Summary
هنا، نقدم بروتوكولا لزرع خلايا سرطان الثدي في لوحة الدهون الثديية في بسيطة وأقل طريقة الغازية، وسهل التعامل، ويمكن استخدام هذا النموذج سرطان الثدي أورثوتوبيك الماوس مع بيئة سليمة وسادة الدهون الثديية للتحقيق في مختلف جوانب السرطان.
Abstract
نموذج حيوان سليم أمر حاسم لفهم أفضل للأمراض. الحيوان نماذج المنشأة بطرق مختلفة (الحقن تحت الجلد، وتكثيفها، والتلاعب بالجينات، وتحريض الكواشف الكيميائية، إلخ) بمختلف الشخصيات المرضية وتلعب أدواراً هامة في التحقيق في جوانب معينة من الأمراض. على الرغم من أنه لا يوجد نموذج وحيد تماما محاكاة تطور المرض البشري برمته، نماذج المرض أجهزة أورثوتوبيك مع بيئة stromal مناسبة تلعب دوراً لا غنى عنه في فهم الأمراض وفحص للمخدرات المحتملة. في هذه المقالة، نحن تصف كيفية زرع خلايا سرطان الثدي في لوحة الدهون الثديية في بسيطة وأقل طريقة الغازية، وسهولة التعامل، واتبع ورم خبيث على الأجهزة البعيدة. مع ميزات السليم نمو الورم الرئيسي، وسرطان الثدي والحلمة التغيرات المرضية، وحدوث ارتفاع لورم خبيث الأجهزة الأخرى، يحاكي هذا النموذج مجانية تقدم سرطان الثدي البشرية. يمكن أن يحقق الورم الرئيسي النمو في الموقعوورم خبيث طويلة بعيدة وورم المكروية من سرطان الثدي باستخدام هذا النموذج.
Introduction
سرطان الثدي هو السبب الرئيسي لوفيات الإناث في جميع أنحاء العالم. مع أن تزايد تدريجيا، أصبح سرطان الثدي يشكل تحديا خطيرا للصحة العامة1. نماذج سرطان مورين جسور جيدة بين الدراسات السريرية والاكلينيكية، ونموذج مرض مورين تقليد جيد سيتم زيادة دقة البحوث المتعلقة بالمرض والطب.
نمو الورم الابتدائي يبدأ تقدم الأمراض الخبيثة، بينما ورم خبيث والمضاعفات هي الأسباب الرئيسية للوفاة والصفات حياة الفقراء في معظم مرضى السرطان. وتستخدم عدة نماذج مورين لتقليد علم الأمراض البشرية الثدي السرطان2،،من34. نماذج إكسينوجرافت تستخدم على نطاق واسع لدراسة السرطان لفهم الشخصيات المرضية والأدوية الشاشة لسلامة وكفاءة5،،من67. الفئران المهندسة وراثيا (GEM) يتم إنشاؤها لتقليد سرطان الثدي البشرية باستهداف بعض المسرطنة أو ورم المكثف الجينات8. جوهره لديهم خلفية بسيطة نسبيا ويرتدون الزي الرسمي لفهم دور الجينات في التقدم سرطانية؛ غير أن البيئة الاصطناعية والخلفية تقتصر على التحقيق في علم الأمراض خبيث والمتعلقة بالعلاجات9. الخلايا السرطانية البشرية، على الرغم من أن مع السمات المرضية البشرية، يمكن إلا يكون مزروع في الفئران التي تفتقر إلى المناعة، وعدم كفاية التفاعل المناعي المضيف الورم قد يؤدي إلى نتائج متحيزة10.
حيث يبدأ الورم الصلبة له تأثير مباشر على الأحرف البيولوجية والمرضية للمرض11،،من1213. نظراً للتقدم سرطانية نتيجة معقدة من التفاعلات بين الخلايا السرطانية والخلايا اللحمية وخلايا المناعة، والخلايا الملتهبة، وعوامل النمو والبروتياز، الأورام الأولية مزروع في الموقع سوف توفر رؤية أفضل وتقليد الخلايا السرطانية عملية أكثر دقة من الأورام الناجمة عن المواد الكيميائية أو حقن تحت الجلد للورم. العوامل الكيميائية المستخدمة للحث على أورام قد تكون ضارة بالبيئة والباحثين وممنوعة حتى في بعض البلدان. التقدم المرضية الحقن تحت الجلد بسبب غياب بيئة وسادة الدهون الثديية، قد تختلف مع أن السرطان الذي ينشأ في مرضى سرطان الثدي حقيقية، ويزعج من لوحة الدهون الثديية. عيوب الحقن تحت الجلد تشجيع استخدام نماذج أورثوتوبيك لدراسة نمو الورم. في البحوث السابقة، أورام MDA-ميغابايت-231 المنتشر جداً، وضعت بعد سبعة أورثوتوبيك الزرع، أشار إلى أهمية موقع حقن14. في الآونة الأخيرة، كان أورثوتوبيك زرع خلايا سرطان الثدي في لوحة الدهون الثديية مع جراحة عنها15،16. مع البيئة لوح الثديية ونمو الورم وهجرة إلى الأجهزة البعيدة تغطية العملية برمتها من سرطان الثدي في المواقع ذات الصلة مرضية، الأمر الذي يجعل هذا نموذج مصغر للتقدم المحرز في الأمراض التي تصيب الإنسان. ومع ذلك، بعد الجراحة، الجلد تلقائياً يحاول شفاء نفسه، التي قد تجلب المخاطر المحتملة للتدخل مع نشأة سرطان الثدي العادي والتحيز في النتائج.
وقد مقارنة بعض نماذج سرطان الثدي وأنشأنا نموذج أورثوتوبيك مينيملي للتحقيق في تأثير الأدوية المحتملة في الثدي سرطان التقدم17،18. في هذه الدراسة، بروتوكول فيديو حول كيفية أورثوتوبيكالي بحقن خلايا سرطان الثدي لوح الدهون الثديية في بسيطة، ويقدم طريقة أقل الغازية. هذا الأسلوب أورثوتوبيك الحقن بدون جراحة مفيد في نواح كثيرة. أولاً، العملية بسيطة وسريعة، حوالي 1 دقيقة للماوس. ثانيا، مع البؤر الورم الرئيسي بدءاً من المواقع حق المرضية، وهو يغطي ورمي كل عملية تطور سرطان الثدي من نمو الورم إلى ورم خبيث الأجهزة الأخرى، الذي يقدم نموذجا جيدا من حيوانات تجريبية لدراسة التفاعل بين الخلايا السرطانية وورم المكروية. وإلى جانب ذلك، يمكن أن يكون نموذجا قيماً لتقدير آثار العلاج في جميع مراحل الإصابة بسرطان الثدي. والهدف من هذا الأسلوب تقديم نموذج حيوان لتطور سرطان الثدي البشرية تقليد مجانية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
التجارب على الحيوانات وأجريت وفقا للحكم والتوصية العامة للتشريع إدارة الحيوانات التجريبية الصيني ووافقت عليها مؤسسة رعاية الحيوان واستخدام اللجنة للعاصمة الطبية جامعة (Ref لا. AEEI-2014-052). واستخدمت النساء بالب/ج الفئران الذين تتراوح أعمارهم بين 6 إلى 8 أسابيع.
1. إعداد الخلايا والحيوانات
- يوم واحد قبل العملية، وحلق الشعر حول الحلمة الرابعة لفضح في مجال التشغيل.
- استخدام يدا واحدة لعقد الماوس محكم في الخلف للتأكد من سوف الماوس لا التحرك بحرية والماوس للكشف على البطن للمشغل بدوره، وثم استخدام جهة أخرى حلق الفراء حول الحلمة الرابعة مع آلة حلاقة إلكترونية.
- وضع طبقة رقيقة من إزالة الشعر كريم حول الحلمة عن 30-60 ثانية ونظيفة بعيداً كريم بماء مقطر ثم جاف الماوس مع الورق الناعم.
- في يوم العملية، جمع خلايا سرطان الثدي موريني (4T1-luc2) وحساب عدد الخلايا، وضبط كثافة الخلية إلى 2 × 105 خلايا/مل في مخزنة الفوسفات المالحة (PBS) في أنابيب ميكروسينتريفوجي العقيمة وإبقائهم على الجليد. لكل الماوس، أعد 1 × 104 خلايا/50 ميليلتر في حقنه 1 مل.
2-أورثوتوبيك حقن
-
تخدير فئران
- حمل التخدير. وضعت الفئران في حاوية مغلقة شفافة وتشغيل الغاز isoflurane 2% تخدير الفئران لمدة حوالي 5 دقائق، حتى أنهم جميعا الاستلقاء وسقوط نائماً.
- المحافظة على التخدير. نقل الفئران من الحاوية لأقنعة التخدير الفردية ووضع بعض المرهم البيطري في عيونهم تجنب جفاف، والحفاظ الفئران سوبينيلي مع حلمات بهم يتعرضون للمشغل، والسماح لهم بمواصلة استنشق الغاز إيسوفلوراني لبضع دقائق حتى وقد أجريت الحقن.
- تأكيد نجاح التخدير بانعدام منعكس سحب قرصه أخمص القدمين.
- تطبيق مرهم العيون لعيون الفئران لمنع جفاف العين.
ملاحظة: طبقاً لحجم الحاوية والعدد من الأقنعة التخدير الفردية المتاحة، يمكن تخديره معا مجموعة من الفئران وحقنه واحدة تحت التخدير الفردية.
-
أداء حقن
- استخدم يد واحدة لخيمة حتى الجلد حول الحلمة الرابعة مع ملاقط، لإعداد المرفعة "نفق" للمحاقن لمتابعة. استخدام اليد الأخرى لعقد حقنه بإبرة تحولت صعودا إدخال الجلد تحت الجلد في 5-10 ملم من الحلمة؛ ثم اتبع "النفق" حتى تلميح إبرة يقترب من الحلمة، والانتقال بعناية الإبرة تلميح إلى لوحة الدهون الثديية حتى يأتي العين إبرة تحت طرف الحلمة، تجاهل الملاقط، وحقن الخلايا ببطء.
- دورة حول الإبرة قليلاً، وسحب المحاقن ببطء؛ استخدم مسحه القطن للصحافة الإبرة الجرح ل 10-20 s التأكد من وجود لا تسرب السوائل.
- مراقبة الحلمة الرابعة لتأكيد حقنه ناجح: يمكن ملاحظة واحدة المجال مسطح شفاف أبيض مع الحلمة كالمركز (الشكل 1).
- الحفاظ على الفئران تخديره لدقيقة أخرى لتجنب ترك الفئران استرداد والتحرك بسرعة كبيرة جداً، مما سوف يسبب حقن الجرح لفتح والخلايا السرطانية تسرب.
3-تحليل نمو الورم وورم خبيث
ملاحظة: الأورام الأولية يتم تحديد المطبات شفافة أو الشبيهة بنفطة بعد الحقن، والكتل الصلبة كروية أو الاهليلجي مع الحلمة بعد بضعة أيام. يتم تقييم نمو الورم بحجم الورم والورم الإضاءة الحيوية.
- لإنشاء حجم الورم، أمسك الماوس مع يد واحدة. كشف على البطن للمشغل واستخدام اليد الأخرى لكليبر الورم الطول (L) والعرض (W). حساب حجم الورم (V) على النحو التالي.
V = (L x W2)/2 - لالتقاط الإضاءة الحيوية ورم، حقن 150 مغ/كغ لوسيفرين د في مؤخرة العنق الماوس، 10 دقيقة قبل التصوير. تخدير الفئران مع الغاز إيسوفلوراني 2% لمدة 5 دقائق وتحويلها إلى أقنعة التخدير الفردية للسماح لهم استنشق الغاز إيسوفلوراني لأطول مدة 5 دقائق. بناء على تعليمات الشركة المصنعة، التقاط الصور الإضاءة الحيوية الورم الرئيسي وورم خبيث، مع وقت التعرض التلقائي، binning المتوسطة، ووقف و/1.
4-حصاد الورم الرئيسي وأجهزة ورم خبيث للتحليل
ملاحظة: عند تحقيق الغرض من هذه التجربة، أو الوصول إلى نقطة النهاية إنسانية، يمكن أن تحصد الورم الرئيسي لمزيد من الدراسة. في هذه الدراسة، يتم إزالة الأورام في 4 إلى 5 أسابيع بعد الحقن، عندما يصل حجم الورم إلى حوالي 800 ملم3. تتم إزالة الرئتين في الأسبوع 8.
-
حصاد الورم الرئيسي
- إجراء عملية جراحية في غطاء معقم للحفاظ على أجواء معقمة. تخدير الحيوانات قبل إيسوفلوراني. تأكيد نجاح التخدير بالافتقار إلى أخمص القدمين قرصه انسحاب ردود الفعل. تطبيق مرهم العيون لعيون الفئران لمنعها من الجفاف.
- فصل الورم من الجلد مع مقص، دروبويسي مسكن (1 ملغ/مل ترامادول، 1 قطره من حوالي 50 ميليلتر للماوس) لتخفيف الألم بعد العمل الجراحي.
- غرزة الجلد خياطة جراحية، قطع خياطة الزائدة، ثني قبالة الشق.
- قطع الورم الرئيسي في النصف مع مشرط، وضع 1/2 الورم بارافورمالدهيد 4% لمزيد من توضع وتلطيخ (H & E) ويوزين وإيمونوهيستوتشيميستري، وتجمد فورا أخرى 1/2 مع النيتروجين السائل النشاف الغربية أو الحمض النووي الريبي دراسة عزلة في وقت لاحق.
- بعد خياطة، الحارة الفئران بمصباح حتى أنهم استرداد، تبقى الفئران في أقفاص مفردة حتى شُفي تماما. استمرار إدارة ترامادول 10 مغ/كغ مع تزقيمية شفوي لمد 3 بعد الجراحة.
-
حصاد الأجهزة ورم خبيث
- Euthanize الفئران بجرعة زائدة من بينتوباربيتال وفتح صدورهم مع المقص ولطف إخراج الرئتين وغسلها ببرنامج تلفزيوني. يمكن تحديد البؤر ورم خبيث في الرئة كما أبيض شفاف المطبات التي هي مختلفة ويمكن تمييزها من أنسجة الرئة الطبيعي الوردي شكلياً.
- وضع الرئتين بارافورمالدهيد 4% للتحقق من ورم خبيث واسطة تلطيخ ح & ه.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
بعد حقنه ناجح، واحد المجال مسطح شفاف أبيض مع الحلمة كالسطح خارج مدار مركز يمكن ملاحظتها (الشكل 1). نمو الورم الرئيسي يمكن أن يقاس بحجم الورم والورم المعيشة الخلية الإضاءة الحيوية (الشكل 2). زيادة حجم الورم والتدفق الإجمالي خلال التجربة قبل بتر. في مرحلة مبكرة، لا يمكن العثور على ورم خبيث لأنه لم يحدث أي ورم ثانوي أو إشارات طرحه قوي للورم الرئيسي عرقلة كشف البؤر الصغيرة ورم خبيث مع إشارات ضعيفة. بعد بتر، يمكن الكشف عن إشارة طرحه من البؤر المنتشر من الأجهزة البعيدة وتحليلها. ودرست مورفولوجية كلا من أقسام الرئة وورم الثدي الأولية مع تلطيخ ح & ه، بينما كان التحقيق في الأوعية تلطيخ الورم مع علامة السفينة CD31 للكثافة ميكروفيسيل (MVD) (الشكل 3).
رقم 1: صور قبل وبعد الحقن أورثوتوبيك في لوحة الدهون الثديية من الإناث بالب/ج الفئران. تم تنفيذ العملية، وتم التقاط الصور بينما الفئران تحت التخدير إيسوفلوراني. أ، قبل الحقن، ب، بعد الحقن.
رقم 2: تم قياس حجم والتدفق الإجمالي للورم الرئيسي من 7 أيام بعد غرس. ولدت غرس تعليق خلية ورم الرئيسي زيادة في الحجم، التي كانت تصور وتحديد باستخدام الفرجار، وفي التدفق الإجمالي، الذي تم قياسه بواسطة نظام الطيف. ويوضح الشكل صور طرحه من الأورام الأولية وورم خبيث لاحظ في نقاط زمنية مختلفة بعد يوم 7 من زرع. p/s = الفوتونات/الثانية. وقد تم تعديل هذا الرقم من تشانغ et al. 17- الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3: ح & ه تلطيخ والمناعي تلطيخ تحليل الأورام الأولية والرئة ورم خبيث. كانت ثابتة في 4% بارافورمالدهيد الأنسجة وجزءاً لا يتجزأ من البارافين والملون. (أ و ب) أقسام كانت ملطخة الهيماتوكسيلين وويوزين (H & E). (ج ود) الأقسام كانت ملطخة بجسم antiCD31. وأشارت إلى تلطيخ البنى CD31 + السفن. لوحات A وأنسجة الورم الرئيسي الحالي ج ، يقدم لوحات ب ود ورم خبيث في الرئة. القرص المضغوط = الكتلة من التفريق. التكبير المستخدمة = 200 X. شريط المقياس = 50 ميكرومتر. وقد تم تعديل هذا الرقم من تشانغ et al. 17- الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
الخلايا المستخدمة في هذه الدراسة هي 4T1-luc2، خلايا سرطان الثدي السلبي الثلاثي موريني بوصفها لوسيفراس، التي أداة مفيدة للاستثمار آثار انتيتومور وأنتيميتاستاتيك للمخدرات بسبب بهم الطبيعة الغازية عالية2،19 . لوسيفيراسيس، مستقرة للخلية الجيل القادم، وتستخدم للإشارة إلى الورم المعيشة خلايا الغدة الثديية وغيرها من الأجهزة البعيدة20. وفي بعض الحالات، نقص وعوز المغذيات داخل الورم نتيجة انخفاض في إشارة طرحه، وحجم الورم الرئيسي لا تتعارض مع إشارة طرحه في مرحلة لاحقة من تطور الورم. يمكن أيضا إجراء تقنية حقن أورثوتوبيك الخلوية (COI) تعليق خلية مع الثدي سرطان الخلية خطوط أخرى، مثل الخلايا البشرية MDA-ميغابايت-231 (بيانات غير منشورة). في هذه الدراسة، مع الغدة الثديية بيئتها، ونموذج حيوان سليم للدراسة وورم المكروية، عبور الحديث بين الخلايا السرطانية والخلايا اللحمية. أثناء التقدم الورم، في بعض الفئران، الحلمة يمكن أن تتقرح أو جرب، تنمو الأنسجة إنتاج الكريات الحمراء، تسطيح أو حتى تختفي، مماثل لما يحدث في حلمات البشرية خلال سرطان الثدي. الفئران قد تواجه مشقة مع تقرحات؛ وينبغي أن تؤخذ الرعاية الإنسانية. قد وجد المزيد من التغيير الحلمة في الفئران باستخدام هذه التقنية المحيط الهندي مما مع تقنية جراحة صغيرة. غرس أورثوتوبيك الجراحية (SOI) من الأنسجة الورم البشري الأشيع سليمة، بالمقارنة مع حقن أورثوتوبيك الخلوية (COI) تعليق خلية، يظهر أعلى أنواع السرطان الخبيث في المثانة والرئة والمعدة، والكلى والقولون21 التي تقليد ما نشهده في22من المرضى.
مع نسبة عالية من ورم خبيث، وبخاصة الرئة ورم خبيث، نموذج سرطان الثدي مورين المنشأة في هذه الدراسة نموذج سرطان سينجينيك جيدة لاستكشاف الهجرة العفوية والغزو، بالمقارنة مع طراز خبيث اصطناعية، مثل حقن الوريد الذيل. أنشطة خلية الورم والأحرف كما تؤدي أدواراً هامة في ورم خبيث. خطوط الخلية الأخرى، مثل خلية سرطان الثدي البشرية MCF-7، حتى مزروع بحقن أورثوتوبيك في لوحة الدهون الثديية من نقص المناعة بالب/ج الفئران، لديها قدرة المنتشر أقل. مع التعديل من الخلايا أو الفئران، مثل التعبير المفرط أو أسفل-التعبير عن بعض الجينات، ويمكن تطبيق هذه التكنولوجيا في أكثر المجالات البحثية.
عملية حاسمة لحقن هذا بعناية وبطء التحرك حتى طرف الإبرة، من تحت الجلد إلى لوحة الدهون الثديية. عندما يقترب طرف المحقن الحلمة، المشغل سوف يشعرون بإصرار من الأنسجة. منذ الغدة الماوس صغير جداً، مطلوب إلا قليلاً المزيد من الضغوط للسماح تلميح حقنه يمر الإصرار. سيؤدي إلى الكثير من الضغوط في تلميح مرورا بالغدة وكسر الجلد، والذي يؤدي إلى فشل الحقن. خلايا لوغاريتمي المرحلة وتعليق خلية واحدة، وبروتوكول التشغيل القياسية (SOP) والمشغلين المهرة كل ما يلزم للحد من التفاوت بين الفئران. ورم الخلايا السلوك مهم للتشكيل وتكرار النماذج الورم. حصاد الخلايا لوغاريتمي المرحلة عندما يكبرون إلى حوالي 80% إلى 90% التقاء؛ كثافات منخفضة جداً أو مرتفعة جداً خلية سوف تتداخل مع نموذج الورم وتؤدي الاختلافات بين التجارب. تعليق خلية واحدة من المهم أيضا منذ كتل الخلية النتيجة في الحسابات الخاطئة لعدد الخلايا. ويتم اختيار التربسين، حلاً يدتا أو غيرها من الأساليب المناسبة لفصل الخلايا وفقا لأهداف التجربة والأهداف الباحث المهتمة في. تعتمد على كثافة الجدول والخلية المحاقن، حجم الحقن يمكن أن تختلف من 25 إلى 100 ميليلتر. مقدار 1 × 104 إلى 1 × 106 خلايا يستخدم عادة لتهيج نمو الورم وفقا لأنواع مختلفة من الخلايا. تلوين تريبان الأزرق يستخدم لتمييز خلايا قابلة للحياة من ميتة أحد. ويعتبر أكثر من بقاء الخلية 95% حالة جيدة للحث ورم سريع النمو وورم خبيث في فيفو. وأيضا مناسبة لأي نماذج أخرى الورم عند إعداد الخلايا السرطانية. الفراء حول الحلمة كليبر حجم الورم الرئيسي والحصول على إشارة طرحه دقيقة بشكل صحيح، ينبغي أن ترفع مرة أخرى بمجرد أنها تنمو مرة أخرى. عندما ينمو الورم الرئيسي لكتلة كبيرة وطرحه إشارة قوية جداً للباحثين لمراقبة أخرى الانبثاث الجهاز (مثلاً، ورم خبيث في الرئة)، تغطية ذلك مع شريط أسود الكهربائية قبل أن تؤخذ الصور الإضاءة الحيوية، أو إزالته قبل جراحة. يمكن استخدام مسكن للألم بعد الجراحة.
يمكن أن يؤدي نجاح التطعيم في الرئة ورم خبيث: مع معدل حدوث أكثر من 90%، البؤر المنتشر في غير حقن الثديين أو العظام أو الغدد الليمفاوية شائعة إلى حد كبير، بينما ورم خبيث الاضطرابات الهضمية نادرة. الأورام الثانوية هي كتلة شفافة ويمكن تمييزها عن الأنسجة الطبيعية المحيطة بها. تطبيق غير دقيقة من الحقن يمكن أن يؤدي إلى أخطاء تجريبية في مواقع الورم في الحجم والشكل وورم خبيث. أي تسرب من مجال شقة بعد الحقن سيتم تقليل حجم الورم، سيؤدي إلى أي تسرب من الغدة الثديية في "النفق" ورم الطويل أسطوانية التي سوف تعرقل تحديد حجم الورم عندما نستخدم قدمه ذات الورنيّة رقمية إلى قياس ذلك. الحقن تحت الجلد حول لوحة الدهون الثديية نادراً ما تؤدي إلى ورم خبيث في الرئة وليست مناسبة لدراسة بعيدة المرتبطة بورم خبيث. لجعل التلقيح مستقرة والحد من خطر التسرب، يمكن استخدام ماتريجيل عند تعليق الخلايا السرطانية. بيد ماتريجيل ليس مذيب واحد، وهو يعتبر نوعا من المصفوفة خارج الخلية (ECM)، وبعض أنواع جل حتى تتضمن العوامل التي قد تتداخل مع التجارب. في التجربة تهدف إلى إدارة المحتوى في المؤسسة، وورم المكروية، عبور الحديث بين الخلايا السرطانية أو مع الخلايا اللحمية، فمن الأفضل تجنب استخدام ماتريجيل. لحقن الخلايا التي تحتوي لوسيفراس العلامة د-لوسيفرين، يتم حقن الركيزة لوسيفراس ربط الحي الخلايا السرطانية في الفئران. واقترح ديناميات الإضاءة الحيوية في الجسم الحي في هذه الدراسة، أن إشارة طرحه تصل إلى الذروة في 10 دقائق بعد الحقن لوسيفرين د، ويمكن أن تكون مستقرة لحوالي 10-15 دقيقة (متفاوتة بين الفئران مختلفة)، عما إذا كان مع الحقن داخل أو حقن تحت الجلد. النظر يتم حقن المخدرات اختبار إينترابيريتونيلي، لتجنب تفاعل الدواء تم اختبارها مع د-لوسيفرين ولتقليل تهيج البريتوني، يقترح حقن تحت الجلد.
وفي الختام، حقن أورثوتوبيك خلايا سرطان الثدي المبينة في هذه الورقة أداة قوية ومفيدة جداً في دراسة علم الأمراض وتطور سرطان الثدي. من السهل التعامل معها، ويمكن تنفيذها بسرعة. وينشأ الورم الرئيسي في الغدة الثديية مع حدوث ارتفاع لورم خبيث، الذي يحاكي العملية الفيزيولوجية المرضية لسرطان الثدي البشرية مجانية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
Acknowledgments
الكتاب أود أن أشكر مؤسسة العلوم الطبيعية الوطنية الصينية (المنحة رقم 81873111، 81673924، 81774039، 81503517)، مؤسسة العلوم الطبيعية بكين (المنحة رقم 7172095، 7162084، 7162083)، ومؤسسة شيا شو في مستشفى بكين من الطب الصيني التقليدي (منح لا، xx201701). ونحن نشكر الأستاذ ليو تشن تشانغ، من مركز الأبحاث التجريبية، الصين أكاديمية العلوم الطبية الصينية، لصور طرحه.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| anesthesia machine | Midmark Corporation, Dayton, OH, USA | Matrx VMS | anesthesia |
| In-Vivo Imaging System | PerkinElmer | IVIS Spectrum | used for bioluminescence detecion |
| isoflurane | Hebei yipin chemical reagents company | O21400 | anesthesia |
| 1 ml syringe | Becton,Dickinson and Company | A257 | cell injection |
| digital caliper | Shang Hai Shen Han Measuring Tools Co., Ltd. | S-H | volume measurement |
| tramadol | Mundipharma company | - | pain killer |
| D-luciferin | Gold Biotechnology Inc. | LUCK-1G | used for bioluminescence detecion |
| The primary antibody against cluster of differentiation (CD) 31 | Abcam | ab28364 | used for MVD detection |
| hematoxylin and eosin staining kit | Beijing Zhong Shan Jinqiao Biotechnology Co., Ltd. | ZLI-9615 | histology |
| hair removal cream | Veet | - | hair removal cream |
| Carbomer Eye Gel | Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH | - | ophthalmic ointment |
| sewing needle | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd. | 17U0302J | suture |
References
- Torre, L. A., et al. Global cancer statistics. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 65 (2), 87-108 (2012).
- Rashid, O. M., Takabe, K. Animal models for exploring the pharmacokinetics of breast cancer therapies. Expert Opinion on Drug Metabolism & Toxicology. 11 (2), 221-230 (2015).
- Wagner, K. U. Models of breast cancer: quo vadis, animal modeling. Breast Cancer Research. 6 (1), 31-38 (2004).
- Horas, K., Zheng, Y., Zhou, H., Seibel, M. J. Animal models for breast cancer metastasis to bone: opportunities and limitations. Cancer Investigation. 33 (9), 459-468 (2015).
- Kawaguchi, T., Foster, B. A., Young, J., Takabe, K. Current Update of Patient-Derived Xenograft Model for Translational Breast Cancer Research. Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. 22 (2), 131-139 (2017).
- Wright, L. E., et al. Murine models of breast cancer bone metastasis. BoneKEy Reports. 5, 804 (2016).
- Cassidy, J. W., Batra, A. S., Greenwood, W., Bruna, A. Patient-derived tumour xenografts for breast cancer drug discovery. Endocrine-Related Cancer. 23 (12), T259-T270 (2016).
- Stiedl, P., Grabner, B., Zboray, K., Bogner, E., Casanova, E. Modeling cancer using genetically engineered mice. Methods in Molecular Biology. 1267, 3-18 (2015).
- Menezes, M. E., et al. Genetically engineered mice as experimental tools to dissect the critical events in breast cancer. Advances in Cancer Research. 121, 331-382 (2014).
- Talmadge, J. E., Singh, R. K., Fidler, I. J., Raz, A. Murine models to evaluate novel and conventional therapeutic strategies for cancer. The American Journal of Pathology. 170 (3), 793-804 (2007).
- Spaw, M., Anant, S., Thomas, S. M. Stromal contributions to the carcinogenic process. Molecular Carcinogenesis. 56 (4), 1199-1213 (2017).
- Joyce, J. A., Pollard, J. W. Microenvironmental regulation of metastasis. Nature Reviews Cancer. 9 (4), 239-252 (2009).
- Hanahan, D., Weinberg, R. A. Hallmarks of cancer: the next generation. Cell. 144 (5), 646-674 (2011).
- Yano, S., et al. Tumor-targeting adenovirus OBP-401 inhibits primary and metastatic tumor growth of triple-negative breast cancer in orthotopic nude-mouse models. Oncotarget. 7 (51), 85273-85282 (2016).
- Kocaturk, B., Versteeg, H. H. Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth. Journal of Visualized Experiments. (96), e51967 (2015).
- Tavera-Mendoza, L. E., Brown, M. A less invasive method for orthotopic injection of breast cancer cells into the mouse mammary gland. Lab Animal. 51 (1), 85-88 (2017).
- Zhang, Y., et al. Establishment of a murine breast tumor model by subcutaneous or orthotopic implantation. Oncology Letters. 15 (5), 6233-6240 (2018).
- Zhang, Y., et al. Gubenyiliu II Inhibits Breast Tumor Growth and Metastasis Associated with Decreased Heparanase Expression and Phosphorylation of ERK and AKT Pathways. Molecules. 22 (5), (2017).
- Kwon, Y. S., Lee, K. S., Chun, S. Y., Jang, T. J., Nam, K. S. Suppressive effects of a proton beam on tumor growth and lung metastasis through the inhibition of metastatic gene expression in 4T1 orthotopic breast cancer model. International Journal of Oncology. 49 (1), 336-342 (2016).
- Kalra, J., et al. Validating the use of a luciferase labeled breast cancer cell line, MDA435LCC6, as a means to monitor tumor progression and to assess the therapeutic activity of an established anticancer drug, docetaxel (Dt) alone or in combination with the ILK inhibitor, QLT0267. Cancer Biology & Therapy. 11 (9), 826-838 (2011).
- Hoffman, R. M. Orthotopic metastatic mouse models for anticancer drug discovery and evaluation: a bridge to the clinic. Investigational New Drugs. 17 (4), 343-359 (1999).
- Hoffman, R. M. Patient-derived orthotopic xenografts: better mimic of metastasis than subcutaneous xenografts. Nature Reviews Cancer. 15, 451 (2015).
