Здесь морфин кондиционером место предпочтение (CPP) Протокол описан измерить инкубации тягу в крыс.
Одной из основных причин повторные рецидивы является жажда наркотиков. Наркотиков жажда увеличивается постепенно в период воздержания, явление называется инкубации жажда наркотиков. Здесь мы описываем морфин-кондиционером место предпочтение (CPP) протокол для измерения инкубации тягу в крыс. В настоящем Протоколе CPP парадигмы, главным образом используя соматосенсорные подсказки используется для создания долгосрочной памяти награду морфина. Окно CPP-трехкамерный, которое отличается в текстуре пола камеры построен. Во-первых животные проверяются на их исходных предпочтение двух бортовых камер трех дней подряд. Затем они вводили внутрибрюшинно морфин/физиологического раствора и положить в их предпочитали/непредпочитаемого камеру за 45 мин. После 6 дней кондиционирования их предпочтений в сторону камеры проверяется на 15 мин в разное время точках после последней сессии принадлежности. С этой парадигмы награда памяти морфина может продолжаться в течение 18 дней. Чтобы проверить ли вышеупомянутый Протокол можно смоделировать увеличение жажды, количество входов в двух бортовых камер, учитываются в период воздержания. Результаты показывают, что входы увеличилось, предполагая, что CPP парадигма может имитировать инкубации тягу. Будущие исследования могут использовать эту модель для изучения нейронных механизмов долговременной памяти и инкубации тягу.
Наркомания представляет собой хроническое заболевание1 с несколькими различных этапов2: выпивка/интоксикации, вывод/отрицательное влияние и заботой/ожидание. В стадии первоначального выпивка/интоксикации цикла зависимость от наркотиков субъектов принимать наркотики из-за усиливающие эффект2. В стадии влияет на вывод/отрицательная предметы опыт негативные соматических и эмоциональных состояний наркотиков вывода, способствующие отрицательное подкрепление механизмы, связанные с развитием наркомании3. В стадии озабоченность/ожидание субъектов восстановить поисках наркотиков после исчезновения, которые могут быть вызваны сигналы, связанные с наркотиками или стресс. В исследованиях на животных наркомании кондиционером место предпочтение (CPP) парадигмы используются для имитации армирующие положительный эффект препаратов4,5,6 , и, таким образом, он используется для моделирования на начальном этапе препарата зависимость от цикла. Морфин, членом семьи opioid, производит положительный эффект армирующие, активировав опиоидные рецепторы в мозге7,,8.
CPP парадигмы основаны на принципе классической кондиционирования (Павловский) и часто используется для измерения полезный эффект наркотических средств, таких как морфин4,5,9,10, из-за его легко доступность в лаборатории. Типичный CPP парадигмы состоит из трех этапов: этапа предварительного кондиционирования, кондиционирования и испытания. Во время этапа принадлежности награждение свойства препарата (unconditioned стимул) в паре с одной или более нейтральных контекстной раздражителей, которые получить свойства, награждение после нескольких комбинаций принадлежности и служить в качестве условных раздражителей. На этапе тестирования предпочтение животных наркотиков в паре отсеков измеряются и отражение их вознаграждение памяти. По этой причине CPP парадигма также используется для изучения механизмов обучения и памяти. Учредить долгосрочную память награду морфина, переменные, которые влияют на создание CPP были скорректированы и оптимизированы с ниже описывается протокол11. Контекстуальные стимулы представляют собой сочетание визуальные, тактильные и запах подсказки. Вариации контекстуальные раздражителей и тестирования время точек изготавливаются по различных научно-исследовательских целей. Например в наших предыдущих исследования12, соматосенсорные сигналы (различных напольных текстуры) главным образом использовались как контекстуальные раздражители расследовать роль хвостовой части островной коры мозга региона соматосенсорной функцией, в приобретении и поддержание долгосрочной памяти вознаграждение. Дизайн аппарата и назначение крысы предпочитали/непредпочитаемого сторон влияют на создание CPP. Трехкамерная аппарат вместо 2 камеры аппарата используется в ниже протокол, чтобы избежать принудительного выбора. Баланс двух бортовых камер и первоначальная уступка животных в них влияют на приобретение CPP4,13. Таким образом сбалансированный дизайн бортовых камер и предвзятым назначение животных применяются в этом протоколе приобрести прочное место предпочтение. Поддержание долгосрочной памяти награда требует более принадлежности испытания на этапе принадлежности. Чтобы уменьшить время стоимость во время фазы принадлежности, проводятся два испытания принадлежности в день и инъекции морфина/физраствора уравновешенной чтобы избежать острого абстинентного эффекта морфина в солевой парных испытания4.
Восстановление животных моделей14 были созданы для моделирования озабоченность/ожидание этап цикла зависимость от наркотиков. CPP также использовались для изучения восстановление, моделирующее рецидив аддиктивного поведения5. Рецидив является одним из препятствий на пути в лечении наркомании. Тяга является одной из причин повторный рецидив. Жажда наркотиков увеличивается постоянно в период воздержания, явление называется инкубации тяга15,16. Инкубации тягу широко изучается в парадигмы самоуправления наркотиков, но не CPP парадигмы. Использование парадигмы CPP, чтобы отразить инкубации тяга была впервые предложенный Li et al. 17. их результаты17 показал, что CPP десятки низкими дозами морфина (1 мг/кг и 3 мг/кг), но не высокой дозе (10 мг/кг) увеличен постепенно в течение первых 14 дней воздержания. Аналогичным образом мышей вводили с низкой дозой кокаина, показал увеличение CPP баллы за время18. Увеличение CPP десятки низкой дозы морфина были использованы для отражать инкубирован тяга17. Длительность показа в и количество записей в связанных с наркотиками окружающую среду предлагается отразить армирующие условных реакций в CPP парадигмы19. Большинство из последних исследований использовать CPP баллы для прямо или косвенно отражают время, проведенное в паре наркотиков камеры во время количество записей бортовых камер как параметр часто пренебрегают. По этим причинам морфин доза 10 мг/кг был использован и в нашем исследовании11было измерено количество записей. Результаты показывают, что входы крыс в сторону камеры значительно возросло во время периода воздержания11. Это означает, что CPP баллы и количество записей являются полезными параметрами в оценке увеличение жажда наркотиков и CPP парадигма применяется для моделирования инкубации тяга явление. Однако чтобы уменьшить количество животных требуется, группа морфина опытных животных тестируется неоднократно; Таким образом эффект исчезновения не могут быть исключены с током в пределах тема дизайн. A между тема дизайн с тот же протокол может преодолеть это ограничение.
Ниже описывается протокол CPP, установлены долгосрочные вознаграждения памяти и моделируется увеличение жажды. Кратко после трех дней предварительного кондиционирования, крыс через шесть дней принадлежности с двумя принадлежности испытаний в день и затем проверяются в разное время точках после последнего суда принадлежности. В этой парадигме CPP построен-трехкамерный поливинилхлорид (ПВХ) окна, используется как аппарат CPP и пол аппарата является сбалансированным. Аппарат состоит из двух палат большие черные боковые (30 см × 25 × 30 см, Д × Ш × в) и один среднего белого камеры (11 cm × 25 × 30 см, Д × Ш × в) с белым полом гладкая ПВХ. Два бортовых камер имеют различные этаж текстуры как соматосенсорные подсказки: один с полом из плексигласа сетки, а другой с черновой пол из ПВХ.
Здесь метод с использованием парадигмы CPP морфина описана установить долгосрочные вознаграждения памяти в Крыса с соматосенсорные подсказки как кондиционером контекста. Для построения такой долгосрочной памяти вознаграждение, изменяется предыдущий протокол21 с сбалансированный аппарат CPP и физиологического раствора и морфин сеансы являются набор по крайней мере 10 h друг от друга. Кроме того во время этапа принадлежности для повышения качества обучения ассоциативные добавляются дополнительные принадлежности сессий. Помимо оценки CPP входы в две стороны камеры измеряются и шаблон расширения входов в сторону камеры схож с этим увеличение активных ответов в парадигме самоуправления.
Создание CPP парадигмы, упомянутые выше влияют несколько факторов. Одним из ключевых факторов является дизайн аппарата: крысы в целом должны иметь аналогичные предпочтение обеспечить сбалансированный аппарат по обе стороны камеры. Несбалансированные аппарат может маскировать приобретение CPP из-за первоначального высокое предпочтение одной стороны Палаты13. Таким образом крайняя предпочтение одной стороне камеры (более 90% общего времени в любом из двух бортовых камер) следует избегать при выборе текстуру слово или другие контекстные подсказки. Для различных экспериментальных целей экспериментаторов можно сбалансировать CPP аппарат, изменяя контекстуальные раздражителей. Для сбалансированного аппарат часто используемые4существуют два способа экспериментальный дизайн. Один из способов предвзятым — пара наркотиков с непредпочитаемого камеры со всеми субъектами; объективное способом является пара половина животных с наркотиками в зале непредпочитаемого, другая половина с предпочтительным камеры. Оба способа можно установить CPP13 , но исследования17,25 с последнего дизайн всегда исключают многие предметы из-за их явное предпочтение одной стороне камеры. Как отдельные уязвимость к наркотиков наркомания26,27,28 , предвзятым дизайн был выбран в этом исследовании чтобы избежать исключения здоровых испытуемых. Одно ограничение предвзятым дизайна является эффект несовместимым предпочтение стороне камеры. Как показано на рисунке 2, крыс в группе физиологическим имеют последовательную низкие оценки CPP для первоначального непредпочитаемого камеры. Таким образом исключается возможность, что несогласованные предпочтение стороне камеры может повлиять на оценки CPP в группе морфина, установив физиологический контроль. Чтобы избежать эффекта потолок предпочтительным камеры, мы используем первоначальный непредпочитаемого камеры как морфин спаренные камеры. Чтобы избежать эффекта новизны и стресса на базовых предпочтений в сторону камеры, выполняются три сессии предварительного кондиционирования, и третья сессия используется в качестве базового. Четвертым фактором является интервал между морфина и физиологическим сессий. В нашей парадигме мы выбираем промежутки времени по крайней мере 10 часов чтобы избежать вывода эффекта в период физиологическим принадлежности. Доза морфина также является важным фактором. Чрезвычайно низкие дозы морфина, например 0,01 мг/кг6, не вызвать место предпочтения. В дозе 10 мг/кг индуцированной высокая оценка CPP17 крыс и широко используется в крыса морфина CPP исследования17,21,23. Однако 10 мг/кг морфина (и.п.) может вызвать угнетение дыхания в около 5% крыс. Более низкие дозы морфина, например 5 мг/кг, могут использоваться в будущих исследованиях. Для других видов, таких как дерево бурозубка терпимости к наркотикам должны рассматриваться при построении CPP парадигмы. Поскольку дерево белозубка развивается быстро терпимости к морфину, увеличение дозы морфина должны использоваться в ходе кондиционирования этап29,30.
С изменение протокола долговременную память вознаграждение устанавливается для по крайней мере 18 дней после 6 дней кондиционирования11 (рис. 2). Будущие исследования должны измерять ли CPP могут сохраняться в течение длительного времени. Повторные рецидивы является главным препятствием в лечении наркомании. Рецидив может вызвать стресс, экологические сигналы и наркотики. После исчезновения CPP памяти эта модель может использоваться для моделирования рецидив, вызванный стресс или наркотиков.
Входы в паре наркотиков камеры в группе морфина увеличилась в период воздержания11 (рис. 3), которая схожа с повышенной активные ответы в парадигме самоуправления. Однако входы в камеру физиологического раствора в паре также увеличилось с CPP парадигмы в крыс и тупайи11, который отличается от неактивных ответы самоуправления парадигмы. Эта разница может из-за различных основополагающих принципов двух парадигм: один классический подготовлять, другой — оперантного кондиционирования. Кроме того тупайи с пищей, которую испытывает CPP не показывают такой шаблон расширения входов30. Таким образом увеличение входов в обе стороны камеры в морфин опытных животных считается представляют инкубирован жажда наркотиков. Хотя нельзя исключить ограничение использования повторяющихся мер в одной теме, шаблон повышенной записей был сохраняется в крыс11, тупайи11,30 и обезьян31. Тем не менее между предметом дизайна во время абстиненции период настоятельно рекомендуется для будущих исследований исключить эффект исчезновения повторных измерений.
Помимо расширения входов CPP счеты с низкими дозами морфина (1 мг/кг и 3 мг/кг) увеличивалось в течение периода воздержания17. Эти результаты показывают, что CPP парадигма может также модель инкубации тяга явление. Однако расширение CPP оценка может также представлять увеличения памяти на условный стимул. В этом аспекте входы в сторону камеры в аппарате трехкамерный, которые похожи на активной реакции в парадигме самоуправления, больше напоминают Поиск наркотиков или полезный эффект препаратов. Было бы интересно проверить тенденции входов в сторону камеры в период воздержания в крыса CPP парадигмы более низкие дозы морфия. Будущие исследования с другими препаратами и мышей должно быть сделано для проверки ли это явление сохраняется через наркотики видов злоупотреблений.
The authors have nothing to disclose.
Эта работа получила поддержку от национальных естественных наук фонд из Китая (NSFC) 31741058 (ВМФ), Шэньчжэнь правительственных грантов (JCYJ20170818162613877 и JCYJ20170818163217196) и Китай докторской науки Фонд Грант 2017 М 622826 (К.Ж).
Morphine | Shenyang First Pharmaceutical Factory | ||
CPP apparatus/Camera | Anlai Technology Company | ||
SPSS | IBM Inc |