Summary
Hypopharyngeal 선 acinus 크기 간호사 꿀 꿀벌 영양의 강력한 척도 이다. 여기, 우리는 해 부, 얼룩, 이미징, 및 간호사 꿀벌 hypopharyngeal 선 acini 측정에 대 한 상세한 프로토콜을 제공 합니다.
Abstract
간호사 hypopharyngeal 땀 샘 작업자 및 애벌레와 퀸 즈 개발을 먹이 로얄 젤리의 단백질 분수를 생성 합니다. 꿀벌의 머리에 있는이 쌍된 샘 수량 매우 민감합니다 그리고 꽃가루와 꽃가루의 품질 대체 간호사 꿀벌 소비. 샘의 얻을 때 간호사 결핍 다이어트를 먹이 큰 때 그들은 완벽 한 다이어트를 먹이 작은. 간호사 hypopharyngeal 동맥 크기 간호사 영양의 강력한 지표 이기 때문에 그 꿀 꿀벌 영양 공부이 동맥을 측정 하는 방법을 알고 필수적 이다. 여기, 우리는 해 부, 얼룩, 이미징, 및 간호사 비 hypopharyngeal 분 비 측정에 대 한 자세한 방법을 제공 합니다. 우리는 흠 없는 스테인드 조직과 선 크기에 꽃가루의 영향을 공부 하는 데 사용 된 데이터의 비교를 제시. 이 방법은 어떻게 다이어트 hypopharyngeal 선 크기에 미치는 영향 하지만 하이브 건강에서이 동맥의 역할을 이해 하기 위한 추가 사용은 테스트에 사용 되었습니다.
Introduction
그들은 인간과 동물에 의해 소비 작물의 다양 한 꽃가루 때문에 꿀벌은 농업 필수품입니다. 많은 관심 지급 되었습니다 꿀 꿀벌 인구 쇠퇴에 식민지 손실 가져가 약 30-40%로 미국1 년 및 유럽2,3에서 10-15%. 다 수 요인, 높은 품질에 감소 등 마 초, 꿀 꿀벌 건강에 부정적인 영향을 줄 가능성이 함께 행동. 단, 가뭄, 지속 양 봉 관행, 및 다른 요인 감소 자연 꽃가루 식민지4,5수의 양과 다양성. 꿀벌 꽃가루에서 거의 모든 그들의 규정식 단백질과 지질을 파생, 때문에 꽃가루를 감소 액세스 심각 하 게 개인 및 식민지 상태를 제한할 수 있습니다.
Hypopharyngeal 땀 샘 분 비 구조 꿀벌의 머리는 눈과 뇌6사이 위치 하 고 있습니다. 정상적인 상황에서 동맥의 발달 및 기능 궤적에 있는 꿀벌의 거울. 나이의 대략 5-10 일에 꿀벌 통에 간호 동작을 수행합니다. 이 동시에 hypopharyngeal 땀 샘의 피크 크기와 가만히 음식이 나 애벌레 및 여왕 같은 다른 성인 개발 먹이 젤리의 주요 단백질 분수 생산 분 비 용량에 도달. 이 최대 크기에는 땀 샘 닮은 각 포도 개별 엽 구조는 acinus로 알려진 포도의 무리 (복수: acini). 작업자 꿀벌 세 고 하이브에 다른 작업에, hypopharyngeal 분 비 축소와 설탕 꿀7,8에 뜨 같은 다른 기능에 걸릴. Hypopharyngeal 땀 샘은 따라서 꿀벌과 그들의 나이 관련 된 작업의 시대와 상관 된다.
간호사 hypopharyngeal 선 크기는 그들의 다이어트9,,1011에 단백질의 품질과 수량에 민감합니다. 간호사 꿀벌 잘 영양은 때 그들의 분 비는 큽니다. 반면, 동맥은 작은 때 꿀벌은 박탈 꽃가루의 성인 개발의 첫 번째 주에 특히. 간호사 꿀벌의 영양 상태를 파악 하기 위해 연구자는 일반적으로 hypopharyngeal 동맥, 동맥 acinus 크기11,12,,1314 를 직접 측정 하 여 측정 또는 단백질은 단백질을 측정 하 여11 콘텐츠 또는 신선한17 그들이 있는 전체 머리의 무게15,16 콘텐츠. 각 메서드는 그것의 자신의 찬 부 양론. 이 메서드는 두 가지 주요 방법으로 도전 될 수 있지만 선 acini 측정에서 얻은 해상도 선호 하 고. 첫 번째 과제는 제대로 파악 하 고 선 해 부입니다. 두 번째는 각 acinus의 정확한 측정을 얻는 이다. 해 빛 현미경 동맥 명확 하 고 또는 밀키 화이트 나타나고는 acini의 국경을 정의 하기 어려울 수 있습니다. 도구가 더 나은 acini의 가장자리를 정의 하 고 정확한 선 측정을 얻기의 가능성을 증가 꿀 꿀벌 영양 공부 하는 사람에 게 도움이 됩니다.
여기, 우리가 관심이 연구원은 해 부, 얼룩, 이미지, acinus 크기의 정확한 측정을 얻을 수 있도록 hypopharyngeal 동맥을 측정 하는 방법을 보여줍니다. 우리가 설명 하는 방법에서 일단 고 실험은 충분히 연습 시간의 상대적으로 짧은 기간에 여러 선 측정을 달성 하기 위한 쉽게, 정확 하 고 복제할 방법을 연구를 제공 합니다. 하나 자신 있게 한 시간에 거의 10 개인의 분 비를 측정할 수 있습니다. 우리는 방법 및 재료이 측정을 얻는 데 필요한 정보를 제공 합니다. 아래에 설명 된 방법 중 가장 중요 한 측면은 적절 한 해 부와 땀 샘의 얼룩 있습니다. 비록 우리가 확대 이미지 캡처하고 acini 상용 소프트웨어와 측정, 우리가 제시 하는 방법을 쉽게 다른 플랫폼18에 적용할 수 있습니다.
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Protocol
1. 해 부하 고 간호사 노동자에서 Hypopharyngeal 땀 얼룩
- 작은 (60 m m x 15 m m) 또는 대형 (100 m m x 15 m m) 유리 페 트리 접시에 멋진 설정 왁 스를 용 해 하 여 왁 스 해 부 접시를 확인 합니다. 해에 대 한 접시를 사용 하기 전에 왁 스를 완전히 냉각 하십시오.
- 처리에 각 벌 준비 Giemsa 솔루션 작업 1시 20분의 20 µ L (1: 20의 v/v 준비 인산 염 버퍼 식 염 수에 Giemsa 얼룩 (PBS: 137 m NaCl, 2.7 m m KCl, 10mm 나2HPO4, 1.8 m m KH2포4m)).
주의: Giemsa 얼룩 메탄올을 포함 하 고 가연성 이다. 그것은 삼, 흡입, 또는 그것은 피부와 접촉할 경우에 독성입니다. 그것은의 지역 기관의 요구에 따라 처분 한다.
참고: 항상 Giemsa 얼룩 빠르게 희석은 일단 저하 하기 때문에 그냥 샘플의 현재 일괄 처리에 대 한 신선한 작업 솔루션을 확인 합니다. 침전 물은 개발 하는 경우 희석된 얼룩을 삭제 합니다. - 현미경 슬라이드와 슬라이드 우물에 인접 한에 50-100 µ L 염 분의 우물에 피펫으로 20 µ L Giemsa 얼룩.
- 10 m m 마이크로 봄이 위를 사용 하 여, 꿀벌에서 머리를 분리 하 고 집게와 왁 스 조각 펜을 사용 하 여 왁 스 해 부 격판덮개로 머리 전면을 포함. 눈과 입에 하나에 핀을 삽입 하 여 추가 안정성을 위한 왁 스 격판덮개로 머리 핀.
- 작은 게 핀 바이스로 고정 날카로운 깨뜨릴 면도날을 사용 하 여 (~ 2-3 m m) 눈과 얼굴 격판덮개의 각 측에 mandibles 사이 절 개. 부드럽게 얼굴 플레이트 아래 마이크로 위를 실행 하 고 안테나와 뇌 사이 더듬이 신경 절단.
- 미세 집게를 사용 하 여 입으로 얼굴 플레이트를 잡아, 그것을 뒤집어 고 좋은 포인트 집게와 핀 왁 스 플레이트에 고정. 필요한 경우 완전히 얼굴 플레이트를 제거 합니다.
- 피펫으로 20 µ L PBS 컷에는 머리의 섹션을 엽니다.
참고: 분 비 수 있습니다 플 로트를 시점에서 또는 한 그들을 위해 검색 해야 합니다. 샘의 진주의 문자열 처럼 모양과 경우 그대로 뇌 위에 있습니다. - 슈퍼 괜 찮 포인트 집게를 사용 하 여 부드럽게 hypopharyngeal 동맥 (동맥 수 있습니다 휴식, 세그먼트에 제거 요구), 중 하나를 제거 하 고 즉시 현미경 슬라이드에 선 Giemsa 얼룩에 전송.
- 5 분, Giemsa 솔루션에 품 어에 선 허용 하 고 집게를 사용 하 여 동일한 슬라이드에 선 염 분의 풀에 전송. 필요한 경우, 마이크로 위 선 더 작은 조각으로 잘라.
참고:이 동맥에 따라서 선 acini의 투명 한 이미지를 쉽게 아첨 비행기를 만들 수 있습니다.
2. 측정 hypopharyngeal 선 Acini
- 켜고 현미경 측정 프로그램을 엽니다. 그것이 이미에 현미경의 광원 설정 합니다. 10 배 현미경 배율을 설정 합니다.
- 땀 샘을 찾아서 컴퓨터 없이 접 안 렌즈에서 확대 된 이미지 초점. 60-80 x 배율 증가 하 고 접 안 렌즈에서 이미지를 초점.
- '취득' 탭에서 조정 하 고 컴퓨터에 라이브 이미지에 초점을 분 비 합니다.
- ' 이미지 이름 ' 상자에 이미지 이름/샘플 설명을 입력 하 고 ' 이미지 획득 ' 더 측정에 대 한 땀 샘의 이미지를 클릭 하십시오.
- '분석' 탭 선택 '영역 도구' ( 보충 그림 1A강조 표시)을 선택 하 고 선택을 취소 '값' '레이블 표시', 또한 '단위'의 선택을 취소 합니다. 다른 모든 설정을 기본 (보충 그림 1A) 설정.
참고:는 낮은 배율에서 얻은 지역 높은 배율에서 얻은 것과 같은 소프트웨어는 자동으로 수준 확대에 따라 지역 측정을 보정. - 지속적으로 클릭 하거나 지속적으로 acinus 경계를 최대한 신중 하 게 추적 하는 동안 마우스 왼쪽된 버튼을 누른 하 여 각 acinus를 측정 합니다. 벌 당 적어도 10 acini 측정 합니다.
참고: 더 많은 실험에 따라 필요할 수 있습니다 ( 토론참조). 그것은 측정에 대 한 충분 한 명확 하 고 제대로 방향이 acini 찾을 수 동맥의 여러 이미지/섹션 필요할 수 있습니다. - 일단 모든 단일 이미지에서 acini 측정 '보고서 작성'을 선택 합니다. 확인 옵션 추가 그림 1B 와 같이 선택 하 고 '내보내기'를 클릭 합니다.
- 원하는 대로 보고서를 저장 합니다. 파일이 이미 만들어졌는지 샘플 집합에 대 한 추가 측정 추가 되 고 하는 경우 새 데이터는 기존 파일에 추가 되도록 보고서 파일이 오픈 되지 않으면 확인 합니다.
- 완료 되 면, 현미경 카메라와 광원을 해제 합니다. 액체와 현미경 슬라이드에서 땀 닦 고 안전 하 게 사용 된 자료의 처리. 증류수와 슬라이드를 헹 구 고 깨끗 한 에탄올 (물에 70 %v / v) 다시 닦아.
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Representative Results
Hypopharyngeal 땀 샘 간호사 노동자에서 해 부 되었고 60-80 X 확대 (그림 1)에서 얼룩 없이 시각. 흠 없는 조직에 완전히 집중 하 고는 acini의 가장자리를 정의 적절 한 대비를 찾을 하기가 어렵습니다. 얼룩진된 조직에는 acini의 가장자리는 스테인드 조직과 흰색 배경 사이의 향상 된 명암으로 인해 날카로운.
그림 1: 흠 없는 (A, B) 또는 (C, D)를 묻은 간호사 세 노동자에서 땀 샘 hypopharyngeal. Note 샘의 두 경우에 표시 됩니다, 얼룩진된 땀 샘은 더 잘 정의 하 고 측정 하기가 쉬워집니다. 또한 메모는 다소 웅크리고 하 고 코일의 다른 초점 비행기의 전체 선 결과 형태. 동맥이 발생 하지 않도록 하려면 구분 될 수 있습니다. 스케일 바 = 500 µ m. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
꿀 꿀벌 노동자 출현 후 h ≤18에서 수집 된와 두 개의 서로 다른 식이 정권에 할당 된: 봄 꽃가루 자연스럽 게 투싼, 애리조나, 미국에 존재의 다이어트 꿀 또는 아무 꽃가루와 그냥 꿀과 혼합. 꿀벌 통에 있는 동안이 다이어트에 제한, 수 있도록 푸시에 철사 감 금 소 사용 했습니다-이전 연구13,14 에 설명 된 대로-평방 센티미터 당 약 1 벌의 밀도에서 꿀벌을 수감. 각 식이 치료 3 두 드러 기에 반복 되었다 (N = 3). 꿀벌 중 식이 정권에 노출 5 d와 그들의 hypopharyngeal 동맥의 분석에 대 한 나이의 8 d에서 수집 했다. 해 부, 얼룩, 및 측정, 위에서 설명한 방법 사용 하 여 이러한 꿀벌의 hypopharyngeal 동맥 acini 측정 하 고 비교 (그림 2). 3 두 드러 기의 각각에 3 개의 꿀벌 다이어트 치료 조합 x 각 나이 대 한 측정 되었다. 10 acini 각 꿀벌에 대 한 측정 되었다. Acini 측정 각 벌 벌 당 평균 acinus 크기를 평균 했다. 이러한 값은 다음 그 통에 대 한 치료 조합 x 나이 대 한 값을 얻기 위해 평균. ANOVA 분석 acinus 측정에 보여준 다이어트 (F1, 8= 2.65, p = 0.001), 나이 (F1, 8 10.03, p = = 0.013), 및 규정식 사이 상호 작용 나이 x (F1, 8= 0.02, p = 0.020) 상당한 영향을 했다. Hypopharyngeal 땀 샘 정한 Tukey의 꽃가루, 지 루 했다 꿀벌에 시간이 지남에 성장 관찰 HSD. 이 패턴 되었습니다 이전9,,1119시연. 꿀벌 꽃가루의 박탈 했다 때 선 acini의 크기 5 d와 8 일 오래 된 꿀벌 사이 다 하지 않았다.
그림 2: 잘 먹이 간호사와 그의 Hypopharyngeal 동맥 크기 꽃가루의 박탈. 노동자는 꽃가루와 꿀 (회색 막대)의 다이어트 또는 혼자 (흰색 막대) 5 또는 8 d 꿀 다이어트 먹이 했다. 이 시간 동안 꿀벌 통 안에 되었고 꿀 또는 꿀, 꽃가루에 갇힌. 위에서 설명한 대로 그들의 hypopharyngeal 동맥 acini 측정 되었다. 오차 막대 3 식민지에 걸쳐 평균 acinus 크기에 대 한 표준 오차를 나타냅니다 (N = 3) 테스트. 3 꿀벌 다이어트 치료 조합 x 각 치료 나이 대 한 각 식민지에서 측정 되었다. 크게는 Tukey에 따라 서로 다른의 별표에 의해 연결 하는 바는 HSD (α = 0.05). 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
꿀벌도 하이브에서 별도 감 금 소에서 유지 하 고 정의 된 다이어트를 먹이 수 있습니다. 꿀 꿀벌 노동자 출현 후 ≤ 18 h에서 수집 된와 4 개의 식이 정권 중 아크릴 유리 케이지 (cage 당 100 벌)에 할당 된: 아무 꽃가루를 포함 하는 다이어트 또는 세 벌 수집 꽃가루 중 하나가 포함 된 다이어트: "아몬드" 꽃가루는 아몬드에서 과수원 단, 사막 식물의 혼합을 포함 하는 소노란 사막에서 "사막" 꽃가루 또는 코비 해리스 외 에 설명 된 대로 미국 남동부에 있는 식민지에서 "SE" 꽃가루 12. 자당 (50 %w / v), 물, 그리고 꽃가루 (적절 한) 광고 libitum제공 했다. 5 개의 감 금 소는 총 20 감 금 소의 결과로 4 개의 식이 치료의 각 건설 되었다. 나이의 8 d 10 꿀벌의 hypopharyngeal 동맥 수집 하 고 측정 했다. 10 acini 각각 측정 되었다. 평균 acinus 크기는 각 벌에 대 한 계산 하 고 이러한 값 각 감 금 소에 대 한 평균 acinus 크기를 가져오는 데 사용 되었다. Hypopharyngeal 선 크기는 다이어트에 꽃가루의 두 존재에 민감한 관찰 (아무 화분 대 화분: t1 5.64, p = < 0.0001)와 제공 하는 꽃가루의 종류 (아몬드 대 사막 대 SE 꽃가루: F2,148 8.06, p = = 0.0005; 그림 3)입니다. 꿀벌 먹이 사막 또는 아몬드 꽃가루 동등한 선 크기를 했다. 꿀벌 꿀벌 보다 작은 샘 아몬드 또는 사막 꽃가루를 먹이 했다 SE 꽃가루를 먹이.
그림 3: 간호사 세 노동자의 Hypopharyngeal 동맥 크기 세 가지 유형의 꽃가루를 먹이 거 나 꽃가루의. 간호사 꿀벌 출현 후 장에 배치 하 고 나이의 8 d까지 혼자 자당으로 구성 된 다이어트 (꽃가루) 또는 자당 및 3 개의 꽃가루 (아몬드, 사막, 또는 SE 꽃가루) 중 하나 지 루 했다. 오차 막대 5 연습장에서 샘플링 하는 꿀벌의 평균 acinus 크기에 대 한 표준 오차를 나타냅니다 (N = 5). 10 꿀벌 샘플링 하 고 각 장에 감 금 소 사이에서 변화를 계산 하 고 감 금 소에 대 한 평균 acinus 크기를 측정 했다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
보조 파일 1: 선 acini (A)를 측정 하 고 (B) 보고서를 작성 하는 동안 스크린 샷 측정 소프트웨어의. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
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Discussion
Hypopharyngeal 선 크기 단백질과 다이어트에 꽃가루의 금액에 민감한 이며 젊은 성인 꿀벌 영양의 중요 한 표식입니다. 여기, 우리는 부하이 조직을 측정 하는 저렴 하 고 재현할 수 방법을 보여 줍니다. 이 조직, 해 부 하기 어려울 수 있습니다 하지만 연습, 하나 상대적으로 그대로 조직으로 점점 청소기 해를 얻을 수 있습니다. 여기에 제시 된 방법의 주요 장점은 그 조직 이다 스테인드, 각 선 acinus의 경계를 명확 하 게 시각화 하는 연구원을 가능 하 게. 얼룩 없이 이러한 acini의 테두리는 시각화 하 고 정확한 acinus 측정을 얻기 위해 연구원의 능력을 줄이는 현미경 집중 하기 어렵다. 얼룩이 지 고는 acini에 대 한 명확한 이미지 획득의 용이성에도 불구 하 고; 정확한 측정을 얻기 위해 몇 가지 중요 한 포인트를 고려 이러한 아래에 설명 됩니다.
큰 샘 나이9,20의 약 7-10 일 잘 먹이 간호사 꿀벌에서 온. 그것은 항상 쉽게, 특히 때이 조직, 그들은 수 있는 작은, 깨지기 쉬운, 그리고 해 부 하기 어려운 작은 땀 샘에 이동 하기 전에 큰 동맥 해 부 첫 연습을 해 부 학습. 신선한 조직 최고의 해 생성 됩니다. 해 부 이전 기간에 대 한 꿀벌을 고정 해야 하나, 벌 얼은 더 이상, 더 연약한 조직 되 면 알으십시오. 이 해 문제가 만들 수 있습니다. 연습 및 날카로운 집게, 연구원 결국 이러한 문제를 극복할 것 이다. 우리 냉동 고 신선한 조직 사이의 얼룩에 차이 발견 하지 않았습니다.
신선한 얼룩은 땀 샘의 적절 한 얼룩을 얻기 위해 필요 합니다. 오래 된 얼룩, 얼룩 제대로 조직 침투 수 없습니다 떠나 덩어리 수 있습니다. 신선한 얼룩 작은 배치에서 매 시간 마다 약 준비 될 중요 하다. 이렇게 하면 조직과 정의 acinus 가장자리와 선명한 이미지에 이르게 현미경 배경 사이의 적절 한 대조. 그것은 또한 얼룩 조직을 제대로 침투 하지 않습니다 경우 얼룩 희석의 범위에서 작동 하는 데 도움이입니다. 우리는 1:20 얼룩 작품 최고의 하지만 다른 희석의 신선한 작업 사진 하나 더 밝거나 얼룩을 욕망 하는 경우에 사용할 수 있습니다 발견.
우리가 측정 하 고 기록 acini 데이터 해 현미경 및 상용 소프트웨어에 연결 된 카메라를 사용. 카메라와 소프트웨어 다소 비용이 많이 드는 이며 따라서 사용할 수 없습니다 모든 실험실. 비록 그것은 이미지를 얻을 하 고 몇 가지 낮은 비용 옵션, 무료 소프트웨어18을 사용할 수 있는 포함 하 여 acini 측정 해 현미경에 부착 된 카메라를가지고 해야 합니다.
여기, 우리는 기본 표시 얼룩 및 hypopharyngeal 동맥 acini 측정 단계 하지만 스트레스 측정, 측정 하나 또는 둘 모두의 땀 샘에 acini 것인지 여부 및 각 동맥의 여러 영역을 측정 하 게 얼마나 많은 acini 결정 연구원까지 그것. 예를 들어 실험적 치료 중 더 많은 미묘한 차이 탐지 하기 위해 하나는 선 당 10 이상 acini 치료 당 10 이상 꿀벌을 측정 해야 할 수도. 우리 동맥에 그들의 위치를 기반으로 하는 어떤 acini 크기 차이 발견 하지 않았습니다. 우리는 또한 하지 acini 왼쪽 또는 오른쪽 동맥에 있는의 크기 차이 발견 했습니다. 경우 연구원 용의자 크기 차이, hypopharyngeal 동맥의 여러 지역과 아마도 두 동맥을 측정 한다.
연구원은 성공적으로 해 부하 고 선 직물을 얼룩이 지 고 acini 측정에 대 한 여기에 설명 된 프로토콜을 사용 하 여 hypopharyngeal 동맥 크기의 정확한 측정을 얻을 수 있어야 합니다. 연습으로,이 측정 얻어질 수 있다 오히려 신속 하 게 앉아 하나에 여러 개의 샘플 처리에 연구원을 수 있도록. 우리는 더 많은 연구 방법과이 동맥 식민지 건강 및 개별 행동에 관련 된 그들은 hypopharyngeal 동맥 크기에 영향을 주는 요소를 더욱 이해를 추구로 여기에 설명 된 방법을 채택할 것 이다 기대.
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Disclosures
저자는 공개 없다.
Acknowledgments
이 작품은 미국 농 무부-ARS에서 내부 자금에 의해 지원 되었다 (프로젝트 번호: 2022-21000-017-00-D). ARS/미국 농 무부는 평등한 기회 고용주 및 공급자.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cool setting wax | Grobet USA | 21.450 | |
| Glass petri dish, small | VWR | 89000-310 | |
| Glass petri dish, large | VWR | 89000-314 | |
| Super Max Wax Pen | Eurotool | PEN-520.00 | |
| Breakable razor blades | Electron Microscopy Sciences | 72004 | |
| pin vise | BioQuip | 4845 | |
| 2A-SA flat/rounded tip forceps | Rubis/BioQuip | 4522 | |
| Fine point forceps | Rubis/BioQuip | 4523 | |
| 5A-SA super fine point forceps | Rubis/BioQuip | 4525 | |
| 10 mm micro spring scissors | BioQuip | 4715 | |
| 3 mm micro spring Vannas scissors | Roboz | RS-5610 | |
| Glass Depression Slides, Single Cavity | GSC International | 4-13057-DZ-12 | |
| PBS tablets | VWR | 97062-730 | |
| Giemsa stain, modified solution | Sigma Aldrich | 32884 | |
| Insect pins | ENTO SPHINX S.R.O. | 02.02 | |
| Leica Applications Suite measurement software | Leica Microsystems | any measurement software, including free software, can be used |
References
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