Summary
हम एक नया पूर्व vivo मॉडल है कि सुअर का गैस्ट्रिक नमूना करने के लिए लगातार तनाव लागू होता है विकसित की है । इस विकास के प्रदर्शन का मूल्यांकन करने के लिए संभव बनाया (ऊंचाई और सबम्यूकोसल उंनयन की अवधि) के विभिंन SIMs सही । इस नए मॉडल की विस्तृत सेटअप पद्धति को समझाया गया है ।
Abstract
सबम्यूकोसल इंजेक्शन सामग्री (सिम्स) के प्रदर्शन में वृद्धि जल्दी जठरांत्र कैंसर के इंडोस्कोपिक चिकित्सा के लिए महत्वपूर्ण है । यह एक पूर्व vivo मॉडल है कि सिम प्रदर्शन सही मूल्यांकन कर सकते है स्थापित करने के लिए आवश्यक है, उच्च प्रदर्शन SIMs के विकास के लिए । हमारे पिछले अध्ययन में, हम एक नया पूर्व vivo मॉडल है कि विस्तार में विभिंन SIMs के प्रदर्शन का मूल्यांकन करने के लिए नमूना समाप्त होता है लगातार तनाव लागू करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है विकसित की है । हम यह भी पुष्टि की है कि प्रस्तावित नए पूर्व vivo मॉडल वर्दी शर्तों के तहत सटीक सबम्यूकोसल ऊंचाई (सेः) माप की अनुमति देता है और SIMs के विभिंन प्रकार के प्रदर्शन की विस्तृत तुलना । यहां, हम नए पूर्व vivo मॉडल का वर्णन है और इस मॉडल की विस्तृत सेटअप पद्धति की व्याख्या । चूंकि नए मॉडल के सभी भागों को प्राप्त करने के लिए आसान थे, नए मॉडल के सेटअप जल्दी पूरा किया जा सकता है । विभिंन SIMs के सेः नए मॉडल का उपयोग करके और अधिक सही मापा जा सकता है । सिम प्रदर्शन निर्धारित करता है कि महत्वपूर्ण कारक नए मॉडल का उपयोग कर पहचाना जा सकता है । फैक्टर की पहचान होने के बाद सिम विकास की गति काफी बढ़ जाएगी ।
Introduction
दोनों इंडोस्कोपिक सबम्यूकोसल विच्छेदन (एसड) और इंडोस्कोपिक श्लैष्मिक लकीर (EMR) वर्तमान में प्रारंभिक चरण गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल कैंसर1,2के लिए आम उपचार कर रहे हैं । एक सबम्यूकोसल इंजेक्शन सामग्री (SIM) को उपश्लेष्म में इंजेक्ट करना, दोनों EMR और एसड प्रक्रियाओं2,3के लिए सबसे महत्वपूर्ण चरणों में से एक है । उच्च सबम्यूकोसल उन्नयन और सबम्यूकोसल उन्नयन के रखरखाव सुरक्षित रूप से EMR का आयोजन करने के लिए महत्वपूर्ण मानदंड हैं/
हालांकि सामांय खारा (एन एस) इंडोस्कोपिक थेरेपी के आविष्कार के बाद से एक सिम के रूप में इस्तेमाल किया गया है4,5, सोडियम hyaluronate (हा) हाल के वर्षों में एक इलाज के रूप में शुरू किया गया था6,7। हा व्यापक रूप से एक बेहतर अपने उच्च प्रदर्शन8,9,10,11के कारण सिम के रूप में इंडोस्कोपिक उपचार में इस्तेमाल किया गया । वर्तमान में, मौजूदा sims के बीच एक प्रदर्शन की तुलना का आयोजन किया गया था, और उच्च प्रदर्शन SIMs एक और बेहतर सिम5,12,13,14, की पहचान करने के लिए विकसित किए गए 15,16,17,18.
पूर्व vivo मॉडल एक सुअर का पेट नमूना का उपयोग कर सिम प्रदर्शन का मूल्यांकन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है, क्योंकि मानव जठरांत्र पथ में सिम प्रदर्शन का आकलन बहुत मुश्किल है19,20,21 , 22. हालांकि, इस पारंपरिक पूर्व vivo मॉडल अत्यंत सरल है, और सुधार के लिए गुंजाइश है । एक पर्यावरण मानव जठरांत्र म्यूकोसा के करीब reproducing सिम प्रदर्शन के सटीक मूल्यांकन सक्षम हो जाएगा ।
हमारे पिछले अध्ययन में, हम एक नया पूर्व vivo मॉडल है कि विस्तार में विभिंन SIMs के प्रदर्शन का मूल्यांकन करने के लिए नमूना समाप्त होता है लगातार तनाव लागू करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है विकसित की है । हम यह भी पुष्टि की है कि प्रस्तावित नए पूर्व vivo मॉडल, वर्दी शर्तों के तहत सटीक वह माप और SIMs23के विभिंन प्रकार के प्रदर्शन की एक विस्तृत तुलना की अनुमति देता है ।
इस अध्ययन में, हम नए पूर्व vivo मॉडल की एक पूरी उपस्थिति मौजूद है, और नए पूर्व vivo मॉडल के विस्तृत सेटअप पद्धति विस्तार में वीडियो और आंकड़े का उपयोग कर समझाया है । नए पूर्व vivo मॉडल भागों है कि आसानी से उपलब्ध है और जल्दी से स्थापित किया जा सकता है के होते हैं । विस्तृत सेटअप पद्धति का विवरण नए मॉडल के प्रसार में योगदान देगा ।
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Protocol
निंनलिखित प्रोटोकॉल क्योटो प्रीफेक्चुरल चिकित्सा विश्वविद्यालय के पशु देखभाल दिशानिर्देश के बाद ।
1. एक सुअर का पेट का उपयोग नमूनों की तैयारी
नोट: पहला कदम के लिए नमूनों को तैयार करने के लिए पूर्व vivo मॉडल (चित्रा 1) में इस्तेमाल किया जा रहा है । सुअर का गैस्ट्रिक दीवार की मोटाई पेट के विभिंन क्षेत्रों में बदलता है । सुअर का पेट के ऊपरी तीसरे का प्रयोग करें, जो अपेक्षाकृत मानव पेट के समान है । अनुचित नमूनों को बाहर निकालें जहां फाइब्रोसिस के कारण सबम्यूकोसल उन्नयन नहीं हो पाया है ।
- 6 × 6 सेमी की अनुमानित आयामों के साथ वर्गों में गैस्ट्रिक नमूनों में कटौती ।
- -30 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर तुरंत गैस्ट्रिक नमूनों की दुकान ।
- गल जमे हुए गैस्ट्रिक नमूनों माप प्रक्रिया से पहले सही समान माप की स्थिति सुनिश्चित करने के लिए ।
2. एक नया पूर्व Vivo मॉडल की विस्तृत सेटअप पद्धति
नोट: दो अलग तरीकों से एक बोर्ड पर गल नमूना बाहर खिंचाव । पारंपरिक पूर्व vivo मॉडल में, पिन (आंकड़ा 1a)19,20,21,22के साथ नमूना तय. दूसरी ओर, नए पूर्व vivo मॉडल में, फिक्स या खिंचाव एक निरंतर तनाव का उत्पादन करने के लिए क्लिप के साथ नमूना के दोनों सिरों को (आंकड़ा 1b, C). नए मॉडल के सभी भागों को प्राप्त करने के लिए आसान कर रहे हैं, और नए मॉडल के सेटअप जल्दी पूरा किया जा सकता है (चित्रा 2). नए मॉडल की प्रक्रिया इस प्रकार है (चित्रा 3):
- स्टेनलेस स्टील क्लिप और चाबी तार और एस आकार हुक (3ए. ए.) कनेक्ट ।
- तार और एस के आकार का हुक और वजन (आंकड़ा 3ए) कनेक्ट ।
- तार के दूसरे छोर से हुक कनेक्ट । एक कर्षण डिवाइस ऊपर की प्रक्रिया में पूरा हो गया है (चित्र बी) ।
- चरखी (आंकड़ा बी3) के आधार के दोनों सिरों पर ठीक
- (चित्रा 3सी) आधार के केंद्र पर रबर की थाली (6 x 6 सेमी) रखें ।
- रबर की थाली पर गैस्ट्रिक नमूना प्लेस और चुटकी नमूना कर्षण डिवाइस की क्लिप के साथ समाप्त होता है ।
- चरखी (दोनों पक्ष) के माध्यम से वजन रुको । इस प्रकार, लगातार तनाव (आंकड़ा 4) नमूना करने के लिए लागू किया जा सकता है ।
- सेः की माप शुरू, क्योंकि नए मॉडल के सेटअप के बाद पूरी तरह से समाप्त हो गया है (चरण 3 नीचे देखें) ।
3. सिम प्रदर्शन का मूल्यांकन
नोट: इस अध्ययन में, हम परीक्षण किया जा करने के लिए sims के रूप में सामांय खारा (एन एस) और ०.४% सोडियम hyaluronate (हा) का इस्तेमाल किया, और दो sims के सेः उपाय । तीन स्वतंत्र माप प्रदर्शन कर रहे हैं । प्राप्त डेटा माध्य और मानक विचलन (S.D.) के रूप में व्यक्त कर रहे हैं । सांख्यिकीय विश्लेषण सांख्यिकीय विश्लेषण सॉफ्टवेयर (GraphPad चश्मे 7) का उपयोग करके किया गया था । हम छात्र टी परीक्षण के साथ सतत चर (सेः) का विश्लेषण, और पी के साथ परिमाणों < ०.०५ महत्वपूर्ण माना जाता था । सेः का माप निम्नानुसार है (चित्रा 5).
- एक सबम्यूकोसल उन्नयन प्रक्रिया से पहले म्यूकोसा की ऊंचाई के आधार पर, ऊंचाई गेज के शूंय बिंदु समायोजन करते हैं । विस्तार में, श्लैष्मिक सतह की ऊंचाई पर scriber फिक्सिंग के बाद पूर्व निर्धारित बटन धक्का द्वारा शूंय बिंदु समायोजन करते हैं ।
- एक सबम्यूकोसल उन्नयन प्रक्रिया (आंकड़ा धारा 5-सी) प्रदर्शन करने के लिए एक २.५-एमएल सिरिंज और 23 गेज सुई का उपयोग कर नमूना मार्जिन से क्षैतिज में प्रत्येक समाधान के २.० एमएल सुई ।
- उपाय सेः तुरंत इंजेक्शन (चित्रा 5d) के बाद 0, २.५, 5, ७.५, 10, १२.५, 15, १७.५, 20, 30, ४५, और ६० मिनट पर एक डिजिटल ऊंचाई पण का उपयोग कर । विस्तार में, ऊंचाई गेज पर प्रदर्शित ऊंचाई रिकॉर्ड जब सबम्यूकोसल उंनयन के शीर्ष करने के लिए scriber फिक्सिंग ।
- तीन स्वतंत्र माप प्रदर्शन, और माध्य और मानक विचलन के रूप में प्राप्त परिणाम व्यक्त करते हैं ।
- प्राप्त उपयुक्त सांख्यिकीय सॉफ्टवेयर का उपयोग कर डेटा का विश्लेषण और SIMs के प्रदर्शन का मूल्यांकन (प्रत्येक सिम के बीच प्रदर्शन की तुलना में किया जा सकता है.)
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Representative Results
सेः नए पूर्व vivo मॉडल या पारंपरिक पूर्व vivo मॉडल में समय के साथ मापा गया था । सेः के मूल्यों (एन एस) पारंपरिक मॉडल का उपयोग कर मापा [एन एस पिन (०.० N) के साथ तय नमूना के म्यूकोसा में इंजेक्शन था] ५.७ मिमी (0 मिनट) थे, ३.६ मिमी (5 मिनट), ३.० मिमी (10 मिनट), और २.२ मिमी (30 मिनट). इस तरह, सेः के मूल्यों में वृद्धि पोस्ट इंजेक्शन समय के साथ कम हो गई । एक समान विश्लेषण ०.४% हा के बजाय एनएस का उपयोग किया गया था । सेः (०.४% HA) के मान ६.५ mm (0 min), ५.२ mm (5 min), ४.८ mm (10 min), और ४.१ mm (30 min) के थे । ०.४% हा के परिणामी SEHs NS की तुलना में अधिक थे पोस्ट इंजेक्शन समय की परवाह किए बिना । SEHs (एन एस और ०.४% हा) पारंपरिक मॉडल (लागू तनाव के अभाव में) का उपयोग कर प्राप्त अपेक्षाकृत बड़े रूपों का प्रदर्शन (दूसरे शब्दों में, उनके मानक विचलन उच्च थे) (चित्रा 6A) ।
अगले, सेः के मूल्यों (एन एस) पारंपरिक मॉडल का उपयोग कर मापा [एन एस एक निरंतर तनाव (१.५ N) में फैला नमूना के म्यूकोसा में इंजेक्शन था] ४.८ mm (0 मिनट) थे, ३.० मिमी (5 मिनट), २.४ मिमी (10 मिनट), और १.८ मिमी (30 मिनट). जब तनाव को बढ़ाकर ३.० N समान परिस्थितियों के तहत, सेः (NS) के मान ४.५ mm (0 min), २.३ mm (5 min), १.५ mm (10 min), और १.३ mm (30 min) थे । सेः विभिंन पोस्ट इंजेक्शन बार में मापा बढ़ती तनाव के साथ कम हुई । नए मॉडल का उपयोग कर प्राप्त SEHs छोटे रूपों का प्रदर्शन (दूसरे शब्दों में, उनके मानक विचलन कम थे) (चित्रा घमण्ड, सी) ।
सेः और तनाव के नमूने के लिए लागू के बीच संबंधों के मूल्यांकन के लिए, हम सेः तुलना में अलग तनाव पर मापा (0.0-3.0 N) । नए मॉडल के साथ विश्लेषण में, ३.० n के एक तनाव पर प्राप्त सेः १.५ n के एक तनाव में प्राप्त सेः की तुलना में काफी कम था (सभी मामलों में, हालत पी < ०.००१ संतुष्ट था) । इसके विपरीत, SEHs के मानक विचलन के बाद से पारंपरिक मॉडल (०.० n) का उपयोग कर प्राप्त उच्च थे, वहां SEHs के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर पारंपरिक मॉडल (०.० n) और नए मॉडल (१.५ n) (चित्रा 6D, ई) का उपयोग कर प्राप्त किया गया ।
चित्र 1. नई पूर्व vivo मॉडल और पारंपरिक पूर्व vivo मॉडल । पारंपरिक पूर्व vivo मॉडल में, सुअर का नमूना पिन के साथ तय किया गया था (A). दूसरी ओर, नए पूर्व vivo मॉडल में, नमूना के दोनों सिरों को एक निरंतर तनाव पैदा करने के लिए क्लिप के साथ फैला रहे थे (ख)। यह मॉडल एक वजन का उपयोग करके समान रूप से तनाव में हो सकता है, और तनाव वजन (सी)को बदलकर व्यवस्थित किया जा सकता है । प्रत्येक सिम नमूना के म्यूकोसा में इंजेक्ट किया गया था, सबम्यूकोसल उंनयन के लिए अग्रणी (डी)। यह आंकड़ा हिरोसे एट अल से संशोधित किया गया है । 23. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्र 2. सभी भागों नए मॉडल के लिए इस्तेमाल किया । नए पूर्व vivo मॉडल भागों है कि आसानी से उपलब्ध है के होते हैं । सभी नए पूर्व vivo मॉडल के लिए इस्तेमाल किया भागों: (क) लगभग 50-300 भार के जी (वजन उचित लागू तनाव के आधार पर बदला जा सकता है); (ख) 25 मिमी के चरखी व्यास के साथ निश्चित प्रकार चरखी; (ग) ०.४५ मिमी के एक व्यास के साथ स्टेनलेस स्टील के तार; (घ) चौड़ाई का स्टेनलेस स्टील क्लिप १४७ मिमी; (ङ) स्टेनलेस स्टील की लंबाई के साथ कुंजी तार 12 सेमी; (च) स्टेनलेस स्टील के आकार का हुक; (छ) lockable स्टेनलेस स्टील एस के आकार का हुक । (यह आंकड़ा हिरोसे एट अल से संशोधित किया गया है । 23). कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्र 3. नए पूर्व vivo मॉडल की विस्तृत सेटअप विधि । नई पूर्व vivo मॉडल जल्दी से स्थापित किया जा सकता है । (एक) स्टेनलेस स्टील क्लिप (चित्रा 2d) और कुंजी तार (चित्रा 2e) और एस आकार हुक (आंकड़ा 2g) कनेक्ट । इसके बाद, तार (चित्रा 2c), एस आकार हुक (चित्रा 2f) और वजन (चित्रा 2a) कनेक्ट । (ख) अंत में, तार (चित्रा 2c) के दूसरे छोर पर हुक (फिगर2g) को कनेक्ट करें । इसके बाद के संस्करण की प्रक्रिया में एक कर्षण डिवाइस पूरा हो गया है । (ग) आधार के दोनों सिरों पर चरखी (चित्रा बी) फिक्स [आयताकार लकड़ी के आधार (४५ x ६० सेमी) मॉडल कोडांतरण के लिए] । इसके बाद, आधार के केंद्र पर रबर की थाली (6 x 6 सेमी) रखें । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 4. नई पूर्व vivo मॉडल की पूरी उपस्थिति । सेः का सटीक मापन किया जा सकता है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 5. नई पूर्व vivo मॉडल का उपयोग करके माप प्रक्रिया । सिम प्रदर्शन का मूल्यांकन करने के लिए, सेः की भयावहता एक डिजिटल ऊंचाई पण (क)द्वारा मापा गया था । एक २.५-एमएल एक 23 गेज सुई के साथ सिरिंज का उपयोग करना, प्रत्येक सिम के २.० मिलीलीटर नमूना मार्जिन से एक सबम्यूकोसल उन्नयन (बी, सी)बनाने के लिए उपम्यूकोसा में इंजेक्ट किया गया था । डिजिटल ऊंचाई पण सबम्यूकोसल उंनयन की ऊंचाई के उपाय करने के लिए इस्तेमाल किया गया था (यानी, सेः के मूल्यों) (डी)। कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 6. या तो नए या पारंपरिक मॉडल का उपयोग कर सेः का मापन । के इंजेक्शन के बाद एन एस या ०.४% हा नमूना के साथ तय की उपम्यूकोसा में (०.० n) (a) या एक निरंतर तनाव में फैला (१.५ n या ३.० n) (B, C), सेः ऊँचाई का उपयोग कर मापा गया था पण. अगले, हम अलग तनाव पर मापा सेः के मूल्यों की तुलना (०.०, १.५, और ३.० एन) एन एस के सबम्यूकोसल इंजेक्शन के बाद (डी) या ०.४% हा (ई)। डेटा तीन से अधिक स्वतंत्र प्रयोगों के अर्थ ± S.D. के रूप में व्यक्त कर रहे हैं । (यह आंकड़ा हिरोसे एट अल से संशोधित किया गया है । 23) कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
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Discussion
नए मॉडल के लिए इस्तेमाल किया सुअर का पेट तुरंत लकीर के बाद एक फ्रीजर में संग्रहीत किया जाना चाहिए, और ठंड के बाद कुछ ही महीनों के भीतर इस्तेमाल किया, के बाद से सूअर पेट की ताजगी सेः माप के लिए आवश्यक है । (हम दोनों जमे हुए और जमे हुए गैस्ट्रिक नमूनों का उपयोग कर सेः मापा, और पुष्टि की कि सेः माप के परिणाम में कोई अंतर नहीं था.)
गैस्ट्रिक नमूनों की गुणवत्ता बहुत सुअर का पेट के व्यक्तिगत मतभेदों से प्रभावित है । इसलिए, यह माप से पहले कई परतों के साथ स्पष्ट रूप से मोटी नमूनों या नमूनों को बाहर करने के लिए सिफारिश की है. इसके अलावा, कुछ नमूनों सेः फाइब्रोसिस के कारण माप के लिए अनुपयुक्त नमूनों हो सकता है । यह अनुचित नमूनों जहां सबम्यूकोसल उंनयन फाइब्रोसिस के कारण नहीं मिला है बाहर करने के लिए सिफारिश की है ।
चूंकि पाचन तंत्र इंडोस्कोपिक उपचार द्वारा विस्तारित है, कुछ तनाव जठरांत्र म्यूकोसा के लिए लागू किया जाता है । यह पता चला था कि सिम प्रदर्शन (सेः के मूल्यों को मापने के द्वारा मूल्यांकन) नमूनों के लिए लागू तनाव के मूल्यों में वृद्धि के साथ घटी । इसलिए, तनाव एक महत्वपूर्ण सिम प्रदर्शन को प्रभावित कारक था (यानी, सेः के मूल्यों)23। 1.5-3.0 N के तनाव के आवेदन एक पर्यावरण मानव जठरांत्र म्यूकोसा के करीब प्रतिलिपि कर सकते हैं । हालांकि, इस विधि की एक सीमा है कि इष्टतम तनाव विश्लेषण के लिए इस्तेमाल किया नमूना के अंतर पर निर्भर हो सकता है ।
पारंपरिक मॉडल में, के बाद से प्रत्येक नमूना के लिए लागू तनाव भिन्न होता है नमूना निर्धारण की डिग्री पर निर्भर करता है, मापा सेः के रूपांतरों बड़े होते हैं (जो सेः के उच्च मानक विचलन के अनुरूप). इसलिए, इन उच्च मानक विचलन यह मुश्किल प्रत्येक सेः विस्तार में तुलना करने के लिए और सांख्यिकीय विश्लेषण करने के लिए बनाते हैं । दूसरी ओर, नए मॉडल में मापा सेः के छोटे रूपों के कारण, सिम प्रदर्शन की तुलना में किया जा सकता है सही पूर्व vivo और सटीक सांख्यिकीय विश्लेषण किया जाता है.
अंत में, नए पूर्व vivo मॉडल सटीक सेः माप और सिम प्रदर्शन की विस्तृत तुलना सक्षम बनाता है । विस्तृत सेटअप पद्धति का विवरण नए मॉडल के प्रसार और उच्च प्रदर्शन सामग्री के विकास में योगदान देगा ।
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Disclosures
लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।
Acknowledgments
यह काम क्योटो अभिनव चिकित्सा प्रौद्योगिकी अनुसंधान एवं विकास सहायता प्रणाली द्वारा समर्थित किया गया था, और शोधों के अनुसंधान कार्यक्रम द्वारा; जापान एजेंसी से चिकित्सा अनुसंधान और विकास (एमएड) के लिए अभिनव चिकित्सा प्रौद्योगिकी के व्यावहारिक आवेदन (TR-स्प्रिंट) के लिए रणनीतिक संवर्धन ।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| weight (153.1 g) | |||
| fixed type pulley | H.H.H. MANUFACTURING | VS25 | |
| stainless steel wire with a diameter of 0.45 mm | Nissa Chain | Cut wire Y-5 | |
| stainless steel clip of width 147 mm | KOKUYO | none | |
| stainless steel key wire with a length of 12 cm | Nissa Chain | P-702 | |
| stainless steel S shaped hook | TRUSCO NAKAYAMA | TCS1.2 | |
| lockable stainless steel S-shaped hook | Mizumoto Machine Mfg | B2054 | |
| rectangular wooden base (45 x 60 cm) | none | none | |
| rubber plate (5 x 5 cm) | none | none | |
| digital height gage | Mitutoyo | HDS-20C | |
| 2.5-mL syringe | Terumo | SS-02SZ | |
| 23-gauge needle | Terumo | NN-2332R | |
| MucoUp | Boston Scientific | none | 0.4% sodium hyaluronate (HA) |
| saline (20 mL) | Otsuka Pharmaceutical | none | normal saline (NS) |
| GraphPad Prism 7 software | GraphPad Inc | none |
References
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