Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

نموذج زرق المستحث بخياطة سيركومليمبال في الجرذان والفئران

doi: 10.3791/58287 Published: October 5, 2018

Summary

هو ارتفاع ضغط الدم المزمن في العين الناجمة عن تطبيق خياطة سيركومليمبال في الجرذان والفئران، مما أدى إلى تدهور خلايا العقدة الشبكية متسقة مع الزرق الوظيفية والهيكلية.

Abstract

خياطة سيركومليمبال تقنية لحفز الزرق التجريبية في القوارض بأمراض مزمنة لرفع الضغط داخل مقلة العين (IOP)، أحد عوامل الخطر معروفة الزرق. هذا البروتوكول يوضح دليل خطوة بخطوة في هذا الأسلوب في "إيفانز طويلة" الجرذان والفئران C57BL/6. تحت التخدير العام، ويتم تطبيق خياطة "محفظة-سلسلة" على الملتحمة، حول خط الاستواء، وخلف ليمبوس العين. العين زميل يعمل كعنصر تحكم غير معالجة. خلال مدة الدراسة، التي كانت فترة 8 أسابيع للفئران و 12 أسبوعا للفئران، IOP ظلت مرتفعة، مقيسة بانتظام بانتعاش tonometry في الحيوانات واعية دون تخدير موضعي. في كلا من الأنواع، أظهرت العينين ستورد ميزات اليكتروريتينوجرام متسقة مع خلل الشبكية الداخلية تفضيلية. وأظهر التصوير المقطعي التماسك البصري الانتقائي ترقق طبقة الألياف العصبية الشبكية. علم الأنسجة الشبكية الفئران في المقطع العرضي العثور على تخفيض كثافة الخلايا في طبقة خلايا العقدة، ولكن أي تغيير في الطبقات الخلوية الأخرى. وأكد فقدان خلايا العقدة تلطيخ من ريتين الماوس تحميل مسطحة مع علامة خلية العقدة محددة (رببمس). خياطة سيركومليمبال هو بسيط، والحد الأدنى الغازية وفعالة من حيث التكلفة وسيلة لحمل العين ارتفاع ضغط الدم الذي يؤدي إلى إصابة خلايا العقدة في الجرذان والفئران.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

نماذج حيوانية توفير منصة هامة للتحقيق في المختبر الخلوية العمليات المرضية الكامنة وراء الزرق، كذلك فيما يتعلق بتقييم التدخلات العلاجية المحتملة. وضعت عدة نماذج إيندوسيبلي لإنتاج ارتفاع ضغط العين المستمر (IOP)، أهم عامل خطر الزرق. وتشمل الأساليب التي تم تطبيقها لرفع IOP: الأوردة حقن المالحة مكثف في ابيسكليرال1، الليزر الضوئي trabecular meshwork2 أو الأوردة حوفي3، وحقن إينتراكاميرال من المواد مثل خلايا الدم الحمراء شبح4، ميكروبيدس،من56 ولزج مطاطي وكلاء7. وقد نهج كل مزايا وقيود.

ينبغي أن تحاكي نموذج جيد الزرق عملية المرض، مع الحد الأدنى من المضاعفات مثل نسبة تظليل الصدمة والتهاب ووسائط الإعلام. هذه المضاعفات هي كثيرا ما يرتبط مع الإجراءات المستخدمة للحث على ارتفاع IOP، ويمكن الخلط بين تفسير النتائج. على سبيل المثال، بزل الغرفة الأمامية، حتى عندما لا يتم الأخذ بالمؤثرات الخارجية، قد ثبت أن تسبب الصدمات والالتهابات التي لا يمثل التغيير جلوكوماتوس النموذجي8،9. بالإضافة إلى أهمية تجنب التهاب، يسهل الحفاظ على الوضوح البصري في فيفو التصوير والكهربية لرصد تطور المرض. على الرغم من أنه ليس من الواضح إلى أي مدى هذه المضاعفات قد يؤثر على التحقيقات المرض، قد يكون من الأفضل لتجنب اختراق العين خلال التعريف النموذجي. نهج خياطة سيركومليمبال يتجنب الاختراق من أنحاء العالم، ويسهل في فيفو التقييم طولية الشبكية هيكل ووظيفة. الأهم من ذلك، هذا النموذج يختلف عن سابقيه في قدرته على العودة IOP إلى قيم الأساس بإزالة خياطة عند الاقتضاء. تطبيع IOP قد تكون مفيدة لدراسة الخلوية ويرتبط الجزيئية للعقدة عكسها ولا رجعة فيها الخلية إصابة10،11،12،،من1314.

تركز هذه المقالة على تقنية لنموذج التعريفي. يمكن الاطلاع على وصف إصابة الشبكية الناجمة عن هذا النموذج في الجرذان والفئران بمزيد من التفصيل في مكان آخر15،،من1617،،من1819.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

وأجريت جميع الإجراءات التجريبية وفقا "قانون الممارسة الأسترالية" لرعاية واستخدام الحيوانات "أغراض علمية"، حددها الوطنية للصحة ومجلس البحوث الطبية في أستراليا. تم الحصول على الموافقة الأخلاقية من "لجنة الأخلاقيات الحيوان معهد هوارد فلوري" (الموافقة رقم 13-044-أم و 13-068-أم للفئران والجرذان، على التوالي).

1-قياس ضغط العين في الفئران واعية

  1. تعيين tonometer انتعاش المختبر إلى إعداد الفئران. قماط الفئران مستيقظا بقطعة من القماش الناعم لتهدئة الحيوان. كشف الرأس والرقبة. عقد الجذع في يد واحدة، مع عودة هذا الحيوان يستريح ضد الصدر المحقق بلطف.
    ملاحظة: تخدير موضعي غير مطلوب.
  2. استخدام اليد الأخرى لإحضار tonometer انتعاش قرب العين في الفئران، حيث يكون غيض المسبار IOP حوالي 2-3 ملم بعيداً عن وعمودي إلى ذروة القرنية. استخدام اليد اليمنى لقياس IOP الحيوان العين اليمنى، واليد اليسرى للعين اليسرى.
  3. انتظر بضع ثوان للفئران الهدوء، واضغط على زر القياس مرة واحدة. التقيد بلطف ضرب غيض المسبار IOP ابيكس القرنية مرة واحدة؛ وسماع صوت تنبيه tonometer انتعاش مرة واحدة.
    ملاحظة: يؤكد إشارة صوتية واحدة من تونوميتير قياس النجاح، والتي يمكن قراءتها من شاشة LCD. صوت تنبيه مزدوج يشير إلى وجود خطأ في قياس. يمكن أن تنشأ أخطاء القياس من العوامل مثل المسافة العمل غير مناسبة بين التحقيق والقرنية، ميل مفرط في التوجه تونوميتير، أو التحقيق ضرب الجفن أو جزء غير المركزي من القرنية. أرجع إلى دليل tonometer انتعاش من الشركة المصنعة لمزيد من التفصيل فيما يتعلق بأخطاء القياس.
  4. كرر الخطوة 1.3 عشر مرات في الفترة الفاصلة الثانية 1-2، وتستمد من هذه القياسات قيمة IOP متوسطة لهذه النقطة الزمنية. إعادة تعيين تونوميتير بعد قراءةال 5.
  5. لرصد المسلسل، قياس IOP في نفس الوقت من اليوم وتحت ظروف الإضاءة متسقة للتقليل من التباين بسبب دورة IOP الدافيء20،21.

2-قياس ضغط العين في الفئران واعية

  1. تعيين tonometer ارتدت إلى إعداد الماوس وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.
  2. لكبح جماح الماوس باليد، ضع الماوس على قمة قفص شواية واجذب الذيل إلى الوراء.
    ملاحظة: وهذا سيدفع إلى الحيوان إلى قبضة على الشواية المعدنية بالأرجل الأمامية ومحاولة سحب نفسه إلى الأمام، الذي سوف تمتد قليلاً في الجسم.
    1. استخدام اليد الأخرى لفهم الجلد فضفاضة مباشرة خلف الأذنين. تأمين الجزء الأسفل من الجسم من الحيوان بعقد الذيل بين خاتم الإصبع والإصبع الأوسط (أو بين الإصبع الصغير ويدك).
      ملاحظة: ليس محاولة لفهم الجلد ضيق جداً، لتجنب الاختناق وتطبيق الضغط على العينين.
  3. مع اليد الحرة الآن (في البداية عقد الذيل)، جلب tonometer انتعاش قرب العين للماوس، حيث يكون غيض المسبار IOP حوالي 2-3 مم من وعمودي إلى ذروة القرنية. لقياس العين الأخرى، قم بتدوير الماوس حيث أن العين الأخرى الآن أمام تونوميتير.
  4. انتظر الماوس للهدوء، واضغط على زر القياس مرة واحدة. مراقبة غيض المسبار IOP ضرب بلطف ابيكس القرنية؛ مع إشارة صوتية واحدة تؤكد قياس النجاح.
    ملاحظة: يشير إشارة صوتية مزدوجة خطأ قياس. قد تساعد ليكون المجرب القراءة الثانية والوثيقة قراءات IOP حين المجرب الأول يأخذ القياسات.
  5. كرر الخطوة 2، 4 للحصول على عشرة قراءات ناجحة لاستخلاص IOP. إعادة تعيين تونوميتير بعد قراءةال 5. السماح بفترة من 1-2 ثانية بين القراءات.
  6. حسب المسلسل القياس في الفئران، قياس الماوس IOP في نفس الوقت من اليوم وتحت ظروف الإضاءة متسقة.

3-تنظيم دورات تعريفية لارتفاع ضغط العين في تخديره من الجرذان والفئران

  1. تنظيف مقاعد البدلاء الجراحية مع الكلورهيكسيدين 0.5% في الإيثانول 70%. وتغطي على مقاعد البدلاء مع الستائر العقيمة. اﻷوتوكﻻف جميع المعدات الجراحية مسبقاً. ضمان جميع المجربون ارتداء معدات الحماية الشخصية المناسبة (الأقنعة والأردية وقفازات معقمة).
  2. للحث على التخدير العام، وضع الحيوان في دائرة للحث. تسليم 3 إلى 3.5% isoflurane مع س2 بمعدل تدفق 3 لتر في الدقيقة.
    1. المحافظة على التخدير مع isoflurane 1.5 في المائة في تسليم 2 لتر في الدقيقة عن طريق قناع وجه القوارض طوال عملية جراحية. ضمان العمق الكافي للتخدير بسبب غياب منعكس قرصه مخلب.
    2. تجنب الاكتئاب الجهاز التنفسي عن طريق ضبط معدل تدفق عند الضرورة للحفاظ على معدل التنفس في حوالي 60 نفسا بالدقيقة.
  3. حدد عشوائياً عين واحدة للحث على ارتفاع ضغط الدم والعين بالعين كونترالاتيرال ليكون بمثابة عنصر تحكم غير معالجة. غرس قطره واحدة من 0.5% بروكسيميتاكيني حل العيون لتخدير موضعي. لتنظيف سطح العين، شطف العين مع 3 مل من المحلول الملحي العادي العقيمة.
  4. وتشمل الحيوانات مع ثني جراحية المعقمة، فينيستراتيد، تعريض العين لتكون خياطة.
  5. أداء خياطة محفظة سلسلة على الملتحمة الصلبية حول العالم. بالنسبة للفئران، نسج خياطة نايلون موازية 7-0 و 2 مم الخلفي إلى ليمبوس (الشكل 1). في الفئران، مكان خياطة نايلون 10-0 في 1 مم الخلفي ليمبوس.
    1. الحرص على عدم اختراق الصلبة العينية. تمدد الحدقة مفاجئة أثناء العملية الجراحية يشير إلى قد المحتمل قد اخترقت الصلبة العينية.
    2. مرساة الخياطة في الملتحمة استخدام 5-6 نقاط الربط في الفئران، و 4-5 نقاط الربط في الفئران.
    3. تجنب ضغط مباشر على الأوردة الرئيسية ابيسكليرال بخيوط الخياطة أسفل الملتحمة في نقطة العبور هذه الأوردة.
      ملاحظة: بينما نحن نوصي بتجنب ضغط الوريد ابيسكليرال الرئيسية في الفئران، لم يتم بشكل روتيني ذلك في الفئران بسبب انخفاض الرؤية لهذه الأوردة في عيون الماوس. حتى ولو لم يتم ضغط الأوردة الرئيسية مباشرة، فمن المحتمل أن تكون سفن أصغر حجماً في الضفيرة الوريد ابيسكليرال تحت الضغط، التي قد تكون عاملاً مساهما في ارتفاع IOP المستدام (انظر مناقشة للآلية IOP من الارتفاع).
  6. ربط خياطة محفظة السلسلة بربط العقدة ثم تليها عقده بسيطة ثانية (الشكل 1). لتجنب سبايك IOP مفرطة في ارتفاع بعد جراحة، يكون مساعدا قياس IOP الفور قبل ابزيم العقدة الثانية.
    1. إذا تم العثور IOP مرتفعة للغاية، ضبط عقده كشف جزئيا الإفراج عن التوتر في نهاية واحدة من الخياطة (السهم في الشكل 1ألف).
    2. بعد تحقيق IOP المطلوب (من الناحية المثالية 30-60 ملم زئبقي في الفئران أو 30-40 مم زئبق في الفئران)، تعادل إيقاف العقدة الثانية مع الحفاظ على قوة شد مستمرة في ذلك النهاية للخياطة (السهم في الشكل 1).
    3. بعد الثانية وقد تم تشديد عقده، وتشذيب نهايات خياطة للتقليل من الإحساس بأي جسم غريب. مراقبة الحيوان أثناء التعافي من التخدير العام.
      ملاحظة: من المهم استخدام العقدة عند ربط العقدة الأولى لضمان ضغط داخلية كافية في العين. وبعد عدة أسابيع عادة لوحظ أن ينتهي تصبح جزءا لا يتجزأ من الملتحمة.

4-رصد IOP

  1. أن قياس IOP الأولى في دقيقتين قد تحت التخدير إيسوفلوراني. وفي وقت لاحق، رصد IOP عند القوارض وقد استعاد وعيه وفقا للخطوات المذكورة آنفا 1 و 2.
    ملاحظة: رصد IOP مرتين خلال اليوم الأول (2 دقيقة و 1 ساعة)، يوميا في الأسبوع الأول ومرة أو مرتين في الأسبوع بعد ذلك.

5-فحص الشبكية هيكل ووظيفة

  1. في المطلوب التجريبية نقطة النهاية (في هذه الحالة بعد 8 أسابيع في الفئران و 12 أسبوعا في الفئران)، تحت التخدير العام باستخدام الحقن داخل مع الكيتامين/إكسيلازيني، قياس وظيفة الشبكية مع اليكتروريتينوجرام داركادابتيد (ERG) كما هو موضح بمزيد من التفصيل في مكان آخر15،،من1617.
    ملاحظة: لقد وجدنا قوية العقدة خلية اختلال وظيفي، وترقق طبقة الألياف العصبية الشبكية، والعقدة الخلية خسارة لمدد تتراوح بين 8-12 أسابيع. الآخرين قد استخدمت بنجاح فترات أطول من IOP ارتفاع14،15.
  2. فورا بعد قياس أرج، وقياس سماكة طبقة الألياف العصبية الشبكية (رنفل) ومجموع سمك الشبكية باستخدام المجال الطيفي تماسك الألياف البصرية التصوير المقطعي (SD--أكتوبر) 16،18.
  3. في نهاية الدراسة الطولية، euthanize الحيوانات تحت التخدير العميق.
    1. تشريح الشبكية للأنسجة18، على سبيل المثال إيمونوستينينج الجامعة-جبل الشبكية باستخدام جسم خلية (كمبوديا) شبكية العقدة محددة مثل الحمض النووي الريبي-البروتين مع العديد من جسم الربط (رببمس) أو المجال الخاص بالمخ هوميوبوكس/بو 3A البروتين (Brn3a)16،،من1922.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

النتائج التالية في الفئران18 والفئران16 أفيد سابقا، ويرد هنا. خياطة سيركومليمبال تنتج نمطاً مماثلاً لارتفاع IOP في الجرذان والفئران (الشكل 2). تم العثور على تصاعد IOP قصيرة، تصل إلى 58.1 ملم زئبق ± 2.7 في الفئران و 38.7 مم زئبق ± 2.2 في الفئران، فورا بعد إجراء خياطة الجروح. في الفئران، خفض حجم IOP تدريجيا على مر الزمن أن 44 ± 6 مم زئبق و 32 ± 2 مم زئبق، في 3 و 24 ساعة، على التوالي15. وبعد هذا IOP الأولية سبايك IOP مستقرا نسبيا لعدة أسابيع. خلال الفترة التجريبية، IOP في أعين العين ارتفاع ضغط الدم (أوهت) ظلت مرتفعة ب ~ 9 مم زئبق لمدة 8 أسابيع في الفئران، والتي ~ 5 مم زئبق لمدة 12 أسبوعا في الفئران.

تقييم الدالة حكومة كمبوديا الملكية، يتسبب أرج الظلامية في طاقات التحفيز قاتمة جداً "الظلامية عتبة الاستجابة" الإيجابية (بستر)، التي عثر عليها تخفيض في عيون أوت، نسبة إلى العيون التحكم في الجرذان والفئران (الشكل 3). وهناك أيضا خفض صغير أرج وب-الموجه، التي من المرجح أن تعكس من خلل خفيف photoreceptors وخلايا ثنائية القطب، على التوالي. أن العجز أكبر عثر في بستر، يؤكد التفضيلية خلل الشبكية الداخلية عقب ارتفاع IOP المزمن المعتدل.

تمشيا مع خلل الشبكية الداخلية، فقدان انتقائي لكثافة الخلايا في طبقة حكومة كمبوديا الملكية كان أيضا واضحا في المقاطع العرضية OHT الشبكية (الشكل 4A -4 ج). في المقابل، ظلت إعداد الخلايا في الطبقات الخارجية والداخلية النووية18من دون تغيير، مما يوحي بأن الآثار الدماغية خارج الهدف كانت ضئيلة. هذه النتائج في الفئران التي تثبتها عدد خلايا على الماوس الجامع-جبل ريتيناي الملون استخدام جسم معين حكومة كمبوديا الملكية والفحص المجهري [كنفوكل] (4E الشكل -4 ز). وعلى نحو مماثل، أظهر مسح أكتوبر حول رأس العصب البصري أن المزمنة IOP الارتفاع ينتج انخفاض سمك رنفل، بينما بقي مجموع سمك الشبكية معدلة في كلا من الأنواع (الشكل 4 وح 4).

Figure 1
الشكل 1 . سيركومليمبال خياطة التطبيق حول خط الاستواء للعين- A: أولاً، استخدام العقدة لتشديد خياطة محفظة السلسلة عن طريق سحب سلسلة واحدة فقط (السهم)، مما يضمن ضغط الداخل كافية. يمكن قياس مساعد IOP فورا قبل ابزيم العقدة الثانية. ب: بعد التعادل ثاني عقده بسيطة لقفل العقدة الأولى. ج: صورة فوتوغرافية لخياطة سيركومليمبال في عين بماوس. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم- 

Figure 2
الشكل 2 . خياطة سيركومليمبال ارتفاع الضغط داخل مقلة العين وفي هذه الحالة لمدة 8 أسابيع في الفئران (أ، ن = 8) و 12 أسبوعا في الفئران (ب، ن = 23)- IOP يطرأ في عيون التحكم كونترالاتيرال. (الفردية عيون OHT ممثلة برموز حمراء وعيون التحكم بالرموز الرمادية). المتوسط والانحرافات المعيارية هي مضافين باللون الأسود. ريبلوتيد البيانات بإذن من 16،العمل السابق18.) الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم- 

Figure 3
الشكل 3 . ارتفاع IOP المزمنة الناجمة عن العجز الوظيفي لا سيما في الشبكية الداخلية في الفئران (أ وب) والفئران (ج ود). أ: أرج متوسط الطول الموجي (n = 8 الفئران) استجابة لحافز مشرق وخافت (2.07 و-5.31 تسجيل cd.s.m-2 لأعلى وأسفل التتبع على التوالي) بعد 8 أسابيع من الارتفاع IOP. ب: السعة النسبية بستر، يدل على وظيفة حكومة كمبوديا الملكية، وكان أكثر المتضررين من فوتوريسيبتورال الموجه وخلية القطبين مدفوعة ب الموجه. ج ود وفق أ و ب لكن المستمدة من متوسط 23 الفئران بعد ارتفاع IOP لمدة 12 أسبوعا. مرة أخرى، والخلل في كمبوديا كان أشد من الخلل في الخلية فوتوريسيبتورال وثنائي القطب. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 4
الشكل 4 . أرج: اليكتروريتينوجرام؛ أوت: العين ارتفاع ضغط الدم؛ IOP: ضغط العين؛ بستر: "استجابة عتبة الظلامية"؛ كمبوديا: خلايا العقدة الشبكية؛ * ف < 0.05. أشرطة الخطأ: الخطأ المعياري للوسط. يتم إعادة استخدام البيانات بإذن من العمل السابق. 16 , 18 الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

خياطة سيركومليمبال نموذج جديد لارتفاع ضغط الدم المزمن في العين. بالإضافة إلى الدراسات التي من خلالها النتائج التمثيلية هي المصدر16،18، هذا النموذج الحيواني قد استخدمت في عدد من الأخيرة دراسات15،،من2324،25 ،26. المقارنة بين هذه التقارير السابقة يظهر أن الأسلوب ينتج نتائج قابلة للتكرار، بما في ذلك حجم ارتفاع IOP، فضلا عن المصطلحات IOP موجزة أثناء التعريف النموذجي (انظر المناقشة فيما بعد). على الرغم من أن مدة ارتفاع IOP اللازمة لحفز قوي حكومة كمبوديا الملكية التغييرات بين 8 و 12 أسبوعا، النموذج يمكن الحفاظ على لفترة أطول، مع دراسات عن نتائج لمدة 15-16 أسبوعا من IOP ارتفاع14،15. بالإضافة إلى التكرار، هذا الأسلوب هو بسيط نسبيا، وفعالة من حيث التكلفة، ويمكن استخدامها في كل من الفئران والجرذان. بالمقارنة مع النهج الأخرى التي تنطوي على اختراق العين في التعريف النموذجي، هذا النموذج قابلة للتحقيقات التي تتطلب الوسائط البصرية واضحة، مثل الكهربية أو في فيفو تصوير الشبكية. واحد أسباب ذلك أن طريقة خياطة سيركومليمبال بتجنب بزل، يهدف إلى الحفاظ على شرف محصنة من العين وذلك تقليل الالتهابات المتصلة بالصدمة، وإعتام عدسة العين. دراسة سابقة لاستخدام هذا الأسلوب، وجدت هذا التعبير، ورابطة المحامين الدولية-1 علامة للالتهاب، لم يكن أوبريجولاتيد في شبكية العين15، لكن لم تحدد حتى الآن وجود علامات التهاب أو التهاب الغرفة الأمامية الأخرى وفي هذا النموذج. هناك ميزة أخرى هي أنه يمكن عكس ارتفاع IOP بإزالة خياطة، وهو إجراء بسيط يمكن القيام به تحت التخدير الخفيفة وتخدير موضعي14،15. وهذا يجعل خياطة سيركومليمبال نموذجا فريداً للتحقيق في إمكانية الرجوع المحتملة لإصابة خلية العقدة في الزرق24.

على الرغم من أن الآلية التي تثير إجراء خياطة IOP ليست مفهومة تماما، هو عرقلة تدفق مائي السبب المحتمل بعد استبعاد عوامل أخرى عديدة. من الدراسات السابقة، أننا أظهرنا أن خياطة سيركومليمبال لا يغير كثيرا من زاوية الغرفة الأمامية العمق أو إيريدوكورنيل في كلا الفئران15 والفئران16 وليست لذلك نموذجا من زاوية إغلاق الزرق. بالإضافة إلى ذلك، كما لم تتغير تمدد الحدقة وحجم التلميذ، كان الحفاظ على وضوح الوسائط البصرية، ولوحظ أية تغييرات تحريضية صريحة مع أكتوبر الغرفة الأمامية أو الشبكية عبر المقاطع، ونحن لا نعتقد أن الضغط داخل مقلة العين ارتفاع ينشأ من خلال إليه تحريضية. أخيرا، لدينا استنتاج أن يمكن تطبيعها IOP سريعاً بعد إزالة خياطة سيركومليمبال يوحي بأن يعيد البناء من meshwork trabecular نتيجة التهاب سيكون أسباب غير المحتمل لل16،ارتفاع IOP24. وبالتالي، فمن المرجح أن ارتفاع IOP ينشأ من عرقلة تدفق مائي، أما عن طريق ضغط شليمم للقناة أو الأوردة ابيسكليرال. ويجري مزيد من التحقيقات لتحديد السبب الدقيق لعرقلة تدفق مائي الناجمة عن هذا النموذج.

خياطة سيركومليمبال نقائص عديدة. قلق واضح واحد هو سبايك IOP الأولية التي تحدث أثناء تطبيق الخياطة، مما يقلل تدريجيا على مدى عدة ساعات. في الواقع، ارتفاع IOP مفرط لديه القدرة على حمل الإصابات الدماغية ضخه، هي ليست نموذجية من الزاوية المفتوحة المزمنة الزرق. وفي هذا الصدد فإنه من الحكمة لمرحلة ما بعد تأكيد جراحيا نضح الشبكية العادي باستخدام تنظير العين أو الأوعية OCT.

وتناول المساهمة المحتملة لارتفاع IOP مؤخرا مقارنة عيون التحكم غير المعالجة مع مجموعة مراقبة شام حيث كان يطبق الخياطة وفقا للطرق المذكورة أعلاه، ومن ثم إزالتها بعد يومين. وبعبارة أخرى، هذه العيون المراقبة الشام تعرضوا لنفس المصطلحات IOP الحادة ولكن ارتفاع IOP المزمن لا تتجاوز 48 ساعة. وجدنا أن النتائج طويلة الأمد، تقاس أرج، أكتوبر وتعول حكومة كمبوديا الملكية، تتغير في عناصر تحكم الشام عند مقارنة مع16من عناصر التحكم غير المعالجة، تبين أن ارتفاع IOP الأولية لم يكن دوراً هاما في عجز حكومة كمبوديا الملكية في هذا النموذج. هذا معتمد أيضا من حقيقة أن هناك أي علاقة بين حجم سبايك IOP واختلال وظيفي حكومة كمبوديا الملكية على المدى الطويل، في أعين العين ارتفاع ضغط الدم (أوت)، في حين كان هناك ارتباط كبير مع ارتفاع IOP المزمن15. بالإضافة إلى ذلك، استرداد دراسة واحدة حيث أزيل الخياطة بعد 8 أسابيع يبين تلك الخلية العقدة تماما، مقيسا بستر24، التي تدعم الفكرة القائلة بأن سبايك IOP مختصر الناجمة عن التعريف النموذجي مساهمة قليلاً خلل الشبكية وجدت بعد ارتفاع IOP المزمنة. سبايك IOP عابر كان عاملاً مساهما في إصابة خلايا العقدة، لا يتوقع المرء الانتعاش بعد إزالة خياطة في الأسبوع 8. ولذلك، على الرغم من أن الحد من تصاعد IOP عابرة، هذا النموذج خياطة سيركومليمبال العين ارتفاع ضغط الدم إضافة مفيدة للنماذج المتاحة حاليا الزرق الحيوانات الصغيرة.

على الرغم من أن الأدلة المذكورة أعلاه يدعم فائدة هذا النموذج، يجب أن تبذل قصاراها لتقليل ارتفاع IOP عابرة. قد تساعد الإجراءات التالية مع نموذج التعريفي. أولاً، المشكلة الأكثر شيوعاً صادف أن IOP يمكن أن تعود إلى طبيعتها بعد تطبيق خياطة بضعة أيام. السبب المحتمل لهذا التطبيع الضغط أن عقده خياطة يخفف تدريجيا مع مرور الوقت. لاستكشاف الأخطاء وإصلاحها، تأكد من العقدة الأولى (slip) يتم تثبيتها بشكل أمن قبل ربط العقدة الثانية. ويمكن تحقيق ذلك مرتبط باستمرار الإبقاء على التوتر في واحدة من نهاية عقده زلة (السهم في الشكل 1ألف) حتى الثانية عقده. المسألة الثانية الأكثر شيوعاً هو تحدميه التي يمكن أن تحدث في الساعات القليلة الأولى بعد خياطة. في تجربتنا، كان هذا المقترنة عادة مع ارتفاع مفرطة IOP سبايك (عادة ≥ 80 مم زئبق في الجرذان والفئران) أو ثقب العين عندما النسيج في خياطة الجروح. وتشمل مضاعفات أخرى من الإجراءات إعتام عدسة العين (عادة ما تكون قابلة للعكس) في الأجل القصير، وخسارة الخياطة على المدى الطويل بسبب انزلاق خياطة أو تمزق الملتحمة. وقد لاحظنا عدم تطوير أي التهابات العين السطحية في أي جماعة من الجرذان أو الفئران. للمستخدمين المبتدئين للجراحة المجهرية، مطلوب بعض الممارسات لتطبيق خياطة سيركومليمبال الرئيسي. لقد أبلغ بمعدل 50% نجاح أولى في أعمالنا الفوج الأول من الفئران (40 من أصل 81 الفئران)16. في تجربتنا، وهذا يحسن إلى 70-80% مع الممارسة. في مجموعة لاحقة من الفئران 60، وجدنا بمعدل نجاح إجمالي 70 في المائة، مع دائرة (13%)، وخياطة الخسارة (17 في المائة) تستأثر بنسبة 30% الفشل. في مجموعة فئران 20، وجدنا معدل نجاح أعلى (90 في المائة) من الفئران، مع الفئران فقط 2 استبعادهم بسبب دائرة (10%)، واستبعدت لا الحيوانات بسبب فقدان خياطة الجروح. تثقيب، أثناء الجراحة حوادث نادرة في نماذج الفئران والفأر (~ 1%).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

Acknowledgments

وتمول هذه الأعمال "الوطنية للصحة" و "مجلس البحوث الطبية في أستراليا" منحة مشروع (1046203)، "مجلس البحوث الأسترالي مستقبل الزمالة" (FT130100338).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
normal saline Baxter International Inc AHB1323 Maintain corneal hydration during surgery
Chlorhexadine 0.5% Orion Laboratories 27411, 80085 Disinfection of surgical instrument
Isoflurane 99.9% Abbott Australasia Pty Ltd CAS 26675-46-7 Proprietory Name: Isoflo(TM) Inhalation anaaesthetic. Pharmaceutical-grade inhalation anesthetic mixed with oxygen gas for suture procedure
ocular lubricant Alcon Laboratories  1618611 Proprietory Name: Genteal, ocular lubricant to keep the other eye moist
Needle holder (microsurgery) World Precision Instruments 555419NT To hold needle during ocular surgery
Proxymetacaine 0.5% Alcon Laboratories  CAS 5875-06-9 Topical ocular analgesia
Scissors (microsurgery) World Precision Instruments 501232 To cut excessive suture stump during ligation
Surgical drape Vital Medical Supplies GM29-612EE Ensure sterile enviornment during surgery
Suture needle for rats (microsurgery) Ninbo medical needles 151109 8-0 nylon suture attached with round needle, cutting edge 3/8, dual-needle, suture length 30cm
Suture needle for mice (microsurgery) Ninbo medical needles 160905 10-0 nylon suture attached with round needle, cutting edge 3/8, dual-needle, suture length 30cm
Tweezers (microsurgery) World Precision Instruments 500342 Manipulate tissues during ocular surgery
rebound tonometer TONOLAB, iCare, Helsinki, Finland TV02 for intraocular pressure monitoring

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Morrison, J. C., et al. A rat model of chronic pressure-induced optic nerve damage. Experimental Eye Research. 64, (1), 85-96 (1997).
  2. Feng, L., Chen, H., Suyeoka, G., Liu, X. A laser-induced mouse model of chronic ocular hypertension to characterize visual defects. Journal of Visualized Experiments. (78), (2013).
  3. Chiu, K., Chang, R., So, K. F. Laser-induced chronic ocular hypertension model on SD rats. Journal of Visualized Experiments. (10), 549 (2007).
  4. Quigley, H. A., Addicks, E. M. Chronic experimental glaucoma in primates. I. Production of elevated intraocular pressure by anterior chamber injection of autologous ghost red blood cells. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 19, (2), 126-136 (1980).
  5. Bunker, S., et al. Experimental glaucoma induced by ocular injection of magnetic microspheres. Journal of Visualized Experiments. (96), (2015).
  6. Weber, A. J., Zelenak, D. Experimental glaucoma in the primate induced by latex microspheres. Journal of Neuroscience Methods. 111, (1), 39-48 (2001).
  7. Moreno, M. C., et al. A new experimental model of glaucoma in rats through intracameral injections of hyaluronic acid. Experimental Eye Research. 81, (1), 71-80 (2005).
  8. Hoyng, P. F., Verbey, N., Thorig, L., van Haeringen, N. J. Topical prostaglandins inhibit trauma-induced inflammation in the rabbit eye. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 27, (8), 1217-1225 (1986).
  9. Kezic, J. M., Chrysostomou, V., Trounce, I. A., McMenamin, P. G., Crowston, J. G. Effect of anterior chamber cannulation and acute IOP elevation on retinal macrophages in the adult mouse. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 54, (4), 3028-3036 (2013).
  10. Waisbourd, M., et al. Reversible structural and functional changes after intraocular pressure reduction in patients with glaucoma. Graefe's Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 254, (6), 1159-1166 (2016).
  11. Foulsham, W. S., Fu, L., Tatham, A. J. Visual improvement following glaucoma surgery: a case report. BMC Ophthalmology. 14, 162 (2014).
  12. Anderson, A. J., Stainer, M. J. A control experiment for studies that show improved visual sensitivity with intraocular pressure lowering in glaucoma. Ophthalmology. 121, (10), 2028-2032 (2014).
  13. Ventura, L. M., Feuer, W. J., Porciatti, V. Progressive loss of retinal ganglion cell function is hindered with IOP-lowering treatment in early glaucoma. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 53, (2), 659-663 (2012).
  14. Zhao, D., et al. ARVO abstract number 3696 - B0043. annual meeting of Association for Research in Vision and Ophthalmology, Honolulu, Hawaii, USA. (2018).
  15. Liu, H. H., et al. Chronic ocular hypertension induced by circumlimbal suture in rats. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 56, (5), 2811-2820 (2015).
  16. Zhao, D., et al. Characterization of the Circumlimbal Suture Model of Chronic IOP Elevation in Mice and Assessment of Changes in Gene Expression of Stretch Sensitive Channels. Frontiers in Neuroscience. 11, 41 (2017).
  17. Nguyen, C. T., et al. Simultaneous Recording of Electroretinography and Visual Evoked Potentials in Anesthetized Rats. Journal of Visualized Experiments. (113), (2016).
  18. Van Koeverden, A. K., He, Z., Nguyen, C. T., Vingrys, A. J., Bui, B. V. Systemic hypertension is not protective against chronic IOP elevation in a rodent model. Scientific Reports. 8, (1), 7107 (2018).
  19. Rodriguez, A. R., de Sevilla Muller, L. P., Brecha, N. C. The RNA binding protein RBPMS is a selective marker of ganglion cells in the mammalian retina. Journal of Comparative Neurology. 522, (6), 1411-1443 (2014).
  20. Aihara, M., Lindsey, J. D., Weinreb, R. N. Twenty-four-hour pattern of mouse intraocular pressure. Exp Eye Research. 77, (6), 681-686 (2003).
  21. Jia, L., Cepurna, W. O., Johnson, E. C., Morrison, J. C. Patterns of intraocular pressure elevation after aqueous humor outflow obstruction in rats. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 41, (6), 1380-1385 (2000).
  22. Nadal-Nicolas, F. M., Jimenez-Lopez, M., Sobrado-Calvo, P., Nieto-Lopez, L., Canovas-Martinez, I., Salinas-Navarro, M., Vidal-Sanz, M., Agudo, M. Brn3a as a marker of retinal ganglion cells: qualitative and quantitative time course studies in naive and optic nerve-injured retinas. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 50, (8), 3860-3868 (2009).
  23. Liu, H. H., Flanagan, J. G. A Mouse Model of Chronic Ocular Hypertension Induced by Circumlimbal Suture. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 58, (1), 353-361 (2017).
  24. Liu, H. H., He, Z., Nguyen, C. T., Vingrys, A. J., Bui, B. V. Reversal of functional loss in a rat model of chronic intraocular pressure elevation. Ophthalmic & Physiological Optics. 37, (1), 71-81 (2017).
  25. Liu, H. H., Zhang, L., Shi, M., Chen, L., Flanagan, J. G. Comparison of laser and circumlimbal suture induced elevation of intraocular pressure in albino CD-1 mice. PLoS One. 12, (11), 0189094 (2017).
  26. Shen, H. H., et al. Intraocular Pressure Induced Retinal Changes Identified Using Synchrotron Infrared Microscopy. PLoS One. 11, (10), 0164035 (2016).
نموذج زرق المستحث بخياطة سيركومليمبال في الجرذان والفئران
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

He, Z., Zhao, D., van Koeverden, A. K., Nguyen, C. T., Lim, J. K. H., Wong, V. H. Y., Vingrys, A. J., Bui, B. V. A Model of Glaucoma Induced by Circumlimbal Suture in Rats and Mice. J. Vis. Exp. (140), e58287, doi:10.3791/58287 (2018).More

He, Z., Zhao, D., van Koeverden, A. K., Nguyen, C. T., Lim, J. K. H., Wong, V. H. Y., Vingrys, A. J., Bui, B. V. A Model of Glaucoma Induced by Circumlimbal Suture in Rats and Mice. J. Vis. Exp. (140), e58287, doi:10.3791/58287 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter