Summary
ويتجلى بروتوكولا لتعزيز الإشارات أيون الكربوهيدرات في استخدام الطيف الكتلي بإصلاح الهياكل البلورية أثناء عمليات إعداد عينة.
Abstract
إعداد عينة عملية حاسمة في تحليل الطيف الكتلي (مللي ثانية) من الكربوهيدرات. على الرغم من أن الليزر ساعد مصفوفة الامتزاز/التأين (استخدام) مرض التصلب العصبي المتعدد هو الأسلوب المفضل في تحليل الكربوهيدرات، ستظل أيون الفقيرة الإشارات والبيانات إمكانية تكرار نتائج العينات الكربوهيدرات مشاكل حادة. للتحليل الكمي من الكربوهيدرات، بروتوكولا تحليلية فعالة توفر بيانات فائقة الجودة ضروري. ويوضح هذا الفيديو نموذج إعداد بروتوكولات تحسين كثافة الإشارات وتقليل التباين البيانات من الكربوهيدرات في استخدام MS. بعد التجفيف، وتبلور من قطرات العينة، يتم إصلاح مورفولوجية كريستال من الميثانول قبل التحليل الشامل والمطيافيه. هو بحث تعزيز في إشارة الكربوهيدرات باستخدام التصوير الكتلي (IMS). وتظهر النتائج التجريبية أن إصلاحهم كريستال يضبط هياكل بلورية وتوزيع تحليلها الكربوهيدرات. بالمقارنة مع طريقة إعداد الحبرية المجففة التقليدية استخدام-مللي ثانية، الكربوهيدرات إصلاح كريستال مورفولوجيس مع الميثانول يظهر كثافة إشارة أفضل بكثير، وتوزيع الصورة أيون واستقرار البيانات. منذ بروتوكولات أثبتت هذه الوثيقة لا تنطوي على تغييرات في تكوين عينة، فتنطبق عموما على مختلف الكربوهيدرات ومصفوفات.
Introduction
تحليل الكربوهيدرات هي أحد المواضيع الهامة والصعبة. الكربوهيدرات ومشتقاتها تلعب أدواراً هامة تعيش الكائنات الحية1،،من23. قد أدى إلى تعقيد هياكل هذه الجزيئات وهي عرضه لتتحلل. لا يمكن أن توصف العديد منهم واضح بسبب صعوبات في فصل والكشف. تحليل الكربوهيدرات باستخدام MS استخدام ما زال على الرغم من أن تم تطبيق تحليل طائفة واسعة من الجزيئات الحيوية، نظراً لحساسية ونتائج مفهومة4، الليزر ساعد مصفوفة الامتزاز/التأين (استخدام) الطيف الكتلي (مللي ثانية) أن يكون تحديا كبيرا بسبب كفاءة التأين المنخفضة مثل هذه الجزيئات5. Derivatization الكيميائية بطريقة مشتركة لتحسين كفاءة التأين من الكربوهيدرات6،7، ولكن هذه الإجراءات بالوقت واستهلاك العينة. وإلى جانب ذلك، كفاءة التأين الكربوهيدرات ديريفاتيزيد لا يزال أقل من البروتينات. وهكذا، ضروري استحداث طرق لتحسين إشارة الكربوهيدرات في استخدام MS دون إجراءات معقدة.
تطبيق استخدام MS للتحليل الكمي موضوع تحديا آخر. مشكلة رئيسية تتمثل في استخدام--مرض التصلب العصبي المتعدد أن لها إمكانية تكرار البيانات وحساسية نتائج تعتمد حاسمة على عينة إعداد البروتوكولات والمعايير التجريبية. في كثير من الحالات، التحليل الكمي باستخدام--مرض التصلب العصبي المتعدد لا يمكن الاعتماد عليها بسبب مورفولوجيس عينة غير متجانسة وتوزيع أكثر. الأمثلة معروفة جيدا عينات أعد مع مصفوفة (المجالس الصحية المحلية) استخدام حمض 2، 5-ديهيدروكسيبينزويك. مدى إدماج أكثر في مصفوفة بلورات عندما يتم تبلور المجالس الصحية المحلية ببطء تحت البيئة المحيطة، لا يمكن التنبؤ بها، نظراً لإظهار العينات الناتجة مورفولوجيس غير النظامية. وتتمثل هذه العينات عادة بلورات على شكل إبرة وغرامة كبيرة. عند إعداد المجالس الصحية المحلية باستخدام المذيبات المتطايرة و/أو لوحة عينة ساخنة، عملية تجفيف سريعة ينتج بلورات غرامة أكثر تجانساً وأفضل النتائج الكمية8،،من910. هذا الأسلوب يعرف باسم "البلورة" استخدام العينات. ويعزى التحسن إلى إدماج أفضل لتحليلها في مصفوفة غرامة بلورات أثناء عملية التبلور بسرعة. لقد أظهرنا أيضا أن التكيف مع البيئة إعداد نموذج تخفيض تباين إشارة الكربوهيدرات وتحسين النتائج الكمية11،12. النتائج في هذه الأعمال تشير إلى أن عينة مورفولوجيا عاملاً حاسما في تحديد جودة الإشارة الكربوهيدرات. لوضع استراتيجية عامة للتحليل اليومي، مطلوب أسلوب إصلاح عينة كفاءة توفير حساسية الكربوهيدرات المحسنة.
وقد درسنا بانتظام العلاقة بين حساسية عينة مورفولوجيا والكربوهيدرات في استخدام--مرض التصلب العصبي المتعدد في تقرير الأخيرة13. إظهار مصفوفات استيفاء تعزيز الإشارات أفضل من ريكريستاليزينج المجففة استخدام العينات والنتائج المتحصل عليها باستخدام العديد من الكربوهيدرات الهامة. يتم إصلاح مورفولوجية عينات المعدة باستخدام الطريقة التقليدية الحبرية المجففة (دد) من البلورة بسرعة مع الميثانول (ميوه). وأظهرت البروتوكولات إعداد نماذج مفصلة هنا. البروتوكول يتكون من ثلاث خطوات رئيسية، بما في ذلك نموذج لوحة preconditioning وترسب العينة والبلورة، وتحليل الطيف الكتلي. وتشمل الكربوهيدرات استخداماً سياليل-لويس (SLeA) ومالتوهيبتاوسي (MH). المجالس الصحية المحلية كمصفوفة نموذج. وتبين النتائج أن كثافة إشارة الكربوهيدرات والتوزيع المكاني تحسنت بشكل ملحوظ بعد البلورة. يمكن تطبيق هذه طريقة للعينات مع المصفوفات شعبية أخرى، بما في ذلك 2,4,6-تريهيدروكسياسيتوفينوني (تاب) وحمض α-سينو-4-هيدروكسيسيناميك. يعمل هذا الأسلوب كنهج عام التي يمكن أن تدمج بسهولة في روتين مختبر لتحليل الكربوهيدرات.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1-نموذج لوحة Preconditioning
-
تنظيف لوحة عينة
- ارتداء القفازات النتريل تجنب تلوث لوحة عينة أثناء التنظيف.
- غسل اليد لوحة عينة مع 100.0 مل من محلول التنظيف (1.0 ملغ/مل).
- غسل اليد لوحة عينة مع الماء المقطر-منزوع (دو).
- أشطف السطح لوحة عينة مع مل 30.0 من ميوه.
- وضع لوحة عينة في الكأس 600 مل والتعبئة مع دو حتى لوحة عينة هي مغمورة تماما في الماء.
- وضع في الكأس الموجات فوق الصوتية حمام (انظر الجدول المواد) و sonicate لوحة عينة لمدة 15 دقيقة (200 W، 40 كيلو هرتز).
- إخراج لوحة عينة وينفخون قطرات الماء باستخدام النتروجين المضغوط.
- إيداع ميليلتر 0.2 من ميوه على لوحة عينة للتحقق ما إذا كان ميوه ينتشر إلى مناطق أخرى.
ملاحظة: إذا ميوه يدمج مع بقع أخرى، كرر الخطوات 1.1.3-1.1.5؛ إذا لم يكن كذلك، انتقل إلى الخطوة التالية.
-
تنظيم درجة حرارة غرفة التجفيف
- استخدام غرفة تجفيف تحت ظروف ثابتة لتجف قطرات، كما هو موضح سابقا11،،من1213. على وجه الخصوص، استخدام الإجراءات المفصلة المبينة في الخطوات 2.1-2.5 من Ou، ي. م. et al. 12بحلول عام 2016. باختصار:
- تطهير غرفة التجفيف بالنيتروجين في درجة حرارة الغرفة بمعدل تدفق مستمر للحفاظ على بيئة منخفضة رطوبة النسبية.
- الاحتفاظ بعينه لوحة درجة الحرارة الثابتة العادية-(25 درجة مئوية) أو ظروف سريعة الجفاف (50 درجة مئوية)، ينظمها كتلة نحاس التحكم في درجة الحرارة في غرفة التجفيف.
- استخدام غرفة تجفيف تحت ظروف ثابتة لتجف قطرات، كما هو موضح سابقا11،،من1213. على وجه الخصوص، استخدام الإجراءات المفصلة المبينة في الخطوات 2.1-2.5 من Ou، ي. م. et al. 12بحلول عام 2016. باختصار:
-
إعداد مصفوفة وأكثر الحلول
-
إعداد مصفوفة الحلول
- حل المجالس الصحية المحلية في 50% الاسيتو الانيتريل (ACN): 50% دو لإعداد حل م 0.1.
-
إعداد التحاليل الكربوهيدرات
- حل SLeA في دو لإعداد حل م 10-4 .
- حل MH في دو لإعداد حل م 10-4 .
-
إعداد مصفوفة الحلول
2-عينة من ترسب والبلورة
ملاحظة: ويرد وصف الإجراءات المحسنة لتحليل كميات صغيرة ومنتظمة من العينات هنا. التأكد من أن درجة الحرارة لوحة عينة استقرت في درجة الحرارة المطلوبة قبل إيداع الحلول. إذا كانت العينة ينتشر على مساحة كبيرة لتغطية البقع عينة أخرى خلال البلورة، إعداد نموذج جديد أو كرر الخطوة 1، 1.
-
لتحليل كمية صغيرة (0.1 ميليلتر) من عينة
ملاحظة: ووضعت الخطوات التالية للتقليل من استهلاك العينة والوقت. ومناسبة للتحليل الكمي لعينات حقيقية مع كمية محدودة أو الرصد السريع للتحليل الكمي.- بريمكس ميليلتر 0.25 حل المجالس الصحية المحلية و 0.25 ميليلتر من SLeA أو حل MH في أنبوب ميكروسينتريفوجي.
- دوامة الحل المختلط باستخدام خلاط دوامة 3 s.
- تدور أسفل الحل المختلط في أجهزة الطرد مركزي ميني 2 s (2000 x غ).
- استخدام ماصة لاستخلاص ميليلتر 0.1 من الحل خلط وإيداعها فورا على لوحة عينة.
ملاحظة: عند إيداع مبلغ صغير من العينة، لا يبقى الحل خلط في غيض ماصة لأكثر من 10 ق. - الانتظار للحصول على نموذج لتجف. الأوقات التجفيف نموذجي مدرجة في الجدول 1.
- استخدام ماصة إيداع ميليلتر 0.2 من ميوه الحق على الفور العينة المجففة. سوف تحصل على العينة الرطب والجاف الفور.
ملاحظة: ضمان أن يتم إنهاء الإجراء ترسب في 3 s لتجنب خسارة كبيرة التبخر من ميوه. - فحص العينة باستخدام مجهر. إذا لم تكن مورفولوجيس كريستال كالمتوقعة (انظر الشكل 1 على سبيل المثال من النتائج المرجوة)، كرر الخطوات 2.1.1-2.1.6 لإعداد نموذج جديد.
- ارتداء القفازات النتريل وعناية تأخذ بها لوحة عينة من غرفة التجفيف.
-
لتحليل كمية العادية (1 ميليلتر) من عينة
ملاحظة: الخطوات التالية التي توضع لتحقيق الحد الأقصى من تجانس العينات الكربوهيدرات مع كمية العينة استخدام المستخدمة عادة. هذه العملية مناسبة للروتين والتحليلات الكمية. عملية البلورة توزيع العينات ومصفوفات بالتساوي إلى مناطق أوسع.- بريمكس ميليلتر 2.5 من حل المجالس الصحية المحلية و 2.5 ميليلتر SLeA أو حل MH في أنبوب ميكروسينتريفوجي.
- دوامة الحل خلط مع خلاط دوامة ل 5 ق.
- تدور أسفل الحل المختلط في أجهزة الطرد مركزي ميني 2 s (2000 x غ).
- استخدام ماصة لاستخلاص ميليلتر 1.0 لحل خلط وإيداعها فورا على لوحة عينة.
ملاحظة: لا استخدام الباقية ممزوجة مسبقاً الحل مرة أخرى بعد إيداع العينات. - الانتظار للحصول على نموذج لتجف. الأوقات التجفيف نموذجي مدرجة في الجدول 1.
- استخدام ماصة إيداع 1.5 ميليلتر من ميوه الحق على الفور العينة المجففة. سوف تحصل على العينة الرطب والجاف الفور.
ملاحظة: الحالات مع درجة حرارة صفيحة العينة عالية (50 درجة مئوية)، ينبغي القيام بالخطوة البلورة داخل 5 s لتقليل تبخر ميوه في تلميح ماصة. - فحص العينة باستخدام مجهر. إذا لم تكن مورفولوجيس كريستال كالمتوقعة (انظر الشكل 1 على سبيل المثال من النتائج المرجوة)، كرر الخطوات 2.2.1-2.2.6 لإعداد نموذج جديد.
- ارتداء القفازات النتريل وعناية تأخذ بها لوحة عينة من غرفة التجفيف.
3-كتلة بيانات قياس الطيف الكتلي اقتناء وتحليل
ملاحظة: يتم تنفيذ التحليل استخدام تجارية وقت الطيران جماعي مطياف (جدول المواد) مجهزة باستخدام مصدر أيون. تشغيل برنامج حاسوبي لمراقبة محددة (جدول المواد) الصك مع الأمثل قبل استخراج الطاقة من التأخير والليزر. وتسجل الأطياف في النمط الخطي مع نطاق شامل من m/z = 0 – 1500. لوحة عينة المحتملة هو ±25 كيلو وكل طائفة في المتوسط 10 طلقات الليزر. ينبغي إجراء التحسين الصك وتحليل العينات باستخدام برنامج متوافق مع المستخدمين واتبع إرشادات الشركة المصنعة للصك.
- فتح برنامج التحكم الصك (انظر الجدول للمواد).
- إدراج لوحة عينة في مطياف كتلة.
- حدد أسلوب الحصول على البيانات الأمثل مسبقاً في البرنامج.
- سجل منطقة نموذج كامل لبرامج التصوير باستخدام نظام الرصد الدولي (انظر الجدول للمواد).
ملاحظة: تخطي هذه الخطوة إذا لم يفعل نظام الرصد الدولي. - بدء الحصول على البيانات في الوضع الدفعي من برنامج التحكم.
- ارسم الصور أيون باستخدام برامج التصوير بعد الانتهاء من الحصول على البيانات.
- تحليل الأطياف الشامل باستخدام برمجيات التحليل (انظر الجدول للمواد) إذا كان يتم تسجيل البيانات دون صورة أيون.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
ممثل وزارة شؤون المرأة صور SLeA مختلطة مع المجالس الصحية المحلية المعدة باستخدام دد وأساليب البلورة تظهر في الشكل 1. مورفولوجيا المجالس الصحية المحلية نموذجية كما أعدت بواسطة الأسلوب DD بلورات كبيرة على شكل إبرة في بريم والهياكل البلورية الجميلة في مركز البقع عينة. هي أطوال النموذجية لمثل هذه البلورات على شكل إبرة ~ 100 ميكرومتر. بعد البلورة من ميوه، قد العينة مساحة أكبر تغطية بالتساوي مع غرامة مثل تقشر بلورات. أطوال بلورات "فليك" تقريبا 20-50 ميكرومتر. ريكريستاليزيد عينات توفير المساحات السطحية فعالية أكبر من تلك التي تنتجها التقليدية DD العينات.
تشير نتائج الرصد أن بلورات مثل تقشر عادة ما يؤدي إلى ارتفاع كثافة إشارة الكربوهيدرات وتوزيع المكاني أكثر تجانساً. في عينات DD التقليدية، توزع إشارات أيون الكربوهيدرات معظمها في محيط البقع عينة. ويبين الشكل 2 نتائج الرصد SLeA و MH مع أو بدون ميوه البلورة. بعد البلورة، عينة توزيع SLeA و MH إشارات مطابقة تماما مع صورة مشرقة ميدان البقع. أيضا، تظهر جميع الكربوهيدرات يتطلب عينات تحسينات كبيرة في كثافة إشارة أكثر من تلك النتائج التي تم الحصول عليها من عينات DD. بسبب كثافة إشارة أعلى والتجانس، يحسن البلورة ملحوظ جودة البيانات في التحليل الكمي.
تعزيز كثافة إشارة الكربوهيدرات بالبلورة الفعال لوسائط أيون إيجابية وسلبية على حد سواء. ويقارن الشكل 3 كثافة إشارة سودياتيد (أيون إيجابية الوضع) والكربوهيدرات (الوضع السلبي أيون) ديبروتوناتيد العينات يتطلب بالنسبة للعينات DD. في المتوسط، يزيد البلورة SLeA وعينات MH الإشارات سودياتيد بعوامل من 3.9 و 3-3، على التوالي. ديبروتوناتيد SLeA، تتعزز إشارة أيون عادة بعامل ما يقرب من 4.7 بعد البلورة.
رقم 1. صور SEM SLe إعداد مصفوفة المجالس الصحية المحلية. يتم إعداد العينات مع الأساليب الحبرية والبلورة المجففة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 2. نتائج صورة الطيف الكتلي من الذئبة الحمامية المجموعية و MH أعد مع الممثل المجففة الأساليب الحبرية والبلورة. وتمثل الصور أيون توزيعات لتحليلها سودياتيد أو ديبروتوناتيد. يتم عرض الصور مشرق الميدان وأيون جميع في نفس النطاق. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3. كثافة إشارة الكربوهيدرات التي تم الحصول عليها بأساليب إعداد نماذج مختلفة- أشرطة سوداء: سودياتيد SLeA (m/z: 843)؛ أشرطة حمراء: ديبروتوناتيد SLeA (m/z: 819)؛ أشرطة زرقاء: سودياتيد MH (m/z: 1175). أشرطة الخطأ تمثل الانحرافات المعيارية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
| عينة | لوحة عينة درجة الحرارة (درجة مئوية) |
حجم العينة (ميليلتر) |
عينة التجفيف الوقت (s) |
ميوه التجفيف الوقت (s) |
منطقة العينة المناسبة توسيع بعد البلورة (%) |
| الذئبة الحمامية المجموعيةA | 25 | 0.1 | 100-150 | < 5 | 0-200 |
| 1 | 300-350 | < 10 | |||
| MH | 0.1 | 100-150 | < 5 | ||
| 1 | 200-350 | < 10 | |||
| الذئبة الحمامية المجموعيةA | 50 | 0.1 | < 5 | < 5 | |
| 1 | < 10 | < 10 | |||
| MH | 0.1 | < 5 | < 5 | ||
| 1 | < 10 | < 10 |
الجدول 1- معلمات التجريبية وظروف التجفيف تحت عينة مختلفة لوحة temperatures.x
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
عدم تجانس العينة مشكلة حاسمة في استخدام--السيدة DD هو الأكثر استخداماً طريقة إعداد نموذج، ولكن البلورات الناتجة عالية غير متجانسة. وتظهر هذه العينات إمكانية تكرار نتائج ضعف الإشارة تسديده لإطلاق النار وعينه بعينه. ولذلك، البحث عن "الحلو البقع" في مناطق العينة أثناء الحصول على البيانات إجراء مشترك في تجارب استخدام. هذه العينات غير المتجانسة غير صالحة للقياس الكمي في التحاليل الروتينية.
في الدراسة الحالية، وهو الأمثل استخدام عينة مورفولوجيا بالبلورة. تحسن كثافة إشارة الكربوهيدرات واستقرار البيانات من البلورة يعزى إلى تحسين إدماج بين الكربوهيدرات والمصفوفات. بسبب خصائص ماء معظم الكربوهيدرات ومصفوفات، يمكن أن تتفكك ميوه كفاءة استخدام بلورات والكربوهيدرات. تظهر الملاحظة أن الترسب والتبخر سريع من ميوه الإصلاحات بلورات المجالس الصحية المحلية على شكل إبرة كبيرة في هياكل بلورية صغيرة مثل تقشر. هذه العملية أيضا يقلل من الفصل عينة ويزيد من مساحة السطح. ووفقا لبيانات نظام الرصد الدولي، توفر بلورات بعد إصلاحه المكروية أفضل للتأين الكربوهيدرات. جدير بالذكر أن استخدام غرفة التجفيف تزويد شرط مرجع التحديد معلمات التجريبية التي تسيطر عليها. يمكن اتبع المستخدمين MS العام للتحليل الروتيني، البروتوكولات ضمن بيئة المحيطة لتحقيق نتائج مماثلة في تعزيز.
أيضا قد يكون تعزيز الإشارات بالبلورة نظراً لزيادة مساحة سطح فعالة، نظراً لاستخدام يهيمن على التفاعلات الكيميائية السطحية14،15. ودرست العلاقة بين كثافة الإشارات ومساحة السطح الفعال لاستخدام بلورات بإعداد العينات تحت عينة مختلفة لوحة درجات الحرارة11،12. بالمقارنة مع تغيير كبير في حجم البلورة باستخدام طريقة البلورة، يمكن تحقيق تسوية غرامة من حجم كريستال بتنظيم درجة حرارة العينة لوحة خلال الحبرية عملية التجفيف. عند استخدام ثاب كمصفوفة، متوسط حجم الإبرة على شكل بلورات من ثاب يقلل من 10 إضعاف عند درجة حرارة العينة لوحة يقلل من 40 درجة مئوية. وتظهر الملاحظات أن يزداد كثافة إشارة الكربوهيدرات إنقاص حجم كريستال13. ومع ذلك، خفض درجة حرارة العينة لوحة غير مناسب للتحليل الروتيني نظراً لأنه لا يمكن تغيير مورفولوجية المجالس الصحية المحلية كفاءة وأنه يتطلب إعداد طويلة مرات.
لضمان أفضل نتيجة البلورة، ينبغي إجراء عمليات التحضير بعناية. أولاً، توفير خلائط عينة جديدة تعزيز إشارة أفضل استخدام الأسلوب البلورة. بمجرد حلول خلط يتعرضون للبيئة المحيطة، يحدث قبل تبلور في الحل، مما يؤدي إلى تغيير حجم البلورة النهائية ومورفولوجيا. مثل هذا تغيير مورفولوجيا يفترض بسبب حدوث تغيير في نسبة مصفوفة/أكثر. إظهار الملاحظات هذه البلورة من هذا القبيل لا يمكن تقديم عينات تعزيز إشارة أفضل. ولذلك، ينبغي أن يتم تشغيل الإجراء بيبيتينج بكفاءة عالية لحماية الحبرية عينة من قبل بلورة إطار تلميح ماصة. وثانيا، ينبغي أن تطبق كمية مناسبة من ميوه تماما الإصلاح عينات. أثناء عملية البلورة، ينبغي أن تودع ميوه على سطح العينة، في أسرع وقت ممكن لتجنب خسارة كبيرة التبخر. لا تذوب بلورات العينة استخدام تماما إذا كان حجم ميوه المودعة لا يكفي. على النقيض من ذلك، سوف تنتشر كمية كبيرة من ميوه وتقليل كثافة العينات. من المستحسن لمراقبة مورفولوجيس العينة تحت مجهر للتأكد من أن إصلاح كريستال مورفولوجيس بشكل صحيح قبل تحليل مرض التصلب العصبي المتعدد. إذا لم تتغير كريستال مورفولوجيس تماما (انظر الشكل 1 و الجدول 1 للرجوع إليها)، من الضروري إعداد عينة جديدة مع نفس الإجراءات.
أفضل نهج التحليل الكمي باستخدام MS هو تحليل العينات المحسنة مع نظام الرصد الدولي. على الرغم من أن الإصلاح يقلل إلى حد كبير عدم تجانس العينة، لا تزال تختلف كثافة إشارة لتحليلها في مجالات مختلفة (الشكل 2). بالمقارنة مع دراسة دليل مواقع العينة المختارة، المتوسطات تحليل المجالات عينة كاملة مع نظام الرصد الدولي بها أوجه عدم اليقين وتباين البيانات. إظهار الملاحظات أن البلورة العينات المحضرة عادية يغطي المبلغ (حل نموذج ميليلتر 1.0) تجانس عينة الكربوهيدرات المتفوقة في التحليل الكمي (الخطوة 2، 2). ومع ذلك، يستهلك IMS تحليل تلك العينات وقت تحليل أكثر من أسلوب الفحص اليدوي. لتحقيق تحليل نظام الرصد الدولي السريع، إعداد العينات باستخدام 0.1 ميليلتر عينة حلول (الخطوة 2، 1) يمكن أن تنتج المناطق عينة صغيرة وتقليل وقت التحليل.
يوفر البلورة من استخدام عينات مورفولوجيا عينة متفوقة للحساسية والتحليل الكمي باستخدام MS. المبدأ الأساسي وراء هذا الأسلوب هو بوضوح. العمليات التجريبية التي وضعت في هذا العمل ملائمة وفعالة للشروط العامة التجريبية. يمكن تطبيق هذه العمليات التجريبية سهولة للتحاليل الروتينية دون إضافية التكلفة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
Acknowledgments
المؤلفين قد لا شكر وتقدير.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagent | |||
| Detergent powder | Alconox | 242985 | |
| Methanol | Merck | 106009 | |
| Acetonitrile | Merck | 100003 | |
| 2,5-dihydroxybenzoic acid (DHB) | Alfa Aesar | A11459 | |
| sialyl-lewis A (SLeA) | Sigma-Aldrich | S1782 | |
| Maltoheptaose | Sigma-Aldrich | M7753 | |
| Pipette tips | Mettler Toledo | 17005091 | |
| Microcentrifuge tube | Axygen | MCT-150-C | |
| Equipment | |||
| Milli-Q water purification system | Millipore | ZMQS6VFT1 | |
| Powder-free nitrile gloves | Microflex | SU-690 | |
| 600 mL beaker | Duran | 2110648 | |
| Ultrasonic cleaner | Delta | DC300H | |
| Hygrometer | Wisewind | 5330 | |
| Nitrogen gas flowmeter | Dwyer | RMA-6-SSV | |
| K-type thermocouples | Digitron | 311-1670 | |
| Vortex mixer | Scientific Industries | SI-0236 | |
| Mini centrifuge | Select BioProducts | Force Mini | |
| Pipette | Rainin | pipet-lite XLS | |
| Stereomicroscope | Olympus | SZX16 | |
| Temperature controllable drying chamber | This lab | ||
| Ultraflex II TOF/TOF mass spectrometer | Bruker Daltonics | ||
| MTP 384 target plate polished steel BC | Bruker Daltonics | 8280781 | |
| Flexcontrol Version 3.4 | Bruker Daltonics | Control software | |
| Fleximaging Version 2.1 | Bruker Daltonics | Imaging software | |
| Flexanalysis Version 3.4 | Bruker Daltonics | Analysis software |
References
- Holme, D. J., Peck, H. Analytical Biochemistry. , 3rd edn, Addison Wesley Longman Limited. (1998).
- Costello, C. E. Time, life ... and mass spectrometry - New techniques to address biological questions. Biophysical Chemistry. 68 (1-3), 173-188 (1997).
- Caroff, M., Karibian, D. Structure of bacterial lipopolysaccharides. Carbohydrate Research. 338 (23), 2431-2447 (2003).
- Marvin, L. F., Roberts, M. A., Fay, L. B. Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry in clinical chemistry. Clinica Chimica Acta. 337 (1), 11-21 (2003).
- Harvey, D. J. Matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry of carbohydrates. Mass Spectrometry Reviews. 18 (6), 349-450 (1999).
- Ciucanu, I., Kerek, F. A simple and rapid method for the permethylation of carbohydrates. Carbohydrate Research. 131 (2), 209-217 (1984).
- Lamari, F. N., Kuhn, R., Karamanos, N. K. Derivatization of carbohydrates for chromatographic, electrophoretic and mass spectrometric structure analysis. Journal of Chromatography B. 793 (1), 15-36 (2003).
- Nishikaze, T., Amano, J. Reverse thin layer method for enhanced ion yield of oligosaccharides in matrix-assisted laser desorption/ionization. Rapid Communications in Mass Spectrometry. 23 (23), 3787-3794 (2009).
- Williams, T. I., Saggese, D. A., Wilcox, R. J., Martin, J. D., Muddiman, D. C. Effect of matrix crystal structure on ion abundance of carbohydrates by matrix-assisted laser desorption/ionization Fourier transform ion cyclotron resonance mass spectrometry. Rapid Communications in Mass Spectrometry. 21 (5), 807-811 (2007).
- Nicola, A. J., Gusev, A. I., Proctor, A., Jackson, E. K., Hercules, D. M. Application of the fast-evaporation sample preparation method for improving quantification of angiotensin II by matrix-assisted laser desorption/ionization. Rapid Communications in Mass Spectrometry. 9 (12), 1164-1171 (1995).
- Lai, Y. H., et al. Reducing Spatial Heterogeneity of MALDI Samples with Marangoni Flows During Sample Preparation. Journal of the American Society for Mass Spectrometry. 27 (8), 1314-1321 (2016).
- Ou, Y. -M., et al. Preparation of Homogeneous MALDI Samples for Quantitative Applications. Journal of Visualized Experiments. (116), e54409 (2016).
- Lee, H., et al. Enhancing carbohydrate ion yield by controlling crystalline structures in matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry. Analytica Chimica Acta. , 49-55 (2017).
- Allwood, D. A., Perera, I. K., Perkins, J., Dyer, P. E., Oldershaw, G. A. Preparation of 'near' homogeneous samples for the analysis of matrix-assisted laser desorption/ionisation processes. Applied Surface Science. 103 (3), 231-244 (1996).
- Sadeghi, M., Vertes, A. Crystallite size dependence of volatilization in matrix-assisted laser desorption ionization. Applied Surface Science. 127 (Supplement C), 226-234 (1998).
