Summary
Schlunddrüsen Drüse Acinus Größe ist ein robustes Maß der Krankenschwester Honig Biene Ernährung. Hier bieten wir ein detailliertes Protokoll zum sezieren, Beizen, imaging und Krankenschwester Biene schlunddrüsen Drüse Azini zu messen.
Abstract
Die Krankenschwester schlunddrüsen Drüsen produzieren die Proteinfraktion des Arbeitnehmers und Gelée Royale, das zur Entwicklung von Larven und Königinnen gespeist wird. Diese gepaarten Drüsen, die befinden sich in den Kopf der Biene sind sehr empfindlich auf die Quantität und Qualität der Pollen und Blütenstaub ersetzt, dass die Krankenschwester Biene verbraucht. Die Drüsen werden kleiner, wenn Krankenschwestern mangelhafte Ernährung zugeführt werden und sind groß, wenn sie komplette Diäten gefüttert werden. Da Krankenschwester schlunddrüsen Drüse Größe ein robuster Indikator für Krankenschwester Ernährung ist, ist es wichtig, dass Studierende Honig Biene Ernährung wissen, wie man diese Drüsen zu messen. Hier bieten wir detaillierte Methoden zum sezieren, Beizen, imaging und Krankenschwester Biene schlunddrüsen Drüsen zu messen. Wir stellen Vergleiche von ungefärbten und gefärbten Gewebe und Daten, die verwendet wurden, um die Auswirkungen der Pollen auf Drüse Größe zu studieren. Mit dieser Methode zu testen, wie Ernährung wirkt sich schlunddrüsen Drüse Größe aber weitergehende Nutzung für das Verständnis der Rolle dieser Drüsen im Bienenstock Gesundheit hat.
Introduction
Honigbienen sind unerlässlich für die Landwirtschaft, weil sie eine Vielzahl von Pflanzen bestäuben, die durch Menschen und Tiere verbraucht werden. Viel Aufmerksamkeit wurde auf den Rückgang der Bienenvölker Honig als Kolonie Verluste schweben rund 30-40 % jährlich in den Vereinigten Staaten1 und 10 – 15 % in Europa2,3gelegt. Mehreren Faktoren ab, einschließlich eingeschränkten Zugang zu qualitativ hochwertigen Futter, wahrscheinlich Akt zusammen, um negative Auswirkungen auf Bienengesundheit. Monokultur, Dürre, nicht nachhaltige Imkerei Praktiken und andere Faktoren verringern die Vielfalt und Menge an natürlichen Pollen Kolonien4,5zur Verfügung. Da Honigbienen abgeleitet fast alle ihre diätetischen Proteine und Lipide aus Pollen werden, kann eingeschränkter Zugang zu Pollen schränken Gesundheit Individuum und Kolonie.
Die schlunddrüsen Drüsen sind sekretorischen Strukturen in die Biene Kopf zwischen Auge und Gehirn-6. Unter normalen Umständen spiegeln die Entwicklungs- und funktionale Flugbahn der Drüsen, die von der Biene, in dem sie aufhalten. In ca. 5 – 10 Tage alt führt die Biene im Bienenstock Krankenpflege Verhaltensweisen. Zur gleichen Zeit erreichen die schlunddrüsen Drüsen ihre Maximalgröße und sekretorischen Kapazität, produzieren die großen Proteinfraktion futtersaft oder Gelee gefüttert, Larven und andere Erwachsene, wie die Königin zu entwickeln. Auf diese Maximalgröße ähneln die Drüsen Weintraube, wo jede Traube eine diskrete Lappen Struktur bekannt als die Acinus ist (plural: Azini). Da die Arbeitsbiene altert und verschiedene Aufgaben im Bienenstock übernimmt, die schlunddrüsen Drüsen schrumpfen und übernehmen verschiedene Funktionen, wie Abbau von Zucker im Nektar7,8. Die schlunddrüsen Drüsen sind daher mit dem Alter die Biene und ihre Aufgabe altersassoziierter korreliert.
Krankenschwester schlunddrüsen Drüse Größe reagiert empfindlich auf die Quantität und Qualität von Protein in ihrer Ernährung9,10,11. Wenn ammenbienen gut ernährt werden, sind ihre Drüsen groß. In der Erwägung, dass die Drüsen sind kleiner ist als die Biene Pollen, besonders in der ersten Woche der Erwachsenen Entwicklung beraubt. Um den Ernährungszustand einer Krankenschwester Biene festzustellen, Forscher in der Regel messen die schlunddrüsen Drüsen, entweder durch direkte Messung Drüse Acinus Größe11,12,13,14 oder Protein Inhalt15,16 , durch die Messung des Proteins Inhalt11 oder frisch Gewicht17 von den ganzen Kopf, wo sie sich befinden. Jede Methode hat ihre eigenen vor- und Nachteile. Wir bevorzugen die Auflösung von Messung der Drüse Azini erhalten, obwohl diese Methode in zwei wesentlichen Punkten schwierig sein kann. Die erste Herausforderung ist es, richtig zu identifizieren und zu zergliedern, die Drüse. Die zweite ist ein genaues Maß für jede Acinus erhalten. Unter einem sezierenden Lichtmikroskop die Drüsen erscheinen klar oder milchig weiß und die Grenzen der Azini können schwierig sein zu definieren. Werkzeuge, um den Rand der Azini besser zu definieren und erhöhen die Wahrscheinlichkeit der Erlangung genauer Drüse Messungen ist vorteilhaft für jeden Honig Biene Ernährung zu studieren.
Hier zeigen wir interessierten Forschern wie zu sezieren, färben, Bild, und schlunddrüsen Drüsen zu messen, so dass genaue Messungen der Acinus Größe erreicht werden können. Die Methode, die wir beschreiben bietet Forscher eine einfache, präzise und reproduzierbare Methode zur Erreichung Mehrfachmessung Drüse in relativ kurzer Zeit, wenn der Experimentator ausreichend praktiziert wird. Man könnte getrost die Drüsen von fast 10 Personen in knapp einer Stunde messen. Wir bieten Informationen über die Methode und Materialien benötigt, um diese Messungen zu erhalten. Die wichtigsten Aspekte der unten beschriebenen Methoden sind die richtige Präparation und Färbung der Drüsen. Obwohl wir die vergrößerten Bilder erfassen und der Azini mit kommerzieller Software Messen, adaptierbar die Methoden, die wir präsentieren leicht auf anderen Plattformen18.
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Protocol
(1) sezieren und Färbung der Schlunddrüsen Drüsen von Krankenschwester Arbeitnehmer
- Machen Sie einen Wachs Dissektion Teller durch schmelzen kühlen Einstellung Wachs in ein kleines (60 mm x 15 mm) oder großen (100 mm x 15 mm) Glas Petrischale. Kühlen Sie das Wachs vollständig ab, bevor Sie mit der Platte für Sezierungen.
- Für jede Biene zu bearbeitenden vorbereiten 20 µL einer 01:20 arbeiten Giemsa-Lösung (01:20 V/V von Giemsa Fleck in Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung vorbereitet (PBS: 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 1,8 mM KH2PO4)).
Achtung: Giemsa Fleck enthält Methanol und ist brennbar. Es ist giftig bei Einatmen, Verschlucken oder Hautkontakt kommt es. Es sollte laut Anforderungen der lokalen Institution entsorgt werden.
Hinweis: Stellen Sie immer einen frischer Tanklösung nur für den aktuellen Stapel von Proben, weil Giemsa Fleck schnell verschlechtert, sobald es verdünnt wird. Verwerfen Sie den verdünnten Fleck, wenn ein Niederschlag entsteht. - Pipettieren 20 µL Giemsa Fleck in die Vertiefungen der Objektträger und 50 – 100 µL Saline auf der Folie neben dem Brunnen.
- Lösen Sie den Kopf von einer Biene, mit der 10 mm-Mikro-Feder-Schere und Betten Sie der vorderen Kopfseite bis in die Wachs-Dissektion-Platte mit Zange und einem Wachs-Carving-Stift ein. Festzunageln Sie den Kopf in die Wachs-Platte für zusätzliche Stabilität durch Einfügen von Nadeln in die Augen und den Mund.
- Eine kleine machen mit einer scharfen zerbrechlich Rasierklinge in einen Schraubstock Pin fixiert (~ 2 – 3 mm) Einschnitt zwischen den Augen und Mandibeln auf jeder Seite der Frontplatte. Sanft laufen Sie die Mikro Schere unter der Frontplatte und Schnitten Sie den riechzentrum Nerv, der zwischen den Antennen und das Gehirn läuft.
- Mit feinen Pinzette, Schnapp dir die Frontplatte durch den Mund, es hochklappen und Heften Sie es an die Wachs-Platte mit feinen Spitze Pinzette und eine Pin. Wenn nötig, entfernen Sie die Stirnplatte vollständig.
- Pipettieren 20 µL PBS auf den Schnitt öffnen Bereich des Kopfes.
Hinweis: Die Drüsen können schweben bis zu diesem Zeitpunkt oder man muss nach ihnen suchen. Die Drüsen aussehen wie eine Perlenkette und befinden sich auf der Oberseite des Gehirns wenn intakt. - Verwenden Sie Superfein Punkt Zange, um eine der schlunddrüsen Drüsen entfernen sanft (die Drüse kann brechen, erfordert es in Segmenten entfernt werden), und sofort übertragen Sie die Drüse auf den Giemsa Fleck auf der Mikroskopie-Folie.
- Ermöglichen Sie die Drüse in der Giemsa-Lösung für 5 min inkubieren, und verwenden Sie Zange, um die Drüse an den Pool der Saline auf derselben Folie übertragen. Bei Bedarf schneiden Sie die Drüse in kleinere Stücke mit der Schere Mikro.
Hinweis: Dies hilft, um die Drüsen in ein flacher Ebene, wodurch es leichter zu erhalten klare Bilder von der Drüse Azini liegen zu machen.
2. Messung der schlunddrüsen Drüse Azini
- Schalten Sie das Mikroskop und öffnen Sie das Messprogramm. Die Lichtquelle für das Mikroskop schalten Sie ein, wenn es nicht bereits auf. Die Mikroskop-Vergrößerung auf 10 X gesetzt.
- Die Drüsen zu finden und das vergrößerte Bild im Okular, ohne den Computer zu konzentrieren. Erhöhen Sie die Vergrößerung auf 60 – 80 X und konzentrieren Sie das Bild im Okular zu.
- Auf der Registerkarte "Acquire" einstellen und die Drüsen auf das live-Bild auf dem Computer konzentrieren.
- Geben Sie Bild Name/Beispielbeschreibung in das Feld "Bild" und klicken Sie auf "Bild holen", um ein Bild von den Drüsen für weitere Messungen zu nehmen.
- Wählen Sie die Registerkarte 'Analyse' wählen Sie die "Flächenwerkzeug" (hervorgehoben in ergänzenden Abbildung 1A) und deaktivieren Sie "Wert" unter "Display Labels", die auch 'Einheit' aufheben wird. Legen Sie alle anderen Einstellungen auf Standard (ergänzende Abbildung 1A).
Hinweis: Die Software kalibriert automatisch die Flächenmaße nach dem Grad der Vergrößerung, so dass das Gebiet von niedrigerer Vergrößerung erhalten das gleiche wie die von einer höheren Vergrößerung erhalten ist. - Messen Sie jeden Acinus indem stetig oder kontinuierlich halten Sie die linke Maustaste gedrückt und Rückverfolgung der Acinus Perimeter so schonend wie möglich. Messen Sie mindestens 10 Azini pro Biene.
Hinweis: Mehr erforderlich sein je nach dem Experiment (siehe Diskussion). Sie benötigen mehrere Bilder/Abschnitte der Drüse, genügend klar, richtig ausgerichtet Azini für Messung zu finden. - Sobald alle die Azini von einem einzigen Image gemessen wurden, wählen Sie "Bericht erstellen". Sicherstellen Sie, dass die Optionen ausgewählt sind, wie in zusätzliche Abbildung 1 b dargestellt und klicken Sie auf "exportieren".
- Speichern Sie den Bericht, wie gewünscht. Wenn eine Datei bereits für den Satz von Proben erstellt wurde und weitere Messungen werden hinzugefügt, stellen Sie sicher, dass die Report-Datei nicht geöffnet ist, damit die neuen Daten an die vorhandene Datei hinzugefügt werden.
- Wenn Sie fertig sind, schalten Sie das Mikroskop-Kamera und Lichtquelle. Wischen Sie die Flüssigkeit und die Drüsen aus der Mikroskopie-Folien und entsorgen Sie sicher aller verwendeten Materialien. Die Folien mit destilliertem Wasser spülen und sauber wischen mit Ethanol (70 % V/V in Wasser) zur Wiederverwendung.
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Representative Results
Schlunddrüsen Drüsen wurden seziert von Krankenschwester Arbeiter und visualisiert mit und ohne Flecken bei 60 – 80 X Vergrößerung (Abbildung 1). Im ungefärbten Gewebe ist es schwierig, die richtigen Kontrast voll konzentrieren und definieren die Kanten der Azini zu finden. Im gefärbten Gewebe sind die Kanten der Azini aufgrund der verbesserten Kontrast zwischen den gefärbten Gewebe und der weiße Hintergrund scharf.
Abbildung 1: ungefärbt (A, B) oder gebeizt (C, D) schlunddrüsen Drüsen von Krankenschwester-Alter Arbeiter. Beachten Sie, dass zwar die Drüsen sichtbar in beiden Fällen, die gefärbten Drüsen mehr gut definiert und daher leichter zu messen sind. Beachten Sie auch, dass die etwas gewellt und Morphologie der ganzen Drüse Ergebnisse in verschiedenen fokalen Ebenen aufgewickelt. Die Drüse kann geschnitten werden, um dies zu verhindern. Skalieren von Balken = 500 µm. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Honig Biene Arbeiter wurden gesammelt bei ≤18 h nach Entstehung und zwei verschiedene diätetische Regime zugeordnet wurden: eine Diät von Frühjahr Pollen natürlicherweise in Tucson, Arizona, USA gemischt mit Honig oder nur Honig mit keine Pollen. Um die Bienen auf diese Diäten während im Bienenstock zu beschränken, Push-in Drahtkörbe dienten – wie in früheren Studien13,14 beschrieben — beschränken die Bienen bei einer Dichte von etwa eine Biene pro Quadratzentimeter. Jede diätetische Behandlung wiederholte sich in drei Bienenstöcke (N = 3). Bienen, die entweder diätetische Regime ausgesetzt wurden bei 5 und 8 d des Alters für die Analyse von ihren schlunddrüsen Drüsen gesammelt. Mit Hilfe der Dissektion, Färbung und Messmethoden, die oben beschriebenen schlunddrüsen Drüse Azini diese Bienen wurden gemessen und verglichen (Abbildung 2). In jedem der drei Bienenstöcke wurden drei Bienen für jedes Alter x Diät Behandlung Kombination gemessen. Zehn Azini wurden für jede Biene gemessen. Für jede Biene, eine durchschnittliche Acinus Größe pro Biene zu erhalten wurden die Azini Messungen gemittelt. Diese Werte wurden dann gemittelt, um einen Wert für das Alter x Behandlung Kombination für diese Struktur zu erhalten. ANOVA-Analyse auf die Acinus Messungen zeigten, dass die Ernährung (F1,8= 2,65, p = 0,001), Alter (F1,8 = 10,03, p = 0.013), und die Interaktion zwischen Ernährung x Alter (F1,8= 0,02, p = 0,020) hatte erhebliche Auswirkungen. Wir beobachteten, dass die schlunddrüsen Drüsen im Laufe der Zeit in die Bienen, die Pollen gefüttert wurden wuchs, wie von einem Tukey bestimmt HSD. Dieses Muster wurde demonstriert bisher9,11,19. Die Größe der Drüse Azini unterscheiden nicht zwischen der 5D und 8 Tage alt Bienen wenn die Bienen Pollen entzogen wurden.
Abbildung 2: Schlunddrüsen Drüse Größen der wohlgenährten Krankenschwestern und beraubt von Pollen. Arbeiter wurden eine Diät von Pollen und Honig (graue Balken) oder eine Diät allein (weiße Balken) für 5 oder 8 d Honig gefüttert. Während dieser Zeit Bienen in den Bienenstock waren und über Honig oder Honig und Pollen in Käfigen gehalten. Ihre schlunddrüsen Drüse Azini wurden gemessen, wie oben beschrieben. Fehlerbalken darzustellen Standardfehler für die mittlere Acinus Größe in den drei Kolonien (N = 3) getestet. Drei Bienen wurden von jeder Kolonie für jede Behandlung Alter x Diät Behandlung Kombination gemessen. Bars, verbunden mit einem Sternchen versehen sind deutlich verschieden von einander nach einem Tukey HSD ist (α = 0,05). Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Bienen können auch in Käfigen getrennt von den Bienenstock gepflegt und gefüttert definierte Diäten. Honig Biene Arbeiter wurden bei ≤ 18 h nach Entstehung und Acrylglas Käfige (100 Bienen pro Käfig) mit einem der vier diätetische Regime zugeordnet wurden: eine Diät, die keinen Pollen oder einer Diät, die eine der drei Bienen gesammelte Pollen: "Mandel" Pollen von einer Mandel Obstgarten-Monokultur, "Wüste" Pollen aus der Sonora-Wüste enthält eine Mischung aus Wüstenpflanzen oder "SE" Pollen von Kolonien befindet sich im Südosten der Vereinigten Staaten, wie in Corby-Harris Et Al. beschrieben 12. Saccharose (50 % w/V), Wasser und Pollen (gegebenenfalls) wurden Ad Libitumzur Verfügung gestellt. Für jede der vier diätetische Behandlungen, insgesamt 20 Käfige wurden fünf Käfige konstruiert. Bei 8 d alt wurden die schlunddrüsen Drüsen von zehn Bienen gesammelt und gemessen. Für jeden einzelnen wurden zehn Azini gemessen. Die durchschnittliche Acinus Größe für jede Biene berechnet wurde und diese Werte wurden verwendet, um eine durchschnittliche Acinus Größe für jeden Käfig zu erhalten. Wir beobachteten, dass schlunddrüsen Drüse Größe empfindlich auf sowohl das Vorhandensein von Pollen in der Ernährung (Pollen gegenüber keine Pollen: t1 = 5,64, p < 0,0001) und der Art der Pollen zur Verfügung gestellt (Mandel vs. Wüste vs. SE Pollen: F2.148 = 8,06, p = 0,0005; ( Abbildung 3). Bienen gefüttert Wüste oder Mandel Pollen hatte entsprechende Drüse Größen. Bienen gefüttert SE Pollen Drüsen, die kleiner als Bienen waren Mandel oder Wüste Pollen gefüttert hatte.
Abbildung 3: Schlunddrüsen Drüse Größen der Krankenschwester-Alter Arbeitnehmer drei verschiedene Arten von Pollen gefüttert oder Pollen entzogen. Ammenbienen wurden in Käfigen nach Entstehung und eine Diät bestehend aus Saccharose allein (keine Pollen) oder Saccharose und einer der drei Pollen (Mandel, Wüste oder SE Pollen) bis 8 d Alter gefüttert wurden. Fehlerbalken darzustellen Standardfehler für die mittlere Acinus Größe in Bienen aus fünf Käfigen Stichprobe (N = 5). Zehn Bienen wurden abgetastet und in jedem Käfig, eine durchschnittliche Acinus Größe für den Käfig zu erhalten und die Unterschiede zwischen den Käfigen berechnen gemessen. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Ergänzende Datei 1: Screenshots von Mess-Software während der Messung die Drüse Azini (A) und Erstellen des Berichts (B). Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
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Discussion
Schlunddrüsen Drüse Größe ist empfindlich auf die Menge an Protein und Pollen in der Ernährung und ist ein kritischer Marker für Nahrung in jungen Erwachsenen Bienen. Hier zeigen wir eine kostengünstige und reproduzierbare Möglichkeit zu zerlegen und dieses Gewebes zu messen. Diese Gewebe können schwierig sein zu sezieren, aber mit etwas Übung kann man zunehmend sauberere Sezierungen mit dem Gewebe relativ intakt erhalten. Der wesentliche Vorteil der hier vorgestellten Methode ist, dass das Gewebe befleckt ist, wodurch die Forscher deutlich die Grenzen der einzelnen Drüse Acinus visualisieren. Ohne Flecken sind die Grenzen dieser Azini schwer zu visualisieren und konzentrieren sich unter dem Mikroskop, das des Forschers Fähigkeit, eine genaue Acinus Messung verringert. Trotz der Leichtigkeit der Färbung und erhalten ein klares Bild für die Azini sollten mehrere kritische Punkte beachtet werden, um genaue Messungen zu erhalten; Diese werden nachfolgend erläutert.
Große Drüsen stammen aus wohlgenährt ammenbienen, die ca. 7 – 10 Tage Alter9,20sind. Es ist immer einfacher, vor allem beim Lernen, diese Gewebe zum ersten üben großen Drüsen sezieren, bevor er auf kleinere Drüsen, da sie klein, zerbrechlich und schwer zu sezieren sind zu sezieren. Frische Gewebe liefert auch die besten Sezierungen. Wenn man die Biene für einen Zeitraum vor der Dissektion einfrieren muss, wissen Sie, dass je länger eine Biene gefroren ist, desto anfälliger das Gewebe wird. Dies kann Sezierungen problematisch machen. Mit Praxis und scharfen Zange werden die Forscher schließlich diese Probleme überwinden. Wir haben keinen Unterschied in der Färbung zwischen gefrorene und frische Gewebe festgestellt.
Frischen Fleck ist notwendig, um die richtige Färbung der Drüsen zu erhalten. Ältere Fleck kann verklumpen, so dass des Flecks nicht in der Lage, richtig das Gewebe durchdringen. Es ist wichtig, dass die frischen Flecken in kleinen Chargen, etwa jede Stunde vorbereitet werden. Dadurch wird sichergestellt, dass richtige Kontrast zwischen dem Gewebe und den Hintergrund unter die Lupe genommen, um scharfe Bilder mit festgelegten Acinus Kanten führt. Es ist auch hilfreich, mit einer Reihe von Fleck Verdünnungen zu arbeiten, wenn der Fleck nicht richtig das Gewebe durchdringen ist. Wir fanden, dass ein 01:20, die frische Arbeiten Bestand an Fleck funktioniert am besten, aber andere Verdünnungen auch funktionieren kann, wenn man einen dunkleren oder helleren Fleck wünscht.
Wir verwendeten eine Kamera angeschlossen, sezierenden Mikroskop und kommerziell verfügbare Software zur Messung und Aufzeichnung der Azini Daten. Die Kamera und Software sind etwas teuer und können daher nicht alle Labore zur Verfügung. Obwohl es notwendig ist, eine Kamera an dem sezierenden Mikroskop angeschlossen um das Image und die Maßnahme erhalten haben sind die Azini dort mehrere niedrigere Kostenoptionen, einschließlich freier Software18, das verwendet werden kann.
Hier zeigen wir die grundlegenden Schritte zum Beizen und Messung der schlunddrüsen Drüse Azini, betonen aber, daß es bis zu der Forscher zu entscheiden, wie viele Azini zu messen, ob Azini auf einer oder beiden Drüsen zu messen, und ob Sie mehrere Bereiche jeder Drüse zu messen. Zum Beispiel um weitere subtile Unterschiede zwischen den experimentellen Behandlungen zu erkennen, müssen eine mehr als 10 Azini pro Drüse und mehr als 10 Bienen pro Behandlung messen. Wir haben nicht bemerkt, Azini Größenunterschiede basiert auf deren Speicherort auf der Drüse. Wir haben auch keine Unterschiede in den Größen von Azini festgestellt, die auf der linken oder rechten Drüsen befinden. Wenn der Forscher Größenunterschiede vermutet, sollte mehrere Bereiche der schlunddrüsen Drüse und vielleicht beide Drüsen gemessen werden.
Forscher sollten in der Lage, genaue Messungen der schlunddrüsen Drüse Größe mit dem hier beschriebenen zum sezieren und Beizen Drüsengewebe und Messung der Azini Protokoll erfolgreich zu erhalten werden. Mit etwas Übung diese Messungen ziemlich schnell erhalten Sie erlauben die Forscher mehrere Proben in einer Sitzung zu verarbeiten. Wir erwarten, dass mehr Forscher, die Methoden, die hier skizzierten beschäftigen werden, während sie versuchen, weitere Faktoren verstehen, die schlunddrüsen Drüse Größe beeinflussen, und wie diese Drüsen Kolonie Gesundheit und das individuelle Verhalten betreffen.
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Disclosures
Die Autoren haben nichts preisgeben.
Acknowledgments
Diese Arbeit wurde unterstützt durch interne Fonds von der USDA-ARS (Projektnummer: 2022-21000-017-00-D). Die ARS/USDA ist ein Anbieter und Chancengleichheit.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cool setting wax | Grobet USA | 21.450 | |
| Glass petri dish, small | VWR | 89000-310 | |
| Glass petri dish, large | VWR | 89000-314 | |
| Super Max Wax Pen | Eurotool | PEN-520.00 | |
| Breakable razor blades | Electron Microscopy Sciences | 72004 | |
| pin vise | BioQuip | 4845 | |
| 2A-SA flat/rounded tip forceps | Rubis/BioQuip | 4522 | |
| Fine point forceps | Rubis/BioQuip | 4523 | |
| 5A-SA super fine point forceps | Rubis/BioQuip | 4525 | |
| 10 mm micro spring scissors | BioQuip | 4715 | |
| 3 mm micro spring Vannas scissors | Roboz | RS-5610 | |
| Glass Depression Slides, Single Cavity | GSC International | 4-13057-DZ-12 | |
| PBS tablets | VWR | 97062-730 | |
| Giemsa stain, modified solution | Sigma Aldrich | 32884 | |
| Insect pins | ENTO SPHINX S.R.O. | 02.02 | |
| Leica Applications Suite measurement software | Leica Microsystems | any measurement software, including free software, can be used |
References
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