Summary
Qui, descriviamo l'induzione della sindrome nefrotica sperimentale nei topi di 129S1/SvImJ di iniezione rapida retrobulbar di doxorubicina. Trattiamo anche topi nefrosica con pellet di rilascio prolungato contenenti aprotinina per inibire l'attività della proteasi della serina urinaria e prevenire la ritenzione di sodio.
Abstract
La sindrome nefrotica è la manifestazione più estrema della malattia renale proteinuric e caratterizzata da proteinuria pesante, ipoalbuminemia ed edema a causa di ritenzione di sodio e l'iperlipidemia. Per studiare la fisiopatologia di questa sindrome, roditore sono stati sviluppati modelli basato sull'iniezione di sostanze tossiche quali doxorubicina provocando danni Podocita. In topi, solo alcuni ceppi sono sensibili a questo modello. Nei topi selvatici 129S1/SvImJ, la somministrazione di doxorubicina tramite iniezione endovenosa rapida al seno retrobulbar induce la sindrome nefrotica sperimentale che caratterizza tutti i sintomi della malattia umana, compreso l'edema e ritenzione di sodio. Dopo l'inizio della proteinuria, topi esposizione aumentata attività della proteasi della serina urinaria che conduce all'attivazione del canale epiteliale del sodio (ENaC) e ritenzione di sodio. L'inibizione farmacologica della proteasi della serina urinaria dal trattamento con rilascio prolungato aprotinina abroga l'attivazione ENaC e previene la ritenzione di sodio. Questo modello è ideale per studiare la fisiopatologia della proteasuria, cioè., l'escrezione delle proteasi della serina attivo che causano l'attivazione di ENaC di proteolisi di sua subunità γ. Questo può essere considerato come il meccanismo principale di attivazione di ENaC e ritenzione di sodio nella malattia renale proteinuric.
Introduction
La sindrome nefrosica è caratterizzata da iperlipidemia, ipoalbuminemia, edema e proteinuria pesante e può essere considerata come la manifestazione più estrema della malattia renale proteinuric. Nei roditori, sindrome nefrotica sperimentale può essere indotta da una singola iniezione di antracicline o con puromicina che conduce a danno del Podocita e somiglia malattia minima del cambiamento umano e glomerulosclerosis segmentale focale (FSGS)1. Dopo la sua prima descrizione nel 1955 da Frenk et al. 2, nefrosi di nucleosidici con puromicina (PAN) in ratti sono diventato un modello standard per studiare la fisiopatologia della sindrome nefrotica in numerosi studi3,4,5,6. Nei topi, il modello corrispondente può essere indotta da antraciclina doxorubicina7. Tuttavia, c'è una forte dipendenza ceppo geneticamente determinato da almeno due loci genetici8. Inoltre, ci sono differenze nella risposta proteinuric e nel corso della sindrome nefrotica9,10. Mediante iniezione endovenosa rapida di doxorubicina e topi 129S1/SvImJ via il seno retrobulbar, risposte a proteinuria raggiungono valori che sono sufficienti per indurre le caratteristiche tipiche della sindrome nefrosica, in particolare ritenzione di volume caratterizzato da ascite e quasi privo di sodio dell'urina7. Ritenzione di sodio nella sindrome nefrosica sperimentale è stata presunta per essere il risultato dell'attivazione del canale epiteliale del sodio (ENaC) nel tubulo distale da proteasi della serina aberrante filtrata come la plasmina causando proteolisi della sua subunità γ4 ,11,12. Recentemente, questo concetto è stato dimostrato in topi nefrotico che erano protetti da attivazione proteolitica di ENaC e ritenzione di sodio dal trattamento con la serina proteasi inibitore aprotinina che era ugualmente efficace come l'ENaC blocker amiloride13. Per assicurare la fornitura continua di tubulo distale, aprotinina è stato amministrato tramite rilascio prolungato impiantato sottocute pellet. Gli studi futuri sono necessarie per identificare le proteasi della serina che sono responsabili per l'attivazione proteolitica di ENaC nella sindrome nefrosica, che è pensata per la situazione umana in parallelo. Per questo scopo, sindrome nefrotica indotta da doxorubicina è un modello prezioso che può essere utilizzato nei topi wild-type o ampliato a topi geneticamente modificati. I vantaggi includono basso costo del farmaco, minore complessità di gestione e buona riproducibilità14.
In questo articolo, dimostriamo l'induzione della sindrome nefrotica sperimentale di iniezione endovenosa rapida di doxorubicina al seno retrobulbar e l'impianto di pellet a rilascio prolungato contenenti aprotinina per inibire la proteasi della serina urinaria attività come misurato con un test cromogenico.
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Protocol
Tutti i metodi sono stati condotti secondo l'istituti nazionali di salute Guida per la cura e uso di animali da laboratorio e la legge tedesca per il benessere degli animali, e sono stati approvati dalle autorità locali (Regierungspräsidium Tübingen).
1. induzione della sindrome nefrotica sperimentale di doxorubicina iniezione al seno Retrobulbar
- Preparare una siringa da 0,5 mL con una cannula di 30G montato contrassegnando la posizione di arresto del pistone.
- Calcolare il volume di iniezione di doxorubicina per uomo (7,25 µ l/g del peso corporeo (bw) uguale a doxorubicina bw 14,5 µ g/g) e topi femminili (6,9 µ l/g bw pari a 13,8 doxorubicina di bw µ g/g) in base al peso del corpo dalla mattina.
Nota: La data dose è appropriata per l'induzione della sindrome nefrotica. Piccole modifiche nel dosaggio conducono ad un corso diverso cruciale della nefropatia raggiungendo da malattia renale cronica lieve con solo piccoli cambiamenti nel tasso di filtrazione glomerulare (doxorubicina bw di 12,6 µ g/g) a renale acuta insufficienza (doxorubicina bw di 15,4 µ g/g)7, 15. - Riscaldare la quantità calcolata di soluzione di doxorubicina (2 µ g / µ l) in una camera calda a 37 ° C.
Attenzione: La doxorubicina è nocivo se ingerito e può causare il cancro. Sempre indossare guanti se lavorando con doxorubicina ed evitare qualsiasi contatto con la pelle. - Riempire la siringa con la soluzione di doxorubicina fino al punto di marcatura e impostare il saldo a zero. Riempire la siringa con il volume di iniezione e controllare il volume pesando la siringa.
- Narcotize il mouse profondamente con 5 vol % isoflurane utilizzando un vaporizzatore e il flusso di ossigeno di 2 L/min.
- Non usare pomata per gli occhi prima dell'iniezione. L'operatore ha bisogno di una visione chiara della cavita ' orbitale per l'esecuzione di un'iniezione retrobulbar sicuro e di successo.
- Valutare il livello di anestesia di pedale reflex ed eventualmente regolare consegna anestetica prima di iniziare ad iniezione.
- Posizionate il mouse a un decubito laterale di destra con dorso rivolto verso il corpo dell'operatore e la testa di fronte a mano iniezione dell'operatore.
Nota: La procedura è descritta per una persona di mano destra, per persone mancine eseguire l'iniezione con la mano sinistra è più facile fare la posizione e iniezione invertita destra a sinistra. - Attentamente sporgono dalla cavità oculare bulbo oculare sinistro del mouse applicando pressione delicata per la pelle, dorsale e ventrale per l'occhio.
- Puntura del seno di sinistra retrobulbar dall'angolo interno dell'occhio (commissura palpebrale mediale). Evitare il contatto con il bulbo oculare di mouse´s.
- Leggermente inclinate la siringa e iniettare l'intero volume in una sola volta. Assicurarsi che il volume viene iniettato senza resistenza e senza segni di stravaso come exopthalmus o perdite dal sito di iniezione.
- Poiché la doxorubicina è una sostanza altamente tossica, controllare benessere almeno una volta al giorno utilizzando un foglio di punteggio secondo Morton e Griffiths et al. 16 e prestare speciale attenzione al sito di iniezione. Se eventuali segni di stravaso come exopthalmus, la chiusura della palpebra alterata o segni di necrosi come occure lesioni della pelle o gonfiore dopo l'iniezione o nei giorni successivi, il mouse dovrebbe essere euthanized.
2. l'impianto di pellet a rilascio prolungato contenenti aprotinina
- Pellet di ordine con la dose desiderata per durata giorno e rilascio in anticipo. In caso di aprotinina, scegliere una dose di 1 mg al giorno per essere rilasciato in 10 giorni.
Nota: In questo studio, i pellet di aprotinina contengono una dose di 10 mg.- Conservare i pellet in luogo asciutto ed evitare qualsiasi esposizione all'umidità.
- Preparare gli elementi richiesti per la chirurgia, tra cui un paio di forbici per capelli, un paio di forbici di preparazione della pelle, un bisturi, pinzette chirurgiche, due paia di pinzette di tessuto, un porta-aghi e 15cm monofile sutura non riassorbibile.
- Sterilizzare gli strumenti utilizzando uno sterilizzatore calore per 5 min a 240 ° C. Prima di utilizzare gli strumenti, attendere 5 min fino a quando non raggiungono la temperatura ambiente.
- Evitare il contatto dei consigli strumento sterilizzato per superfici non sterili.
- Per evitare ustioni cutanee caldi strumenti.
- Sterilizzare gli strumenti utilizzando uno sterilizzatore calore per 5 min a 240 ° C. Prima di utilizzare gli strumenti, attendere 5 min fino a quando non raggiungono la temperatura ambiente.
- Narcotize del mouse con isoflurano 5 vol % seguita da 1,5 vol % utilizzando un vaporizzatore e ossigeno flusso di 2 L/min.
- Posizionare il mouse in posizione prona su un dispositivo per riscaldare coperto con uno strato di garza per evitare lesioni termiche al mouse. Temperatura in superficie è di circa 37 ° C.
- Proteggere gli occhi con l'unguento.
- Rimuovere i peli in mezzo torna in un'area di circa 0,5 cm2 con le forbici o un tagliacapelli e disinfettare la pelle senza peli con un disinfettante adatto per la disinfezione della pelle. Rimuovere come capelli meno possibile così rimane più difficile per il mouse raggiungere la ferita e thread termina più tardi e per mantenere la temperatura corporea.
- Incidere la pelle senza peli con un bisturi in direzione cranio-caudale di una lunghezza di circa 5 mm. Prepare un sacchetto laterale sinistro di circa 1 cm di profondità nel tessuto connettivo sottocutaneo usando una preparazione smussata.
- Valutare il livello di anestesia di pedale reflex ed eventualmente regolare consegna anestetica prima di iniziare l'intervento chirurgico.
- Inserire un 10-giorno rilascio pellet il sacchetto laterale sinistro preparato utilizzando pinzette sterili per tessuti. Lasciare la pallina nella parte inferiore del sacchetto in posizione planare.
- Evitare il contatto del pellet di liquido e umidità fino a inserito nella busta di preparato.
- Chiudere la pelle con 2-3 punti di sutura. Lasciare solo le estremità del filo molto breve per rendere più difficile per il mouse per aprire le suture di rosicchiamento.
- Posizionare i topi singolarmente per ridurre il disagio postoperatorio e per prevenire l'apertura delle suture di rosicchiamento. Tenere il mouse in vista fino a quando ha riacquistato sufficiente coscienza dopo narcosi.
Nota: non c'è nessuna necessità di trattamento del dolore postoperatorio poiché questo intervento è ben tollerato senza alcun segno di disagio o dolore. In alternativa si consiglia di analgesici topici, ad es. una goccia di bupivacaine sull'incisione prima della chiusura che fornirebbe fino a 8 h di analgesia.
3. valutazione modello induzione, segni della sindrome nefrotica e benessere
- Raccogliere le urine del mattino (8:00) in una tazza di reazione (1,5 mL) ogni giorno dal giorno iniezione massaggiando la vescica.
- Proteinuria di misure mediante analisi della proteina di Bradford e normalizzare in creatinina.
Nota: Per l'induzione della sindrome nefrotica, proteinuria dovrebbe raggiungere una soglia di creatinina di 120 mg/mg tra 7 e 10 giorno dopo l'iniezione di doxorubicina.
- Proteinuria di misure mediante analisi della proteina di Bradford e normalizzare in creatinina.
- Cercare lo sviluppo di ascite. Verifica per aumento della circonferenza addominale o fianchi sporgenti.
- Pesa il mouse, le palline di cibo e la bottiglia bevente al mattino (8:00) ogni giorno.
- Verifica benessere almeno una volta al giorno utilizzando un foglio di punteggio secondo Morton e Griffiths et al. 16
4. misurazione della proteasi della serina urinaria con un test cromogenico
- Preparare soluzione substrato aggiungendo 15 mL di soluzione salina sterile tamponata al fosfato (PBS) per una bottiglia di 25 mg di substrato cromogenico liofilizzata S-2251, producendo una concentrazione di 2 mM. Sciogliere aprotinina in PBS per ottenere una soluzione di aprotinina con una concentrazione di 2 mg/mL.
- Memorizzare le soluzioni preparate a-20 ° C. Questo rallenta significativamente la auto-degradazione di S-2251. Non utilizzare soluzioni vecchie con una forte tonalità di giallo.
- Utilizzare la soluzione di lavoro del substrato appena preparata o scongelati e caldo in una camera di calore di 37 ° C.
- Scongelare i campioni di urina a temperatura ambiente.
- Prevenire il degrado della proteasi evitando ripetuto scongelamento e ricongelamento. Conservare i campioni di urina a-20 ° C.
- Utilizzare una piastra microtiter di 96 adatta per misurazione fotometrica. Aggiungere 3 µ l di urina non diluito in ciascuno dei due pozzetti e aggiungere 50 µ l di soluzione di lavoro del substrato con 3 µ l di soluzione PBS o di aprotinina ai pozzetti. Coprire la piastra con un foglio sigillante.
- Incubare la piastra microtiter coperto per 60 min in una camera di calore di 37 ° C.
- Misurare la densità ottica di ciascun pozzetto a 450 nm utilizzando un lettore di micropiastre.
- Prendere la differenza tra il diametro esterno senza aprotinina e con aprotinina come attività di urinaria aprotinina sensibili serina proteasi.
Nota: Misurazione di un campione accoppiato con e senza aprotinina aumenta la specificità del test poiché il substrato potrebbe anche essere clivato da altre proteasi che non giocano un ruolo fisiopatologico.
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Representative Results
Dopo l'induzione della narcosi isoflurano, doxorubicina è stato iniettato rapidamente via il seno sinistro retrobulbar. L'intero volume di 7,25 µ l/g bw è stato iniettato senza alcuna resistenza e lo stravaso dimostrando correggere endovenosa posizione della cannula. Il mouse ha recuperato da narcosi velocemente e ha avuto nessun danno in quel giorno e da allora in poi. In particolare, non c'era alcun segno di danno all'occhio sinistro. Dopo doxorubicina iniezione, cibo e l'assunzione fluida è sceso oltre i primi 3 giorni a causa di un generale effetto tossico di doxorubicina e recuperato da allora in poi (Figura 1a). Durante i primi 3 giorni dopo l'iniezione, il mouse ha perso il 3,4% del relativo peso corporeo a causa di inappetenza (Figura 1b). A partire dal 5° giorno, il mouse sviluppato marcata proteinuria (Figura 1C) che è stata seguita da una massiccia diminuzione dell'escrezione urinaria del sodio nonostante l'assunzione di cibo adeguato (Figura 1a, b). Questa ritenzione di sodio portano ad un enorme guadagno di peso corporeo del 22,2% dal 3 ° giorno fino al giorno 10 ed è stato accompagnato dall'ascite. Come conseguenza di proteinuria, il mouse sviluppato ipoalbuminemia (Figura 1C). In un campione di plasma prelevato il giorno 10, iperlipidemia era visibile. Questi dati mostrano che la doxorubicina dato dal seno retrobulbar rapidamente e impressionante induce una vera e propria sindrome nefrosica nei topi selvatici 129S1/SvImJ.
Ritenzione di sodio nella sindrome nefrosica sperimentale era legato all'attivazione di ENaC per filtrazione aberrante della proteasi della serina come plasmina11,12. Se questo concetto vale, l'inibizione delle proteasi della serina urinaria di aprotinina dovrebbe proteggere da ENaC attivazione e ritenzione di sodio. Per studiare l'effetto di aprotinina sull'attivazione di ENaC, abbiamo trattato un mouse nefrosica con aprotinina. Aprotinina è rapidamente eliminato per filtrazione glomerulare, abbiamo scelto usando un batuffolo di rilascio prolungato per garantire la disponibilità continua di aprotinina nel tubulo distale oltre i 10 giorni di somministrazione. Il terzo giorno dopo l'iniezione di doxorubicina, un mouse è stato impiantato con un pellet contenenti aprotinina e un mouse di controllo ha ricevuto un pellet con placebo sotto narcosi isoflurano. Animali ha recuperato velocemente narcosi di forma e la ferita è guarita senza problemi. Dal giorno 5, proteinuria sviluppato in entrambi i topi in simile misura (Figura 2a). Tuttavia, solo i topi nefrosica trattati con placebo hanno avvertito ritenzione di sodio (Figura 2b) e aumento di peso corporeo (Figura 2C) che indica l'attivazione di ENaC. Al contrario, il mouse trattati con aprotinina era protetto da ritenzione di sodio e aumento di peso di corpo (Figura 2b, c). Questo dimostra chiaramente che l'attività della proteasi della serina urinaria è la causa della ritenzione di sodio nella sindrome nefrosica.
La concentrazione di aprotinina raggiunta in urina e del plasma è stata misurata con un test ELISA. Come mostrato in Figura 3a, concentrazione urinaria aprotinina ha alzato presto dopo l'impianto e da allora fu costante. Media concentrazione urinaria aprotinina era 207 ± 29 µ g/mL (32 ± 4 µM) considerando che la concentrazione di aprotinina del plasma dopo 10 giorni di trattamento era 13 µ g/mL (2 µM), che è paragonabile alla concentrazione del plasma ottenuti in pazienti trattati con aprotinina17. L'effetto di aprotinina su attività della proteasi della serina urinaria è stata misurata con un test cromogenico utilizzando campioni di urina prelevati durante il corso della sindrome nefrotica sperimentale. Questa analisi è basata sull'idrolisi del legame peptidico nel substrato rilasciando la p-nitroanilina che può essere facilmente rilevato da fotometria a 450 nm. Come illustrato in Figura 3b, l'attività della proteasi della serina aumentò rapidamente nelle urine dal mouse nefrosica trattati con placebo in parallelo l'insorgenza di proteinuria. Al contrario, l'attività della proteasi della serina urinaria completamente è stata inibita nel topo nefrotico aprotinina-trattati in concomitanza con la prevenzione dell'attivazione di ENaC e ritenzione di sodio indicato nella Figura 2b, c.
Figura 1: corso di assunzione di cibo e fluido (a), sodio urinario escrezione e corpo peso (b) e concentrazione di albumina del plasma e proteinuria (c) prima e dopo l'induzione della sindrome nefrotica sperimentale. Dopo un declino negli alimenti e l'assunzione di liquidi durante i primi tre giorni dopo doxorubicina, topi mostrano un'assunzione quasi costante. Dopo cinque giorni, lo sviluppo di proteinuria inizia e raggiunge nefrotica soglia fra i giorni 7 e 10, che conduce alla vera e propria sindrome nefrotica con formazione di edema, ritenzione di sodio e il hypoalbuminemia. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 2: corso di proteinuria (a), l'escrezione urinaria del sodio (b) e peso corporeo (c) in un mouse trattati ognuno con pellet di aprotinina o placebo il giorno 3 dopo l'iniezione di doxorubicina. Nonostante lo sviluppo di proteinuria in misura analoga aprotinina protegge dalla formazione di edema e ritenzione di sodio causata dall'attivazione di ENaC durante la sindrome nefrotica. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 3: percorso di concentrazione urinaria aprotinina dopo l'impianto del pellet con concentrazione nel plasma di aprotinina. Corso di attività della proteasi della serina urinaria misurata con il test cromogenico descritto nel passaggio 4. Concentrazione urinaria di aprotinina picchi presto dopo l'impianto ed è costante da allora in poi. L'attività della proteasi della serina aumenta rapidamente nelle urine durante la sindrome nefrotica, l'insorgenza di proteinuria in parallelo. Aprotinina in vivo previene contro aumento nell'attività della proteasi della serina urinaria. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
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Discussion
Qui, dimostriamo che iniezione di doxorubicina tramite iniezione retrobulbar del seno induce la sindrome nefrotica sperimentale nei topi di 129S1/SvImJ con proteinuria, ritenzione di sodio, hypoalbumenia e iperlipidemia. Tuttavia, ci sono due problemi critici che devono essere presi in considerazione quando si utilizza questo modello. In primo luogo, l'induzione del modello è strettamente dipendente dalla dose e deviazioni della dose di doxorubicina piccolo come 0,3 µ g/g di influenzano la risposta dei topi15. Quando iniettati con una dose più bassa ad esempio 14 µ g/g bw o qui di seguito, doxorubicina provoca proteinuria non-nefrotico solo che non è associata a ritenzione di sodio evidente, l'ascite e l'iperlipidemia. Al contrario, l'iniezione di una dose più alta porta a insufficienza renale acuta e l'alta mortalità acuta. Secondo la dose e la risposta dei topi, cause di doxorubicina un corso simile ad insufficienza renale acuta umana (AKI), malattia renale cronica con conservato filtrazione glomerulare valuta (stadio CKD G1-3) o la malattia renale cronica progressiva con ridotta tasso di filtrazione glomerulare (CKD G4-5) che porta a uremia7,15.
In secondo luogo, questo modello è limitato a determinati ceppi di topi e il ceppo C57Bl/6 ampiamente usato è resistente8. Inoltre, contaminazione genetica come potrebbero essere presenti durante un reincrocio può portare a un tasso di risposta significativamente più basso. Questo può essere evitato in una certa misura, aumentando la dose di doxorubicina. Tuttavia, la dose di doxorubicina utilizzato per l'induzione del modello (14,5 µ g/g bw) è già vicino il LD50 descritto tra 15-17 µ g/g bw in questo ceppo7,18.
L'uso di questo modello di mouse si apre la possibilità di studiare diverse domande altamente innovative riguardanti la sindrome nefrotica, raggiungendo da proteinuria ed edema formazione i dysregulations endocrinologici e anemia renale15. In questo senso, nefropatia indotta da doxorubicina copre l'ampio spettro di CKD umana ed è una buona alternativa ai modelli attuali utilizzate in nefrologia ricercare tali 5/6 il nephrectomy19,20 o uretere unilaterale legatura21. Inoltre, è possibile applicare il modello di topi geneticamente modificati per studiare il ruolo di un certo gene di interesse nel corso del modello ad esempio la mancanza della chinasi del siero e glucocorticoide 1 (SGK1)7 o molti altri.
Una caratteristica speciale del modello presentato è l'avvenimento di proteasuria, i. e., l'escrezione delle proteasi della serina attivo che causano l'attivazione di ENaC di proteolisi della sua subunità γ. Ciò conduce all'escrezione di un quasi privo di sodio dell'urina e volume ritenzione caratterizzata da rapida di peso corporeo e lo sviluppo di ascite dopo l'inizio del proteasuria. Tuttavia, questo fenomeno è transitorio, e dopo 15 giorni, topi spontaneamente sciolto l'ascite e peso anche se persiste proteinuria. La ragione, tuttavia, resta sfuggente. Questo comportamento paradossale inoltre è stato osservato negli studi con ratti nefrotica4 e sembra rappresentare una caratteristica generale della sindrome nefrotica sperimentale in roditori.
L'attività della proteasi della serina urinaria è stata misurata con un test cromogenico che è semplice e veloce. Si basa sull'idrolisi del legame dell'ammide della p-nitroanilina legata ad un peptide della lunghezza di 4 aminoacidi che può essere clivata da una proteasi diverse. In genere, substrati cromogeni non sono specifici per una certa proteasi e c'è sostanziale sovrapposizione delle proteasi che fendono un particolare substrato. Il substrato usato qui è un substrato preferito della proteasi della serina tripsina-come ad esempio plasmina o plasma callicreina22. Per aumentare la specificità, l'attività della proteasi dovrebbe sempre essere risoluto da un campione accoppiato con e senza un inibitore23,24. In questo studio, aprotinina è stato utilizzato per definire attività di proteasi della serina tripsina-simile. Calcolando l'attività di aprotinina sensibili dalla differenza, le attività di altre proteasi sono vanificate. Nel topo nefrosica trattato con aprotinina in vivo l'attività della proteasi della serina urinaria non era aumentato e soprattutto coincise con abrogazione della ritenzione di sodio. Così, l'attività della proteasi della serina urinaria non è solo causale per ritenzione di sodio nella sindrome nefrosica, ma può anche essere considerata un biomarcatore per prevedere l'efficacia di un inibitore della proteasi della serina nella sindrome nefrosica, che potrebbe diventare un nuovo punto di vista terapeutico approccio trattamento della sindrome nefrosica. Nello studio di Bohnert et al. 13, la serina proteasi inibitore mesilate e del plasminogeno conversione inibitore acido tranexamico non erano efficaci nella prevenzione della ritenzione di sodio che ha coinciso con un tentativo di normalizzare l'attività della proteasi della serina urinaria.
Anche se la doxorubicina è una sostanza altamente tossica, iniezione retrobulbar è sicuro e non associato a qualsiasi danno che ha alterato il benessere dell'animale. Si potrebbe sostenere che l'iniezione della vena della coda sarebbe un approccio più adatto, ridurre la sofferenza degli animali. In uno studio comparativo, abbiamo scoperto che induzione tramite iniezione della vena della coda di doxorubicina era inferiore a retrobulbar rotta a causa di un più alto tasso di topi che non hanno sviluppato la sindrome nefrotica (34% non-responsivi) rispetto a quelli indotti dalla retrobulbar rotta ( 0-15% non-responder). Inoltre, proteinuria di iniezione della vena della coda era più basso che porta alla ritenzione di sodio attenuato. Questo potrebbe essere spiegato dalle differenze nella farmacocinetica e un' più alta concentrazione di doxorubicina realizzata dopo l'iniezione retrobulbar rapida che è essenziale per l'induzione del modello di danno del Podocita. Tuttavia, si deve sottolineare che l'iniezione retrobulbar ha bisogno di un operatore altamente qualificato ed esperto per evitare la complicazione relativa allo stravaso di quantità anche minime di doxorubicina.
In conclusione, la sindrome nefrotica sperimentale da doxorubicina è un modello versatile della malattia renale proteinuric in topi 129S1/SvImJ che permette di indagare questioni scientifiche altamente attuale, soprattutto proteasuria.
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Disclosures
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Acknowledgments
Questo studio è stato sostenuto da una sovvenzione della Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG, AR 1092/2-1).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| supplies | |||
| BD Micro FINE + U-40 (0.30 mm x 8 mm) | BD Deutschland GmbH, Heidelberg, Germany | PZN: 07468060 | syring |
| ETHILON*II (5/0, 16 mm, 3/8c, 45 cm) | Johnson&Johnson Medical GmbH, Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany) | EH7823H | suture |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| reagents | |||
| aprotinin (6000 KIU/mg) | LOXO, Heidelberg, Germany | CAS 9087-70-1 | |
| Bepanthen, Augen- und Nasensalbe | Bayer Vital GmbH, Leverkusen, Germany | PZN: 1578681 | ointment |
| Chromogenix S-2251 | HAEMOCHROM DIAGNOSTICA GmbH, Essen, Germany | 82 0332 39 | chromogenic substrate |
| doxorubicin (2.0 µg/µL) | Cell Pharm, Bad Vilbel, Germany | CAS 25316-40-9 | doxorubicin |
| isofluran CP (1 mL/mL) | CP-Pharma, Burgdorf, Germany | CAS 26675-46-7 | isofluran |
| pellets with matrix-driven sustained release (custom-made) | Innovative Research of America, Sarasota, FL | X-999 | pellet |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| equipment | |||
| ELx808 Absorbance Mikroplate Reader | BioTek, Bad Friedrichshall, Germany | ELx808 | microplate reader |
| MICROSTERIL - 436 | B.M.S., Trescore Balneario, Italy | GAL/436 | sterilizer |
| Hybridization oven/shaker | GE Healthcare UK Limited, Amersham LIFE SCIENCE, Little Chalfont, UK | RPN 2511 | heat chamber |
| Thermo MAT Pro 10 W, 15x25 cm, Lucky Reptile | Import Export Peter Hoch GmbH, Waldkirch, Germany | 61201 | mouse warming device |
References
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