Summary
Здесь мы представляем протокол вживлять клеток рака молочной железы в молочной железы жировой ткани в простой, менее инвазивные и легко ручка путь, и эта модель рака груди ортотопическая мыши с помощью надлежащего молочной железы жировой ткани среды может использоваться для изучения различных аспектов рак.
Abstract
Надлежащего животную модель имеет решающее значение для более глубокого понимания болезней. Животные модели созданы различными методами (подкожные инъекции, ксенотрасплантатов, генетические манипуляции, индукции химических реактивов и т.д.) имеют различные патологические знаки и играют важную роль в расследовании определенных аспектов заболевания. Хотя единой модели не могут полностью имитировать всей человеческой прогрессирования, ортотопическая модели заболеванием органов с надлежащей стромальные среды играют незаменимую роль в понимании заболеваний и скрининг потенциальных лекарственных препаратов. В этой статье мы опишем, как имплантата груди раковые клетки в молочной железы жировой ткани в простой, менее инвазивные и легко ручка путь, и следовать метастазов в отдаленные органы. С возможности надлежащего роста первичной опухоли, груди и сосков патологические изменения и высокой появления метастазов в других органах эта модель maximumly имитирует прогрессии рака молочной железы человека. С помощью этой модели можно исследовать первичного опухолевого роста в situ, Лонг отдаленных метастазов и микроокружения опухоли рака молочной железы.
Introduction
Рак молочной железы является основной причиной женской смертности во всем мире. С его постепенное увеличение числа случаев рак молочной железы стал серьезной проблемой для общественного здравоохранения1. Модели мышиных рака являются хорошие мосты между доклинических и клинических исследований, и хороший мимических мышиных болезни модель будет повысить точность исследований по болезни и медицины.
Рост первичной опухоли начинается хода злокачественного заболевания, в то время как метастазы и осложнений являются основными причинами смерти и качества жизни бедных в большинстве больных раком. Несколько мышиных модели используются для имитации патологии молочной железы человека рак2,3,4. Гранулы ксенотрансплантата модели широко используются для исследования рака понять патологические знаки и экран наркотиков для безопасности и эффективности в5,6,7. Чтобы имитировать рака молочной железы человека путем ориентации определенных онкогенов или генов усмирителя тумора8создаются генетически мышей (GEM). GEM имеют относительно простых и форме фон понять роль генов в раковой прогресса; Однако, искусственной среды и фон ограничены расследовать метастазов патологии и терапии9. Человеческих раковых клеток, хотя с человеческой патологии, может только быть имплантированы в иммунной недостаточным мышей, и недостаточности иммунной взаимодействия опухоли хост может привести к предвзятым результаты10.
Где инициирует твердых опухоль имеет прямое влияние на биологических и патологические знаки болезни11,12,13. Поскольку раковые прогресс итоги сложных взаимодействий между опухолевых клеток, стромальные клетки, иммунологии клетки, воспалительные клетки, факторы роста и протеаз, первичные опухоли имплантируются в situ обеспечит лучшее понимание и имитировать более точно, чем опухоли, вызванные химических агентов или подкожной инъекции опухоли клетки злокачественный процесс. Химические агенты, используется, чтобы вызвать опухоли могут быть вредны для исследователей и окружающей среды и даже запрещены в некоторых странах. Из-за отсутствия в среде молочной железы жировой ткани патологических хода подкожной инъекции могут отличаться с что в реальной молочной железы больных раком, чьи рак возникает и раздражает от молочной железы жировой ткани. Недостатки подкожной инъекции поощрять использование ортотопическая моделей для изучения роста опухоли. В более ранних исследованиях высоко метастатические опухоли MDA-MB-231, после семи ортотопическая трансплантации, указал на важность инъекции местоположение14. Недавно имплантации ортотопическая клеток рака молочной железы в молочной железы жировой ткани с хирургии был сообщил15,16. С молочной площадку окружающей среды, рост опухоли и миграции в отдаленные органы крышка весь процесс рака молочной железы на патологически соответствующих сайтов, что делает эту модель в миниатюре хода заболеваний человека. Однако после операции, кожа автоматически пытается исцелить себя, которая может принести потенциальную опасность вмешательства с нормальной груди Рак зарождение и исказить результаты.
Мы по сравнению некоторые модели рака молочной железы и создали минимально инвазивной ортотопическая модель для изучения потенциального воздействия наркотиков на груди Рак прогрессия17,18. В этом исследовании видео-протокол о том, как orthotopically придать груди раковые клетки молочной железы жировой ткани в простой, менее инвазивный способ. Этот метод впрыска ортотопическая без хирургии выгодно во многих отношениях. Во-первых операция является простой и быстрый, примерно в 1 минуту на мыши. Во-вторых, с медальоном первичной опухоли, начиная прямо патологических участков, она охватывает весь онкогенной процесса прогрессии рака молочной железы от роста опухоли в другие органы метастазов, который обеспечивает хорошую экспериментальных животных модель для изучения взаимодействие опухолевых клеток и микроокружения опухоли. Кроме того она может быть ценной моделью оценить эффекты лечения на всех стадиях рака молочной железы. Цель этого метода является предоставить животной модели для прогрессии рака груди maximumly имитировать человека.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Эксперименты на животных были проведены в соответствии с положения и общая рекомендация китайского экспериментальных животных администрации законодательства и были одобрены учреждение животных ухода и использования Комитета столицы медицинского университета (Ref нет. AEEI-2014-052). Были использованы самок мышей Balb/c, в возрасте от 6 до 8 недель.
1. Подготовка клетки и животных
- Один день до операции, брить волосы вокруг сосков четвертой подвергать зоне.
- Одной рукой крепко держать мышь на спине, чтобы убедиться, что мышь не будет свободно перемещаться, поверните вверх мыши, чтобы разоблачить его живот, чтобы оператор и затем использовать другой брить шерсть вокруг четвертой соски с электронных бритвы.
- Наносят тонким слоем удаления волос крем вокруг сосков для 30-60 сек, Избавьтесь от крем с дистиллированной водой и затем высушить мыши с мягкой бумагой.
- В день операции собирать мышиных груди раковые клетки (4T1-luc2), подсчитать ячейки и отрегулируйте плотность клеток до 2 x 105 клеток/мл в фосфат амортизированное saline (PBS) в стерильных microcentrifuge трубы и держать их на льду. Для каждой мыши готовится 1 x 104 клеток/50 мкл в 1-мл шприц.
2. ортотопическая инъекции
-
Анестезия мышей
- Побудить анестезии. Поставьте мышей в закрытом контейнере прозрачным и включите изофлюрановая 2% газа, чтобы анестезировать мышей для около 5 минут, пока они все лежат и Осень спит.
- Поддержание анестезии. Передавать отдельные анестезии маски мышей из контейнера, положить некоторые ветеринар мазь на их глаза, чтобы избежать сухости, держать мышей supinely со своими сосками, подвергается оператора и пусть они продолжают вдыхать изофлюрановая газ за несколько минут до инъекции была выполнена.
- Подтвердите успех анестезии, отсутствие рефлекс вывод щепотку мыс.
- Применить глазной мази в глаза мышей, чтобы предотвратить сухость глаз.
Примечание: Согласно размер контейнера и количество отдельных анестезии маски доступны, Группа мышей может быть под наркозом вместе и вводят один за другим индивидуальным анестезию.
-
Выполнение инъекции
- Одной рукой палатку кожу вокруг четвертой соска с помощью пинцета, чтобы настроить поднятой «туннель» для шприца следовать. Используйте другой стороны провести шприц с иглой, повернул вверх, чтобы войти в кожу подкожно в 5-10 мм от соска; затем следовать «туннель» до тех пор, пока кончик иглы приближается к соске, тщательно двигаться иглы кончиком в жировой ткани молочной железы до глаз иглы приходит под кончик соска, отменить пинцет и медленно вводить клетки.
- Поворот вокруг иглы немного и убрать шприц медленно; Используйте ватный тампон, нажмите иглы раной для s 10-20, чтобы убедиться, что есть нет утечки жидкости.
- Соблюдать четвертый соска для подтверждения успешного инъекций: один белый прозрачный плоский сфере с соском как центр может наблюдаться (рис. 1).
- Держите мышей, под наркозом еще минуту избежать давая мышей восстановить и двигаться слишком быстро, которая приведет к инъекций, ранение открыть и опухолевые клетки просачиваться.
3. Анализ роста опухоли и метастазов
Примечание: Первичные опухоли определяются прозрачным или блистер как шишки после инъекции, а также сферической или эллипсоид твердых кусков с соском спустя несколько дней. Рост опухоли оценивается объем опухоли и опухоли биолюминесценции.
- Чтобы установить объем опухоли, удерживайте кнопку мыши, с одной стороны. Подвергать его живот, чтобы оператор и использовать другой штангенциркуль опухоли Длина (L) и ширины (W). Рассчитайте объем опухоли (V) следующим образом.
V = (L x W2) / 2 - Чтобы захватить опухоли биолюминесценции, придать 150 мг/кг D-люциферин затылок мыши, 10 мин до изображений. Анестезировать мышей с 2% изофлюрановая газа на 5 мин и передавать их на отдельные анестезии маски, чтобы пусть они вдыхают изофлюрановая газа на 5 минут дольше. Следуя инструкциям изготовителя захвата изображения биолюминесценции первичной опухоли и метастазов, автоматическая выдержка, средний биннинга и f/стоп на 1.
4. Сбор первичной опухоли и метастазов органов для анализа
Примечание: Когда достижение цели этого эксперимента, или достижения конечной гуманной, первичной опухоли могут быть собраны для дальнейшего изучения. В этом исследовании опухоли удаляются на 4-5 недель после инъекции, когда объем опухоли достигает около 800 мм3. Легкие, удаляются в неделю 8.
-
Сбор первичной опухоли
- Выполните операцию в стерильных капот для поддержания в стерильной атмосфере. Анестезировать животных от изофлюрановая. Подтвердите успех анестезии, отсутствие мыс щепотку вывода рефлексов. Применить глазной мази в глаза мышей, чтобы предотвратить их от высыхания.
- Отделить опухоль из кожи с ножницами, прикапывают обезболивающее (трамадол 1 мг/мл, 1 капля около 50 мкл на мышь) для облегчения боли в послеоперационном периоде.
- Стежка кожи с шовного, срезают излишки шовного, драпировка от разреза.
- Вырезать первичной опухоли в половине с помощью скальпеля, положить 1/2 опухоли в параформальдегида 4% для дальнейшего гематоксилином и эозином (H & E) и иммуногистохимии и немедленно заморозить другие 1/2 с жидким азотом для западный blotting или РНК исследование, изоляции позже.
- После сшивания, теплый мышей с лампой, пока они восстановить, держать мышей в одной клетки до тех пор, пока полностью выздоровел. Непрерывно управлять 10 мг/кг трамадола с пероральная затравка для 3 d после операции.
-
Заготовка метастазов органов
- Усыпить мышей с передозировкой Пентобарбитал, открыть свои сундуки с ножницами, осторожно вынуть легких и мыть их с PBS. Легких метастазов очагов могут быть определены как Белая прозрачная шишки, которые являются морфологически различные и отличаются от обычных розовый легочной ткани.
- Положите легких в параформальдегида 4% для проверки метастазов, H & E пятнать.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
После успешного введения, один белый прозрачный плоский сфере с соском как вне поверхности вокруг центра может наблюдаться (рис. 1). Рост первичной опухоли может быть измерен объем опухоли и живых опухолевых клеток биолюминесценции (рис. 2). Объем опухоли и общего потока возросла в ходе эксперимента перед резекции. На ранней стадии не удается найти метастаз потому что случилось не вторичные опухоли или сильные сигналы биолюминесцентных первичной опухоли мешают обнаружения метастазов в небольших очагов с слабых сигналов. После резекции можно обнаружить и проанализировать биолюминесцентных сигнал от метастатических очагов отдаленные органы. Морфология как основной груди опухоль, так и легких секции были изучены с H & E окрашивание, хотя было расследовано ангиогенеза путем пятнать опухоли с маркером CD31 судно для microvessel плотности (МВД) (рис. 3).
Рисунок 1: фотографии до и после инъекции в молочной железы жировой ткани самок мышей Balb/c ортотопическая. Операция была выполнена, и фотографии были приняты в то время как мышей были под изофлюрановая наркозом. A, перед инъекцией, B, после инъекции.
Рисунок 2: объем и общего потока первичной опухоли были измерены от 7 дней после имплантации. Имплантация клеток подвеска генерируется повышенной первичной опухоли и в томе, который был визуализирован и определяется при помощи штангенциркуля, общего потока, который измерялся спектр системой. На рисунке показана биолюминесцентных изображения первичной опухоли и метастазов, наблюдается в различные моменты времени после 7 день имплантации. p/s = фотонов в секунду. Этот показатель был изменен с Чжан и др. 17. пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 3: H & E окрашивание и иммуногистохимическое окрашивание анализ первичных опухолей и метастазов легких. Тканей фиксировали в параформальдегида 4%, заливали в парафин и витражи. (A и B) разделы окрашивали гематоксилином и эозином (H & E). (C и D) разделы окрашивали antiCD31 антител. Коричневатого окрашивания указал CD31 + судов. Групп A и C настоящей первичной опухоли тканей, панелей, B и D представляют метастаз в легких. CD = Кластер дифференцировки. Увеличение используемых = 200 X. В баре шкалы = 50 мкм. Этот показатель был изменен с Чжан и др. 17. пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Клетки, используемые в данном исследовании, 4T1-luc2, мышиных тройной негативного груди раковые клетки с маркировки Люцифераза, которые являются полезным инструментом для инвестирования противоопухолевой и антиметастатической эффекты препаратов из-за их высокой захватнический характер2,19 . Luciferases, стабильной следующему поколению клеток, используются для обозначения живых опухолевых клеток, как в молочной железе, так и в других отдаленных органах20. В некоторых случаях гипоксии и дефицит питательных веществ в пределах опухоли результат снижение биолюминесцентных сигнала и объем первичной опухоли не является несовместимым с биолюминесцентных сигнала на более поздней стадии прогрессии опухоли. Техника сотовой ортотопическая инъекции (COI) клеточных суспензий может также выполняться с другими груди рак клеточных линий, например клетки человека MDA-MB-231 (неопубликованные данные). В этом исследовании, с молочной железы как окружающей среды, это модель надлежащего животных для изучения микроокружения опухоли, пересекая разговор между опухолевых клеток и стромальных клеток. Во время опухоль прогресс, в некоторых мышей сосок может изъязвляются, парша, растут красные грануляционной ткани, сгладить или даже исчезнуть, похож на то, что происходит в человека соски во время рака молочной железы. Мышь может испытывать дискомфорт с язвы; гуманные осторожность. Более соска изменения были найдены в мышей, используя эту технику ПОУ, чем с техникой микро инвазивной хирургии. Хирургические ортотопическая имплантации (SOI) гистологически нетронутым человеческие опухолевой ткани, по сравнению с сотовой ортотопическая инъекции (COI) клеточных суспензий, показывает выше злокачественные опухоли мочевого пузыря, легкого, желудка, почек, кишки и21 имитировать то, что видел в22пациентов.
С высоким уровнем заболеваемости метастазов, особенно легких метастазов, мышиных груди Рак в этом исследовании — хороший сингенных рака модель для изучения спонтанной миграции и вторжения, по сравнению с моделью искусственных метастазов, такие как хвост инъекции Вену. Деятельность клеток опухоли и персонажи также играют важную роль в метастазов. Другие клеточные линии, например клетки рака молочной железы человека MCF-7, даже насаждают ортотопическая инъекции в молочной железы жировой ткани иммунный дефицит мышей Balb/c, у нижней метастатической способности. С изменением ячеек или мышей, например гиперэкспрессия или вниз выражение гена эта технология может применяться в более научно-исследовательских областях.
Решающее значение операции этой инъекции является тщательно и медленно двигаться вверх кончик иглы от подкожно в молочной железы жировой ткани. Когда кончик шприца приближается к соске, оператор будет чувствовать себя настоянию из ткани. Поскольку мышь железы очень мал, только немного больше давления необходима позволить пройти по настоянию кончик шприца. Слишком большое давление приведет к оконечности проходящей через сальник и разорвать кожу, что приводит к сбою инъекции. Логарифмический фаза клетки, подвеска одноклеточных, стандартные операции протокола (СОП) и квалифицированные операторы все необходимые для уменьшения различия среди мышей. Поведение клеток опухоли имеет важное значение для формирования и повторяемые опухоли моделей. Урожай логарифмической этап клеток, когда они растут до около 80-90% слияния; клетки слишком низкой или слишком высокой плотности будет вмешиваться с моделью опухоли и привести к различиям между экспериментов. Подвеска одноклеточных также имеет важное значение, поскольку ячейка сгустки результат просчетов номер ячейки. Трипсин, ЭДТА решение или другие соответствующие методы выбраны для отсоединения ячеек в зависимости от цели эксперимента и целей исследователь заинтересован в. Зависит от плотности масштаба и клеток шприц, объем впрыска может варьироваться от 25 до 100 мкл. Количество 1 x 10-4 до 1 x 106 клеток обычно используется чтобы раздражать опухолевого роста согласно различных типов клеток. Трипановый синий пятнать используется для различения жизнеспособных клеток от мертвых одних. Более чем 95% клеток жизнеспособность рассматривается как хорошая ситуация для стимулирования быстрого опухолевого роста и метастазирования в естественных условиях. Они также подходят для любых других моделей опухоли при подготовке опухолевых клеток. Правильно штангенциркуль размер первичной опухоли и получить точный биолюминесцентных сигнал, меха вокруг соска следует быть удалены снова после того, как он растет обратно. Когда первичная опухоль увеличивается до большой массы и ее биолюминесцентных сигнал слишком сильный для исследователей, чтобы наблюдать другой орган метастазов (например, метастаз в легких), покрывают его с черной изоленты, прежде чем биолюминесценции изображения принимаются, или удалить его хирургия. Болеутоляющее средство может использоваться для послеоперационные боли.
Успешное прививка может привести к метастаз в легких: с встречаемость более чем на 90%, метастазов в грудь не вводят, кости или лимфатические узлы довольно часто, в то время как Целиакия метастазов редко. Вторичные опухоли являются полупрозрачными массы и можно отличить от окружающих нормальных тканей. Неточные заявления инъекции может привести к экспериментальной ошибки в местах, размер и форму и метастазированием опухоли. Утечку от плоской области после инъекции уменьшит размер опухоли, любой утечки из молочной железы в «туннель» приведет к цилиндрические длинные опухоль, которая будет препятствовать определение объема опухоли, когда мы используем цифровой штангенциркуль для Измерьте его. Подкожной инъекции вокруг молочной железы жировой ткани редко приводят к метастазы в легких и не подходят для отдаленных метастазов связанные исследования. Чтобы сделать прививки стабильной и уменьшить риск утечки, Matrigel может использоваться при приостановке опухолевых клеток. Однако Matrigel не одного растворителя, она рассматривается как своего рода внеклеточного матрикса (ECM), и некоторые виды гель даже содержат факторы, которые могут мешать экспериментов. В эксперименте, направленных на микроокружения опухоли, ECM, пересекая говорить среди опухолевых клеток или с стромальные клетки, это лучше избегать использования Matrigel. Для вводили клетки с Люцифераза тег D-люциферин, субстрат Люцифераза вводится для связывания живых опухолевых клеток в мышах. В этом исследовании, динамика биолюминесценции в vivo предложил на 10 минут после инъекции D-люциферин, биолюминесцентных сигнал достичь пика и может быть стабильным в течение 10-15 минут (варьируется между различными мышей), ли с Внутрибрюшинное или подкожной инъекции. Учитывая, что проверенный препарат вводят внутрибрюшинно, чтобы избежать взаимодействия испытания препарата с D-люциферин и уменьшить перитонеальный раздражение, предлагается подкожных инъекций.
В заключение ортотопическая инъекции клеток рака молочной железы, изложенных в настоящем документе является очень полезным и мощным инструментом в изучении патологии и прогрессирования рака молочной железы. Легко обрабатывать и может быть выполнена быстро. Первичной опухоли происходит в молочной железе с высоким появлением метастазов, который maximumly имитирует патофизиологических процесс карциномы груди человека.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы не имеют ничего сообщать.
Acknowledgments
Авторы хотели бы поблагодарить Фонд национального естественных наук Китая (Грант № 81873111, 81673924, 81774039, 81503517), Пекин фонда естественных наук (Грант № 7172095, 7162084, 7162083) и Сюй ся Фонд Пекин больницы Традиционная китайская медицина (Грант no, xx201701). Мы благодарим профессор Чан-Чжэнь Лю, от экспериментальный научно-исследовательский центр, Китай Академии медицинских наук, биолюминесцентных изображений.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| anesthesia machine | Midmark Corporation, Dayton, OH, USA | Matrx VMS | anesthesia |
| In-Vivo Imaging System | PerkinElmer | IVIS Spectrum | used for bioluminescence detecion |
| isoflurane | Hebei yipin chemical reagents company | O21400 | anesthesia |
| 1 ml syringe | Becton,Dickinson and Company | A257 | cell injection |
| digital caliper | Shang Hai Shen Han Measuring Tools Co., Ltd. | S-H | volume measurement |
| tramadol | Mundipharma company | - | pain killer |
| D-luciferin | Gold Biotechnology Inc. | LUCK-1G | used for bioluminescence detecion |
| The primary antibody against cluster of differentiation (CD) 31 | Abcam | ab28364 | used for MVD detection |
| hematoxylin and eosin staining kit | Beijing Zhong Shan Jinqiao Biotechnology Co., Ltd. | ZLI-9615 | histology |
| hair removal cream | Veet | - | hair removal cream |
| Carbomer Eye Gel | Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH | - | ophthalmic ointment |
| sewing needle | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd. | 17U0302J | suture |
References
- Torre, L. A., et al. Global cancer statistics. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 65 (2), 87-108 (2012).
- Rashid, O. M., Takabe, K. Animal models for exploring the pharmacokinetics of breast cancer therapies. Expert Opinion on Drug Metabolism & Toxicology. 11 (2), 221-230 (2015).
- Wagner, K. U. Models of breast cancer: quo vadis, animal modeling. Breast Cancer Research. 6 (1), 31-38 (2004).
- Horas, K., Zheng, Y., Zhou, H., Seibel, M. J. Animal models for breast cancer metastasis to bone: opportunities and limitations. Cancer Investigation. 33 (9), 459-468 (2015).
- Kawaguchi, T., Foster, B. A., Young, J., Takabe, K. Current Update of Patient-Derived Xenograft Model for Translational Breast Cancer Research. Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. 22 (2), 131-139 (2017).
- Wright, L. E., et al. Murine models of breast cancer bone metastasis. BoneKEy Reports. 5, 804 (2016).
- Cassidy, J. W., Batra, A. S., Greenwood, W., Bruna, A. Patient-derived tumour xenografts for breast cancer drug discovery. Endocrine-Related Cancer. 23 (12), T259-T270 (2016).
- Stiedl, P., Grabner, B., Zboray, K., Bogner, E., Casanova, E. Modeling cancer using genetically engineered mice. Methods in Molecular Biology. 1267, 3-18 (2015).
- Menezes, M. E., et al. Genetically engineered mice as experimental tools to dissect the critical events in breast cancer. Advances in Cancer Research. 121, 331-382 (2014).
- Talmadge, J. E., Singh, R. K., Fidler, I. J., Raz, A. Murine models to evaluate novel and conventional therapeutic strategies for cancer. The American Journal of Pathology. 170 (3), 793-804 (2007).
- Spaw, M., Anant, S., Thomas, S. M. Stromal contributions to the carcinogenic process. Molecular Carcinogenesis. 56 (4), 1199-1213 (2017).
- Joyce, J. A., Pollard, J. W. Microenvironmental regulation of metastasis. Nature Reviews Cancer. 9 (4), 239-252 (2009).
- Hanahan, D., Weinberg, R. A. Hallmarks of cancer: the next generation. Cell. 144 (5), 646-674 (2011).
- Yano, S., et al. Tumor-targeting adenovirus OBP-401 inhibits primary and metastatic tumor growth of triple-negative breast cancer in orthotopic nude-mouse models. Oncotarget. 7 (51), 85273-85282 (2016).
- Kocaturk, B., Versteeg, H. H. Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth. Journal of Visualized Experiments. (96), e51967 (2015).
- Tavera-Mendoza, L. E., Brown, M. A less invasive method for orthotopic injection of breast cancer cells into the mouse mammary gland. Lab Animal. 51 (1), 85-88 (2017).
- Zhang, Y., et al. Establishment of a murine breast tumor model by subcutaneous or orthotopic implantation. Oncology Letters. 15 (5), 6233-6240 (2018).
- Zhang, Y., et al. Gubenyiliu II Inhibits Breast Tumor Growth and Metastasis Associated with Decreased Heparanase Expression and Phosphorylation of ERK and AKT Pathways. Molecules. 22 (5), (2017).
- Kwon, Y. S., Lee, K. S., Chun, S. Y., Jang, T. J., Nam, K. S. Suppressive effects of a proton beam on tumor growth and lung metastasis through the inhibition of metastatic gene expression in 4T1 orthotopic breast cancer model. International Journal of Oncology. 49 (1), 336-342 (2016).
- Kalra, J., et al. Validating the use of a luciferase labeled breast cancer cell line, MDA435LCC6, as a means to monitor tumor progression and to assess the therapeutic activity of an established anticancer drug, docetaxel (Dt) alone or in combination with the ILK inhibitor, QLT0267. Cancer Biology & Therapy. 11 (9), 826-838 (2011).
- Hoffman, R. M. Orthotopic metastatic mouse models for anticancer drug discovery and evaluation: a bridge to the clinic. Investigational New Drugs. 17 (4), 343-359 (1999).
- Hoffman, R. M. Patient-derived orthotopic xenografts: better mimic of metastasis than subcutaneous xenografts. Nature Reviews Cancer. 15, 451 (2015).
