Environment

מדידת Hypopharyngeal בלוטת Acinus בגודל דבורת הדבש (בומבוס) עובדים

Published: September 14, 2018 doi: 10.3791/58261

¹USDA-ARS, Carl Hayden Bee Research Center

Summary

Hypopharyngeal בלוטת acinus גודל הוא מדד חזקים של אחות דבש דבורים תזונה. כאן, אנו מספקים פרוטוקול מפורט לנתח, מכתים, הדמיה של מדידת האחות דבורה hypopharyngeal בלוטת acini.

Abstract

בלוטות hypopharyngeal האחות לייצר את השבר חלבון של העובד ושל מלכות זה מוזן לפיתוח הזחלים ומלכות. בלוטות אלה לזווג ממוקמים בראש של הדבורה רגישים מאוד הכמות, האיכות של אבקה ואבקה תחליפי הדבורה האחות צורכת. הבלוטות נעשים קטנים יותר, כאשר אחיות ניזונים תזונה לקויה של גדולים, כאשר הם ניזונים דיאטות מלאה. בגלל גודל בלוטת hypopharyngeal האחות הוא מחוון חזקים של האחות תזונה, זה חיוני כי הלומדים דבש דבורים תזונה יודעים איך למדוד בלוטות אלו. כאן, אנו מספקים שיטות מפורט לנתח, מכתים, הדמיה של מדידת האחות דבורה hypopharyngeal בלוטות. אנו מציגים השוואות של רקמות וללא רבב, מיטה והנתונים ששימשו לחקור את ההשפעה של אבקה על גודל בלוטת. בשיטה זו נעשה שימוש כדי לבחון כיצד משפיעה על גודל בלוטת hypopharyngeal דיאטה, אך יש שימוש נוסף להבנת התפקיד של בלוטות אלה בבריאות הכוורת.

Introduction

דבש דבורים חיוניים לחקלאות כי הם להאביק מגוון רחב של גידולים אשר שנצרכים על ידי בני האדם ובעלי החיים. תשומת לב רבה הוקדשה הירידה של אוכלוסיות דבורים דבש כמו המושבה הפסדים לרחף סביב 30-40% בכל שנה ארצות הברית¹ ו- 10 – 15% אירופה²^,³. גורמים רבים, כולל גישה מופחתת באיכות גבוהה מספוא, מעשה סביר יחד כדי להיות השפעה שלילית על בריאות דבש דבורים. מונוקולטורה, הבצורת, פרקטיקות קיימא לכוורות וגורמים אחרים להקטין את המגוון והכמות של טבעי pollens לרשות המושבות⁴^,⁵. כי דבש דבורים נובעת כמעט את כל שלהם תזונתיים חלבונים ושומנים אבקה, גישה מופחתת אבקה יכול להגביל קשות בריאות הפרט והמושבה.

בלוטות hypopharyngeal הם מבנים הפרשה ממוקם בראש של הדבורה בין העיניים המוח⁶. בנסיבות רגילות, מסלול התפתחותי ופונקציונליים של הבלוטות מראה של הדבורה הם ממוקמים. כ 5-10 ימים של גיל, הדבורה ביצוע התנהגויות סיעוד הכוורת. בזמן הזה, בלוטות hypopharyngeal להגיע שלהם גודל השיא של קיבולת הפרשה, בהפקת השבר החלבון העיקרי של מזון שבוחרים או ג'לי למאכל פיתוח הזחלים ומבוגרים אחרים, כגון המלכה. בגודל הזה לשיא הבלוטות דומים אשכול ענבים איפה ענבים כל מבנה האונה דיסקרטית המכונה של acinus (ברבים: acini). הדבורה הגילאים, לוקח על משימות שונות בכוורת, בלוטות hypopharyngeal לכווץ ולקחת על פונקציות שונות, כמו פירוק סוכרים צוף⁷^,⁸. בלוטות hypopharyngeal ולכן הם בקורלציה עם הגיל של הדבורה, משימתם הקשורים לגיל.

גודל בלוטת hypopharyngeal האחות הוא רגיש ובאיכות של חלבון שלהם דיאטה⁹^,¹⁰^,¹¹. כאשר אחות דבורים ניזונים היטב, בלוטות שלהם הם גדולים. בעוד הבלוטות קטנות כאשר הדבורה הוא משולל אבקה, במיוחד בשבוע הראשון של התפתחות למבוגרים. על מנת לקבוע את המצב התזונתי של דבורה האחות, חוקרים למדוד בדרך כלל בלוטות hypopharyngeal, או על ידי מדידה ישירות בלוטת acinus בגודל¹¹^,¹²^,¹³^,¹⁴ או חלבון תוכן¹⁵^,¹⁶ או על ידי מדידת החלבון תוכן¹¹ או טרי במשקל¹⁷ של הראש כולו במקום בו הם נמצאות. לכל שיטה יש יתרונות וחסרונות משלה. אנו מעדיפים את הרזולוציה המתקבל מדידה של בלוטת acini, אך שיטה זו יכולה להיות מאתגרת בשתי דרכים עיקריות. האתגר הראשון הוא לזהות כראוי ומנתחים את בלוטת. השני הוא קבלת מדד מדויק של כל acinus. תחת מיקרוסקופ אור ויבתר, הבלוטות מופיעים לבן נקי או חלבי, גבולות acini יכול להיות שקשה להגדיר. כלים כדי להגדיר טוב יותר על קצה acini, וכדי להגביר את הסבירות של קבלת מדידות מדויקות בלוטת הוא מועיל לאף אחד לומד תזונת הדבורים דבש.

כאן, אנו מראים גם חוקרים כיצד לנתח, כתם, תמונה, וכיצד למדוד בלוטות hypopharyngeal כך יכולה להיות מושגת מדידות מדויקות של גודל acinus. השיטה שנתאר מציע חוקרים שיטה קלה, מדויק ו לטבלה הניתנת לשכפול להשגת מספר מדידות בלוטת תוך תקופה קצרה יחסית של זמן ברגע הנסיין מספיק מתורגל. אחד בביטחון יכול למדוד הבלוטות של כמעט 10 אנשים קצת יותר משעה. אנו מציעים פרטים על השיטה וגם החומרים הדרושים כדי לקבל מדידות אלה. ההיבטים החשובים ביותר של שיטות המפורטות להלן הן את הקרע הנכון מכתים של הבלוטות. למרות לנו ללכוד את התמונות בהגדלה, למדוד את acini עם תוכנה מסחרית, השיטות שאנו מציגים בקלות ניתן להתאים את פלטפורמות אחרות¹⁸.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. לנתח, מכתימה את בלוטות Hypopharyngeal מעובדים אחות

להכין צלחת לנתיחה שעווה על ידי המסת שעווה מגניב בהגדרה קטן (60 מ"מ x 15 מ"מ) או זכוכית גדולים (100 מ"מ x 15 מ"מ) צלחת פטרי. מגניב את השעווה לחלוטין לפני השימוש במשטח עבור ניתוח.
עבור כל דבורה להיות מעובד, להכין 20 µL מ- 1:20 עובדים Giemsa פתרון (20:1 v/v של מוכן גימזה בתוך באגירה פוספט תמיסת מלח (PBS: 137 מ מ NaCl, מ מ 2.7 אשלגן כלורי, 10 מ מ נה₂HPO₄,₂PO 1.8 מ מ ח'₄)).
התראה: צביעת גימזה מכיל מתנול, הוא דליק. זה רעילים אם בלע, בשאיפה, או אם זה בא במגע עם העור. זה צריך להיות מסולק בהתאם לדרישות המוסד המקומי.
הערה: להפוך תמיד הפתרון עובד טריים רק עבור האצווה הנוכחית של דגימות מכיוון גימזה מדרדרת במהירות ברגע זה מדולל. למחוק את הכתם מדולל אם מתפתח התמיסה.
Pipet 20 תאים µL גימזה לתוך הבארות של שקופיות מיקרוסקופ, 50 – 100 µL תמיסת מלח על גבי השקופית סמוך למעיין.
ניתוק בראש, דבורה, בעזרת המספריים מיקרו-קולקציית אביב 10 מ מ, להטביע את הצד הקדמי ראש למעלה לתוך הצלחת ניתוח שעווה באמצעות מלקחיים ועט גילוף שעווה. להצמיד את הראש המשקולת שעווה ליציבות נוספת על-ידי הוספת סיכות העיניים ואחד בפה.
בעזרת סכין גילוח שבירים חדה קבוע לתוך מלקחיים pin, לבצע קטן (~ 2-3 מ מ) חתך בין עיני לבין הלסת בכל צד של הפנים צלחת. בעדינות להפעיל את המספריים מיקרו כתשר הפנים וחותכים את עצב antennal בין מחושיהם המוח.
בעזרת מלקחיים בסדר, לתפוס את הצלחת הפנים על ידי הפה תקפיץ את זה, להפיל את זה על הלוח שעווה עם הצבע בסדר מלקחיים, סיכה. במידת הצורך, הסר את לוחית הפנים לחלוטין.
Pipet 20 µL PBS לתוך החתך פתח סעיף של הראש.
הערה: הבלוטות עלול לעוף בשלב זה או אחד עליך לחפש אותם. הבלוטות נראה כמו מחרוזת פנינים, נמצאים מעל המוח אם ללא פגע.
להשתמש מלקחיים הצבע בסדר סופר בעדינות להסיר אחד של בלוטות hypopharyngeal (בלוטת עשוי לשבור, הדורשים להסרתה בקטעים), ולהעביר מיד את בלוטת צביעת גימזה בשקופית מיקרוסקופ.
לאפשר בלוטת דגירה בפתרון Giemsa במשך 5 דקות, ולאחר מכן להשתמש מלקחיים להעביר את בלוטת לבריכה של תמיסת מלח לאותה השקופית. אם יש צורך, לחתוך את בלוטת לחלקים קטנים יותר עם המספריים מיקרו.
הערה: פעולה זו מסייעת להפוך את הבלוטות בתוך מטוס להחמיא, ובכך קל יותר להשיג תמונות ברורות של acini בלוטת.

2. מדידה של hypopharyngeal בלוטת Acini

הפעלת המיקרוסקופ ופתח את התוכנית מדידה. הפעל את מקור האור בשביל המיקרוסקופ, אם זה לא כבר על. הגדר את רמת ההגדלה של מיקרוסקופ 10 X.
למצוא הבלוטות ולהתמקד את התמונה בהגדלה העינית, ללא המחשב. העלאת מידת ההגדלה ל- 60-80 X ולהתמקד התמונה העינית.
תחת לשונית 'רכוש', להתאים ולהתמקד הבלוטות על התמונה בשידור חי במחשב.
הקלד תיאור שם/לדוגמה תמונה לתוך התיבה 'שם התמונה' ולחץ על 'לרכוש ' תמונה לקחת תמונה של הבלוטות למדידות נוספות.
בחר את הכרטיסיה 'ניתוח' בחר 'בכלי שטח"(מסומן במשלימה איור 1A), בטל את בחירת 'ערך' תחת 'הצג תוויות', אשר גם בטל בחירת 'יחידה'. הגדר כל שאר ההגדרות של ברירת המחדל (איור משלים 1A).
הערה: התוכנה אוטומטית מכייל את המידות אזור בהתאם לרמת ההגדלה כך האזור המתקבל הגדלה נמוכה יותר הוא זהה לזה המתקבל הגדלה גבוהה יותר.
למדוד כל acinus באופן רציף בלחיצה או ללא הרף החזקת לחצן העכבר השמאלי תוך מעקב למתחם acinus רשפאה. למדוד לפחות 10 acini לכל דבורה.
הערה: יותר עשוי להיות נחוץ בהתאם הניסוי (ראה את הדיון). זה עשוי לדרוש מספר תמונות מקטעים של בלוטת למצוא מספיק ברור, אוריינטציה כראוי acini למדידה.
מרגע נמדדו כל acini של תמונה בודדת, בחר באפשרות 'יצירת דוח'. ודא כי האפשרויות שנבחרו כפי שמוצג באיור משלימה 1B , לחץ על 'ייצוא'.
לשמור את הדוח הרצוי. אם כבר נוצר קובץ עבור ערכת דוגמיות, מדידות נוספות מתווספות ודא כי קובץ הדוח אינה פתוחה כך הנתונים החדשים מתווספים לקובץ הקיים.
כשתסיים, כבה את המצלמה מיקרוסקופ ואת מקור האור. לנגב את הנוזל ואת בלוטות את השקופיות מיקרוסקופ, להיפטר בבטחה כל חומר משומש. לשטוף את השקופיות עם מים מזוקקים, נגב ניקוי עם אתנול (70% v/v במים) לשימוש חוזר.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

בלוטות Hypopharyngeal היו גזור מעובדים האחות, דמיינו עם או בלי כתם בהגדלה X 60 – 80 (איור 1). ברקמת וללא רבב, קשה למצוא ניגוד תקין לחלוטין להתמקד ולהגדיר את קצות acini. ברקמה מוכתם, קצות acini חדים בגלל הניגוד משופרת בין הרקמות מוכתם לבין הרקע הלבן

איור 1: מוכתם (A, B) או צבעונית (C, D) hypopharyngeal ובלוטות האחות בגילאי העובדים. שימו לב כי בעוד הבלוטות גלויים בשני המקרים, בלוטות מוכתם יותר מוגדרים היטב, ולכן קל יותר למדוד. גם שים לב במידת מכורבלת, מתפתל מורפולוגיה של התוצאות בלוטת כולו במישורים מוקד שונים. יכול להיות למחלקה בלוטת כדי למנוע זאת התרחשות. גודל ברים = 500 מיקרומטר. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

דבש דבורים עובדים היו שנאספו-≤18 h לאחר הופעתה, שהוזמנו שני המשטרים תזונתיים שונים: דיאטה של האביב אבקה באופן טבעי נוכח טוסון, אריזונה, ארה ב מעורבב עם דבש או רק דבש עם אין אבקה. כדי להגביל את הדבורים הדיאטות בזמן בכוורת, שימשו הכלובים דחיפה פנימה תיל – כפי שמתואר מחקרים קודמת¹³^,¹⁴ — והזוהמה הדבורים-צפיפות של דבורה אחת לסנטימטר מרובע. כל טיפול תזונתי חזר על עצמו בשלפוחיות שלוש (N = 3). דבורים חשופים או משטר תזונה נאספו ב 5 ימים ו 8 קבוצו של גיל לניתוח של בלוטות hypopharyngeal שלהם. באמצעות את הקרע, מכתים, ומדידת בשיטות המתוארות לעיל, acini בלוטת hypopharyngeal של הדבורים האלה נמדדו, בהשוואה (איור 2). בכל אחת ההייבס שלוש, שלוש הדבורים נמדדו בכל גיל x שילוב טיפול בתזונה. עשר acini נמדדו עבור כל דבורה. המדידות acini היו בממוצע עבור כל דבורה להשיג גודל של acinus הממוצעת לכל דבורה. ערכים אלה היו בממוצע אז כדי לקבל ערך לגיל x טיפול שילוב של הכוורת. ניתוח ANOVA על המדידות acinus הראה שתזונה (F_{1, 8}_{= 2.65,} p = 0.001), גיל (F_{1, 8} = 10.03, p = 0.013), ואת האינטראקציה בין דיאטה x גיל (F_{1, 8}_{= 0.02,} p = 0.020) אפקטים משמעותיים. הבחנו כי בלוטות hypopharyngeal גדל עם הזמן בהדבורים מוזנים אבקה, כפי שנקבע על ידי של Tukey HSD. תבנית זו כבר הוכיחה בעבר⁹^,¹¹^,¹⁹. גודל acini בלוטת שונה בין 5 d דבורים בן 8 ימים כאשר הדבורים נשלל אבקה.

איור 2: גודל בלוטת Hypopharyngeal אחיות מוזן היטב ואלה משולל אבקה. העובדים הואכלו בדיאטה של אבקה ודבש (סרגלים אפורים) או דיאטה של דבש לבד (ברים לבן) עבור d 5 או 8. במהלך תקופה זו, דבורים היו בתוך הכוורת, בכלוב על דבש או דבש ואבקת פרחים. שלהם acini בלוטת hypopharyngeal נמדדו כמתואר לעיל. קווי שגיאה מייצגים שגיאת התקן עבור גודל acinus רשע ברחבי המושבות שלוש (N = 3) שנבדקו. שלוש הדבורים נמדדו מהמושבה לכל בכל גיל טיפול x שילוב טיפול בתזונה. ברים המחוברים באמצעות כוכבית שונה באופן משמעותי מזו על פי Tukey של HSD (α = 0.05). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

דבורים יכול גם בתוך כלובים נפרדים מן הכוורת תוחזקה נמאס דיאטות מוגדרים. דבש דבורים עובדים היו שנאספו ב ≤ 18 h לאחר הופעתה, שהוזמנו כלובי זכוכית אקרילית (100 דבורים לכל כלוב) עם אחד של ארבע משטרים תזונתיים: דיאטה המכילה לא אבקה או דיאטה המכילה אחד pollens שנאספו דבורה שלוש: "שקד" אבקה של שקד מונוקולטורה הפרדס, "מדבר" אבקה מן המדבר סונורה המכיל תערובת של צמחי המדבר או "SE" אבקה מן המושבות ממוקם בדרום מזרח ארצות הברית, כפי שמתואר ב Corby-האריס. et al. ¹². סוכרוז (50% w/v), מים, אבקה (במידת הצורך) נמסרו ad libitum. חמישה כלובים נבנו עבור כל אחד הטיפולים התזונתיים ארבע, וכתוצאה מכך סכום כולל של 20 כלובים. -D 8 של גיל, בלוטות hypopharyngeal דבורים עשר היו נאספים וכוח שלהם נמדד. עשר acini נמדדו עבור כל אדם. גודל acinus הממוצע מחושב עבור כל דבורה, ערכים אלה שימשו כדי להשיג גודל של acinus הממוצעת עבור כל הכלוב. הבחנו כי גודל בלוטת hypopharyngeal הוא רגיש על נוכחות של אבקה בתזונה (אבקה נגד אין אבקה: t₁ = 5.64, p < 0.0001) ואת הסוג של אבקה מסופקים (שקדים לעומת המדבר לעומת אבקה SE: F_2,148 = 8.06, p = 0.0005; איור 3). דבורים ניזונים המדבר או אבקה שקדים היה גודל בלוטת שוות ערך. דבורים להזנה אבקה SE היה בלוטות שהיו קטנים יותר דבורים ניזונים אבקה שקדים או במדבר.

איור 3: גודל בלוטת Hypopharyngeal האחות בגילאי העובדים להאכיל שלושה סוגים שונים של אבקה או משולל אבקה. הדבורים האחות הונחו בתוך כלובים לאחר הופעתה, קיבלו דיאטה המורכבת סוכרוז לבד (לא אבקה) או סוכרוז ואחד pollens שלוש (שקדים, במדבר או אבקה SE) עד 8 קבוצו של גיל. קווי שגיאה מייצגים שגיאת התקן עבור גודל acinus רשע ב דבורים שנדגמו מתוך הכלובים חמש (N = 5). דבורים עשר שנדגמו, נמדד בכלוב כל להשיג גודל של acinus הממוצעת עבור הכלוב וכדי לחשב את וריאציית בין הכלובים. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

1 הקבצים המשלימים: מסך יריות של תוכנת המדידה תוך מדידת acini את בלוטת (א) ויצירת הדו ח (B). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

גודל בלוטת Hypopharyngeal הוא רגיש לכל כמות חלבון ואבקה בתזונה והוא סימן קריטי מזון בדבורים למבוגרים צעירים. . הנה, נדגים דרך לשחזור וזולה כדי לנתח ולמדוד את הרקמה הזאת. רקמות אלה יכול להיות קשה כדי לנתח, אבל עם תרגול, הוא יכול להשיג והניתוחים יותר ויותר נקי עם הרקמות ללא פגע יחסית. היתרון העיקרי של השיטה המובאת כאן היא כי הרקמה היא מוכתמת, אשר מאפשר בבירור להמחיש את הגבולות של כל acinus בלוטת. בלי כתם, גבולות אלה acini קשים להמחיש ולהתמקד תחת המיקרוסקופ שמפחית את היכולת של החוקר לקבל של מדידה מדויקת acinus. למרות הקלות של צביעת וקבלת תמונה ברורה על acini, מספר נקודות קריטיות יש לקחת בחשבון על מנת לקבל מדידות מדויקות; אלו נדונים להלן.

בלוטות גדולות באים הדבורים האחות מוזן היטב כי הם כ 7-10 ימים⁹^,גיל²⁰. . זה תמיד קל יותר, במיוחד כאשר לומדים לפרק רקמות אלו, לאימון הראשון לנתח בלוטות גדולות להמשיך בלוטות קטנות יותר כמו שהם יכולים להיות קטנה, שברירית, קשה לנתח את... רקמות טריים גם התשואות יחליט את הטוב ביותר. אם אחד חייבים להקפיא את הדבורה במשך תקופה של זמן לפני. הקרע, יודע כי ככל דבורה מוקפא, שברירית יותר הופך הרקמה. זה יכול להפוך והניתוחים בעייתי. עם התרגול, מלקחיים חדה, החוקר יתגבר בסופו של דבר בנושאים אלה. אנחנו לא הבחין הבדל מכתים בין רקמות קפוא ורענן.

כתם טרי הכרחי על מנת להשיג צביעה נכונה של הבלוטות. כתם מבוגר יכול מתקבצים, עוזב את הכתם מצליח לחלחל כראוי את הרקמות חשוב כי כתם טרי להיות מוכנה בקבוצות קטנות, כל שעה לערך. פעולה זו תבטיח ניגודיות נאותה בין הרקמה ואת הרקע תחת המיקרוסקופ, מה שמוביל תמונות חדות עם קצוות מוגדרים acinus. זה גם עוזר לעבוד עם מגוון של הכתם דילולים, אם הכתם לא לחדור את הרקמה כראוי. . מצאנו את זה 1:20 טריים מלאי עבודה של הכתם עובד הכי טוב, אבל אחרים דילולים יכולה לעבוד גם אם אחד רצונות כתם כהה יותר או בהיר יותר.

השתמשנו מצלמה מחוברת את המיקרוסקופ ויבתר והתוכנה זמינים מסחרית כדי למדוד ולהקליט את הנתונים acini. המצלמה והתוכנה יקרות למדי, ולכן לא יהיו זמינים בכל מעבדות. אמנם יש צורך יש מצלמה מחוברת המיקרוסקופ ויבתר על מנת לקבל את התמונה, למדוד את acini ישנם מספר אפשרויות בעלות נמוכה יותר, כולל תוכנה חופשית¹⁸, שניתן להשתמש בהם.

. הנה, אנחנו מראים הבסיסי השלבים עבור צביעת ומדידת acini בלוטת את hypopharyngeal, אבל להדגיש שזה תפקיד של מחליט כמה acini כדי למדוד, אם למדוד acini על בלוטות אחת או את שתיהן, ואם למדוד אזורים מרובים של כל בלוטה. לדוגמה, כדי לזהות יותר את ההבדלים הדקים בין טיפולים ניסיוניים, אחד אולי צריך למדוד acini יותר מ-10 לכל בלוטת ודבורים יותר מ-10 לכל טיפול. לא שמנו לב כל הבדלי גודל acini בהתאם למיקומם על בלוטת. אנחנו גם לא הבחין כל הבדלים בגדלים acini הנמצאות על בלוטות שמאלה או ימינה. אם החוקר חושד כל ההבדלים בגודל, יש למדוד אזורים מרובים של בלוטת hypopharyngeal, אולי שתי בלוטות.

חוקרים אמור להיות מסוגל להשיג בהצלחה מדידות מדויקות מגודלו בלוטת hypopharyngeal באמצעות פרוטוקול המתוארים כאן בשביל לנתח, צביעת בלוטה ומדידת acini. עם התרגול, מדידות אלה ניתן להשיג די מהר, ומאפשר החוקר לעבד מספר דוגמאות בישיבה אחת. אנו מצפים כי חוקרים יותר יעסיק את השיטות המתוארות כאן כמו שהם מבקשים להבין את הגורמים המשפיעים על גודל בלוטת hypopharyngeal עוד יותר, ואיך בלוטות אלה מתייחסות המושבה בריאות והתנהגות הפרט.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

המחברים אין לחשוף.

Acknowledgments

עבודה זו נתמכה על ידי קרנות פנימי של משרד החקלאות-ARS (מספר הפרוייקט: 2022-21000-017-00-D). ערס/משרד החקלאות הוא הזדמנות שווה המעסיק ספק.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Cool setting wax	Grobet USA	21.450
Glass petri dish, small	VWR	89000-310
Glass petri dish, large	VWR	89000-314
Super Max Wax Pen	Eurotool	PEN-520.00
Breakable razor blades	Electron Microscopy Sciences	72004
pin vise	BioQuip	4845
2A-SA flat/rounded tip forceps	Rubis/BioQuip	4522
Fine point forceps	Rubis/BioQuip	4523
5A-SA super fine point forceps	Rubis/BioQuip	4525
10 mm micro spring scissors	BioQuip	4715
3 mm micro spring Vannas scissors	Roboz	RS-5610
Glass Depression Slides, Single Cavity	GSC International	4-13057-DZ-12
PBS tablets	VWR	97062-730
Giemsa stain, modified solution	Sigma Aldrich	32884
Insect pins	ENTO SPHINX S.R.O.	02.02
Leica Applications Suite measurement software	Leica Microsystems		any measurement software, including free software, can be used