rødt fluorescerende signal til de behandlede (venstre) side af musen 1 h post injektion. (B) NP IVIS signal på 24 h er faldet betydeligt. Venligst klik her for at se en større version af dette tal. 

Figure 6
Figur 6 . Bekræftelse af retroductal NP persistens 24 h post injektion. A, C. Uninjected kontrol SMG farvet for Aqp5 og Krt5, mærkning sekretoriske acinar og duktalt celler, henholdsvis. B, D. I retroductal NP injiceres SMG, Aqp5 og Krt5 pletter viser normal kirtel morfologi og NPs taget i både acini og kanaler (skala barer: 75 µm). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Retroductal injektion er kritisk for lokaliserede medicinafgivelse til spytkirtel. Denne teknik har applikationer i screening terapeutiske agenter for betingelser herunder Sjögrens syndrom og RIH9,10,28. Direkte medicinafgivelse i SMG via retroductal injektion giver en afgørende fordel frem for systemisk administration i dens potentiale til at nedbringe ud-target effekter, herunder immun aktivering11. Evnen til at maksimere lokale medicinafgivelse, uden akkumulering i omgivende væv kan også aktivere terapeutiske test i dosis bredere end kunne opnås systemisk.

Vi præsentere denne protokol, med fejlfinding og kvalitet check trin, som en detaljerede og opdaterede metode til at levere polymere nanomaterialer gennem Whartons kanalen til murine SMG20. For eksempel, letter korrekt brug af en wire guide kanyle placering. Desuden ved hjælp af tørre blotting i stedet for ren lim til at holde kanylen på plads under injektion, minimeres risikoen for slimhinde traumer. Denne metode kan bruges til behandling af musene med en række forbindelser, og kan udføres over flere dage med den samme mus til at evaluere en timecourse af gentagen administration11.

Normale kirtel sekretion vil give en enkel og ligetil clearance mekanisme for overskydende nyttelast, selvom denne strategi bør være optimeret til forskellige applikationer af omhyggelig udvælgelse af injicerede stof og titrering af atropin dosering. I dette tilfælde vedvarer NPs i SMG i mindst 24 timer. Ved hjælp af NPs i stand til at narkotika lastning eller lignende nanomaterialer, fremtidige anvendelser af dette arbejde omfatte at overvinde den opløselighed, som ellers vil forhindre test hydrofobe agenter med retroductal injektion20,21.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne har ikke noget at oplyse.

Acknowledgments

Forskning rapporteret i denne publikation blev støttet af den nationale Dental-Institut og Craniofacial forskning (NIDCR) og National Cancer Institute (NCI) af National Institutes of Health under Award antallet R56 DE025098, UG3 DE027695 og F30 CA206296. Indholdet er udelukkende ansvarlig for forfattere og repræsenterer ikke nødvendigvis de officielle synspunkter af National Institutes of Health. Dette arbejde blev også støttet af NSF DMR 1206219 IADR Innovation i Oral Care Award (2016).

Vi vil gerne takke Jayne Gavrity for hendes hjælp i udfører IVIS eksperimenter. Vi vil gerne takke Karen Bentley for hendes input og bistand i udførelsen af EM. Vi vil gerne takke Pei-Lun Weng for hans hjælp med IHC. Vi vil gerne takke Matthew Ingalls for sin bistand i figur forberedelse. Vi vil gerne takke Dr. Elaine Smolock og Emily Wu for kritisk læsning af dette manuskript.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Pilocarpine hydrochloride Sigma Aldrich P6503 Pilocarpine
Student Vannas Spring Scissors Fine Science Tools 91500-9 Spring Scissors for Tracheostomy
Sterile Saline Solution Medline RDI30296H Saline
Dumont #7 Forceps Fine Science Tools 11274-20 Curved Forceps
Dumont #5 Forceps Fine Science Tools 11251-10 Straight Forceps
Standard Pattern Forceps Fine Science Tools 11000-12 Blunt Forceps
Fine Scissors- Tungsten Carbide Fine Science Tools 14568-09 Dissection Scissors
Microhematocrit Heparinized Capillary Tubes Fisher Scientific 22362566 Capillary tubes
Lubricant Eye Ointment Refresh N/A Refresh Lacri-Lube
Goat polyclonal anti-Nkcc1 Santa Cruz Biotech SC-21545 Nkcc1 Antibody
DAPI (4',6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride) Thermo Fisher Scientific D1306 DAPI
GraphPad Prism GraphPad ver6.0 Statistical Software
Cotton tipped applicator Medline MDS202000 Applicator for eye ointment
0.5cc Insulin Syringe, 29G x 1/2" BD 7629 Syringe for intraperitoneal injection

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Miranda-Rius, J., Brunet-Llobet, L., Lahor-Soler, E., Farre, M. Salivary Secretory Disorders, Inducing Drugs, and Clinical Management. International Journal Of Medical Sciences. 12 (10), 811-824 (2015).
  2. Acauan, M. D., Figueiredo, M. A. Z., Cherubini, K., Gomes, A. P. N., Salum, F. G. Radiotherapy-induced salivary dysfunction: Structural changes, pathogenetic mechanisms and therapies. Archives of Oral Biology. 60 (12), 1802-1810 (2015).
  3. Dirix, P., Nuyts, S., Vander Poorten, V., Delaere, P., Van den Bogaert, W. The influence of xerostomia after radiotherapy on quality of life. Supportive Care in Cancer. 16 (2), 171-179 (2008).
  4. Vissink, A., et al. Clinical management of salivary gland hypofunction and xerostomia in head-and-neck cancer patients: successes and barriers. International Journal of Radiation Oncology Biology Physics. 78 (4), 983-991 (2010).
  5. Delporte, C., et al. Increased fluid secretion after adenoviral-mediated transfer of the aquaporin-1 cDNA to irradiated rat salivary glands. Proceedings of the National Academy of Sciences. 94 (7), 3268-3273 (1997).
  6. Samuni, Y., Baum, B. J. Gene delivery in salivary glands: from the bench to the clinic. Biochimica et Biophysica Acta. 1812 (11), 1515-1521 (2011).
  7. Beahm, D. D., et al. Surgical approaches to the submandibular gland: A review of literature. International Journal of Surgery. 7 (6), 503-509 (2009).
  8. Zheng, C., Shinomiya, T., Goldsmith, C. M., Di Pasquale, G., Baum, B. J. Convenient and reproducible in vivo gene transfer to mouse parotid glands. Oral diseases. 17 (1), 77-82 (2011).
  9. Zheng, C., et al. Prevention of Radiation-Induced Salivary Hypofunction Following hKGF Gene Delivery to Murine Submandibular Glands. Clinical Cancer Research. 17 (9), 2842-2851 (2011).
  10. Okazaki, Y., et al. Acceleration of rat salivary gland tissue repair by basic fibroblast growth factor. Archives of Oral Biology. 45 (10), 911-919 (2000).
  11. Arany, S., Benoit, D. S., Dewhurst, S., Ovitt, C. E. Nanoparticle-mediated gene silencing confers radioprotection to salivary glands in vivo. Molecular Therapy. 21 (6), 1182-1194 (2013).
  12. Cotrim, A. P., Sowers, A., Mitchell, J. B., Baum, B. J. Prevention of irradiation-induced salivary hypofunction by microvessel protection in mouse salivary glands. Molecular Therapy. 15 (12), 2101-2106 (2007).
  13. Redman, R. S., Ball, W. D., Mezey, E., Key, S. Dispersed donor salivary gland cells are widely distributed in the recipient gland when infused up the ductal tree. Biotechnic & Histochemistry. 84 (6), 253-260 (2009).
  14. Grundmann, O., Fillinger, J. L., Victory, K. R., Burd, R., Limesand, K. H. Restoration of radiation therapy-induced salivary gland dysfunction in mice by post therapy IGF-1 administration. BMC Cancer. 10, 417-417 (2010).
  15. Limesand, K. H., et al. Insulin-Like Growth Factor-1 Preserves Salivary Gland Function After Fractionated Radiation. International Journal of Radiation Oncology Biology Physics. 78 (2), 579-586 (2010).
  16. Marmary, Y., et al. Radiation-induced loss of salivary gland function is driven by cellular senescence and prevented by IL-6 modulation. Cancer Research. , (2016).
  17. Baum, B. J., et al. Early responses to adenoviral-mediated transfer of the aquaporin-1 cDNA for radiation-induced salivary hypofunction. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (47), 19403-19407 (2012).
  18. Arany, S., et al. Pro-apoptotic gene knockdown mediated by nanocomplexed siRNA reduces radiation damage in primary salivary gland cultures. Journal of Cellular Biochemistry. 113 (6), 1955-1965 (2012).
  19. Benoit, D. S. W., Henry, S. M., Shubin, A. D., Hoffman, A. S., Stayton, P. S. pH-responsive polymeric siRNA carriers sensitize multidrug resistant ovarian cancer cells to doxorubicin via knockdown of polo-like kinase 1. Molecular pharmaceutics. 7 (2), 442-455 (2010).
  20. Malcolm, D. W., Varghese, J. J., Sorrells, J. E., Ovitt, C. E., Benoit, D. S. W. The Effects of Biological Fluids on Colloidal Stability and siRNA Delivery of a pH-Responsive Micellar Nanoparticle Delivery System. ACS Nano. , (2017).
  21. Baranello, M. P., Bauer, L., Benoit, D. S. Poly(styrene-alt-maleic anhydride)-based diblock copolymer micelles exhibit versatile hydrophobic drug loading, drug-dependent release, and internalization by multidrug resistant ovarian cancer cells. Biomacromolecules. 15 (7), 2629-2641 (2014).
  22. Wang, Y., et al. Fracture-Targeted Delivery of β-Catenin Agonists via Peptide-Functionalized Nanoparticles Augments Fracture Healing. ACS Nano. 11 (9), 9445-9458 (2017).
  23. Baranello, M. P., Bauer, L., Jordan, C. T., Benoit, D. S. W. Micelle Delivery of Parthenolide to Acute Myeloid Leukemia Cells. Cellular and Molecular Bioengineering. 8 (3), 455-470 (2015).
  24. Kuriki, Y., et al. Cannulation of the Mouse Submandibular Salivary Gland via the Wharton's Duct. Journal of Visualized Experiments. (51), e3074 (2011).
  25. Nair, R. P., Zheng, C., Sunavala-Dossabhoy, G. Retroductal Submandibular Gland Instillation and Localized Fractionated Irradiation in a Rat Model of Salivary Hypofunction. Journal of Visualized Experiments. (110), (2016).
  26. Wang, Y., Malcolm, D. W., Benoit, D. S. W. Controlled and sustained delivery of siRNA/NPs from hydrogels expedites bone fracture healing. Biomaterials. 139 (Supplement C), 127-138 (2017).
  27. Hoffman, M. D., Van Hove, A. H., Benoit, D. S. W. Degradable hydrogels for spatiotemporal control of mesenchymal stem cells localized at decellularized bone allografts. Acta Biomaterialia. 10 (8), 3431-3441 (2014).
  28. Nguyen, C. Q., Yin, H., Lee, B. H., Chiorini, J. A., Peck, A. B. IL17: potential therapeutic target in Sjogren's syndrome using adenovirus-mediated gene transfer. Laboratory Investigation. 91 (1), 54-62 (2011).

Tags

Bioteknologi spørgsmålet 135 Cannulation retrograd retroductal nanopartikel submandibulære spyt kirtel
Retroductal nanopartikel injektion til Murine submandibulære kirtel
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Varghese, J. J., Schmale, I. L.,… More

Varghese, J. J., Schmale, I. L., Wang, Y., Hansen, M. E., Newlands, S. D., Ovitt, C. E., Benoit, D. S. W. Retroductal Nanoparticle Injection to the Murine Submandibular Gland. J. Vis. Exp. (135), e57521, doi:10.3791/57521 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter