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Behavior

ऊंचा प्लस भूलभुलैया परीक्षण वीडियो ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर के साथ संयुक्त Exogenous Ketogenic की खुराक के Anxiolytic प्रभाव की जांच करने के लिए

Published: January 7, 2019 doi: 10.3791/58396
Automatic Translation
1, 2,3, 1,2, 4,5,6, 1, 7
1Department of Psychology, Hyperbaric Neuroscience Research Laboratory, University of South Florida, 2Department of Molecular Pharmacology and Physiology, Metabolic Medicine Research Laboratory, Morsani College of Medicine, University of South Florida, 3Institute for Human and Machine Cognition, 4Department of Pharmaceutical Sciences, College of Pharmacy, University of South Florida, 5James A. Haley VA Medical Center, 6Shriners Hospital for Children, 7Savaria Department of Biology, ELTE Eötvös Loránd University

Summary

यहां, हम मूषक पशु मॉडल की चिंता के स्तर में परिवर्तन की जांच करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं । उन्नत प्लस भूलभुलैया (EPM) परीक्षण, एक वीडियो ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर के साथ एक साथ प्रयोग किया जाता है, एक विश्वसनीय विधि नैदानिक प्रयोगशाला परिदृश्यों में विभिन्न संभावित anxiolytic उपचार के प्रभाव दस्तावेज़ प्रदान करता है ।

Abstract

इस अध्ययन का समग्र लक्ष्य एक वीडियो ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर के साथ संयोजन में ऊंचा प्लस भूलभुलैया (EPM) परीक्षण की कार्यप्रणाली का वर्णन है । विधि के प्रयोजन के लिए प्रयोगशाला कुतर मॉडलों पर विभिंन संभावित anxiolytic उपचार के प्रभाव दस्तावेज है । EPM परीक्षण खुले स्थानों और ऊंचाइयों, और उनके सहज तीव्र प्रेरणा के लिए उपंयास वातावरण का पता लगाने के लिए संरक्षित, संलग्न अंधेरे रिक्त स्थान और बिना शर्त डर की ओर कुतर ' proclivity पर आधारित है । EPM परीक्षण anxiolytic या कुतर दिया दवाओं है कि व्यवहार को प्रभावित करने के लिए जाना जाता है की anxiogenic प्रतिक्रियाओं की जांच के लिए एक व्यापक रूप से इस्तेमाल किया व्यवहार परीक्षण है । निरीक्षण बंद हथियारों पर खर्च समय की एक घटी हुई अनुपात का प्रदर्शन, खुले हथियारों पर खर्च समय का एक बढ़ा अनुपात, प्रविष्टियों की एक कम संख्या के हथियार बंद करने के लिए, और प्रविष्टियों की एक उन्नत संख्या EPM परीक्षण द्वारा मापा हथियार खोलने के लिए कम प्रतिबिंबित हो सकता है चिंता का स्तर । इस विधि का उपयोग, चिंता से संबंधित व्यवहार पर exogenous कीटोंन की खुराक के प्रभाव Sprague Dawley (एसपीडी) चूहों में परीक्षण किया है. Exogenous कीटोंन की खुराक क्रोनिक ८३ दिन या जीर्ण और तीव्रता से मौखिक रूप से gavaged के लिए चूहों को खिलाया जाता है, दैनिक 7 दिनों के लिए, EPM परीक्षण आयोजित करने से पहले. व्यवहार डेटा संग्रह उपचार के अंत में एक अंधा पर्यवेक्षक द्वारा स्मार्ट वीडियो ट्रैकिंग प्रणाली का उपयोग किया जाता है । मुख्य निष्कर्षों EPM परीक्षण कीटोंन पूरक-प्रेरित anxiolytic प्रभाव का पता लगाने के लिए एक प्रभावी तरीका है कि संकेत मिलता है और दवा या चयापचय आधारित चिकित्सा के साथ जुड़े चिंता व्यवहार में परिवर्तन का आकलन करने के लिए एक संवेदनशील उपाय माना जा सकता है.

Introduction

इस लेख के लक्ष्य के लिए एक वीडियो ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर के साथ संयोजन में EPM परीक्षण की कार्यप्रणाली का वर्णन करने के लिए चिंता में परिवर्तन से संबंधित व्यवहार और प्रयोगशाला में उपंयास उपचार में बदलाव की निगरानी के लिए है । EPM परीक्षण एक अपेक्षाकृत सरल व्यवहार मूल्यांकन विधि है, जो चिंता व्यवहार के स्तर और दवा उपचार1के आवेदन के बाद चूहों की चिंता प्रतिक्रियाओं को बढ़ाता है की जांच के लिए विकसित किया गया है. दरअसल, यह प्रदर्शित किया गया है कि EPM परीक्षण एक व्यापक रूप से इस्तेमाल किया और प्रभावी कुतर1,2की चिंता के स्तर में परिवर्तन की जांच के लिए व्यवहार परख है । कुतर (मुख्य रूप से चूहों और चूहों) में EPM परीक्षण की प्रयोज्यता, खुली जगह की एक अनकंडीशनल डर (परिहार), और उनके उच्च स्तर के सहज प्रेरणा के उपंयास का पता लगाने के लिए संलग्न, डार्क spaces (दृष्टिकोण) की ओर उनके proclivity पर आधारित है वातावरण. नतीजतन, EPM परीक्षण एक दृष्टिकोण पर आधारित एक अच्छी तरह से स्थापित पद्धति है-परिहार संघर्ष2,3.

EPM चार ऊंचा हथियार है, जो हैंडल और मिठानी4 (चित्रा 1) द्वारा वर्णित किया गया है के साथ मिलकर एक प्लस के आकार का उपकरण है, और दो विपरीत हथियार है कि आसपास के लिए खुले है (खुली बाहों) के होते हैं, जबकि दो बंद विपरीत हथियार (बंद हथियार) दीवारों से लैस हैं । उपचार के बाद, अगर समय में वृद्धि हुई खुली बाहों पर खर्च किया जाता है और/या खुले हाथ प्रविष्टियों की एक वृद्धि की संख्या नियंत्रण की तुलना में (अनुपचारित) जानवरों EPM पर पता चला है, यह एक anxiolytic प्रभाव2,3इंगित करता है । सबसे मजबूत परिहार प्रतिक्रिया शुरू होने के बाद पहले 5 मिनट में प्रदर्शन किया गया है (EPM के चार हथियारों के चौराहे में चूहों के स्थान) EPM परख के5; इसलिए, एक इलाज के बाद किसी भी व्यवहार आमतौर पर 5 मिनट के लिए EPM पर दर्ज की गई है । एक चिंता स्तर के अतिरिक्त उपाय के रूप में, सिर में गिरावट की संख्या, रियर (दो हिंद पैर पर कुतर के ऊर्ध्वाधर खड़े), मल boli, साथ ही साथ कुल शाखा प्रविष्टियां (सहज मोटर गतिविधि) और विभिंन मुद्राओं (खींच या ठंड), भी दर्ज किया जा सकता है पर EPM2. इस प्रकार, कई व्यवहार मानकों चिंता से संबंधित व्यवहार का एक व्यापक आकलन प्रदान करने के लिए संकलित किया जा सकता है ।

आदेश में परिणामों की वैधता बढ़ाने के लिए, दो से तीन व्यवहार परख सामांयतः एक साथ प्रयोग किया जाता है, जैसे प्रकाश अंधेरे विकल्प परीक्षण के रूप में, सामाजिक संपर्क परीक्षण, और EPM परीक्षण, विभिंन पशु मॉडल6की चिंता के स्तर को मापने के लिए । EPM परख कुतर पर अकेले प्रदर्शन भी एक उपयुक्त विधि के लिए विभिंन दवाओं7anxiolytic या anxiogenic प्रभाव की जांच है । EPM परीक्षण न केवल बेंजोडाइजेपाइन-प्रकार anxiolytics (जैसे, डायजेपाम)8करने के लिए संवेदनशील है, लेकिन यह भी, दूसरों के अलावा, एमिनो एसिड, monoamine, peptidergic और nucleosidergic यौगिकों के लिए (जैसे, एन मिथाइल-डी-aspartate (मोर्फिन) विरोधी एपी 7, α-अमीनो-3-hydroxy-5-मिथाइल-4-isoxazolepropionic अम्ल (AMPA) विरोधी CNQX, µ-opioid रिसेप्टर एगोनिस्ट अफ़ीम, NPY1 विरोधी BIBP3226, पदार्थ पी, ghrelin, ऑक्सीटोसिन, सेरोटोनिन रिसेप्टर एगोनिस्ट और विरोधी जैसे 8-OH-DPAT और रास्ता-१००६३५, और β1-एड्रीनर्जिक विरोधी betaxolol)9,10,11,12. नतीजतन, कुतर पर EPM परख विभिंन उपचार के प्रभाव की जांच करने के लिए एक उपयुक्त और संवेदनशील तरीका है कि मस्तिष्क anxiolytic प्रभाव में शामिल क्षेत्रों को प्रभावित (जैसे, प्रमस्तिष्कखंड, हिप्पोकैम्पस, और अंगों क्षेत्रों) और कार्रवाई के तंत्र (जैसे, serotonergic, GABAergic, और adenosinergic प्रणाली)2चिंता में फंसा । इन EPM अध्ययनों में परीक्षण एजेंटों exogenous कीटोंन की खुराक है कि एक संवेदनशील विधि व्यवहार परिवर्तन का पता लगाने के लिए आवश्यकता हो सकती है कि सूक्ष्म तरीके में संकेतन बदल मस्तिष्क शामिल हैं ।

इस अनुच्छेद में, हम EPM परीक्षण का वर्णन एक वीडियो ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर है, जो प्रयोगात्मक पूर्वाग्रह को खत्म करने में मदद करता है और संग्रह और उपंयास anxiolytic उपचार के जवाब में व्यवहार परिवर्तन के विश्लेषण की सुविधा के साथ संयोजन में इस्तेमाल किया ।

Protocol

पशु उपचार और मापने प्रक्रियाओं दक्षिण फ्लोरिडा के विश्वविद्यालय संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) दिशानिर्देश (प्रोटोकॉल #0006R) के अनुसार प्रदर्शन किया गया । उपयोग में लाई जाने वाली पशुओं की संख्या को कम करने के लिए सभी प्रयास किए गए ।

1. तैयारी

नोट: प्रोटोकॉल आमतौर पर प्रयोगशाला की आवश्यकता है EPM परीक्षण के लिए चूहों या माउस नस्ल । हालांकि, ऐसे गिनी सूअरों के रूप में अंय जानवरों, भी13EPMs पर परीक्षण किया गया है । यह भूलभुलैया में जानवरों और भूलभुलैया रंग के बीच रंग कंट्रास्ट पर विचार करने के लिए जब वीडियो ट्रैकिंग का उपयोग करने के लिए महत्वपूर्ण है । इसके विपरीत शोधकर्ताओं के लिए कम महत्वपूर्ण है जानवरों रहते है या वीडियो के माध्यम से देख रहे हैं । वीडियो ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर की सेटिंग के लिए दस्तावेज है कि जानवरों या तो एक काले या सफेद भूलभुलैया पर काले या सफेद हो विंयस्त करने की आवश्यकता है । विंयास सेटिंग्स के साथ कोई समस्या स्पष्ट ऐक्रेलिक भूलभुलैया के साथ हो सकता है, लेकिन एक मैट ग्रे भूलभुलैया दोनों कुतर रंग के लिए इष्टतम किया जा सकता है ।

  1. प्रयोग के लिए जानवरों का चयन करें, संभावित कारकों को प्रभावित करने पर विचार, जैसे तनाव, लिंग, मद चक्र, और उंर, साथ ही शरीर के वजन2।
  2. व्यक्तिगत प्रयोग के आधार पर, परीक्षण के लिए प्रति समूह पशुओं की संख्या निर्धारित करें ।
    नोट: समूह आकार परीक्षण उपचार के साथ अपेक्षित है प्रभाव आकार पर निर्भर हो जाएगा । विद्युत विश्लेषण आम तौर पर किया जाता है पहले प्रयोग के लिए विषयों की ंयूनतम संख्या का निर्धारण करने के लिए किसी भी कार्य में है पशु प्रतिक्रियाओं में परिवर्तनशीलता दिया, साथ ही साथ प्रयोगात्मक समूहों की संख्या/
  3. प्रयोग को डिज़ाइन करें (जिसमें विभिन्न व्यवहार परीक्षणों की बैटरी, जैसे ओपन-फील्ड टेस्ट, EPM टेस्ट, होल-बोर्ड टेस्ट, और जबरदस्ती-तैराकी परीक्षण का उपयोग किया जाएगा) सावधानी से ।
    नोट: EPM परीक्षण EPM1,2पर जानवरों के व्यवहार को बदलने के लिए तुरंत पहले एक उपंयास परीक्षण वातावरण (जैसे एक खुला क्षेत्र परीक्षण के रूप में) को कुतर के पूर्व एक्सपोजर ।
  4. EPM परीक्षण से पहले एक समान तरीके से सभी जानवरों को संभाल ।
    नोट: यह प्रदर्शन किया गया है कि अलग तनाव कारकों, दवाओं के आवेदन (जैसे, इंजेक्शन), शिपिंग तनाव, और हैंडलिंग व्यवहार और EPM16पर कुतर के व्यवहार प्रतिक्रियाओं को बदल सकते हैं । इस प्रकार, एक पशु घर के लिए पशुओं के आदी होना (जैसे, शिपमेंट के बाद, EPM परीक्षण से पहले 1-2 सप्ताह के लिए), प्रयोगात्मक शर्तों, और उपचार प्रक्रियाओं (जैसे, gavaging) आवश्यक हैं । यह भी महत्वपूर्ण है कि कुतर के हैंडलिंग और पूर्व तनाव के साथ किसी भी अनुभव, विशेष रूप से तुरंत परीक्षण से पहले, पशुओं और उपचार समूहों में संगत है ।
  5. ऐसे चूहों और चूहों के रूप में रात पशुओं में व्यवहार अध्ययन आचरण, एक रिवर्स प्रकाश चक्र का उपयोग कर, ताकि व्यवहार मूल्यांकन किया जा सकता है जब जानवरों उनके अंधेरे में हैं, सक्रिय चरण.
    नोट: व्यवहार पर अलग आवास की स्थिति और प्रकाश चक्र/circadian लय के प्रभाव और EPM परिणामों पर उनके प्रभाव पहले17का प्रदर्शन किया गया, के बाद से जानवरों के हार्मोन प्रकाश चक्र द्वारा विनियमित रहे हैं.
  6. प्रक्रियाओं के दौरान एक ही प्रयोगकर्ता का प्रयोग करें और उंहें पूछने के लिए एक मजबूत गंध के साथ इत्र या साबुन से बचें ।
  7. प्रयोगकर्ता से पूछो या EPM वातावरण के पास वस्तुओं चाल के दौरान पशु के पास बात नहीं है ।
    नोट: यह महत्वपूर्ण है कि पर्यवेक्षक ंयूनतम आंदोलनों बनाता है और कोई शोर जब व्यवहार डेटा इकट्ठा ।
  8. पिछले जानवरों जो परीक्षण जानवर द्वारा अन्वेषण के साथ हस्तक्षेप हो सकता है की किसी भी गंध मिटा करने के लिए प्रत्येक परीक्षण के बाद पूरे EPM साफ ।
  9. अनुशंसित EPM परीक्षण से पहले कई दिनों के लिए जानवरों को संभाल (इसे उठा धीरे धड़ से और यह एक या दो मिनट के लिए पकड़े) के लिए उंहें प्रयोगकर्ता को acclimate ।
  10. जब EPM पर जानवरों को रखने, एक सुसंगत तरीके से सभी जानवरों को संभालने के लिए सुनिश्चित करें और एक ही हाथ का सामना करना पड़ स्थिति में EPM में प्रत्येक कुतर जगह (उदाहरणके लिए, प्रयोगकर्ता से दूर खुले हाथ का सामना करना पड़ केंद्र में) ।

2. Exogenous कीटोंन की खुराक के आवेदन

  1. उपचार (जैसे, intragastric gavage) के लिए खुराक गणना का निर्धारण करने के लिए किसी भी उपचार शुरू करने से पहले जानवरों के शरीर के वजन को मापने ।
  2. intragastric gavage विधि (अनुकूलन अवधि) के लिए gavage द्वारा पानी का उपयोग कर पशु परिचित 5 डी के लिए कीटोंन पूरकता से पहले (मानक मूषक चाउ/मानक आहार [SD] + water gavage; उदा., २.५ g/kg शरीर का वजन पानी/ किसी भी जानवर है कि intragastric gavage विधि के लिए अनुकूल नहीं है के उपयोग को छोड़ दें ।
  3. अनुकूलन अवधि के बाद, ८३ डी के लिए लंबे रूप से पशुओं फ़ीड और एसडी और gavage के साथ 7 डी के लिए जीर्ण या तो पानी के साथ दैनिक (जैसे, 5 जी/kg शरीर का वजन/दिन; नियंत्रण समूह: n = 8), कीटोंन की खुराक जैसे कीटोंन एस्टर (KE; 1, 3- butanediol-acetoacetate diester; उदा., 5 g/किलो शरीर का वजन/ n = 8), कीटोंन नमक (KS; Na+/K+\u2012beta-hydroxybutyrate [βHB] खनिज लवण; उदा., 5 g/किलो शरीर का वजन/ n = 8), या KS + मध्यम श्रृंखला ट्राइग्लिसराइड (1:1 अनुपात, KSMCT; n = 8)18,19,20.
    नोट: intragastric gavage प्राप्त जानवरों के उपचार के बाद EPM 1 ज पर परीक्षण किया गया । मानक कुतर चाउ और पानी के साथ gavaged के साथ खिलाया चूहों (कीटोंन पूरकता को छोड़कर) नियंत्रण समूहों के रूप में कार्य किया ।

3. चिंता परख

  1. EPM उपकरण
    1. परिणाम को मानकीकृत करने के लिए एक अध्ययन भर में एक ही उपकरण का उपयोग करें । EPM एक प्लस के आकार का उपकरण है, जो चार हथियारों के होते है (जैसे, हथियार 10 सेमी चौड़ा और ५० सेमी लंबा हो सकता है): दो विपरीत हथियार खोल रहे हैं, और दो बंद विपरीत हथियार उच्च (जैसे, 30 सेमी) दीवारों के साथ सुसज्जित हैं । तंत्र मंजिल (जैसे, ५५ सेमी)2से ऊपर उठाया है ।
      नोट: सबसे अधिक इस्तेमाल किया पैरामीटर खुले बाहों में जमा समय और खुली बाहों में प्रविष्टियों की संख्या में खर्च कर रहे हैं; हालांकि, बंद हथियार और केंद्र में बिताए समय, और बंद हथियार और केंद्र में प्रविष्टियों की संख्या मापा जाता है, साथ ही साथ दूरी प्रत्येक क्षेत्र में कूच ।
    2. अप्रत्यक्ष प्रकाश का उपयोग करके EPM प्रकाश (यानी, के बजाय सीधे EPM तंत्र रोशन की छत की ओर प्रकाश स्रोत प्रत्यक्ष) और सुनिश्चित सभी चार हथियारों इसी तरह प्रबुद्ध (छाया के बिना कर रहे हैं, चित्रा 2देखें) ।
      नोट: प्रकाश के स्तर में परिवर्तन EPM पर कुतर के व्यवहार को बदल । इसलिए, इसी तरह की रोशनी लगातार प्रयोगात्मक पशुओं और दिनों (जैसे, कमरे में २,८०० लुमेन)2में की जरूरत है ।
  2. वीडियो ट्रैकिंग प्रणाली
    नोट: एक कंप्यूटर इंटरफेस और डेटा संग्रह है, जो स्वचालित रूप से चूहों में व्यवहार डेटा एकत्र करेगा के लिए एक वीडियो कैमरा के साथ एक वीडियो ट्रैकिंग प्रणाली का उपयोग करें (चित्रा 3). वीडियो ट्रैकिंग प्रणाली के लिए, मानक एनालॉग कैमरों की एक विस्तृत विविधता या उपयोगकर्ता परिभाषित छवि स्रोतों (अवरक्त कैमरा, camcorder, WIA-अनुरूप यूएसबी कैमरा, वेबकैम,etc.) किया जा सकता है । रिकॉर्ड किए गए वीडियो का विश्लेषण करते समय, आंदोलन ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर. avi,. vob,. wmv,. asf,. mov,. क्यूटी,. mpg,. mpeg,. mp4,. 3gp, और. mkv जैसे सभी आम वीडियो प्रारूपों का समर्थन करता है । वीडियो सही रूप से प्लेबैक नहीं है, तो यह एक विशिष्ट कोडेक की आवश्यकता हो सकती है; यदि सिस्टम में संगत कोडेक स्थापित है, तो अतिरिक्त वीडियो स्वरूप समर्थित हैं । आंदोलन ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर भी पहले से प्राप्त वीडियो का विश्लेषण और इस तरह के डीवीडी के रूप में विभिंन स्रोतों से छवियों को संसाधित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है/एचडी रिकार्डर, डिजिटल वीडियो फ़ाइलें (. avi,. divx,. mpeg,etc.), वेबकैम, DV कैमरा, और WIA-संगत इमेजिंग डिवाइसेस ।
    1. सिस्टम सेटअप
      1. एक यूएसबी २.० बंदरगाह में आंदोलन ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर की स्थापना कुंजी प्लग और अधिष्ठापन उपकरण लांच ।
      2. प्रायोगिक क्षेत्र के ऊपर कैमरा ठीक करें और यह सुनिश्चित करें कि यह प्रयोग की अवधि के लिए ही रहेगा ।
      3. अनुदेश पुस्तिका का उपयोग करके आंदोलन ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर प्रणाली में एक नया प्रयोग सेट करें । नए प्रयोगका चयन करें । नया प्रयोग (चित्रा 3, अनुपूरक फाइल 1) का पालन करना चाहिए कि प्रोटोकॉल के आइकन पर डबल क्लिक करें ।
      4. प्रयोग जानकारी संवाद में प्रयोग करने के लिए विवरण दर्ज करें ।
      5. प्रक्रिया करने के लिए वीडियो अनुक्रम का स्रोत निर्दिष्ट करें ।
      6. एक सही दूरी माप के लिए रूपांतरण नियम निर्धारित करें । अंशांकन प्रक्रिया के लिए दूरी और गति के लिए विश्वसनीय मूल्यों को प्राप्त करने के क्रम में प्रयोगात्मक क्षेत्र के वास्तविक आयामों के बारे में सूचित किया जा करने के लिए आंदोलन ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर सक्षम बनाता है ।
      7. कार्य क्षेत्र में रुचि के क्षेत्रों (क्षेत्रों) का निर्धारण ।
      8. पता लगाने की प्रक्रिया के मापदंडों को समायोजित करें ।
        1. आंदोलन के लिए आदेश में ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर ठीक छवि में जानवर की स्थिति का पता लगाने के लिए, कुछ का पता लगाने के समायोजन सेट किया जाना चाहिए.
        2. ट्रैकिंग प्रक्रिया का पता लगाने सेटिंग्स पैनल के चमक & कंट्रास्ट अनुभाग में सामान्य चमक और कंट्रास्ट पैरामीटर्स के ठीक समायोजन का उपयोग करके एक स्पष्ट और अच्छी तरह से विषम छवि की आवश्यकता है । आवश्यकतानुसार, पूरी छवि के लिए या यूज़र-डिफ़ाइंड ज़ोन के लिए इन सेटिंग्स को समायोजित करें ।
      9. प्रत्येक क्षेत्र में एक चूहे का पता लगाने की प्रक्रिया का परीक्षण करने के लिए रखो ।
      10. जांच प्रक्रिया विषय सही रूप से पहचान कर सकते हैं, तो सत्यापित करने के लिए प्रारंभ परीक्षण बटन दबाएँ । पता लगाने की पुष्टि स्क्रीन पर एक डॉट की उपस्थिति से सक्रिय है । परीक्षण शुरू करने से पहले अंशांकन प्रक्रिया को किया जाना है ।
      11. पहचान की पुष्टि माना जाता है जब केवल काले डॉट खिलाड़ी में दिखाया गया है जानवर ट्रैक किया जा रहा है । लाल ट्रैकिंग लाइन को बारीकी से सभी जानवरों के विस्थापनों का पालन करने की जरूरत है । उचित ट्रैकिंग भी एक सफेद पशु संख्या और इसी विस्थापन के आधार पर निर्देशांक लिस्टिंग लेबल के साथ की पुष्टि की है । यदि ऐसी कोई खोज प्राप्त नहीं हुई है, तो पता लगाना और ट्रैकिंग प्रक्रिया ऑप्टिमाइज़ करने के लिए थ्रेशोल्ड और अपरदन पैरामीटर्स समायोजित करें.
      12. दहलीज और कटाव मापदंडों को समायोजित करने के लिए एक तेज और शोर मुक्त परीक्षण छवि पाने के लिए ।
      13. ट्रैकिंग पथ ठीक से पता लगाया है, तो रोकें परीक्षण बटन (आरेख 4) दबाएँ । इन समायोजन हर नई प्रयोगात्मक फ़ाइल के लिए इस्तेमाल किया जा करने के लिए जा रहे हैं, तो डिफ़ॉल्ट रूप में सहेजें बटन दबाएँ । नई डिटेक्शन सेटिंग्स को सहेजने के लिए स्वीकारें बटन दबाएं ।
      14. परीक्षण के समय की स्थिति निर्धारित करें ।
      15. यदि प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल ट्रैक अधिग्रहण की प्रक्रिया को एक ही समय विषय प्रयोगात्मक क्षेत्र में रखा गया है पर शुरू करने की आवश्यकता है, यह दूरस्थ इकाई है कि सॉफ्टवेयर के साथ आता है या एक वायरलेस माउस का उपयोग करने के लिए सेट करने के लिए संभव है ।
        नोट: यह विकल्प दूर से शुरू और बंद को नियंत्रित करने की संभावना प्रदान करता है.
    2. सिस्टम में विषयों का सेटअप
      1. प्रयोग विषय के डेटाबेस का प्रबंधन करें । प्रयोगात्मक विषयों का डेटाबेस बनाने के लिए, विषय डेटाबेस प्रबंधक को प्रयोग सहायक बार में विषय बटन दबाकर दर्ज करें ।
      2. डेटाबेस में नए विषय जोड़ने के लिए + बटन दबाएं ।
      3. पहले से चयनित एक विषय विकल्प के साथ, विषय का कोड दर्ज करें ।
      4. विषय गुण अनुभाग में शेष विषय की जानकारी भरें ।
      5. नया विषय जोड़ने के लिए बनाएं बटन दबाएं ।
      6. प्रयोग योजना को परिभाषित करें । विभिंन चरणों, सत्रों, परीक्षणों, और प्रायोगिक परियोजना के भीतर क्रियान्वित करने की योजना बनाई विषयों को परिभाषित करने के लिए शेड्यूलर का उपयोग करें । परीक्षण स्वचालित रूप से निष्पादित किया जा करने के लिए "अगले परीक्षण" के रूप में चुना जाता है । यह गुण परीक्षण नाम के बाईं ओर एक हरा टिक के रूप में दिखाया गया है ।
    3. एक साथ रिकॉर्डिंग और ट्रैकिंग द्वारा डेटा अधिग्रहण
      नोट: जब एक लाइव छवि स्रोत चयनित है, खिलाड़ी पैनल आसानी से चयनित कैमरे से आ रहा वीडियो पर कब्जा करने के लिए एक एम्बेडेड रिकॉर्डिंग मॉड्यूल प्रदान करता है.
      1. डेटा प्राप्ति के लिए आंदोलन ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर तैयार (अंशांकन, क्षेत्र परिभाषा, जांच सेटिंग्स, समय सेटिंग्स, शेड्यूलर).
      2. डेटा प्राप्ति पैनल खोलें ।
      3. सॉफ्टवेयर में उपलब्ध रिकॉर्डिंग शुरू बटन दबाकर जानवर के बिना प्रयोग के वीडियो रिकॉर्डिंग शुरू करो ।
      4. पशु को प्रायोगिक क्षेत्र में लगाएं ।
      5. समय नियंत्रण कक्ष पर प्रारंभ बटन दबाकर डेटा प्राप्ति प्रक्रिया प्रारंभ करें । ट्रैकिंग प्रक्रिया रिकॉर्डिंग प्रक्रिया के साथ एक साथ किया जाएगा । आवश्यकतानुसार, experimenter को मैन्युअल रूप से व्यवहार चर को नोट करने के लिए कहें, जैसे कि रियर, सिर डिप, और फॉल्स (चित्रा 5).
      6. EPM डेटा को मैंयुअल रूप से एकत्र करें और साथ ही एक अंधा प्रेक्षक द्वारा (EPM से एक पर्दा द्वारा पर्यवेक्षक अलग) परीक्षण कक्ष में ।
      7. ट्रैकिंग प्रक्रिया रिकॉर्डिंग के अंत तक प्रतीक्षा करें या समय नियंत्रण कक्ष पर रोकें बटन दबाएँ.
      8. प्रायोगिक क्षेत्र से पशु निकालें । आंदोलन ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर प्लेयर पर उपलब्ध रोक बटन दबाकर वीडियो रिकॉर्डिंग प्रक्रिया बंद करो ।
      9. इसे धोने और सूखने से अगले जानवर के लिए प्रायोगिक क्षेत्र तैयार करें । चक्र को फिर से दोहराएं ।
    4. डेटा विश्लेषण
      1. विश्लेषण उपकरण तक पहुंचने के लिए, प्रयोग सहायक पट्टी में विश्लेषण बटन दबाएं ।
      2. समाप्त परीक्षणों की विश्लेषण रिपोर्ट जनरेट करने के लिए, विश्लेषण करने के लिए परीक्षण का चयन करें । कॉंफ़िगर करें और विश्लेषण रिपोर्ट का चयन करें । विश्लेषण करने के लिए समय अंतराल सेट करें । रिपोर्ट्स जेनरेट करें और उनकी समीक्षा करें. परिणामों को किसी स्प्रेडशीट या छवि स्वरूपों (चित्र 6) में निर्यात करें ।
  3. चिंता के स्तर की माप के लिए EPM
    1. EPM प्रयोगों (एक dimly जलाया और शांत कमरे में) मौखिक gavage के बाद तनाव की स्थिति के तहत प्रदर्शन करते हैं ।
      नोट: सुनिश्चित करें कि प्रयोग एक बंद समय अंतराल में (जैसे, १२०० और १४०० के बीच) चला रहे हैं, क्योंकि circadian लय EPM15,17पर कुतर ' व्यवहार को प्रभावित कर सकते हैं । प्रयोग के दौरान अनावश्यक आंदोलनों और शोर से बचें ।
    2. परीक्षण के शुरू होने से पहले, सुनिश्चित करें कि EPM साफ और सूख गया है और वीडियो ट्रैकिंग प्रणाली का उपयोग करने के लिए तैयार है ।
    3. प्रयोग शुरू करने से पहले प्रयोगात्मक कमरे 30 मिनट के लिए अपने घर पिंजरे में चूहों स्थानांतरण ।
    4. EPM के चार भुजाओं के चौराहे पर एक चूहा रखें, प्रयोगकर्ता के सामने खुले हाथ का सामना करें ।
    5. चलाने के वीडियो ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर, के रूप में अच्छी तरह के रूप में मैंयुअल रूप से पशु के व्यवहार रिकॉर्ड, 5 मिनट के लिए ।
    6. यदि पशु EPM से गिर जाता है, इसे लेने और इसे वापस जगह EPM के एक ही बिंदु पर जहां यह गिर गया । विश्लेषण से इस जानवर के व्यवहार डेटा को छोड़ दें ।
      नोट: एक जोर शोर या आंदोलन हो सकता है स्थिर हथियार/ यदि एक जोर शोर प्रयोग के दौरान सुना है, विश्लेषण से उस पल में प्रयोग के दौर से गुजर पशु के व्यवहार डेटा को बाहर ।
    7. 5 मिनट के परीक्षण के अंत में, वीडियो ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर बंद करो और EPM से पशु को हटा दें । इसे वापस अपने घर पिंजरे में रखें ।
    8. अगले प्रयोग से पहले/पशु, एक विशुद्धीकरण डिटर्जेंट के साथ EPM साफ (जैसे, Quatricide) नल का पानी के बाद । कागज तौलिए के साथ उपकरण सूखी ।

4. वीडियो ट्रैकिंग प्रणाली द्वारा एकत्र आंकड़ों का विश्लेषण

  1. रिकॉर्ड किए गए डेटा के आधार पर, खुले बाहों में और बंद बाहों में बिताए गए समय की मात्रा का विश्लेषण करें; खुले हथियार, बंद हथियार, और केंद्र क्षेत्र के लिए किए गए प्रविष्टियों की संख्या; बंद बाहों में प्रवेश करने के लिए विलंबता; दूरी खुली बाहों में कूच, हथियार बंद, और केंद्र क्षेत्र में ।
    नोट: पशु एक क्षेत्र में जब शरीर द्रव्यमान का केंद्र है कि क्षेत्र में माना जाता है ।
  2. व्यवहार पर उपचार के प्रभाव का निर्धारण के साथ एक विश्लेषण प्रसरण (ANOVA) के साथ फिशर के कम से महत्वपूर्ण अंतर (एलएसडी) परीक्षण/Tukey की एकाधिक तुलना परीक्षण ।

Representative Results

वर्तमान प्रयोग परिकल्पना की जांच करता है कि exogenous कीटोंन अनुपूरक प्रशासित या तो जीर्ण (८३ दिन के लिए खिलाया) या जीर्ण (मौखिक रूप से 7 दिनों के लिए gavaged) पर एक anxiolytic प्रभाव पड़ता है दो महीने पुराने पुरुष Sprague-Dawley (एसपीडी) चूहों ( २५०-३५० छ) । जीर्ण प्रशासन निंनलिखित कीटोंन की खुराक शामिल: कम खुराक कीटोंन एस्टर (LKE; 1, 3-butanediol-acetoacetate diester, ~ 10 ग्राम/केजी/दिन, LKE), उच्च खुराक कीटोंन एस्टर (HKE; ~ 25 ग्राम/केजी/दिन, HKE), बीटा-hydroxybutyrate-खनिज नमक (bHB-S; ~ 25 ग्राम/ kg/दिन, KS), और bHB-S + मध्यम श्रृंखला ट्राइग्लिसराइड (MCT; ~ 25 ग्राम/किग्रा/दिन, KSMCT) । पुराने प्रयोगों के लिए, निम्नलिखित उपचार समूहों का उपयोग किया गया: KE, KS, और KSMCT (5 ग्राम/ नियंत्रण समूहों एसडी या एसडी पानी gavage (नियंत्रण) के साथ शामिल थे । सभी डेटा मतलब ± (SEM) के मानक त्रुटि के रूप में प्रतिनिधित्व किया गया था । ०.०५ p < जब परिणाम महत्वपूर्ण माना जाता था । महत्व एक तरह से ANOVA है फिशर एलएसडी परीक्षण के साथ निर्धारित किया गया था ।

पुरानी खिलाने के बाद, KSMCT समूह में चूहों नियंत्रण समूह की तुलना में खुले बाहों (पी = ०.००९४) में काफी अधिक समय बिताया । बंद बाहों में बिताया समय LKE, KS, और KSMCT समूहों में काफी कम था (पी = ०.०३८९, ०.००७७, और ०.००१९, क्रमशः), जबकि एस समूह के केंद्र में काफी अधिक समय खर्च (पी = ०.०२३९) नियंत्रण (एसडी) समूह की तुलना में ( चित्रा 7A) 18.

KS और KSMCT समूहों में चूहों खुले बाहों में काफी लंबी दूरी की यात्रा (पी = ०.०३६ और ०.०१६५), जबकि LKE, KS और KSMCT समूहों में चूहों काफी कम दूरी दिखाया बंद बाहों में कूच (पी = ०.०२५२, ०.०००४१, और ०.००३२, क्रमशः), नियंत्रण समूह (एसडी) (चित्रा 7B) की तुलना में. जब नियंत्रण समूह, KS और KSMCT समूहों की तुलना में अधिक से अधिक दूरी था केंद्र क्षेत्र में कूच (पी = ०.०२०६ और ०.०४८२, क्रमशः), जबकि KSMCT समूह में, बंद हथियारों के लिए पहले प्रवेश द्वार के लिए विलंबता काफी अधिक था के बाद जीर्ण खिला (पी = ०.००३८)18 (चित्रा 7C) ।

खुले बाहों में बिताया समय (पी = ०.०२८१) के समूह में बड़ा था मौखिक gavage के 7 दिनों के बाद, जबकि KE, KS, और KSMCT समूहों में, केंद्र में बिताए गए समय में कमी आई (p = ०.०००५, < ०.०००१, और = ०.०२३, क्रमशः), contro की तुलना में एल ग्रुप (फिगर 8A)18. KE और ks समूहों में, बंद बाहों में प्रविष्टियों की संख्या काफी कम थी (पी = ०.०४३६ और ०.०२३४, क्रमशः) प्रशासन के 7 दिनों के बाद (चित्रा 8B), जबकि KS समूह में चूहों को भी केंद्र में प्रवेश किया कम बार (पी = ०.०१९३), नियंत्रण (SD) समूह की तुलना में ।

Figure 1
चित्रा 1: उन्नत प्लस भूलभुलैया (EPM) चूहों के परीक्षण के लिए इस्तेमाल किया. प्रत्येक बांह 10 सेमी चौड़ा और ५० सेमी लंबा है, दो विपरीत हथियारों के साथ एक उठाया बढ़त के साथ खोला । दोनों बंद विपरीत हथियार 30 सेमी ऊंची दीवारों से सुसज्जित हैं । तल से रनवे की ऊंचाई ५५ सेमी है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए ।

Figure 2
चित्रा 2: प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष प्रकाश व्यवस्था के उदाहरण । सुनिश्चित करें कि प्रकाश स्रोत छत की ओर इशारा किया है, जबकि प्रयोगात्मक क्षेत्र के ऊपर प्रत्यक्ष प्रकाश अवरुद्ध है । यह महत्वपूर्ण है EPM प्रयोगों के दौरान अप्रत्यक्ष प्रकाश का उपयोग करने के लिए इसी तरह छाया के बिना सभी चार हथियार रोशन । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 3
चित्रा 3: आंदोलन ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर के प्रयोग सहायक बार । यह मुख्य संचालन के लिए पहुंच प्रदान करने के लिए बनाया गया है । बटन सामांय प्रयोग प्रक्रिया के अंतर्गत कार्य के अनुरूप होते हैं, जबकि केवल वर्तमान में स्वीकृत कार्य सक्रिय होते हैं । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 4
चित्रा 4: विषय ट्रैक एक लाल लाइन के साथ पशु आंदोलन के बाद के रूप में चिह्नित है । सीमा का समायोजन करके, पृष्ठभूमि में कमी की जा सकती है जब तक केवल पशु का पता चला है और लाल रेखा से ट्रैक । ट्रैक विषय के द्रव्यमान के केंद्र का अनुसरण कर रहा है, और वर्तमान स्थिति निर्देशांक संकेत कर रहे हैं. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 5
चित्रा 5: उन्नत प्लस भूलभुलैया (EPM) खुले हाथ में एक Sprague Dawley (एसपीडी) चूहे के साथ । प्रयोगात्मक सेट-अप का एक उदाहरण प्रदर्शित किया जाता है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 6
चित्रा 6: एक परीक्षण के दौरान जानवर के जमा आंदोलन ट्रैक । डेटा विश्लेषण के भाग के रूप में, ट्रैकिंग क्षेत्र में विषय के एकत्र पथ ट्रेस प्रदर्शित किया जा सकता है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 7
चित्रा 7: exogenous कीटोंन पूरकता की पुरानी खिलाने के ८३ दिनों के बाद EPM में एसपीडी चूहों के व्यवहार प्रतिक्रियाओं. इन पैनलों प्रतिनिधि EPM और आंदोलन-ट्रैकिंग प्रणाली18द्वारा एकत्र परिणाम दिखाओ । (a) KSMCT समूह ने खुली बाहों में समय का अधिक प्रतिशत खर्च किया, जबकि LKE, KS और KSMCT समूहों ने नियंत्रण (SD) समूह की तुलना में, बंद बाहों में कम समय बिताया । (ख) के KS और KSMCT समूहों खुली बाहों में अधिक दूरी की यात्रा की, जबकि LKE, KS, और KSMCT समूहों बंद बाहों में कम दूरी की यात्रा, नियंत्रण (एसडी) समूह की तुलना में कम चिंता दिखा । (ग) KSMCT समूह ने बाद में बंद शस्त्र में प्रवेश किया, नियंत्रण (एसडी) समूह की तुलना में कम चिंता का संकेत है. संक्षिप्त नाम: एसडी = मानक कुतर चाउ + पानी (25 ग्राम/kg शरीर का वजन (बीवीएससी) of water/दिन); LKE = SD + LKE (1, 3-butanediol-acetoacetate diester, 10 g/kg बीवीएससी/day); HKE = SD + HKE (25 g/kg बीवीएससी/day); KS = SD + beta-hydroxybutyrate-मिनरल सॉल्ट (bHB-S; 25 g/kg बीवीएससी/day); KSMCT = SD + bHB-S + मध्यम श्रृंखला ट्राइग्लिसराइड (MCT; 25 g/kg बीवीएससी/day); एसपीडी = Sprague-Dawley चूहा; EPM = ऊंचा प्लस भूलभुलैया (* p < ०.०५; * * p < ०.०१; * * * p < ०.००१; * * * * p < ०.०००१) । इस आंकड़े को तीव्र श्वसन संक्रमण एट अलसे संशोधित किया गया है । 18. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 8
चित्रा 8: exogenous कीटोंन पूरकता के मौखिक gavage के 7 दिनों के बाद एसपीडी चूहों के व्यवहार प्रतिक्रियाओं. प्रतिनिधि परिणाम EPM परीक्षण के माध्यम से एकत्र किए गए, एक आंदोलन ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर प्रणाली18का उपयोग कर । (क) के समूह ने खुली बाहों में समय का एक बड़ा प्रतिशत खर्च किया, जबकि ke, KS, और KSMCT समूहों के केंद्र में कम समय बिताया (नियंत्रण [एसडी] समूह की तुलना में), इस प्रकार कम चिंता का संकेत है । (B) नियंत्रण (SD) समूह की तुलना में, KE और KS समूहों में चूहों से बंद बाहों में कम प्रविष्टियां पाई गईं । संक्षिप्त नाम: एसडी = मानक कुतर चाउ + पानी (5 ग्राम/किलो बीवीएससी पानी/ KE = SD + कीटोंन एस्टर (1, 3-butanediol-acetoacetate diester, 5 g/kg बीवीएससी/day); KS = SD + beta-hydroxybutyrate-मिनरल सॉल्ट (bHB-S; 5 g/kg बीवीएससी/day); KSMCT = SD + bHB-S + MCT (5 g/kg बीवीएससी/day); एसपीडी = Sprague-Dawley चूहा; EPM = ऊंचा प्लस भूलभुलैया (* p < ०.०५; * * * p < ०.००१; * * * * p < ०.०००१) । इस आंकड़े को तीव्र श्वसन संक्रमण एट अलसे संशोधित किया गया है । 18. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Discussion

सामान्य तौर पर, कई सामान्य रूप से इस्तेमाल किया परीक्षण, जैसे प्रकाश अंधेरे विकल्प परीक्षण, सामाजिक संपर्क परीक्षण, और EPM परीक्षण, विभिन्न पशु मॉडलों में चिंता स्तर को मापने के लिए उपयोग किया जाता है. हालांकि, अकेले EPM परख एक उपयुक्त विधि की जांच करने के लिए, उदाहरण के लिए, ' कुतर चिंता के स्तर पर exogenous कीटोंन की खुराक के प्रभाव18,20।

EPM विधि का मुख्य लाभ यह है कि यह ' कुतर ' सहज proclivity की ओर अंधेरे, संलग्न रिक्त स्थान, ऊंचाइयों के अनकंडीशनल डर के अलावा और खुली जगहों के परिहार पर निर्भर करता है । दूसरी ओर, अंय चिंता की तरह व्यवहार का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया तरीकों जैसे बिजली के झटके के रूप में कुछ हानिकारक उत्तेजनाओं के लिए व्यवहार प्रतिक्रियाओं पर आधारित हैं, भोजन/पानी अभाव, जोर शोर, और शिकारी गंध के लिए जोखिम3। ये परीक्षण आमतौर पर एक वातानुकूलित प्रतिक्रिया में परिणाम है, जबकि EPM भी एक अधिक मानवीय विकल्प का प्रतिनिधित्व करता है । इसके अलावा, EPM अलग मस्तिष्क क्षेत्रों (जैसे, अंग क्षेत्रों, हिप्पोकैम्पस) और अंतर्निहित तंत्र (जैसे, गाबा, ग्लूटामेट, सेरोटोनिन, adenosine) चिंता व्यवहार2की भागीदारी का अध्ययन करने के लिए एक उपयोगी उपकरण हो सकता है ।

जब उपचार है कि पशुओं के लिए काफी तनावपूर्ण है आवेदन (जैसे, मौखिक gavage), यह महत्वपूर्ण है कि सभी जानवरों को उसी तरह से संभाला और एक ही व्यक्ति द्वारा कर रहे हैं, खासकर जब संभावित, सूक्ष्म anxiolytic प्रभाव का आकलन । यदि संभव हो तो, पीने के पानी में या एक स्वादिष्ट ' इलाज ' के माध्यम से दवा की शुरूआत एक पसंदीदा तरीका हो सकता है । एक ही राशि प्रत्येक जानवर के लिए प्रशासित है कि यह सुनिश्चित करने के लिए, एक मौखिक gavage इस्तेमाल किया जा सकता है । यौगिक के pharmacokinetic गुणों के आधार पर, यह आमतौर पर gavaging के बाद 1 घंटे के भीतर EPM पर जानवरों का परीक्षण करने के लिए सलाह दी जाती है । जब प्रयोगात्मक विषयों का चयन, यह उनके तनाव, लिंग, मद चक्र, और उंर, साथ ही शरीर के वजन, उद्देश्यों और परीक्षण पदार्थ2के अनुसार विचार करने के लिए महत्वपूर्ण है । उंर के संबंध में, जब EPM अध्ययन डिजाइन और डेटा की व्याख्या, यह विचार करना महत्वपूर्ण है कि खुले हाथ प्रविष्टियों का प्रतिशत रैखिकता21 साल की उंर के साथ बढ़ जाती है और EPM व्यवहार में उंर बढ़ने से संबंधित परिवर्तन तनाव विशेष है22।

जब एक EPM परीक्षण का आयोजन, वहां संभावित समस्याओं को संबोधित किया जाना चाहिए रहे हैं । कई बार जानवरों ग़ैर प्रवृत्तियों के कारण विश्लेषण से बाहर रखा जा करने की जरूरत है (जैसे, पशु क्षेत्र जहां यह रखा गया था कभी नहीं छोड़ता, लगभग तंत्र बंद हो जाता है, एक शोर या उपकरण के बाहर घटना से विचलित है). इसके अलावा EPM परीक्षण के साथ जटिलताओं उपचार जो बेहोशी या सक्रियता क्योंकि प्रभाव के इन प्रकार के EPM मापदंडों के माध्यम से मूल्यांकन करने की आवश्यकता के कारण शामिल हो सकते हैं ।

यह EPM परीक्षण के लिए पशुओं को बेनकाब करने के लिए महत्वपूर्ण है केवल एक बार खुले हथियारों पर कम गतिविधि और केंद्रीय मंच पर खर्च कम कुल समय EPM पर पहली जोखिम की तुलना में कुतर के दूसरे (दोहराया) जोखिम पर प्रदर्शन किया गया 14,15. इसलिए, EPM परीक्षण करने के लिए कुतर के एक एकल जोखिम की पुरजोर सिफारिश की है । हालांकि, अगर वहां EPM के लिए पहला और दूसरा जोखिम के बीच तीन सप्ताह की एक ंयूनतम है और EPM सेट अप दूसरे कमरे (अलग वातावरण) में ले जाया जाता है, जानवरों EPM परीक्षण से अधिक एक बार2से जांच की जा सकती है ।

EPM विभिंन सामग्रियों, आकारों में उपलब्ध है (जैसे, माउस या चूहे के लिए), और रंग, जो अध्ययन विषयों को चुनने पर विचार करने की जरूरत है । यह ध्यान में रखना है कि तंत्र पर पिछले जानवर द्वारा छोड़ दिया गंध बाद में जानवर के व्यवहार को बदल सकते है महत्वपूर्ण है । इसलिए, हम एक सामग्री है कि साफ करने के लिए आसान है, जैसे एक्रिलिक ग्लास (पारदर्शी नहीं) है, जो धोने के बाद गंध बनाए रखने नहीं है की एक EPM का उपयोग करने की सलाह देते हैं । लकड़ी से बने EPM तंत्र से बचें । अधिमानतः, EPM पर परीक्षण जानवरों के रंग से अलग है कि एक मैट रंग का उपयोग करें (जैसे, काले सफेद जानवरों का परीक्षण कर रहे हैं). पशु और बाड़े के बीच बेहतर इसके विपरीत, पशु का पता लगाने के बेहतर और उच्च विश्वसनीयता और परिणाम प्राप्त की परिशुद्धता (दूरी कवर, गति, ट्रैकिंग) । मैट ग्रे सामग्री से बने EPM उपकरण सफेद, काले और सफेद और काले जानवरों के साथ उपयोगी होते हैं ।

वीडियो ट्रैकिंग प्रणाली का एक और लाभ यह है कि EPM के अलावा, यह इस तरह के पानी भूलभुलैया के रूप में व्यवहार परीक्षण, की एक विस्तृत विविधता के साथ इसे स्थापित करने के लिए एक लचीला और आसान तरीका प्रदान करता है, खुले मैदान, प्लस/रेडियल बांह/टी-Y भूलभुलैया, जगह वरीयता, मजबूर तैराकी , और पूंछ निलंबन परीक्षण ।

सारांश में, इस अनुच्छेद के लक्ष्य के लिए EPM एक वीडियो ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर के साथ संयोजन में इस्तेमाल के लिए इकट्ठा और उपंयास anxiolytic उपचार के जवाब में व्यवहार परिवर्तन का विश्लेषण परीक्षण का वर्णन है । EPM के संभावित अनुप्रयोगों चिंता से संबंधित विकारों के उपचार के लिए नए विकसित औषधीय एजेंटों की प्री-स्क्रीनिंग शामिल हैं । anxiolytic और anxiogenic एजेंटों के अलावा दुर्व्यवहार के विभिन्न हार्मोनों और दवाओं के व्यवहारिक प्रभाव की भी जांच की जा सकती है । उंर बढ़ने और विभिंन तनाव के लिए जोखिम का प्रभाव भी मूल्यांकन किया जा सकता है । इस अध्ययन से यह निष्कर्ष निकला है कि जब उचित कदम उठाए जाते हैं तो EPM के उपयोग में कीटोंन पूरकता18,20के साथ जुड़े व्यवहार परिवर्तन का आकलन करने के लिए एक संवेदनशील विधि सिद्ध हुई है ।

Disclosures

D'Agostino, D.P., Kesl, एस., अर्नाल्ड, पी. रचनाएँ और श्रेष्ठ और निरंतर Ketosis के उत्पादन के लिए विधियाँ. अंतरराष्ट्रीय पेटेंट # पीसीटी/US2014/031237. दक्षिण फ्लोरिडा विश्वविद्यालय ।

कृषि, सी., D'Agostino, D.P., चिंता से संबंधित व्यवहार को कम करने के लिए Exogenous कीटोंन की खुराक । अनंतिम पेटेंट #62289749 । दक्षिण फ्लोरिडा विश्वविद्यालय ।

डोमिनिक पी D'Agostino और Csilla तीव्र श्वसन संक्रमण कंपनी कीटोंन प्रौद्योगिकियों LLC के सह मालिक हैं ।

इन हितों की समीक्षा और विश्वविद्यालय द्वारा प्रबंधित ब्याज नीतियों के अपने संस्थागत और व्यक्तिगत संघर्ष के अनुसार किया गया है । सभी लेखकों की घोषणा है कि ब्याज की कोई अतिरिक्त संघर्ष कर रहे हैं ।

Acknowledgments

यह काम एक ONR अनुदान N000141310062 और एक GLUT1D फाउंडेशन अनुदान #6143113500 (डोमिनिक पी D'Agostino), हंगरी की राष्ट्रीय विकास एजेंसी द्वारा समर्थन किया गया था (के तहत अनुदान नहीं । TIOP-1.3.1.-07/2-2F-2009-2008; Kovács Zsolt करने के लिए) और दिग्गजों मामलों के विभाग द्वारा (प्रकार के निशान के लिए) । लेखक इस विषय पर चल रहे अनुसंधान का समर्थन करने के लिए क्वेस्ट पोषण LLC धंयवाद करना चाहते है (Csilla तीव्र श्वसन संक्रमण) ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Elevated Plus Maze for mice and rats Coulbourn Instruments H10-35-EPM
SMART Video Tracking Software Harvard Apparatus SMART 3.0

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References

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ऊंचा प्लस भूलभुलैया परीक्षण वीडियो ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर के साथ संयुक्त Exogenous Ketogenic की खुराक के Anxiolytic प्रभाव की जांच करने के लिए
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Ari, C., D’Agostino, D. P., Diamond, D. M., Kindy, M., Park, C., Kovács, Z. Elevated Plus Maze Test Combined with Video Tracking Software to Investigate the Anxiolytic Effect of Exogenous Ketogenic Supplements. J. Vis. Exp. (143), e58396, doi:10.3791/58396 (2019).

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