Summary
Pancreas islet transplantation er en måde at opnå normoglycemia i type 1 diabetes. Denne artikel fokuserer på transplantation teknik gennem ruten intraportal at opretholde normale blodsukkerniveauer i diabetisk mus.
Abstract
Pancreas islet transplantation at reducere hyperglykæmi er meget vellykket i gnavere med kemisk induceret diabetes. Den mest almindelige transplantation site i eksperimentel islet transplantation er nyre kapsel. Dog som mindre viden om samspillet mellem pancreas Holme og blodkomponenter, giver det også mening at bruge portalen vene tilgang i eksperimentel islet transplantation.
Denne protokol viser en intraportal Holmen transplantation teknik i NMRI nøgen mus. Streptozotocin (180 mg/kg) sprøjtes intraperitoneal for at fremkalde hyperglykæmi i modtagerens mus. De betragtes som diabetiker på en ikke-fastende blodsukker niveau større end 20 mmol/L. En dag før transplantation, er mus i bugspytkirtlen Holme isoleret fra donor bugspytkirtlen af collagenase fordøjelsen; et minimum af 350 småøer er udnyttet pr. diabetisk modtager. Afhængig af holmen isolation udbytte, er to eller flere donor mus udnyttet pr. modtager. Efter overnatning kultur ved 37 ° C administreres Holme ind i modtagerens leveren via portalen vene. Efter kirurgi, mus er beskyttet i rød Makrolon huse og observeret indtil er vågen. Denne protokol fastholder glykæmisk kontrol for 120 dage i syngeneic mus og 15 dage i allogen mus.
Introduction
Holmen transplantation er en lovende metode til behandling af type 1 diabetes mellitus1. Det første forsøg på at overføre en får i bugspytkirtlen Fragmentets ind en diabetisk patient blev udført af Watson Williams i 1893. Dog et stort gennembrud i klinisk islet transplantation blev opnået med Edmonton-protokollen, og derefter en række nationale programmer blev udviklet2. I fortiden, flere steder, såsom knoglemarv, omental pose, intramuskulær region, gastrisk slimhinden, milt og nyre kapsel, blev undersøgt i prækliniske modeller, men den portalen venøse system anses som en af de hensigtsmæssige og effektive hjemmeside for klinisk programmer3,4,5,6.
Eksogene administration af insulin kan erstattes af holmen infusion ind i vena. Dette anses en foretrukne websted, fordi ilttilførslen er sammenlignelig med i native bugspytkirtlen på grund af placeringen nedstrøms i sammenløbet af portalen arterie og vene. Derudover er der et stort areal, så den tre-dimensionelle struktur af holmene kan bevares, og vascularization kunne lettes5. I en modtagende diabetisk mus, 2.000 menneskelige eller svin islet ækvivalenter eller 350 mus er Holme passende at vende hyperglykæmisk stat7,8. Euglycemic niveauer blev rapporteret for 15 dage i den modtagende musemodel, xenogene Holme og modellens allogene mus til mus, og mere end 120 dage i syngeneic mus til mus transplantation.
Faktorer, der er relevante for effekten af holmen transplantation via portalen vene er passende anæstesi, punktering og hæmostase9. Anæstesi kan fremkaldes ved indånding (5% isofluran) eller injektion (ketamin, xylazin eller pentobarbital), og stofferne kombineres ofte. Kontrol af dybden og tidspunkt for anæstesi, bør være opmærksom tilstand af musen, som farven på slimhinderne, øjenlåg, cornea refleks, respirationsfrekvens og kropstemperatur. Det er vigtigt at sikre, at dyret ikke kæmper, og at det overlever handlingen. Temperaturen kan vedligeholdes af forskellige varme enheder, såsom varmepuder, røde pærer, etc. A varmt termisk plade er blevet brugt til at opretholde en temperatur på 25-30 ° C mellem mus og driften tabellen, som forhindrer forekomsten af hypotermi. Doser af anæstetika er vigtig, da alle af dem er metaboliseres i leveren og portallymfeknuderne funktion kan forbigående uordnede ved infusion af holmen suspension. Det ideelle punktering punkt for portalen vene er position mellem den første og anden biflod vene.
Antallet af Holme og den tilsigtede Injektionsvolumen også påvirke resultatet af transplantation, som en overdreven volumen kan øge shear stress. En 0,2 mL volumen er hensigtsmæssigt for Holmen transplantation ind i vena. De puncturing sår (26-gauge kanyle) inducerer blødning fra portalen vene, som skal stoppes i en rettidig og effektiv måde. Steril gaze eller en finger kan anvendes med minimal Tryk på stedet, hvor punktering i ca 6 min at stoppe blødningen. Taget sammen, portal islet injektion er effektive og giver forordning over blodsukkerniveauet i kemisk inducerede diabetisk musemodeller.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle procedurer i denne protokol er blevet godkendt af tyske animalsk velfærd lovgivning og retningslinjer. Overvej at bruge 10 til 12 uger gamle NMRI nøgen mus og C57Bl/6 mus (donor: gamle kvinde; modtageren: mandlige) i hele eksperimenterne. Bruge NMRI nøgen mus til Holmen isolation. Holde mus under definerede betingelser ifølge lokale Dyrefacilitet forordninger.
1. induktion af Diabetes ved Streptozotocin
- På dag -4, måle kroppen vægte på 10 til 12 uger gamle NMRI nøgen mus og C57Bl/6 mus bruger en vægt maskine.
- Den målte kropsvægt, forberede sig en 180 mg/kg dosis af streptozotocin i 0,1 mL saltvand pr. mus.
Bemærk: Streptozotocin skal være frisk forberedt før brug og dækket med aluminiumsfolie, som er det lysfølsomme. - Sprøjt syngeneic og allogen mus hver med en enkelt dosis på 0,1 mL af streptozotocin (180 mg/kg) intraperitoneal ved hjælp af en 26 G kanyle.
- På dag -3 indsamle -2 og -1 2-4 µL af blod ved punktering hale årerne af ikke-fastende mus.
- Bruge 2-4 µL af blodprøve pr. teststrimmel til måling af blodsukker NMRI nøgen mus og C57Bl/6 mus
Bemærk: På dette punkt, bør 80% af mus bliver en diabetisk (20 mmol/L).- Brug mus til Holmen transplantation, når deres blod glucose niveauer nå 20 mmol/L.
2. isolering af pancreas Holme fra mus
- Bedøver mus med ketamin (100 mg/kg kropsvægt) og xylazin (20 mg/kg kropsvægt) ved intraperitoneal injektion med et 26 G kanyle.
Bemærk: Bind af ketamin og xylazin var bestemt efter kroppen vægte af dyr (0,10 mL/10 g). - Holde musene i liggende stilling og desinficere med povidon-jodopløsning. Bekræfte ordentlig eutanasi af indskrivning den pedal refleks.
Bemærk: I tilfælde af C57Bl/6 barbere maveregionen. - Hold huden med fine pincet og gøre en midterlinjen snit med en saks til at afsløre i bughulen. Sted i tarmen situs til venstre og uden for bughulen på en steril gaze komprimere.
- Justere maven i en anden retning til lokalisere bugspytkirtlen og andre tilknyttede væv.
- Nå aorta og gøre en lille snit til at dræne blodet. Brug steril gaze for blod absorption.
- Fjern forsigtigt tarmen. Adskille bugspytkirtlen fra mave og milt.
- Punktafgifter bugspytkirtlen og placere det i en frisk petriskål. Fjern alle de uønskede materialer, såsom fedt, ved hjælp af pincet.
- Fyld en 5 mL sprøjte med 4 mL af collagenase og indsprøjtes i bugspytkirtlen med en 26 G kanyle (stock løsning: 30 mg af collagenase i 12 mL af Hanks løsning).
- Hakkekød bugspytkirtlen med saks til at øge arealet for en forbedret fordøjelse og overførsel til en 12 mL rød hætte tube.
Bemærk: Hanks afbalanceret saltopløsning: HBSS 10 x (100 mL) Penicillin-Streptomycin (10 mL), phosphatbufferet (1 mL), Ciprofloxacin (10 mL), HEPES (35 mL), destilleret H2O (900 mL) - Udføre en fordøjelsen i 10 minutter ved 37 ° C i vandbad ryster. Vortex prøve tre gange med regelmæssige mellemrum for 15 s.
- Bland fordøjet bugspytkirtlen kraftigt i hånden i 3 min og læg den i isbad i 10 s.
- Tilsættes 6 mL koldt Hank at stoppe fordøjelsen reaktion og centrifugeres ved 560 x g i 3 min ved stuetemperatur.
- Fjern supernatanten og opløse toerstoffet i 10 mL af Parker/føtal kalv serum (P/FCS) medium ved stuetemperatur.
Bemærk: P/FCS medium: TCM-199 10 x (100 mL), FCS (50 mL), Penicillin-Streptomycin (10 mL), HEPES (20 mL), destilleret H2O (900 mL) - Identificere holmene baseret på deres morfologi (sfæroide, gylden-brun farve) under et lysmikroskop. Undgå Holme med mørke Centre. Check for renhed og levedygtighed ved at udføre dithizone farvning under et lysmikroskop.
Bemærk: Dithizone binder til zinkion og giver rød-farvet plet til holmene. - Brug 1 mL pipette til at tælle og håndplukke Holme under et lysmikroskop og overføre dem til en frisk petriskål (60 mm x 15 mm) indeholdende 4 mL af P/FCS medium.
Bemærk: Volumen af P /FCS medium i petriskålen bør ikke overstige 4 mL for at sikre ilt tilgængelighed. - Holde de isolerede øer i 4 mL af P/FCS medium natten over ved 37 ° C i en inkubator.
3. forberedelse af dyr til Holmen Transplantation
- Fjern de isolerede øer fra 37 ° C inkubator og placere dem under en flow-bænk. Center Holme med et swingende cirkelbevægelser i petriskålen.
- Fyld en 1 mL sprøjte (blå 23-G kanyle) med 0,1 mL af P/FCS medium. Derefter tilføje 350 Holme i 0,3 mL af Hanks løsning. Hold sprøjten lodret i stand til at tillade Holme at bilægge.
- Mindske lydstyrken til 0,05 mL og erstatte den blå 23-G nål med en brun 26 G kanyle. Den samme sprøjte, tilføje 0,15 mL af Ficoll (density gradient medium) til toppen for at nå en endelige mængden af 0,2 mL i sprøjten. Undgå luftbobler.
- Hold sprøjten i en vertikal position og drej det lidt for at undgå sammenklumpning af Holme. Holmene udlignes på kegle af sprøjten inden for 2-3 min.
- Måle krop vægt og blod glucose niveauerne af de modtagende mus; blodsukkerniveauet bør være omkring 20 mmol/L.
- Bedøver mus med ketamin (100 mg/kg kropsvægt) og xylazin (20 mg/kg kropsvægt) ved intraperitoneal injektion med 26 G kanyle.
- Placere mus i liggende stilling på en varm termisk plade (37 ° C). Check dybden af anæstesi ved at klemme tå.
- Ren maveregionen med povidon-jodopløsning (hud desinfektionsmiddel). For at forhindre øjne fra udtørring, holde dem fugtige med øjet salve.
Bemærk: I tilfælde af C57Bl/6 barbere maveregionen.
4. Holmen Transplantation via den Intraportal rute
- Start med en laparotomi ved at holde huden med pincet og at gøre en 2-3 cm på dag 0,-lang midterlinjen snit med en saks. Sted en steril våde gaze komprimere omkring såret kanterne til at holde det fugtigt.
- Sted i tarmen situs til venstre og uden for bughulen på steril gaze komprimere.
Bemærk: Holde tarmen fugtig under hele proceduren med pre varmede 0,9% NaCl opløsning eller steril gaze dyppet i normal saltvand. - Flytte duodenum og Find bugspytkirtlen. Find Vena beliggende på den ventrale websted ved at skubbe bugspytkirtlen opad. Bruge en finger og tommelfinger til at udsætte Vena og når udsat, punktere det tæt på leveren.
- Inden for 1 min, langsomt og støt injicere Holme (0,2 mL fra trin 3.4) i portåren under inspektionen af Forstørrelsesglas til at undgå enhver lækage af Holme.
Bemærk: Efter injektion, altid tjekke for resterende Holme i sprøjten. Tage 1 mL af P/FCS medier i en sprøjte, flush i en frisk petriskål og tælle under et mikroskop. - Placer en steril måler på webstedet punktering og lægge pres med pegefingeren (indtrængningsdybde: 0,5-1 cm) for 6 min at stoppe blødningen.
Bemærk: Lydstyrken injiceres bør ikke overstige 0,2 mL. Overdreven volumen og trykkrav kan beskadige Holme på grund af shear stress. - Omhyggeligt placere tarmen situs, bughinde, bugmuskel lag og fascia tilbage på plads.
- Brug pincet, løft huden, lukke muskel snit med resorberbare silke sutur og øvre hud lag med 2-3 klip.
- Rengør overfladen med hud desinfektionsmiddel, anvende et sår healer og placere mus i individuelle bure. Sår healer giver en vandtæt acrylat lag og beskytte mod maceration og sekundær infektion.
Bemærk: Observere musene, indtil de har genvundet tilstrækkelig bevidsthed, give tramadol (0,2 mg / mus) samt væsker. I denne protokol, mus inddrives fra anæstesi hurtigt og tramadol administration reduceret smerte. Efter 7 dage, skal såret helbrede. - Feed musene med regelmæssige mad og vand. Mad og vand forbrug og urin udskillelse vil stige efter streptozotocin injektion.
- Måle blodsukkerniveauet hver dag for den første uge og derefter en gang om ugen i syngeneic mus. I allogen mus, måle blodsukkerniveauet tre gange om ugen i op til 15 dage.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Kompetenceudvikling af transplanterede Holme blev studeret i kemisk inducerede diabetisk mus. Holmene blev transplanteret via portalen venøse system i diabetisk mus model. Donor-modtager-forhold var 2:1. I modellen syngeneic musen blev to donor mus udnyttet til at opnå 350 Holme. Holmene blev derefter transplanteres ind i diabetisk mus. En reduktion i blodsukkerniveauet blev observeret på dag 1 efter transplantation, tyder på en rolle af transplanterede pancreas Holme i at reducere blod glukose niveau. Streptozotocin steg blodsukkerniveauet op til omkring 22 mmol/L. En dråbe blod glukose niveau til 4,6 mmol/L (dag 1) blev observeret efter islet transplantation (figur 1A). Normoglycemia blev opretholdt i op til 121 dage, som vist i figur 1A. Det organ vægt og blod glukose niveau fulgt omtrent samme mønster. Efter streptozotocin injektion og kirurgi faldt kropsvægten. Fra dag 2 videre, det havde en tendens til at stige mod normal, fra 25.3 g (dag 4) til 29,7 g (dag 121), som vist i figur 1B.
I tilfælde af større histocompatibility (MHC) blev forkerte mus, 350 Holme fra to C57Bl/6 (H2d) mus transplanteret ind i diabetisk BALB/c (H2b) mus. Efter streptozotocin injektion steg blodglucose op til 26,6 mmol/L. Efter islet transplantation, blod glukose niveau faldt til 4,4 mmol/L (dag 1; Figur 2A). Normoglycemia (4.44 til 7,2 mmol/L) blev observeret i op til 10 dage, men ikke efter 15 dage (20,1 mmol/L). Kropsvægt i diabetisk mus faldt fra 26 g (dag -3) til 23 g (dag 0) og videre til 21,5 g (dag 1). Efter transplantation, kropsvægten gradvist inddrives fra 23 g (dag 2) 25 g (dag 10). På grund af MHC-mismatch, blod glukose niveau steg og kropsvægten faldt 10 dage efter islet transplantation (figur 2B).
Figur 1 : Effekt af syngeneic Holmen transplantation. (A) blod glukose niveau blev målt på forskellige tidspunkter i streptozotocin-induceret diabetisk mus (n = 3). En enkelt dosis af streptozotocin (180 mg/kg) blev sprøjtet før transplantation af 350 Holme til hver enkelt modtager (dag 0). Blod glukose niveau (mmol/L) blev målt op til 121 dage (dag -3: 17 ± 2.3; dag 0: 22,6 ± 1; dag 1: 4,6 ± 0,3; dag 5: 7.5 ± 0,4; og dag 121: 5.3 ± 0,09). (B) stigning i kropsvægt efter islet transplantation. Ovenstående data repræsenterer den gennemsnit ± standardafvigelse. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2 : Effekt af allogene islet transplantation. (A) blod glukose niveau blev målt på forskellige tidspunkter i streptozotocin-induceret diabetisk mus (n = 2). En enkelt dosis af streptozotocin (180 mg/kg) blev sprøjtet før transplantation af 350 i bugspytkirtlen Holme (dag 0). Blod glukose niveau (mmol/L) blev målt i op til 15 dage (dag -1: 25,5 ± 5.3; dag 0: 26,6 ± 1.4; dag 2:8 ± 0,9; dag 10: 6,2 ± 0,08; og dag 15: 20.1 ± 1.6). Normoglycemic stat blev opretholdt i op til 10 dage, og senere, blod glucose koncentrationer steg. (B) opfølgning af kropsvægt før og efter islet transplantation. Data repræsenterer den gennemsnit ± standardafvigelse. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3 : Repræsentant immunfarvning billede af transplanterede pancreas Holme i leveren: vaske afsnittet leveren (5 µm) med PBS, blok med 10% æsel serum efterfulgt af natten inkubation ved 4 ° C med insulin primære antistof (1: 500) og blodplader endotel celle vedhæftning molekyle PECAM-1 primære antistof (1: 100). Næste dag, pletten med sekundære antistoffer for 1 h, vask med PBS, counter pletten med Hoechst og fange billederne hos Leica fluorescerende mikroskop. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
I denne undersøgelse, er den intraportal rute af holmen transplantation udforsket. Denne protokol er yderst effektiv til at lindre diabetisk stress og en dybdegående mulighed for at udforske islet transplantation undersøgelser. Denne protokol bekræfter, at omkring 350 murine Holme er i stand til at vende den hyperglykæmisk stat. Desuden, ingen af musene døde under proceduren, og glykæmisk kontrol blev opnået i alle modtagere. Kroppens vægt og blod glucose niveauer blev regelmæssigt registreret afspejler kompetence, standard og funktionalitet af transplanterede Holme i vende hyperglykæmi. I syngeneically transplanterede mus, blev blod glucose niveauer målt hver dag for den første uge og en gang om ugen derefter. Efter Holme transplantation og hypoksiske betingelse udløse faktorer endotelceller for at udskille pro-angiogene faktorer såsom VEGF efter 14 dage og dermed øge den vaskulære engraftment i leveren, som vist i figur 3. I allogen mus, blev blod glucose niveauer målt tre gange om ugen i op til 15 dage. Efter 15 dage, blev transplanterede Holme afvist i allogen modellen på grund af en immun angreb, medmindre immunosuppressive lægemidler administreres
Der er flere islet isolation protokoller offentliggjort i litteratur10,11. Den mest enkle er at vælge Holme manuelt på grundlag af deres størrelse og morfologi efter collagenase fordøjelsen. Dette er en af de mest afgørende skridt til at vælge kun Holme og for at undgå eksokrine celler, snavs, etc. valgte Holme bør opretholdes ved 37 ° C natten over i en inkubator til at tillade dem at inddrive fra mekanisk stress opstår under fordøjelsen procedure. Udvælgelsen af streptozotocin dosis og intraportal Holmen transplantation er også nøglen til denne protokol. Kropstemperaturen skulle reguleres og vedligeholdes ved hjælp af en termisk plade i hele den kirurgiske procedure. Steril gaze bør anvendes med minimal Tryk for 6 min på webstedet af punktering at undgå blødninger. Mus skal holdes under observation, indtil de genvinde tilstrækkelig bevidsthed.
Visse trin i denne protokol kan ændres. For eksempel, kan optimering af fordøjelsestid og mængden af collagenase øge udbyttet af Holme i forskellige mus stammer. I stedet for hurtig induktion af diabetes (180 mg pr. kg streptozotocin), langsomt stigende hyperglykæmi kan være fremkaldt ved hjælp af en lavere dosis over en længere periode af tid (fx 40 mg/kg/dag streptozotocin i 5 dage i træk). Dette kunne give bedre engraftment af transplanterede Holme. Andre steder, såsom knoglemarv, omental pose, intramuskulær region, gastrisk slimhinden, milt og nyre kan udforskes som alternativer til intraportal vene.
Dårlig engraftment af transplanterede Holme er stadig et stort problem i kliniske forsøg. Andre omfatter mangel på donorer, uoverensstemmelser i at opretholde blod glukose niveauer efter transplantation, immunosuppression og blod-medierede reaktioner12,13. Manglende metoder til at vurdere korrekt engraftment er endnu en hindring. Sporing transplanterede Holme ved Kernemagnetisk resonans eller bioluminescens imaging kan muligvis erstatte klassiske metoder såsom glukose tolerance test eller c-peptid. I fremtiden, stamceller transplanteret sammen med Holme kan levere ernæringsmæssige og immunmodulerende støtte14.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Alle forfatterne erklærer, at de har nogen interessekonflikt.
Acknowledgments
Vi vil gerne anerkende Gundula Hertl for hendes støtte.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| C57Bl/6 mice | Charles River (Sulzfeld, Germany) | (10-12 weeks) | |
| BALB/c mice | Charles River (Sulzfeld, Germany) | (10-12 weeks) | |
| NMRI nude mice | Charles River (Sulzfeld, Germany) | (10-12 weeks) | |
| Ketamine | Bela-pharm | ||
| Xylazine | CEVA TIERGESUNDHEIT GmbH | ||
| Syringe, 23G and 26G needle | BD | ||
| Petri Dish | Falcon | 303800 | |
| NaCl | Carl Roth | 351007 | |
| Sterile Gauze | Fuhrmann | 7647-14-5 | |
| Shaking Water bath | Kotterman | 1501 | |
| Scissors | Braun | 1501 | |
| Glucose Meter | One Touch | ||
| Warm Thermal Plate | Thermo Fisher | ||
| Braunol (povidone-iodide solution) | B.Braun Melsungen AG | 3864154 | |
| Liposic Edo - Sprinkled Ointment (eye ointment) | Dr. G Mann Chem.-Pharm. GmbH | ||
| Incubator | Fa. Roth | ||
| Flow Bench | Herdus | ||
| Ficoll | Sigma-Aldrich | 10771 | |
| 5-0 Silk Suture Vicryl | Braun | (7.5 *1.75mm) | |
| Michel Clamps (clips) | Aesculap | BN507R | |
| P/FCS Solution | Gibco | 21180-021 | |
| TCM-199 (10x) | Gibco | 21180-021 | |
| FCS | Biowest | S1810-500 | |
| Penicillin-streptomycin | Gibco | 15140-122 | |
| HEPES (1 M) | Biochrom | L 1613 | |
| Gentamycin | Ratiopharm | ||
| Ciprofloxacin | Fresenius Kabi | ||
| Hank's Solution | Gibco | 14060-040 | |
| Collagenase | Roche | 11213865001 | |
| Streptozotocin | Calbiochem | 572204 | |
| OPSITE-spray (wound healer) | Smith and nephew | 66004978 | |
| Reugular food | Altromin | ||
| Head light LED 16042 (magnifying glass) | Eschenbach | 16042 | |
| Rat anti-mouse PECAM-1(CD31) monoclonal primary antibody | Millipore, Chemicon | CBL1337 | Dilution (1:100) |
| Donkey anti-rat secondary antibody | Dianova | 712095153 | Dilution (1:400) |
| Polyclonal guinea pig anti-insulin primay antibody | Dako | A0564 | Dilution (1:500) |
| Donkey anti-guinea pig secondary antibody | Dianova | 706-259-148 | Dilution (1:400) |
References
- McCall, M., Shapiro, A. M. Update on islet transplantation. Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 2 (7), a007823 (2012).
- Shapiro, A. M., et al. Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen. New England Journal of Medicine. 343 (4), 230-238 (2000).
- Cantarelli, E., et al. Bone marrow as an alternative site for islet transplantation. Blood. 114 (20), 4566-4574 (2009).
- Echeverri, G. J., et al. Endoscopic gastric submucosal transplantation of islets (ENDO-STI): technique and initial results in diabetic pigs. American Journal of Transplantation. 9 (11), 2485-2496 (2009).
- Korsgren, O., et al. Optimising islet engraftment is critical for successful clinical islet transplantation. Diabetologia. 51 (2), 227-232 (2008).
- Merani, S., Toso, C., Emamaullee, J., Shapiro, A. M. Optimal implantation site for pancreatic islet transplantation. British Journal of Surgery. 95 (12), 1449-1461 (2008).
- Lingwal, N., et al. Inhibition of gelatinase B (matrix metalloprotease-9) activity reduces cellular inflammation and restores function of transplanted pancreatic islets. Diabetes. 61 (8), 2045-2053 (2012).
- Chen, C., et al. Improved intraportal islet transplantation outcome by systemic IKK-beta inhibition: NF-kappaB activity in pancreatic islets depends on oxygen availability. American Journal of Transplantation. 11 (2), 215-224 (2011).
- Wang, Y., Wang, T., Zhang, L. Three aspects are critical for carrying out intraportal islet transplants successfully in a diabetes mouse model. Experimental and Clinical Transplantation. 10 (3), 302-304 (2012).
- Neuman, J. C., Truchan, N. A., Joseph, J. W., Kimple, M. E. A method for mouse pancreatic islet isolation and intracellular cAMP determination. Journal of Visualized Experiments. (88), e50374 (2014).
- Zmuda, E. J., Powell, C. A., Hai, T. A method for murine islet isolation and subcapsular kidney transplantation. Journal of Visualized Experiments. (50), (2011).
- Rother, K. I., Harlan, D. M. Challenges facing islet transplantation for the treatment of type 1 diabetes mellitus. Journal of Clinical Investigation. 114 (7), 877-883 (2004).
- Su, Z., et al. Small islets are essential for successful intraportal transplantation in a diabetes mouse model. Scandinavian Journal of Immunology. 72 (6), 504-510 (2010).
- Rekittke, N. E., Ang, M., Rawat, D., Khatri, R., Linn, T. Regenerative Therapy of Type 1 Diabetes Mellitus: From Pancreatic Islet Transplantation to Mesenchymal Stem Cells. Stem Cells International. 2016, 22 (2016).
