Summary
Bukspyttkjertelen Holme transplantasjon er en måte å oppnå normoglycemia i type 1 diabetes. Denne artikkelen fokuserer på transplantasjon teknikken gjennom intraportal ruten å opprettholde normale blodsukkeret hos diabetiker mus.
Abstract
Bukspyttkjertelen Holme transplantasjon å redusere hyperglykemi er svært vellykket i gnagere med kjemisk indusert diabetes. Webområdet for vanligste transplantasjon i eksperimentell Holme transplantasjon er nyre kapselen. Men som mindre er kjent om samspillet av bukspyttkjertelen holmer med blod bestanddeler, fornuftig det også å bruke portalen blodåre tilnærming i eksperimentell Holme transplantasjon.
Denne protokollen demonstrerer en intraportal Holme transplantasjon teknikk i NMRI naken mus. Streptozotocin (180 mg/kg) injiseres intraperitoneally for å indusere hyperglykemi i mottakerens mus. De blir betraktet som diabetiker på en ikke-faste blodsukkernivå større enn 20 mmol/L. Én dag før transplantasjon, er musen bukspyttkjertelen holmer isolert fra donor bukspyttkjertelen av collagenase fordøyelse; minst 350 holmer benyttes per diabetiker mottaker. Avhengig av Holme isolasjon avkastningen, benyttes to eller flere donor mus per mottaker. Etter natten kultur på 37 ° C administreres holmer i mottakerens leveren via portalen blodåre. Etter operasjonen, mus er beskyttet i rødt Makrolon hus og observert til er våken. Denne protokollen opprettholder glykemisk kontroll for 120 dager i syngeneic mus og 15 dager i allogene mus.
Introduction
Holme transplantasjon er en lovende tilnærming til behandling av type 1 diabetes mellitus1. Første forsøk på å overføre et sauer bukspyttkjertelen fragment til en diabetiker pasient ble utført av Watson Williams i 1893. Men et stort gjennombrudd i klinisk Holme transplantasjon ble oppnådd med Edmonton-protokollen, og deretter en rekke nasjonale programmer ble utviklet2. I siste, flere steder, som benmargen, omental veske, intramuskulær regionen, mage slimhinnen, milt og nyre capsule, ble undersøkt i preklinisk modeller, men portalen venøse systemet er regnet som en av området passer og effektiv i kliniske programmer3,4,5,6.
Eksogene administrasjon av insulin kan erstattes av Holme infusjon i portalen blodåre. Dette er ansett som en foretrukket sted fordi oksygentilførsel er sammenlignbar med i native bukspyttkjertelen beliggenhet nedstrøms av samløpet av portalen arterien og venen. Dessuten, det er et stort område, slik at den tredimensjonale strukturen i øyene kan bli bevart, og endometrial blodkar kunne tilrettelagt5. I en mottaker diabetiker mus, 2000 mennesker eller svin Holme ekvivalenter eller 350 musen er holmer tilstrekkelig å reversere den hyperglycemic state7,8. Euglycemic nivåer ble rapportert 15 dager i musen mottaker modellen xenogeneic holmer og allogene musen til mus modell, og i mer enn 120 dager i syngeneic musen til mus transplantasjon.
Faktorer relevant for effekten av Holme transplantasjon via portalen blodåre er riktig anestesi, punktering og hemostasen9. Anestesi kan være forårsaket av innånding (5% isoflurane) eller injeksjon (Ketamin, xylazine eller pentobarbital), og stoffer er ofte kombinert. Kontroll av dybden og tidspunktet for anestesi, bør oppmerksomhet vies i delstaten musen, for eksempel fargen på slimhinnene, øye lokket, hornhinnen refleks, pustefrekvens og kroppstemperatur. Det er viktig å sikre at dyret ikke er sliter og at det overlever operasjonen. Temperaturen kan opprettholdes av ulike oppvarming enheter, for eksempel oppvarming pads, red lyspærer, etc. A varm varmeplaten er brukt til å opprettholde en temperatur på 25-30 ° C mellom musen og tabellen operasjon, som hindrer forekomst av nedkjøling. Doser av anestesi er viktig, som alle er metaboliseres i leveren, og nedsatt funksjon kan være transiently uordnede av tilførsel av Holme suspensjon. Det ideelle punktering punktet for portalen blodåre er plasseringen mellom første og andre sideelv venen.
Antall holmer og tiltenkte injeksjon volumet også påvirke utfallet av transplantasjon, høyt volum kan øke skjæring stress. En 0,2-mL volum anses hensiktsmessig for Holme transplantasjon i portalen blodåre. Puncturing såret (26-gauge p) induserer blødning fra portalen blodåre, som må stoppes på en riktig og effektiv måte. Sterilt gasbind eller en finger kan brukes med minimal trykk på stedet av punktering i ca 6 min å stoppe blødningen. Tatt sammen, portalen Holme injeksjon er effektivt og gir regulering over blodsukkernivået i kjemisk indusert diabetiker musen modeller.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle prosedyrer i denne protokollen er godkjent av tysk dyr velferd lov og retningslinjer. Vurder å bruke 10 - 12 uke-gamle NMRI naken mus og C57Bl/6 mus (donor: gammel kvinne; mottaker: mannlige) gjennom eksperimenter. Bruk NMRI naken mus Holme isolering. Holde musene definerte vilkår i henhold til lokale dyr anlegget forskrifter.
1. induksjon av Diabetes ved Streptozotocin
- På dag -4, måle kroppen vekten av 10 til 12 uke-gamle NMRI naken mus og C57Bl/6 mus bruker en veiing maskin.
- Ifølge målt kroppsvekten, forberede en 180 mg/kg dose streptozotocin i 0,1 mL saltoppløsning per musen.
Merk: Streptozotocin bør være fersk forberedt før bruk og dekket med aluminiumsfolie, som det er lys-sensitive. - Sette inn syngeneic og allogene musene hver med en enkelt dose av 0,1 mL streptozotocin (180 mg/kg) intraperitoneally bruker en 26-G nål.
- På dag -3 samle 2 og -1 2-4 µL av blod av punktering hale årer av ikke-fastet mus.
- Bruke 2-4 µL av blodprøve per strimmel for å måle blodsukker i NMRI naken mus og C57Bl/6 mus
Merk: På dette punktet, 80% av musene bør bli diabetiker (20 mmol/L).- Bruk mus for Holme transplantasjon når deres blod glucose høyder når 20 mmol/L.
2. isolering av bukspyttkjertelen holmer fra mus
- Bedøve mus med ketamin (100 mg/kg kroppsvekt) og xylazine (20 mg/kg kroppsvekt) ved intraperitoneal injeksjon med en 26-G nål.
Merk: Volum av ketamin og xylazine var bestemt etter kroppen vekten av dyrene (0,10 mL/10 g). - Holde musene i supine posisjon og desinfisere povidon-jod løsning. Bekrefte riktig euthanasia ved å sjekke den pedal refleks.
Merk: Ved C57Bl/6 barbere mageregionen. - Hold huden med fine tang og gjøre en midtlinjen snitt med saks å avsløre bukhulen. Plass det tarmen situs til venstre og utenfor bukhulen på en sterilt gasbind komprimere.
- Justere magen i en annen retning å finne bukspyttkjertel og andre tilknyttede vev.
- Nå aorta og gjøre et lite kutt å tappe blod. Bruk sterilt gasbind for blod absorpsjon.
- Fjern forsiktig tarmen. Skille bukspyttkjertelen fra mage og milt.
- Avgiftsdirektoratet bukspyttkjertelen og plasserer den i en fersk Petriskål. Fjerne alle uønskede materialer, for eksempel fat, ved hjelp av pinsett.
- Fyll en 5 mL sprøyte med 4 mL collagenase og injisere i bukspyttkjertelen med en 26-G nål (lagerløsning: 30 mg collagenase i 12 mL av Hanks løsning).
- Hakke bukspyttkjertelen med saks å øke arealet for en bedre fordøyelse og overføring til en 12 mL lua rør.
Merk: Hanks balansert salt løsning: HBSS 10 x (100 mL), Penicillin-Streptomycin (10 mL), Gentamycin (1 mL), Ciprofloxacin (10 mL), HEPES (35 mL), destillert H2O (900 mL) - Utføre en fordøyelsen for 10 min på 37 ° C i en risting vannbad. Vortex prøven tre ganger med jevne mellomrom for 15 s.
- Bland fordøyd bukspyttkjertelen kraftig hånd for 3 min og plassere den på is 10 s.
- Legge til 6 mL kaldt Hanks løsning å stoppe fordøyelsen reaksjon og sentrifuge 560 x g for 3 min ved romtemperatur.
- Fjern nedbryting og oppløse pellet i 10 mL av Parker/fosterets kalv serum (P/FCS) medium ved romtemperatur.
Merk: P/FCS medium: TCM-199 10 x (100 mL), FCS (50 mL), Penicillin-Streptomycin (10 mL), HEPES (20 mL), destillert H2O (900 mL) - Identifisere holmer basert på deres morfologi (spheroid, gyldenbrune farge) under lys mikroskop. Unngå holmer med mørk sentre. Sjekk for renhet og gjennomførbarheten ved å utføre dithizone flekker under en lys mikroskop.
Merk: Dithizone binder til sink ion og gir rød-farget flekker til øyene. - Bruk en 1-mL pipette telle håndplukker holmer under lys mikroskop og overføre dem til en frisk Petriskål (60 x 15 mm) som inneholder 4 mL av P/FCS medium.
Merk: Volumet av P /FCS medium i Petriskål bør ikke overstige 4 mL slik oksygen tilgjengelighet. - Hold de isolerte småøyer i 4 mL av P/FCS medium over natten på 37 ° C i en inkubator.
3. forberedelse av dyr til Holme transplantasjon
- Fjern de isolerte småøyer settefiskanlegg 37 ° C og plassere dem under en flow benk. Midtstill holmer med en sirkulær svingende bevegelse av Petriskål.
- Fyll en 1-mL sprøyte (blå 23-G p) med 0,1 mL P/FCS medium. Legg deretter til 350 holmer i 0,3 mL av Hanks løsning. Holde sprøyten i vertikal posisjon at øyene å avgjøre.
- Reduser volumet til 0,05 mL og erstatte den blå 23-G-p med en brun 26-G nål. På den samme sprøyten, legge 0,15 mL Ficoll (tetthet gradert medium) til toppen for å nå et siste volum på 0,2 mL i sprøyten. Unngå luftbobler.
- Holde sprøyten i vertikal posisjon og roter den litt for å unngå klumper av holmer. Øyene vil utligne på membran av innen 2-3 min.
- Mål av kropp vekt og blod glucose høyder av mottakeren mus; blodsukkernivået bør være rundt 20 mmol/L.
- Bedøve mus med ketamin (100 mg/kg kroppsvekt) og xylazine (20 mg/kg kroppsvekt) ved intraperitoneal injeksjon med 26-G nål.
- Plass musene i supine posisjon på en varm varmeplaten (37 ° C). Sjekk dybden på anestesi ved pinching tåen.
- Rengjør mageregionen povidon-jod løsning (hud desinfeksjonsmiddel). For å hindre øynene tørker, holde dem fuktige med øye ointment.
Merk: Ved C57Bl/6 barbere mageregionen.
4. Holme transplantasjon via Intraportal-ruten
- På dag 0, starter med en laparotomy ved å holde huden med tang og gjør en 2-3 cm-lang midtlinjen snitt med en saks. Sted et sterilt våt gasbind komprimere rundt såret kantene slik at det kan fortsette.
- Plass det tarmen situs til venstre og utenfor bukhulen på sterilt gasbind omslag.
Merk: Holde tarmen fuktig hele prosedyren med forvarmes 0,9% NaCl løsning eller sterilt gasbind dyppet i normal saline. - Flytt tolvfingertarmen og finne bukspyttkjertelen. Finn portalen blodåre ligger på ventral stedet skyve bukspyttkjertelen oppover. Bruk en finger og tommel for å avsløre portalen blodåre og, når utsatt, punktering det nær leveren.
- Innen 1 min, sakte og jevnt injisere holmer (0,2 mL fra trinn 3.4) i portalen blodåre under inspeksjon av forstørrelsesglass for å unngå eventuelle holmer.
Merk: Etter sprøytebruk, alltid sjekke for gjenværende holmer i sprøyten. Ta 1 mL av P/FCS media i en sprøyte, flush i en fersk Petriskål og antall under et mikroskop. - Plasser en steril måler punktering området og presse med pekefingeren (gjennomtrenging dyp: 0,5-1 cm) for 6 min å stoppe blødningen.
Merk: Volumet injisert må ikke overstige 0,2 mL. Høyt volum og press kan skade øyene på grunn av skjæring stress. - Plassere forsiktig den tarmen situs, peritoneum, bukmuskel lag og fascia tilbake på plass.
- Ved hjelp av pinsett, løfte huden, nær den muskel snittet med absorberbare silke Sutur og øverste huden laget med 2-3 klipp.
- Rengjør overflaten med huden desinfeksjonsmiddel, bruke et sår helbreder og plassere musene i individuelle bur. Sår helbreder gir en vanntett acrylate lag og beskytte mot maserasjon og sekundær infeksjon.
Merk: Observere musene før de har fått tilbake tilstrekkelig bevissthet, gi tramadol (0,2 mg per mus) sammen med væsker. I denne protokollen, mus utvinnes fra anestesi raskt og tramadol administrasjon redusert smerte. Etter 7 dager, kan såret helbrede. - Mate mus med vanlig mat og vann. Mat og vann forbruk og urin utskillelse øker etter streptozotocin injeksjon.
- Måle blodsukkernivået hver dag for den første uken og deretter en gang i uken i syngeneic mus. Allogene mus, måle blodsukkernivået tre ganger i uken for opptil 15 dager.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Kompetansen til transplanterte holmer ble studert i kjemisk indusert diabetiker mus. Øyene ble transplantert via portalen venøse systemet i diabetiker mus modell. Donor-mottaker forholdet var 2:1. I syngeneic musemodell, ble to donor mus benyttet for å få 350 holmer. Øyene ble deretter transplanted i diabetiker mus. En reduksjon i blodsukkernivå ble observert på dag 1 etter transplantasjon, antyder en rolle av transplantert bukspyttkjertelen holmer i å redusere blodsukkernivå. Streptozotocin økte blodsukkernivå til om lag 22 mmol/L. En nedgang i blodsukkernivå til 4.6 mmol/L (dag 1) ble observert etter Holme transplantasjon (figur 1A). Normoglycemia ble opprettholdt i opptil 121 dager, som vist i figur 1A. Kroppen vekt og blod glukose nivå fulgte omtrent samme mønster. Etter streptozotocin injeksjon og kirurgi, kroppsvekten redusert. Fra dag 2 videre tendens det til å stige mot normal, fra 25.3 g (dag 4) 29.7 g (dag 121), som vist i figur 1B.
Ved store histocompatibility (MHC) ble mus, 350 holmer fra to C57Bl/6 (H2d) mus transplantert inn diabetiker BALB/c (H2b) mus. Etter streptozotocin injeksjon økt blodsukker opptil 26,6 mmol/L. Etter Holme transplantasjon, blodsukkernivå falt til 4,4 mmol/L (dag 1; Figur 2A). Normoglycemia (4.44 til 7,2 mmol/L) ble observert i opptil 10 dager, men ikke etter 15 dager (20,1 mmol/L). Kroppsvekten av diabetiker mus falt fra 26 g (dag -3) til 23 g (dag 0) og videre til 21,5 g (dag 1). Etter transplantasjon, kroppsvekten gradvis utvinnes fra 23 g (dag 2) til 25 g (dag 10). På grunn av MHC-CLSIDer, blodsukkernivå økt og kroppsvekt redusert 10 dager etter Holme transplantasjon (figur 2B).
Figur 1 : Effekten av syngeneic Holme transplantasjon. (A) blodsukkernivå ble målt på ulike tidspunkt i streptozotocin-indusert diabetiker mus (n = 3). En enkelt dose av streptozotocin (180 mg/kg) ble injisert før transplantasjon av 350 holmer til hver enkelt mottaker (dag 0). Blodsukkernivå (mmol/L) ble målt i opptil 121 dager (dag -3: 17 ± 2.3; dag 0: 22.6 ± 1, dag 1: 4.6 ± 0,3; dag 5: 7.5 ± 0,4; og dag 121: 5.3 ± 0.09). (B) økningen i kroppsvekt etter Holme transplantasjon. Data over representerer den gjennomsnittlig ± standardavviket. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2 : Effekten av allogene Holme transplantasjon. (A) blodsukkernivå ble målt på ulike tidspunkt i streptozotocin-indusert diabetiker mus (n = 2). En enkelt dose av streptozotocin (180 mg/kg) ble injisert før transplantasjon av 350 bukspyttkjertelen holmer (dag 0). Blodsukkernivå (mmol/L) ble målt i opptil 15 dager (dag -1: 25,5 ± 5.3; dag 0: 26,6 ± 1.4, dag 2:8 ± 0,9; dag 10: 6.2 ± 0,08; og dag 15: 20,1 ± 1.6). Normoglycemic staten ble opprettholdt i opptil 10 dager og deretter blod glukose konsentrasjoner økt. (B) oppfølging av kroppsvekt før og etter Holme transplantasjon. Dataene representerer den gjennomsnittlig ± standardavviket. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3 : Representant immunostai-bilde av transplantert bukspyttkjertelen holmer i leveren: vask delen leveren (5 µm) med PBS, blokk med 10% esel serum etterfulgt av natten inkubasjon på 4 ° C med insulin primære antistoff (1:500) og blodplater endothelial celle vedheft molekyl PECAM-1 primære antistoff (1: 100). Neste dag, flekk med sekundær antistoffer 1t, vask med PBS, counter flekk med Hoechst og ta bilder med Leica fluorescerende mikroskop. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
I denne studien er intraportal ruten Holme transplantasjon utforsket. Denne protokollen er svært effektiv i lindrende diabetiker stress og grundig mulighet å utforske Holme transplantasjon studier. Denne protokollen bekrefter at ca 350 murine holmer er i stand til å reversere hyperglycemic staten. Videre ingen av musene døde under prosedyren og glykemisk kontroll ble oppnådd i alle mottakere. Kroppen vekt og blod glucose høyder innspilt regelmessig for å gjenspeile den kompetanse, standard og funksjonalitet av transplantert holmer snu hyperglykemi. I syngeneically transplantert mus, ble blodsukkernivået målt hver dag for den første uken og en gang i uken etterpå. Etter holmer transplantasjon, hypoxic tilstand og andre utløse faktorer endotelceller skiller pro-angiogenic faktorer som VEGF etter 14 dager, og dermed øke vascular engraftment i leveren som vist i Figur 3. I allogene mus, ble blodsukkernivået målt tre ganger i uken for opptil 15 dager. Etter 15 dager, ble transplantert holmer avvist i allogene modellen på grunn av en immun angrep, Hvis suppressive medikamenter administreres
Det er flere Holme isolasjon protokoller publisert i litteratur10,11. Det enkleste er å plukke holmer manuelt ut fra deres størrelse og morfologi etter collagenase fordøyelsen. Dette er en av de mest avgjørende skritt å velge bare holmer og for å unngå exocrine celler, rusk, etc. valgt holmer bør opprettholdes på 37 ° C over natten i en inkubator å tillate dem å gjenopprette mekanisk stress oppstod under fordøyelsen prosedyre. Streptozotocin dose og intraportal Holme transplantasjon er også nøkkelen til denne protokollen. Kroppstemperaturen bør reguleres og vedlikeholdt ved hjelp av en varmeplaten gjennom den kirurgiske prosedyren. Sterilt gasbind bør brukes med minimal press for 6 min på stedet av punktering å unngå blødning. Mus bør holdes under observasjon før de har gjenopprettet tilstrekkelig bevissthet.
Enkelte trinn i denne protokollen kan endres. For eksempel kan optimalisering av tiden fordøyelsen og volumet av collagenase øke avkastningen av holmer i forskjellige mus stammer. I stedet for raske induksjon av diabetes (180 mg/kg streptozotocin), langsomt økende hyperglykemi kan indusert ved hjelp av en lavere dose over en lengre periode (f.eks 40 mg/kg/dag streptozotocin i 5 påfølgende dager). Dette kan gi bedre engraftment av transplantert holmer. Andre steder, som benmargen, omental veske, intramuskulær regionen, mage slimhinnen, milt og nyre kan utforskes som alternativer til intraportal venen.
Dårlig engraftment av transplantert holmer er fortsatt et stort problem i kliniske forsøk. Andre er mangel på givere, inkonsekvenser opprettholde blodsukker etter transplantasjon, immunsuppresjon og blod-medierte reaksjoner12,13. Mangel på metoder for å vurdere riktig engraftment er en annen hindring. Sporing transplantert holmer magnetisk resonans eller bioluminescens bildebehandling kan muligens erstatte klassiske metodene som glukose toleranse test eller c-peptid. I fremtiden, stamceller transplantert sammen med holmer kan gi ernæringsmessige og immunomodulating støtte14.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Alle forfattere erklærer at de har ingen interessekonflikt.
Acknowledgments
Vi ønsker å erkjenne Gundula Hertl for hennes støtte.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| C57Bl/6 mice | Charles River (Sulzfeld, Germany) | (10-12 weeks) | |
| BALB/c mice | Charles River (Sulzfeld, Germany) | (10-12 weeks) | |
| NMRI nude mice | Charles River (Sulzfeld, Germany) | (10-12 weeks) | |
| Ketamine | Bela-pharm | ||
| Xylazine | CEVA TIERGESUNDHEIT GmbH | ||
| Syringe, 23G and 26G needle | BD | ||
| Petri Dish | Falcon | 303800 | |
| NaCl | Carl Roth | 351007 | |
| Sterile Gauze | Fuhrmann | 7647-14-5 | |
| Shaking Water bath | Kotterman | 1501 | |
| Scissors | Braun | 1501 | |
| Glucose Meter | One Touch | ||
| Warm Thermal Plate | Thermo Fisher | ||
| Braunol (povidone-iodide solution) | B.Braun Melsungen AG | 3864154 | |
| Liposic Edo - Sprinkled Ointment (eye ointment) | Dr. G Mann Chem.-Pharm. GmbH | ||
| Incubator | Fa. Roth | ||
| Flow Bench | Herdus | ||
| Ficoll | Sigma-Aldrich | 10771 | |
| 5-0 Silk Suture Vicryl | Braun | (7.5 *1.75mm) | |
| Michel Clamps (clips) | Aesculap | BN507R | |
| P/FCS Solution | Gibco | 21180-021 | |
| TCM-199 (10x) | Gibco | 21180-021 | |
| FCS | Biowest | S1810-500 | |
| Penicillin-streptomycin | Gibco | 15140-122 | |
| HEPES (1 M) | Biochrom | L 1613 | |
| Gentamycin | Ratiopharm | ||
| Ciprofloxacin | Fresenius Kabi | ||
| Hank's Solution | Gibco | 14060-040 | |
| Collagenase | Roche | 11213865001 | |
| Streptozotocin | Calbiochem | 572204 | |
| OPSITE-spray (wound healer) | Smith and nephew | 66004978 | |
| Reugular food | Altromin | ||
| Head light LED 16042 (magnifying glass) | Eschenbach | 16042 | |
| Rat anti-mouse PECAM-1(CD31) monoclonal primary antibody | Millipore, Chemicon | CBL1337 | Dilution (1:100) |
| Donkey anti-rat secondary antibody | Dianova | 712095153 | Dilution (1:400) |
| Polyclonal guinea pig anti-insulin primay antibody | Dako | A0564 | Dilution (1:500) |
| Donkey anti-guinea pig secondary antibody | Dianova | 706-259-148 | Dilution (1:400) |
References
- McCall, M., Shapiro, A. M. Update on islet transplantation. Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 2 (7), a007823 (2012).
- Shapiro, A. M., et al. Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen. New England Journal of Medicine. 343 (4), 230-238 (2000).
- Cantarelli, E., et al. Bone marrow as an alternative site for islet transplantation. Blood. 114 (20), 4566-4574 (2009).
- Echeverri, G. J., et al. Endoscopic gastric submucosal transplantation of islets (ENDO-STI): technique and initial results in diabetic pigs. American Journal of Transplantation. 9 (11), 2485-2496 (2009).
- Korsgren, O., et al. Optimising islet engraftment is critical for successful clinical islet transplantation. Diabetologia. 51 (2), 227-232 (2008).
- Merani, S., Toso, C., Emamaullee, J., Shapiro, A. M. Optimal implantation site for pancreatic islet transplantation. British Journal of Surgery. 95 (12), 1449-1461 (2008).
- Lingwal, N., et al. Inhibition of gelatinase B (matrix metalloprotease-9) activity reduces cellular inflammation and restores function of transplanted pancreatic islets. Diabetes. 61 (8), 2045-2053 (2012).
- Chen, C., et al. Improved intraportal islet transplantation outcome by systemic IKK-beta inhibition: NF-kappaB activity in pancreatic islets depends on oxygen availability. American Journal of Transplantation. 11 (2), 215-224 (2011).
- Wang, Y., Wang, T., Zhang, L. Three aspects are critical for carrying out intraportal islet transplants successfully in a diabetes mouse model. Experimental and Clinical Transplantation. 10 (3), 302-304 (2012).
- Neuman, J. C., Truchan, N. A., Joseph, J. W., Kimple, M. E. A method for mouse pancreatic islet isolation and intracellular cAMP determination. Journal of Visualized Experiments. (88), e50374 (2014).
- Zmuda, E. J., Powell, C. A., Hai, T. A method for murine islet isolation and subcapsular kidney transplantation. Journal of Visualized Experiments. (50), (2011).
- Rother, K. I., Harlan, D. M. Challenges facing islet transplantation for the treatment of type 1 diabetes mellitus. Journal of Clinical Investigation. 114 (7), 877-883 (2004).
- Su, Z., et al. Small islets are essential for successful intraportal transplantation in a diabetes mouse model. Scandinavian Journal of Immunology. 72 (6), 504-510 (2010).
- Rekittke, N. E., Ang, M., Rawat, D., Khatri, R., Linn, T. Regenerative Therapy of Type 1 Diabetes Mellitus: From Pancreatic Islet Transplantation to Mesenchymal Stem Cells. Stem Cells International. 2016, 22 (2016).
