Summary
Her, beskriver vi en simpel metode til at fremkalde klinisk relevante hud tryksår (PUs) i en musemodel af rygmarvsskade (SCI). Denne model kan bruges i prækliniske studier til skærmen for forskellige therapeutics for helbredende PUs i SCI patienter.
Abstract
Tryksår (PUs) er fælles invaliderende komplikationer af traumatisk rygmarvsskade (SCI) og har tendens til at forekomme i blødt væv omkring benede fremspring. Der er, dog lidt kendt om SCI indvirkning på hud, sår healing i forbindelse med dyremodeller i kontrolleret eksperimentel indstillinger. I denne undersøgelse præsenteres en simpel, ikke-invasiv, reproducerbare og klinisk relevante musemodel af PUs i forbindelse med komplet SCI. Voksne mandlige mus (Balb/c, 10 uger gammel) blev barberet og skrabes. Efter hårfjerning (24 h), mus blev udsat for laminektomi efterfulgt af fuldstændig rygmarv transection (T9-T10 ryghvirvler). Umiddelbart efter, var en hud fold på bagsiden af musene ophævet og klemt inde mellem to magnetiske diske holdes på plads til næste 12 h, således at der skabes en iskæmisk område, der udviklede sig til en PU i de følgende dage. De sårede områder viste væv ødem og epidermal forsvinden af dag 3 efter magnet ansøgning. PUs spontant udviklet og helbredt. Healing var, men langsommere i SCI mus sammenlignet for at kontrollere ikke-SCI mus, når såret blev oprettet under niveauet for SCI. omvendt, ingen forskel i healing blev set mellem SCI og kontrol ikke-SCI mus når såret blev lavet over niveauet af SCI. Denne model er en potentielt nyttig værktøj at studere dynamikken i huden PU udvikling og healing efter SCI samt teste terapeutiske tilgange, der kan hjælpe med at helbrede disse sår.
Introduction
Tryksår (PUs) er store sekundære komplikationer af traumatisk SCI1. PUs er lokaliseret skader huden og/eller underliggende væv, der normalt opstår over benede fremspring hvor kropsvægt er koncentreret, mens patienten siddende eller liggende1. Hud, fedt og muskler er udsat for denne konstante pres, der fører til udvikling af lokaliserede iskæmi, væv betændelse, mekaniske skader og nekrose2,3.
Udviklingen af PUs er påvirket af flere lokale faktorer, herunder omfanget af pres og vrid, lastning varighed, huden fugt og temperatur, skade levetid og generelle hud hygiejne. Der er også systemiske faktorer, der spiller en rolle, som generelle fysiske tilstand, ben og muskel væv morfologi og styrke4, patientens alder, hematological foranstaltninger, køn og endda socio-økonomiske faktorer, herunder ægteskabelig status, uddannelse, og indkomst4,5.
Forebyggelse og behandling af PUs fortsat betydelige udfordringer i SCI patienter. SCI patienter udvikle PUs i ~ 30-40% af tilfælde med en re-forekomst på 60-85%, muligvis på grund af svage arvæv og mangel på beskyttende sensation1. Således PUs fører ofte til ny indlæggelse af SCI patienter, og samlet set udgør en betydelig økonomisk byrde (80% flere vs SCI kun) til sundhedssystemet5,6,7,8,9 , 10.
Til bedste af vores viden, har der været nogen undersøgelser i kontrolleret eksperimentel indstillinger at undersøge virkningen af SCI på PU helbredende proces på grund af manglen på passende dyremodeller. Her, er en reproducerbar og klinisk relevante musemodel af PU i huden beskrevet. Denne model kan bruges til at studere dynamikken i PU debut og efterfølgende healing, samt at teste potentielle terapeutiske tilgange for at forhindre PU eller forbedre PU healing i forbindelse med SCI.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle dyr håndtering og kirurgiske procedurer blev udført i overensstemmelse med en protokol, der er godkendt af Rutgers University institutionelle Animal Care og brug udvalget. Mus blev fodret standard kost og vand ad libitum.
1. forberedelse af kirurgisk og ikke-kirurgiske instrumenter
- Sterilisere de kirurgisk og ikke-kirurgiske instrumenter i en autoklave.
- Rengør den kirurgiske operationsbordet med 70% ethanol og varme en varmepude til 37 ° C.
- Placer en varmepude på operationsbordet og dække det med steril kirurgiske gardiner.
Bemærk: I alle overlevelse procedurer bruges "No Touch" teknikken her til at opretholde sterilitet.
2. forberedelse af dyr og udfører T9-T10 Spinal laminektomi
- Skaffe voksne (Balb/c) 10-uge-forhenværende mand mus. Fremkalde anæstesi i hvert dyr ved hjælp af en inhalator begyndelsen med 5% isofluran, og derefter reducere til 2-3% at fastholde sedation for den resterende del af procedurerne.
- Bekræft komplet anæstesi ved fremkalde nogen reaktion på en hale/paw knivspids induceret nociception stimulation.
- Barbering håret over dorsum (hoved til hale) med en elektrisk clipper, og derefter anvende den depilatory fløde (3 min) for at fjerne de resterende hår. Endelig, vaske dorsum med rindende vand/våd krat og returnere dyr til deres bure.
Bemærk: Dette er nødvendigt for at undgå yderligere irritation af huden og kemisk forurening i forbindelse med huden såret - Den næste dag, anvende oftalmologiske salve til hornhinder at beskytte øjnene mod tørring under den kirurgiske procedure og derefter krat huden med 3 alternative præparater betadine krat og 70% ethanol.
- Med en skalpel, skal du udføre en hud indsnit (~1.0-1.5 cm) langs midterlinjen på tilbage på niveau med T8-T12 ryghvirvler.
Bemærk: Niveau af ryghvirvler er identificeret ved at tælle tilbage ryghvirvel fra T13 ved hjælp af placeringen af flydende ribben, der svarer til T13 ryghvirvel11,12. - Fjern det subkutane fedtvæv for at få adgang til paraspinal muskler og derefter dissekere dem langsomt for at udsætte torntappene og bladplader på begge sider.
Bemærk: Gøre denne procedure meget omhyggeligt for at undgå overskydende blødning eller skade på rygmarven, på dette tidspunkt. - Udføre en laminektomi at eksponere rygmarven (T9-T10 ryghvirvler) af forsigtigt skrælning off spinal lamina ved hjælp af microdissecting pincet.
Bemærk: Udføre laminektomi, så et overskud af rygmarven er udsat for at lette oprettelsen af skaden. I kontrolgruppen udføres kun laminectomy.
3. udføre T9-T10 komplet rygmarvsskade
- Brug af pincet, sikre rygsøjlen på T8 og lift op til at overdrive spinal krumning.
- Ved hjælp af fine saks, afsnit rygmarven mellem T9 og T10 ryghvirvel helt til gulvet i rygmarvskanalen at sikre komplet transection.
- Efter at have observeret den komplette transection under en kirurgisk mikroskop, skal du anvende et stykke spæk over laminektomi-webstedet for at give ekstra beskyttelse til rygmarven inden operationsstedet lukning.
- Endelig lukke såret og sutur paravertebral muskler, overfladiske fascie, ved hjælp af løbende sutur og derefter lukke huden ved hjælp af sutur klip12.
- Post-SCI, observere afføring på den næste dag; dog administrere urinblæren ved manuel blære evakuering.
Bemærk: Basso mus skala (BMS) kan bruges til at overvåge status for hindlimb funktionel genopretning post-SCI på dag 2 og derefter ugentlige, se tillægs figur 111,12,13.
4. induktion af huden tryksår efter komplet SCI
- Umiddelbart efter operationen SCI krat på bagsiden af dyret med betadine og 70% alkohol.
- For en PU under webstedet SCI indsprøjtes i den dorsale huden i nærheden af korsbenet, en meget lille mængde (10 µL) 0,125% bupivacaine løsning ved hjælp af en 25 G nål på ækvidistante steder ~0.5-1.0 cm fra hinanden, i en ellipse omkring magnet påføringsstedet.
Bemærk: En PU over webstedet SCI injicere den dorsale huden i nærheden af cervikal region. - Forsigtigt løfte en hud fold på bagsiden af musen og sandwich det mellem 2 magnetiske diske (5 × 12 mm i diameter, 2,4 g, 3800 G magnetisk kraft) (figur 1). 11 , 12
- Straks efter magnet ansøgning, retur dyr til enkelt bure placeret på genvundet en varmepude indtil fuld bevidsthed er (figur 1).
- Efter 12 h af magnet program, let bedøver dyr med isofluran og fjerne magneterne. Tage et fotografi af sår websteder, til at optage de oprindelige udseende af PU (dag 0 tid punkt). Dække såret med gennemsigtig dressing film (3M) at undgå tørring eller forurening.
5. postoperative dyrs pleje, eutanasi og væv indsamling til histologi
- Umiddelbart efter operationen, skal du injicere dyret med 1 mL 0,9% saltvand subkutant for hydrering.
- Subkutant injicere buprenorphin-SR (1 mg/kg) straks for analgesi.
- Injiceres subkutant dyrs daglige meloxicam (1 mg/kg), og cefazolin (50 mg/kg for 3-7 dage) og to gange daglig manuel blære evakuering.
- Placere dyr i enkelt bure og give tilgængelige fødevarer og vand ad libitum. Mus med komplet SCI kan gå ved hjælp af deres forbens og tilgang til mad og vand uden problemer.
- Fjern kirurgisk klip 7 dage efter SCI kirurgi.
- På de ønskede tidspunkter efter SCI og hud sårede, aflive dyr af CO2 inhalation (3-5 min), i overensstemmelse med AVMA retningslinjer om eutanasi14.
- Indsamle sårede hud prøver, rette i 10% formalin i 24 timer, og derefter gemme i 70% ethanol ved 4 ° C indtil skæring.
- For at behandle væv, indkapsle i paraffin og generere tyndslib (5 µm) på en mikrotom. Pletten med hæmatoxylin og eosin (H & E) til at visualisere væv morfologi (figur 3). For Immunhistokemi undersøgelser (figur 4), pletten sektioner ved hjælp af passende antistoffer for Ki67 (spredning), CD31 (angiogenese), og alpha-glat muskel aktin (α-SMA) som beskrevet i Kumar et al.12
Bemærk: Billede analyse software kan bruges til at kvantificere billede funktioner12.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Denne protokol skaber en PU i fastsættelsen af komplet SCI. kort (som illustreret i figur 1), alle mus med eller uden komplet SCI tolereret magneterne udmærket, som forblev i deres oprindelige position for fuldt 12 h (figur 1 c, 1 d, 1f, 1 h ). Alle mus udviklet to cirkulære sår adskilt af en bro af normale væv (figur 1e, 1 g, 1i). Den første sårende reaktion var ens i mus uden SCI (figur 1e), eller med SCI under SCI websted (figur 1 g) eller over SCI websted (figur 1i).
Figur 2 viser forsvinden af epidermis af dag 3 indlæg magnet fjernelse og sin genkomst af dag 7, omend med et betydeligt langsommere migration i sårene skabt under niveauet for SCI i SCI mus.
Pres sår blev klassificeret som tidligere offentliggjorte kriterier12. Figur 3 og figur 4 skildrer den helbredende egenskaber i SCI og styre ikke-SCI mus. Gruppen SCI udstillet langsommere heling, større ar område, tyndere epidermis og dermis og lavere massefylde af prolifererende celler (Ki67+ celler), blodkar (CD31+ celler), og alpha-glat muskel aktin (α-SMA+) i huden sår 11 , 12.
Når huden sår var lavet over niveauet af SCI, som vist i figur 5, ingen ændring i helbredende tid, epidermal og dermal blev tykkelser eller ar område set i forhold til ikke-SCI kontrol.
Figur 1 : Eksperimentel procedure for at skabe tryk sår i ikke-SCI (n = 3) og komplet SCI mus (n = 3). Efter 1-ugers tilvænning i laboratoriet, mus blev barberet og skrabet (en). Skematisk af magnetiske disk (M) placering (b, ændret fra Stadler et al.15). Placering af magnetiske diske på huden dorsum af en normal mus og dens aktivitet efter genopretning fra anæstesi i buret (d, c). I SCI mus, diske kan placeres under (f) eller ovenfor (h) SCI site. Magnet-induceret hud skade er synlige straks efter 12 h af M applikation, som viser 2 sår adskilt af en intakt hud bro i den ikke-SCI (e) og SCI mus (g, jeg). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2 : Hud sår histologi (H & E pletten) og epidermal sår bredde. På dag 3 og dag 7 efter M program, et sæt af mus blev ofret i den ikke-SCI (CTRL + M) og komplet-SCI (SCI + M) grupper til at studere de tidlige effekter M-induceret iskæmi og derefter reperfusion. Pilene angiver de epidermale sår kanter, beliggende hvor epithelial foring tynder ud og forsvinder. Skalalinjen = 1 mm. Epidermal sår bredde målt i hver gruppe (n = 3 for hvert tidspunkt) er repræsenteret i det nederste panel bar diagram. Statistisk signifikans bestemmes af Student t-test. * p < 0,05 og ** p < 0,01. Data præsenteres som betyder ± SEM (standard fejl af middelværdien). Dette tal er blevet ændret med tilladelse fra Journal Neurotrauma, 35, 6, 815-824, (2018), udgivet af Mary Ann Liebert, Inc., New Rochelle, NY12. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3 : Virkningen af komplet SCI på M-induceret PU udvikling og healing. (en) repræsentant billeder af hud sår i ikke-SCI (CTRL + M) og komplet-SCI (SCI + M) mus efter PU induktion i perioden på 21 dage. Skalalinjen = 1 cm. (b) Quantified sår billeder viser brøkdel af sår lukning som funktion af tiden. (c, d) Repræsentative billeder af helede sår viser området ar i ikke-SCI og SCI mus. (e) Quantified ar område i ikke-LAF versus SCI mus. (f, g) Repræsentative histologi helede sår hud (H & E farvning) viser epidermis (E, dobbelte pile), dermis (D, store dobbelte pile), og fedtlag (F). Skalalinjen = 100 µm. (h) kvantificering af epidermale og dermal tykkelser af helede sår på tidspunkt af sår lukning (21 dage for ikke-SCI og 35 dage for SCI mus). Data præsenteres som mean±SEM. Statistisk signifikans bestemmes af ANOVA efterfulgt af post-hoc Fisher LSD test og Students t-test. * p < 0,05, ** p < 0,01, og *** p < 0,001. Dette tal er blevet genoptrykt med tilladelse fra Journal Neurotrauma, 35, 6, 815-824, (2018), udgivet af Mary Ann Liebert, Inc., New Rochelle, NY12. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4 : Udtryk for Ki67, CD31 og en SMA i hudsår af ikke-SCI og SCI mus. Såret væv er høstet efter sår lukning, nemlig på dage 21 (Control + M) og 35 (SCI + M) post-PU induktion. Repræsentative billeder af 5 µm tykt afsnit farves med anti-Ki67, anti-CD31 eller anti-α-SMA og visualiseret med en 40 x mål. Repræsentative billeder af ikke-SCI (en, d, g) og SCI (b, e, h) mus viser fordelingen af Ki67+, CD31+, og α-SMA+ (brun plet, røde pile punkt til nogle farvede områder) . % Positive område af udtryk som fremkommer ved billedanalyse sammenlignes mellem grupper (c, f, jeg). Området var et gennemsnit af tre 40 x felter (to fra sår kanter) og en fra sår center pr. sektion (2-mus, 3 mus i hver gruppe). Data præsenteres som gennemsnit ± SEM. statistiske betydning var bestemt af Student's t-test. Dette tal er blevet genoptrykt med tilladelse fra Journal Neurotrauma, 35, 6, 815-824, (2018), udgivet af Mary Ann Liebert, Inc., New Rochelle, NY12. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 5 : Virkningen af SCI på udvikling og heling af sår over webstedet SCI. Repræsentative billeder af sår i ikke-SCI (CTRL + M) og SCI (SCI + M) mus over observationsperiode (en). Skalalinjen = 1 cm. Ar-området på dag 21 er repræsenteret ved cirkler (a) og blev gennemsnitsværdien i ikke-SCI og SCI mus (b). Kvantificerede sår billeder viser brøkdel af sår lukning som funktion af tiden (c). Repræsentative histologi af helede hudsår viser epidermis (E, lille dobbeltpil) og dermis (D, stor dobbelt pil). Skalalinjen = 100 µm (d). Kvantificering af epidermale og dermal tykkelser af helede hudsår på såret lukning tid (dag 21). Data præsenteres som gennemsnit ± SEM. statistiske betydning bestemmes af ANOVA efterfulgt af posthoc Fishers LSD test eller Student t-test. NS-statistisk ikke-væsentlig. Dette tal er blevet ændret og genoptrykt med tilladelse fra Journal Neurotrauma, 35, 6, 815-824, (2018), udgivet af Mary Ann Liebert, Inc., New Rochelle, NY12. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Supplerende figur 1: Motor funktion i SCI mus blev vurderet ved hjælp af BMS score efter skade dag 2 og derefter ugentlige. BMS score på dag 2 og uge 5 var 0.058 ±0.058 (median 0-ingen bevægelse, n = 17) og 0.35±0.12 (n = 17, median-0). Data repræsenteres som mean±SEM. Dette tal er blevet ændret og genoptrykt med tilladelse fra Journal Neurotrauma, 35, 6, 815-824, (2018), udgivet af Mary Ann Liebert, Inc., New Rochelle, NY12. Venligst klik her for at downloade denne figur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Protokollen i denne undersøgelse beskriver en roman eksperimentel model af PUs til at evaluere virkningen af SCI på sårheling. Huden PUs blev fremkaldt via en 12 h anvendelsen af to 12 mm diameter Disk magneter på en dorsale huden fold, enten angivet ovenfor eller nedenfor SCI site. Data viser, at SCI bremser hud sårheling hos mus. Vigtigere, disse observationer blev specielt lavet i hud sår under niveauet innervation af SCI, som sår ovennævnte SCI-niveau, og således at forblev innerverede, var stort set upåvirket i deres helbredende mønster i forhold til de ikke-SCI mus.
PU protokollen beskrevet heri er baseret på en tidligere udgivne metode anvendes i mus, hvor svagere magneter (1000 Gauss) blev anvendt i tre cyklusser af 12 h magnet anvendelse adskilt af 12 h uden magnet15. I første omgang, sammenlignet vi ved hjælp af en, to og tre 12t cyklusser af magnet ansøgning. En ulempe ved hjælp af gentagne ansøgninger er der hver gang særlig forsigtig skal træffes at løsrive magnet fra hud-folden og genanvende det på nøjagtig samme sted. En enkelt ansøgning er derfor meget enklere og var tilstrækkelig til at skabe en PU i mus dorsale huden fold. Ellers, denne metode kræver ikke en kompleks enhed, forringe ikke dyrenes bevægelser, og er meget reproducerbare. Undersøgelser ved hjælp af forskellige magnet størrelser, figurer og eller styrker, eller forsøger at skabe PUs i forskellige anatomiske steder kan være nødvendigt at reoptimize i protokollen. Som i alle hud sår healing undersøgelser er det vigtigt at korrekt anvendelse og regelmæssigt ændre filmens gennemsigtigt dække for at undgå udtørring og forurening af såret bed.
Mekanisme af PU dannelse i denne model bygger på den trykstyrke kraft mellem to magneter, der forventes at væsentligt overstiger kapillær og venøse perfusion pres på huden, og har tidligere været veldokumenteret for at fremkalde læsioner i større dyr16. Ved hjælp af en enkelt 12 h cyklus lavet en hud sår, der havde skade strækker sig dybt ind i dermis, som svarer til faser I og II efter standardkriterier15. En begrænsning af denne teknik er, at vi ikke har kunnet få et fase III-IV PU. Derfor kunne man ikke studere inddragelse af muskler og knogler i PU udvikling og healing uden betydelige ændringer i vores nuværende model. Derudover PUs vi generere helbrede spontant og, derfor, repræsenterer trofast ikke en kronisk PU som kan ses i menneskelige patienter. Interessant, men resulterede metoden i en LÆDERLOOK med den oprindelige lignende størrelse lukket med lignende dynamics som almindeligt brugt 1 cm x 1 cm full-tykkelse excisional hud sår. PU induktion metode skåner den underliggende panniculus carnosus, mens det er helt fjernet i den excisional model. Det forekommer således, at panniculus carnosus ikke spiller en stor rolle i såret lukning proces, som i mus og andre gnavere, foregår primært via sammentrækning medieret af fibroblaster og myofibroblasts i levedygtige dermis omkring webstedet sår med lille ar dannelse17.
Site af PU induktion, over eller under SCI, forstyrrer ikke den hud indsnit bruges til at få adgang til webstedet for SCI. Derfor, metoden kan let anvendes under eller over niveauet af SCI, som giver studier, der kan differentiere lokalt vs systemiske virkninger af SCI på sårheling. Mens ikke-SCI dyr fortsætter med at tage på i vægt efter PU induktion, hæmmet vækst af SCI dyr. Trods denne dybtgående systemiske ændringer, var sårheling ikke påvirket, da PU blev oprettet ovenfor SCI niveau. Denne model kan derfor bruges til bedre at forstå rollen, de lokale innervation i sårheling. Som i alle undersøgelser, der involverer SCI, er det vigtigt at yde særlig omsorg og overvågning til post-SCI mus, som kræver manuel tømning af blæren, overvågning af tarm betingelser, og profylaktisk behandling med antibiotika11,12 .
SCI patienter anfægtes væsentligt selv med den bedste hospitalsbehandling og uddannelse, og huden PUs give betydelige omkostninger til det amerikanske sundhedssystem. Denne model giver side-by-side evaluering af effekten af SCI på huden PU udvikling og healing, som giver en platform til at teste forskellige terapeutiske strategier, der kan hjælpe PU healing i SCI patienter.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ikke noget at oplyse.
Acknowledgments
Dette arbejde blev delvist støttet af New Jersey Kommissionen på rygmarven forskning (CSCR15IRG010), US Department of Defense (SC160029) og Yale Institut for kirurgi Ohse Grant forskningsprogrammet. Vi takker Sean o ' Leary fra WM Keck Center for kollaborativ neurovidenskab, Rutgers for teknisk bistand.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Magnets | Master Magnetcs, Inc., Castle Rock, CO | CD14C | 3800 G Magnetic force |
| Mice standard diet | PMI Nutrition International, Brentwood, MO | Standard Food Pellet | |
| Isoflurane | HENRY SCHEIN Animal Health | SKU 029405 | |
| ImageJ | NIH, Bethesda, MD | Image Analysis Software | |
| BETADINE Surgical Scrub | HENRY SCHEIN Animal Health | ||
| Ophthalmic Ointment | HENRY SCHEIN Animal Health | SKU 008897 | |
| NAIR-Hair Remover Lotion | Church & Dwight Co., Inc. Princeton, NJ | ||
| ELOXIJECT (meloxicam) Injection | HENRY SCHEIN Animal Health | SKU 049755 | 5 mg/mL, 10 mL |
| Cefazolin Sodium | HENRY SCHEIN Animal Health | SKU 054846 | 1 g, 10 mL bottle |
| Buprenorphine-SR | ZooPharm, Windsor, CO | - | - |
| 0.9% Sodium Chloride Injection USP | BRAUN, Irvine, CA | S8004-5384 | |
| 10% Neutral Buffered Formalin | VWR, Radnor, PA | 16004-130 | |
| BALB/C Male Mouse | Charles River Lab., Wilmington, MA | 28 | |
| Sterile Cotton Tipped Applicator | Puritan, Guilford, ME | SKU#: 25-806 | |
| Michel Suture Clips | Fine Science Tools (USA) Inc., Foster City, CA | 12040-01 | |
| Surgical Suture, U.S.P. | Henry Schein Animal Health | 101-2636 |
References
- Rappl, L. M. Physiological changes in tissues denervated by spinal cord injury tissues and possible effects on wound healing. International Wound Journal. 5 (3), 435-444 (2008).
- Salcido, R., Popescu, A., Ahn, C. Animal models in pressure ulcer research. The Journal of Spinal Cord Medicine. 30 (2), 107-116 (2007).
- Mak, A. F., Zhang, M., Tam, E. W. Biomechanics of pressure ulcer in body tissues interacting with external forces during locomotion. Annual Review of Biomedical Engineering. 12, 29-53 (2010).
- National Pressure Ulcer Advisory Panel. Prevention and Treatment of Pressure Ulcers: Clinical Practice Guideline. , Cambridge Media. Osborne Park, Western Australia. (2014).
- Marin, J., Nixon, J., Gorecki, C. A systematic review of risk factors for the development and recurrence of pressure ulcers in people with spinal cord injuries. Spinal Cord. 51 (7), 522-527 (2013).
- Krause, J. S. Skin sores after spinal cord injury: relationship to life adjustment. Spinal Cord. 36 (1), 51-56 (1998).
- Redelings, M. D., Lee, N. E., Sorvillo, F. Pressure ulcers: more lethal than we thought? Advances in Skin & Wound. 18 (7), 367-372 (2005).
- Kruger, E. A., Pires, M., Ngann, Y., Sterling, M., Rubayi, S. Comprehensive management of pressure ulcers in spinal cord injury: current concept and future trends. The Journal of Spinal Cord Medicine. 36 (6), 572-585 (2013).
- Lala, D., Dumont, F. S., Leblond, J., Houghton, P. E., Noreau, L. Impact of pressure ulcers on individuals living with a spinal cord injury. Archives of Physical Medicine and Rehabilitation. 95 (15), 2312-2319 (2014).
- Li, C., DiPiro, N. D., Krause, J. A latent structural equation model of risk behaviors and pressure ulcer outcomes among people with spinal cord injury. Spinal Cord. 55 (6), 553-558 (2017).
- Kumar, S., Yarmush, M. L., Berthiaume, F. Impact of complete spinal cord injury on neovascularization and tissue granulation in mouse model of skin pressure ulcers. Journal of Neurotrauma. 34 (13), A72-A73 (2017).
- Kumar, S., Yarmush, M. L., Dash, B. C., Hsia, H. C., Berthiaume, F. Impact of complete spinal cord injury on healing of skin ulcers in mouse models. Journal of Neurotrauma. 35 (6), 815-824 (2018).
- Basso, D. M., Fisher, L. C., Anderson, A. J., Jakeman, L. B., McTigue, D. M., Popovich, P. G. Basso Mouse Scale for locomotion detects differences in recovery after spinal cord injury in five common mouse strains. Journal of Neurotrauma. 23 (5), 635-659 (2006).
- Leary, S., et al. AVMA Guidelines for the Euthanasia of Animals. , American Veterinary Medical Association. Schaumburg, Illinois, USA. (2013).
- Stadler, I., Zhang, R. Y., Oskoui, P., Whittaker, M. S., Lanzafame, R. J. Development of a simple, noninvasive, clinically relevant model of pressure ulcers in the mouse. Journal of Investigative Surgery. 17 (4), 221-227 (2004).
- Peirce, S. M., Skalak, T. C., Rodeheaver, G. T. Ischemia-reperfusion injury in chronic pressure ulcer formation: a skin model in the rat. Wound Repair and Regeneration. 8 (1), 68-76 (2000).
- Wong, V. W., Sorkin, M., Glotzbach, J. P., Longaker, M. T., Gurtner, G. C. Surgical approaches to create murine models of human wound healing. Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2011, 969618-969625 (2011).
