Summary
כאן, פרוטוקול העדפה (CPP) מורפיום ממוזגים המקום מתואר למדוד דגירה של השתוקקות אצל חולדות.
Abstract
הגורם העיקרי תיקרנה מדי חוזרות ונשנות הוא לשוקולד התרופה. סמים התשוקה עולה בהדרגה במהלך תקופת התנזרות, תופעה כינה דגירה של השתוקקות סמים. כאן, אנו מתארים את פרוטוקול העדפה (CPP) המקום מורפיום ממוזגים למדידת הדגירה של השתוקקות אצל חולדות. ב פרוטוקול זה, פרדיגמה CPP בעיקר העסקת רמזים המגע משמש ליצירת זיכרון תגמול לטווח ארוך של מורפיום. תיבה CPP שלוש-הקאמרית שונה במרקם של רצפת החדר בנוי. ראשית, החיות נבדקים על העדפה הבסיסית שלהם כדי הצ'יימברס דו צדדי 3 ימים רצופים. לאחר מכן, הם הזריקו intraperitoneally מורפיום/תמיסת מלח, להכניס לתא שלהם לא מועדף/מועדפות למשך 45 דקות. לאחר 6 ימים של מיזוג, נבדק העדפה שלהם כדי הצ'יימברס בצד למשך 15 דקות בנקודות זמן שונות לאחר הדיון מיזוג האחרון. עם הפרדיגמה הזו, פרס לזכרו של מורפיום יכול להימשך לפחות 18 ימים. כדי לבדוק אם הפרוטוקול הנ ל יכול מודל תשוקה מוגברת, מספר הכניסות לתוך חדרי דו צדדי נספרים במהלך תקופת התנזרות. התוצאות מציגות כי הכניסות מוגבר, רומז כי הפרדיגמה CPP עשויה לחקות הדגירה של תשוקה. מחקרים עתידיים יכול להעסיק את מודל זה ללמוד מנגנונים עצביים שבבסיס זיכרון לטווח ארוך, דגירה של תשוקה.
Introduction
ההתמכרות לסמים היא מחלה כרונית1 עם שלבים שונים מספר2: מוגזמת/שיכרון, משפיעים על נסיגה/שלילי, העיסוק/ציפייה. בשלב הראשוני מוגזמת/שיכרון של מחזור התמכרות לסמים, נושאים לוקח סמים עקב חיזוק effect2. בשלב משפיעים על נסיגה/שלילי, נושאים חוויה שלילית סומאטית והרגשי של סמים גמילה, אשר לקדם את מנגנוני חיזוק שלילי הקשורים לפיתוח התמכרות3. בשלב העיסוק/ציפייה, נושאים להחזיר מכור לסמים לאחר הכחדה, אשר יכול להיות מופעלות על ידי רמזים הקשורים לסמים או לחצים. מחקרים שנעשו בבעלי חיים של התמכרות לסמים, פרדיגמות העדפה (CPP) המקום ממוזגים משמשים כדי לחקות את האפקט חיזוק חיובי של סמים-4,-5,-6 ו, לכן, משמש מודל השלב ההתחלתי של הסם מחזור התמכרות. מורפיום, חבר של משפחת אופיואידים, מייצרת אפקט חיזוק חיובי על ידי הפעלת קולטני אופיואידים ב-7,המוח8.
הפרדיגמה CPP הוא מבוסס על העיקרון של מיזוג (פבלוביות) קלאסית, נפוץ כדי למדוד את השפעת סמים של התעללות, כמו מורפיום4,5,9,10, עקב קל שלה מתגמלת זמינות מעבדות. פרדיגמה CPP טיפוסי מורכב משלושה שלבים: שלבי טרום מיזוג, מיזוג, הבדיקה. במהלך שלב מיזוג, המאפיינים מתגמל של תרופה (unconditioned הגירוי) ניתן לזווג עם אחד או יותר נייטרלי הקשרית לגירויים, אשר לקבל מאפיינים מתגמלת לאחר מספר מיזוג זיווגים, לשמש גירוי מותנה. במהלך שלב הבדיקה, העדפה החיה תאים סמים-זוגי נמדד, בא לידי ביטוי כמו זיכרון הפרס שלהם. מסיבה זו, הפרדיגמה CPP משמש גם כדי לחקור את המנגנונים של למידה וזיכרון. כדי ליצור זיכרון תגמול לטווח ארוך של מורפיום, משתנים המשפיעים על הקמת CPP יש כבר מותאם וממוטב עם להלן פרוטוקול המתואר11. גירויים הקשריות הן שילוב של חזותית, מישוש, ריח רמזים. וריאציות של גירויים הקשרית ואת נקודות זמן בדיקות נעשות בהתאם למטרות מחקריות שונות. לדוגמה שלנו הקודם המחקר12, הותאם המגע (מרקמים שונים קומה) בעיקר שימשו גירויים הקשריים כדי לחקור את התפקיד של החלק סימטרית של קליפת צר אופקים, אזור במוח עם פונקציית המגע, ברכישת ותחזוקה של זיכרון תגמול לטווח ארוך. העיצוב של המנגנון וההקצאה של חולדות מועדף/לא מועדפת הצדדים משפיעים על הקמת CPP. מנגנון 3-הקאמרית במקום מנגנון דו תאיים משמש להלן פרוטוקול כדי למנוע אפשרויות בכפייה. את האיזון בין שני תאי צד או ההקצאה הראשונית של בעלי חיים לתוכם על רכישת CPP4,13. לכן, עיצוב מאוזן של התאים בצד והקצאה משוחד של חיות יוחלו לפי פרוטוקול זה לרכוש העדפה חזקה במקום. תחזוקה של זיכרון תגמול לטווח ארוך דורשת ניסויים מיזוג נוספים במהלך שלב מיזוג. להפחית את עלות זמן במהלך שלב מיזוג, מתבצעת בשני ניסויים מיזוג ליום, זריקות מורפיום/תמיסת מלח הם ולאזנה כדי למנוע את השפעת גמילה חריפה מורפיום מלוחים ניסויים לזווג4.
השבה חייתיים14 הוקמו לדגם השלב העיסוק/ציפייה של מעגל ההתמכרות לסמים. CPP הוא מנוצל גם ללמוד השבה כי מודלים של נסיגה להתנהגות ממכר5. Relapse הוא אחד המחסומים בטיפול של התמכרות לסמים. התשוקה הוא אחד הגורמים של התדרדרות חוזרת ונשנית. חקיקת סמים גדל ללא הרף במהלך תקופת התנזרות, תופעה כינה דגירה של השתוקקות15,16. דגירה של תשוקה היא למדה נרחב הפרדיגמה ניהול עצמי סמים. אבל לא את הפרדיגמה CPP. השימוש של הפרדיגמה CPP כדי לשקף דגירה של השתוקקות היה הראשון שהציע לי. et al. 17. התוצאות שלהם17 הראה כי CPP עשרות במינון נמוך של מורפיום (1 מ"ג/ק"ג ו- 3 מ"ג/ק"ג) אבל לא מינון גבוה (10 מ"ג/ק"ג) גדל בהדרגה במהלך 14 הימים הראשונים של התנזרות. באופן דומה, עכברים מוזרק עם מינון נמוך של קוקאין הראה תוצאות CPP מוגבר לאורך זמן18. עשרות CPP מוגברת במינונים נמוכים של מורפיום שימשו כדי לשקף את התשוקה מודגרות17. גם משך הזמן בילה וגם מספר הערכים סמים-הקשורים לסביבה מוצעים כדי לשקף את התגובות מותנה חיזוק הפרדיגמה CPP19. רוב המחקרים האחרונים להשתמש CPP ציונים לשיקוף במישרין או בעקיפין הזמן המושקע בתאי לזווג סמים תוך מספר הרשומות ללשכה בצד כמו פרמטר הוא מוזנחים תדיר. מסיבות אלו, שימש מורפיום מינון של 10 מ"ג/ק"ג, מספר הערכים נמדדה המחקר שלנו11. התוצאות מציגות כניסות של חולדות ללשכה הצד גדל באופן משמעותי במהלך תקופת התנזרות11. זה מציינת CPP ציונים וגם מספר הערכים הם פרמטרים שימושי בהערכת מוגברת לשוקולד סמים הפרדיגמה CPP הוא החלים דגם הדגירה של השתוקקות התופעה. עם זאת, כדי לצמצם את מספר החיות הנדרש, קבוצה של חיות מנוסים מורפיום נבדק שוב ושוב; לכן, ההשפעה של הכחדה יכול ייכללו לא עם הזרם בתוך נושא העיצוב. א בין נושא עיצוב עם אותו פרוטוקול יכול להתגבר על מגבלה זו.
להלן תיאור הפרוטוקול CPP נוסדה זיכרון תגמול לטווח ארוך, המודל תשוקה מוגברת. בקצרה, לאחר שלושה ימים מראש מיזוג, חולדות לעבור שישה ימים מיזוג עם שני ניסויים מיזוג ליום ואת ואז נבדקים בנקודות זמן שונות אחרי המשפט האחרון מיזוג. פרדיגמה זו CPP, תיבה 3-הקאמרית פוליוויניל כלוריד (PVC) משמש את המנגנון CPP בנויה, הרצפה של המנגנון מאוזנת. המנגנון כולל שני תאי צד שחור גדול (30 ס"מ × 25 ס"מ × 30 ס מ, × L × W H) אחד האמצעי הלבן קאמרית (11 ס"מ × 25 ס"מ × 30 ס מ, × L × W H) עם רצפת PVC חלקה לבנה. הצ'יימברס דו צדדי יש מרקמים שונים קומה כמו רמזים המגע: אחד עם רשת רצפת פלקסיגלס, והשני עם רצפת PVC קשה.
Protocol
ההליכים ניסיוני נערכו בהתאם להנחיות אכפת הלאומית ואת השימוש של בעלי חיים, הניסויים אושרו על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים ועל שימוש הוועדה ב שנג'ן מוסדות של טכנולוגיה מתקדמת, סינית האקדמיה למדעים.
1. בעלי חיים Habituation
- לקבל חולדות למבוגרים זכר מן המעבדה בעלי חיים ולשמור אותם תחת מחזור/כהה 12 שעות (אור על השעות 07:00 עד 19:00) עם גישה חופשית מזון ומים.
- להתמודד עם בעלי החיים על ידי משחק עם אותם או מלטף אותם פעמיים ביום למשך שבועיים לפני הניסויים.
- באופן אקראי להקצות חיות קבוצות מלח או מורפיום.
2. סמים הכנה
- להכין הידרוכלוריד מורפיום כמו 10 מ"ג/מ"ל, להזריק חולדות intraperitoneally (i.p.)-נפח של 1 מ"ל/ק"ג.
- כפקד, להזריק חולדות עם תמיסת מלח ב נפח של 1 מ"ל/ק"ג.
3. CPP המנגנון
- המנגנון CPP של שלוש-הקאמרית ברמזים שונים חוש המישוש (קומה) ולבדוק העדפה הראשונית של חולדות ללשכה בצד שני. המנגנון כולל שני תאי צד שחור גדול (30 ס"מ × 25 ס"מ × 30 ס מ, × L × W H) אחד האמצעי הלבן קאמרית (11 ס"מ × 25 ס"מ × 30 ס מ, × L × W H) עם רצפת PVC חלקה לבנה. הצ'יימברס דו צדדי יש מרקמים שונים קומה כמו רמזים המגע: אחד עם רשת רצפת פלקסיגלס, והשני עם רצפת PVC קשה.
- השילוב של חוש המישוש רמזים כדי לוודא כי המנגנון הוא משוחד, שכן מנגנון משוחד חשופה מניב תוצאות חיוביות שגויות4משתנים.
הערה: נושא מתודולוגי חשוב בעיצוב של המנגנון CPP היא אם המתקן הוא "משוחד" או "אי-הטיה"4. אם קבוצה אחת של חולדות לא מאומן מראה אין העדפה הראשונית בחדר צדדי אחד על פני האחר, המנגנון הוא נחשב "משוחדת". אחרת, מחשיבים אותו בתור "משוחד"13.
4. CPP הליך
- להקים את הפרדיגמה CPP מורפיום-induced בעיקר על פי הקודם21,מחקרים22 עם שינוי של מיזוג נקודות זמן, מספר ההפעלות מיזוג, מיזוג תקופת הניסיון ובדיקות נקודות זמן20 . תיאור קצר ניתנת להלן, אשר לוח הזמנים ניסיוני מתואר באיור1.
- שלב טרום מיזוג
- במהלך שלב זה (יום 1 עד 3), הסר את הגיליוטינה דלתות כדי לאפשר גישה חופשית כל המתקן למקום החיה בבית הבליעה האמצעי.
- שיא הפעילות של החיות למשך 15 דקות.
- חישוב הזמן המושקע של התאים דו צדדי ביום 3 כקו הבסיס והפנה זה כמו T0.
- הסר חולדות מזין פחות מאשר - ארבע פעמים לאחד התאים בצד מ ניסוי23 כמו החולדות האלו הם נוטים יש בעיות בחיי רווחה כללית (למשל, פרווה מלוכלכת. ויש גידולים). בדוק את מצב התקינות של החיות במהלך תקופת כל ניסיוני.
- שלב מיזוג
הערה: מיזוג שלב כולל 6 ימים (יום 4-9).- לנושאים ממוזגים מורפיום, להזריק חולדות i.p. מורפיום (10 מ"ג/ק"ג) או תמיסת מלח (1 מ"ל/ק"ג) לסירוגין בבוקר (9:00) או הפעלות הערב (19:00) (10 h בנפרד).
- להגביל את החולדות מיד אחרי כל זריקה כדי לזווג הסמים שלה (לא מועדפת) או תמיסת מלח-זוגי קאמרית (מועדף) למשך 45 דקות (איור 1B).
- לשמור על מערכת הקלטת וידאו ב-.
הערה: הניסיון שלנו כ 5% של חולדות יש השפל הנשימה לאחר הזריקה הראשונה של מורפיום (10 מ"ג/ק"ג). במקרה כזה, כדי להגדיל את שיעור ההישרדות של חולדות מדוכא בדרכי הנשימה, תיפסו את העכברוש מהחדר מיזוג, להוציא את הלשון שלה, שים את זה על נייר טישו לבן בכלוב בבית שלה. - עבור פקדים ממוזגים-תמיסת מלח, לתת חולדות מלוחים זריקות (1 מ"ל/ק"ג) לפני חשיפה לתא בצד אחד של המנגנון CPP במהלך הפגישה בוקר לצד השני במהלך הפגישה הערב עבור 45 min/מושב בקנה אחד עם מורפיום קבוצה (איור 1 C).
- שלב הבדיקה
- במהלך שלב זה, להסיר את הגיליוטינה דלתות כדי לאפשר גישה חופשית כל המתקן למקום החיה בבית הבליעה האמצעי לתת להם בחופשיות לחקור את המנגנון כולו למשך 15 דקות.
- שיא הפעילות שלהם במהלך זה 15 דקות.
- לבצע בדיקות שלאחר מיזוג שלושה, קרי, מבחן 1 (T1), מבחן 2 (T2) מבחן 3 (T3), 2 ימים, 10 ימים ו- 18 ימים לאחר הדיון מיזוג האחרון במצב ללא מורפיום, בהתאמה (איור 1 א').
- משתנים נקודות זמן הבדיקה עבור מטרות שונות ניסיוני.
הערה: כדי לצמצם את מספר עכברים הנדרש, בעיצוב בתוך הנושא הוא מועסק. עם זאת, כדי לא לכלול את אפקט הכחדה, בין נושא עיצוב נדרש.
איור 1: בצרות. (א) אנחנו הולכים-. בצרות של כל התהליך CPP. (ב) ז ניסיוני בשלב מיזוג של מורפיום קבוצה. לוח הזמנים של השלב מיזוג של קבוצה מלוחים (ג) נסיוני. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
5. ניתוח נתונים
- לחשב את הציון CPP בקבוצה morphine(saline) כמו: הציון CPP = הזמן המושקע של החדר סמים-זוגי (לא מועדפת) / הזמן הכולל בילה בתאי מיזוג שני.
- לבצע ניתוח נתונים של ציונים CPP, כניסות ללשכה לצד שיטות סטטיסטיות המתאימות באמצעות SPSS.
- להציג את כל הנתונים ההתנהגותי אומר ± SEM, איפה SEM השגיאה הסטנדרטית של ממוצע. לשקול את הערכים של p < 0.05 כמו סטטיסטית משמעותית ולציין על ידי כוכביות (*) ו octothorpesin (#) של הדמויות.
Representative Results
התוצאות הבאות נציג הצג מורפיום ש-CPP ניתן להקים בהצלחה על-ידי הפרוטוקול המתואר לעיל לבין זיכרון תגמול לטווח ארוך של מורפיום (איור 2) יכול להישמר. מספר הערכים ללשכה בצד, מקביל מספר התשובות הפעיל התבנית ניהול עצמי, משקף את המאפיין חיזוק של מורפיום. בשל מספר ערכים (איור 3), המציין את הדגירה של תשוקה, נצפתה באמצעות הפרדיגמה CPP זה מורפיום.
CPP זיכרון יכול להימשך לפחות 18 ימים לאחר הדיון מיזוג האחרון.
חולדות עשרים ואחד בקבוצה מורפיום וחולדות 10 בקבוצה מלוחים שימשו כדי לבדוק הביטוי של זיכרון מתגמלת לטווח הארוך. אנובה מעורבות גילה הבדלים משמעותיים האינטראקציה בין הקבוצה לבין מבחן (F (3,87) = 4.973, p = 0.003), מבחן (F (3,87) = 18.237, p < 0.001) וקבוצת (F (1,29) = 11.413, p = 0.002). הבדלים משמעותיים בין בדיקות (F (3,60) = 46.628, p < 0.001) קבוצה מורפיום, אבל לא מלוחים group(F(3,27) = 1.576, p = 0.218) אותרו על ידי חד-כיווני אנובה חוזרות. ניתוח השוואה מרובים עם התאמת Bonferroni הראה הבדלים משמעותיים בין שלוש בדיקות T0 בקבוצה מורפיום. כפי שמוצג באיור2, זיכרון גמול מורפיום נמשך לפחות 18 ימים וירד בחודש מגמה תלויי-זמן. הנתונים מתקבלים מן מחקר שפורסם הקודם11.
כניסות צדדיים בקבוצה מורפיום גדל בהדרגה
קבוצה מורפיום
כדי לבחון את המגמה של כניסות, קבוצה (תמיסת מלח-זוגי, מורפיום-זוגי) כמו גורם בין-נושאים ובדיקה (T0, T1, T2 ו T3) כגורם בתוך-נושאים שנקבעו ANOVA מעורבת. אין הבדלים משמעותיים האינטראקציה בין הקבוצה לבין מבחן (F (2.311,92.449) = 1.915, p = 0.147) וקבוצת (F(1,40) = 0.898, p = 0.349), אך משמעות במבחן (F(2.311,92.499) = 24.243, p < 0.001), אותרו. ניתוח השוואה מרובים עם הכי פחות משמעותי ההבדל (LSD) המבחן הראה הבדלים משמעותיים בין T1 T0 (p < 0.001), T2 ו- T0 (0.001 < p) ו T3 ו T0 (p < 0.001) בקבוצת מורפיום כניסות מורפיום-זוגי. בנוגע תמיסת מלח-זוגי מדורים, חשיבות סטטיסטית קיים בין T2 T0 (p = 0.002) ו T3 ו T0 (p = 0.003) אבל לא T1 ו- T0 (p = 0.246), בדומה לתבנית של דגירה של הרואין השתוקקות24. באופן כללי, כניסות ללשכה צד ב המורפיום קבוצה מוגברת זמן-dependently.
החולדות שהוזנו בתדירות גבוהה יותר כדי תא מורפיום-זוגי מאשר תא תמיסת מלח-זוגי-T1 (t(1,21) =-2.833, p = 0.010) ו- T2 (t(1,21) =-4.458, p = 0.0002) אבל לא T3 (t(1,21) =-0.471, p = 0.642) (דו-זנבית מזווג t-בדיקות).
קבוצה מלוחים
דומה עם הקבוצה מורפיום, ANOVA מעורבת הוחל, חשף אין הבדלים משמעותיים האינטראקציה בין הקבוצה לבין מבחן (F(3,54) = 0.345, p = 0.793), מבחן (F(3,54) = 1.793, p = 0.159) וקבוצת (F(1,18) = 0.151, p = 0.702). לפיכך, כניסות חללים צדדיים בקבוצה מלוחים היו יציבים לאורך זמן.
איור 2: CPP זיכרון זה יכול להימשך לפחות 18 ימים אך ירידות עם הזמן. שימור זיכרון של CPP בקבוצה מורפיום (n = 21) וקבוצת מלוחים (n = 10) הוערך על ידי מדידת הניקוד CPP עבור מספר נקודות זמן לאחר שעבר מיזוג (T1, 2 ימים; T2, 10 ימים ו- T3, 18 ימים). כל הערכים של CPP ציונים הם זאת אומרת ± ב- SEM. # # # p מציין < 0.001 ו # # אומר p < 0.01 לעומת קבוצת מלוחים; מצביע p < 0.001 לעומת T0 בקבוצה מורפיום. דמות זו שונתה מן השמש. et al., 201711. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 3: כניסות תאי-צד בקבוצות מורפיום, תמיסת מלח. כניסות ללשכה צד שני בקבוצה מורפיום (n = 21) וקבוצת מלוחים (n = 10) היו העריך במספר נקודות זמן לאחר שעבר ההתניה (T1, 2 ימים; T2, 10 ימים ו- T3, 18 ימים) לעומת T0. כל הערכים של כניסות הם זאת אומרת ± ב- SEM... בקבוצה מורפיום (א), כניסות לצד מורפיום-זוגי עלה בצורה משמעותית מאוד מ T1 ל T3 תוך כניסות לשכת תמיסת מלח-לזווג רק גדלה באופן משמעותי מ T2. T מזווג בדיקות עם מורפיום-זוגי תא, תא תמיסת מלח-זוגי הראה עליות משמעותיות מאוד הן T1 ו T2. בקבוצה מלוחים (B), ישנם ללא שינויים משמעותיים כניסות לשני הצדדים. דמות זו שונתה מן השמש. et al., 201711. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
Discussion
כאן, שיטה באמצעות פרדיגמה CPP מורפיום הוא תיאר להקים זיכרון תגמול לטווח ארוך בעכברוש ברמזים המגע בהקשר ממוזגים. כדי לבנות כזה פרס זיכרון, פרוטוקול21 הקודם עם מנגנון CPP מאוזן הוא שונה, ההפעלות תמיסת מלח ו מורפיום סט לפחות 10 h לגזרים. בנוסף, טיפולים מיזוג נוספים יתווספו במהלך שלב מיזוג כדי לשפר את הלמידה associative. מלבד הציונים CPP, הכניסות ללשכה צד שני נמדדים, התבנית של כניסות מוגברת ללשכה צד דומה עם זה של התגובות פעילות מוגברת הפרדיגמה ניהול עצמי.
מספר גורמים משפיעים על הקמתה של הפרדיגמה CPP שהוזכרו לעיל. גורם מפתח אחד הוא העיצוב של המנגנון: חולדות באופן כללי צריך להיות דומה העדפה בשני החדרים בצד כדי להבטיח המנגנון מאוזנת. מנגנון לא מאוזן מטשטשים את רכישת CPP עקב העדפת גבוהה הראשונית של צד אחד קאמרית13. לכן, יש להימנע העדפה אקסטרים לתא בצד אחד (למעלה מ-90% של הזמן הכולל באחד התאים דו צדדי) בעת בחירת המרקם של הרצפה או רמזים הקשריים אחרים. למטרות ניסויים שונים, ניסויים יכולים לאזן את המנגנון CPP על-ידי שינוי הגירויים הקשרית. למכשירים מאוזנת, שתי דרכים של תכנון ניסויים הם נפוצים4. אחת הדרכים משוחד היא זוג סמים עם החדר לא מועדפת עם כל הנושאים; דרך מוטים היא זוג מחצית החיות עם סמים בבית הבליעה לא מועדפת, החצי השני עם החדר המועדף. בשתי הדרכים ליצור CPP13 אבל מחקרים17,,25 , עם העיצוב האחרון לא תמיד לכלול נושאים רבים עקב העדפתן חזקה לתא בצד אחד. כאשר קיימת פגיעות בודדים סמים התמכרות26,27,28 , בעיצוב משוחד נבחר במחקר זה כדי למנוע אי-הכללה של הנבדקים בריא. מגבלה אחת של עיצוב משוחד היא ההשפעה של העדפה לא עקבית חללים צדדיים. כפי שמוצג באיור2, חולדות בקבוצה מלוחים יש עקביות הציונים CPP נמוכה של תא הראשונית לא מועדפת. לכן, האפשרות כי העדפה לא עקבית ללשכה צד יכול להשפיע על התוצאות CPP בקבוצה מורפיום הוא נשלל על-ידי הגדרת את הפקדים מלוחים. כדי למנוע את השפעת תקרת החדר המועדף, אנו משתמשים תא הראשונית לא מועדפות כמו תא לזווג מורפיום. כדי למנוע את השפעת החדשנות ומתח על ההעדפה בסיסית ללשכה בצד, מתבצעות שלוש פגישות מיזוג טרום ולאחר המפגש השלישי משמש כקו הבסיס. הגורם הרביעי הוא המרווח בין מורפיום והפעלות מלוחים. ב הפרדיגמה שלנו, אנו בוחרים במרווחי זמן לפחות 10 שעות כדי למנוע את האפקט נסיגה בתקופה מיזוג מלוחים. המינון של מורפיום הוא גם גורם חשוב. מינון נמוך מאוד של מורפיום, כגון 0.01 מ"ג/ק"ג6, לא לגרום המקום העדפה. מינון של 10 מ"ג/ק"ג המושרה הגבוהה CPP ציון17 בחולדות, הוא נפוץ עכברוש מורפיום CPP מחקרים17,21,23. עם זאת, מורפין 10 מ"ג/ק"ג (i.p.) עשויה לגרום דיכאון הנשימה אצל כ-5% של חולדות. מינונים נמוכים יותר של מורפיום, כגון 5 מ"ג/ק"ג, יכולה לשמש מחקרים עתידיים. עבור מינים אחרים, כגון עץ הסוררת, עמידות לתרופות יש לקחת בחשבון בעת בניית הפרדיגמה CPP. מאז עץ הסוררת מפתחת עמידות מהירה למורפין, מינון מוגבר של מורפיום אמור לשמש במהלך מיזוג שלב29,30.
עם פרוטוקול ששונה, זיכרון תגמול לטווח ארוך היא הוקמה לפחות 18 ימים לאחר 6 ימים של מיזוג11 (איור 2). מחקרים עתידיים צריך למדוד אם CPP יכול להישמר זמן רב יותר. Relapse חוזרות היא המכשול העיקרי בטיפול ההתמכרות לסמים. מתח, רמזים סביבתיים וסמים שיכולים לזרז relapse. לאחר הכחדה של הזיכרון CPP, מודל זה יכול היה לשמש מודל relapse המושרה על ידי מתח או סמים.
הכניסות ללשכה סמים-זוגי בקבוצה מורפיום עלה ב תקופת התנזרות11 (איור 3), אשר דומה עם התגובות פעילות מוגברת הפרדיגמה ניהול עצמי. עם זאת, כניסות לתא תמיסת מלח-זוגי גם גדל עם הפרדיגמה CPP חולדות והן חדפי־עצים11, שהוא שונה מכל התגובות לא פעיל של הפרדיגמה ניהול עצמי. הבדל זה אולי בגלל עקרונות היסוד שונים של שתי פרדיגמות: אחת היא התניה קלאסית, והשני הוא התניה אופרנטית. חוץ מזה, חדפי־עצים עם אוכל ש-CPP חוויות לא הראה תבנית כזאת של כניסות מוגברת30. לכן, הכניסות מוגברת כדי שני תאי צד בבעלי חיים מנוסים מורפיום נחשבים לייצג מודגרות התשוקה של סמים. למרות המגבלה של שימוש באמצעים חוזרות ונשנות בנושא אחד לא ייכללו, התבנית של ערכי מוגברת היה והתפאורה חולדות11, חדפי־עצים11,30 , קופים31. למרות זאת, בין נושא עיצוב במהלך ההתנזרות תקופה מומלצת מאוד מחקרים עתידיים לא לכלול את האפקט הכחדה של מדידות חוזרות ונשנות.
מלבד הכניסות מוגברת, CPP ציונים עם מינון נמוך של מורפיום (1 מ"ג/ק"ג ו- 3 מ"ג/ק"ג) גדל בהדרגה במהלך תקופת התנזרות17. תוצאות אלו מראים כי הפרדיגמה CPP יכולה גם לדגמן הדגירה של השתוקקות התופעה. עם זאת, ציון CPP מוגברת עשוי גם לייצג של זיכרון מוגבר עבור הגירוי מותנה. בהיבט זה, כניסות ללשכה צד במנגנון 3 תאיים, אשר דומה הפעיל תגובות ב הפרדיגמה ניהול עצמי, להידמות יותר החיפוש אחר תרופות או את השפעת סמים מתגמלת. זה יהיה מעניין לבדוק את המגמות כניסות ללשכה בצד במהלך תקופת התנזרות בשנת החולדה CPP פרדיגמות מינונים נמוכים יותר של מורפיום. מחקרים עתידיים עם תרופות ועכברים אחרים צריך להיעשות כדי לוודא אם תופעה זו כולו על פני תרופות של התעללות/מינים.
Disclosures
המחברים אין לחשוף.
Acknowledgments
עבודה זו נתמכה על ידי נבחרת מדעי הטבע קרן של סין (NSFC) 31741058 (Y.Z.), מענקים ממשלתיים שנג'ן (JCYJ20170818162613877 ו- JCYJ20170818163217196), סין פוסט-דוקטורט במדעי קרן גרנט 2017 ז 622826 (K.Z.).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Morphine | Shenyang First Pharmaceutical Factory | ||
| CPP apparatus/Camera | Anlai Technology Company | ||
| SPSS | IBM Inc |
References
- Leshner, A. I. Addiction is a brain disease, and it matters. Science. 278 (5335), 45-47 (1997).
- Koob, G. F., Volkow, N. D. Neurocircuitry of Addiction. Neuropsychopharmacology. 35 (1), 217-238 (2010).
- Zhu, Y., Wienecke, C. F., Nachtrab, G., Chen, X. A thalamic input to the nucleus accumbens mediates opiate dependence. Nature. 530 (7589), 219-222 (2016).
- Tzschentke, T. M. Measuring reward with the conditioned place preference paradigm: a comprehensive review of drug effects, recent progress and new issues. Progress in Neurobiology. 56 (6), 613-672 (1998).
- Tzschentke, T. M. Measuring reward with the conditioned place preference (CPP) paradigm: update of the last decade. Addiction Biology. 12 (3-4), 227-462 (2007).
- Mucha, R. F., vander Kooy, D., O'Shaughnessy, M., Bucenieks, P. Drug reinforcement studied by the use of place conditioning in rat. Brain Research. 243 (1), 91-105 (1982).
- van Ree, J. M., Gerrits, M. A., Vanderschuren, L. J. Opioids, reward and addiction: An encounter of biology, psychology, and medicine. Pharmacological Reviews. 51 (2), 341-396 (1999).
- Le Merrer, J., Becker, J. A., Befort, K., Kieffer, B. L. Reward processing by the opioid system in the brain. Physiological Reviews. 89 (4), 1379-1412 (2009).
- Bardo, M. T., Bevins, R. A. Conditioned place preference: what does it add to our preclinical understanding of drug reward? Psychopharmacology. 153 (1), 31-43 (2000).
- Bardo, M. T., Rowlett, J. K., Harris, M. J. Conditioned place preference using opiate and stimulant drugs: a meta-analysis. Neuroscience & Biobehavioral Reviews. 19 (1), 39-51 (1995).
- Sun, Y., Pan, Z., Ma, Y. Increased entrances to side compartments indicate incubation of craving in morphine-induced rat and tree shrew CPP models. Pharmacology Biochemistry and Behavior. 159, 62-68 (2017).
- Sun, Y. M., et al. The caudal part of the posterior insula of rats participates in the maintenance but not the acquisition of morphine conditioned place preference. CNS Neuroscience & Therapeutics. , (2018).
- Cunningham, C. L., Ferree, N. K., Howard, M. A. Apparatus bias and place conditioning with ethanol in mice. Psychopharmacology. 170 (4), 409-422 (2003).
- Carles, S. -S., Rainer, S. REVIEW: Behavioural assessment of drug reinforcement and addictive features in rodents: an overview. Addiction Biology. 11 (1), 2-38 (2006).
- Grimm, J. W., Hope, B. T., Wise, R. A., Shaham, Y. Neuroadaptation. Incubation of cocaine craving after withdrawal. Nature. 412 (6843), 141-142 (2001).
- Gawin, F., Kleber, H. Pharmacologic treatments of cocaine abuse. Psychiatric Clinics of North America. 9 (3), 573-583 (1986).
- Li, Y. Q., et al. Central amygdala extracellular signal-regulated kinase signaling pathway is critical to incubation of opiate craving. J Neurosci. 28 (49), 13248-13257 (2008).
- Lubbers, B. R., et al. The Extracellular Matrix Protein Brevican Limits Time-Dependent Enhancement of Cocaine Conditioned Place Preference. Neuropsychopharmacology. 41 (7), 1907-1916 (2016).
- Bardo, M. T., Miller, J. S., Neisewander, J. L. Conditioned place preference with morphine: the effect of extinction training on the reinforcing CR. Pharmacology Biochemistry and Behavior. 21 (4), 545-549 (1984).
- Sun, Y., Zong, W., Zhou, M., Ma, Y., Wang, J. Pre-conditioned place preference treatment of chloral hydrate interrupts the rewarding effect of morphine. Pharmacology Biochemistry and Behavior. , 60-63 (2015).
- Lin, X., Wang, Q., Cheng, Y., Ji, J., Yu, L. C. Changes of protein expression profiles in the amygdala during the process of morphine-induced conditioned place preference in rats. Behavioural Brain Research. 221 (1), 197-206 (2011).
- Lv, X. -F., Xu, Y., Han, J. -S., Cui, C. -L. Expression of activity-regulated cytoskeleton-associated protein (Arc/Arg3.1) in the nucleus accumbens is critical for the acquisition, expression and reinstatement of morphine-induced conditioned place preference. Behavioural Brain Research. 223 (1), 182-191 (2011).
- Meng, Z., Liu, C., Hu, X., Ma, Y. Somatosensory cortices are required for the acquisition of morphine-induced conditioned place preference. PLoS One. 4 (11), e7742 (2009).
- Shalev, U., Morales, M., Hope, B., Yap, J., Shaham, Y. Time-dependent changes in extinction behavior and stress-induced reinstatement of drug seeking following withdrawal from heroin in rats. Psychopharmacology. 156 (1), 98-107 (2001).
- Zhao, Y., et al. Electrolytic lesions of the bilateral ventrolateral orbital cortex inhibit methamphetamine-associated contextual memory formation in rats. Brain Research. , (2015).
- Vanderschuren, L. J., Everitt, B. J. Drug seeking becomes compulsive after prolonged cocaine self-administration. Science. 305 (5686), 1017-1019 (2004).
- Deroche-Gamonet, V., Belin, D., Piazza, P. V. Evidence for addiction-like behavior in the rat. Science. 305 (5686), 1014-1017 (2004).
- Augier, E., et al. A molecular mechanism for choosing alcohol over an alternative reward. Science. 360 (6395), 1321-1326 (2018).
- Sun, Y. M., Yang, J. Z., Sun, H. Y., Ma, Y. Y., Wang, J. H. Establishment of tree shrew chronic morphine dependent model. Dongwuxue Yanjiu. 33 (1), 14-18 (2012).
- Duan, Y., Shen, F., Gu, T., Sui, N. Addiction: From Context-Induced Hedonia to Appetite, Based on Transition of Micro-behaviors in Morphine Abstinent Tree Shrews. Frontiers in Psychology. 7, 816 (2016).
- Wu, X., et al. Morphine-induced conditioned place preference in rhesus monkeys: Resistance to inactivation of insula and extinction. Neurobiology of Learning and Memory. 131, 192-200 (2016).
