Summary
Aqui, apresentamos um protocolo para implante de células de câncer de mama para a almofada de gordura mamária de forma simples, menos invasiva e fácil de manusear de maneira, e este modelo de câncer de mama ortotópico rato com um ambiente adequado do tecido mamário pode ser usado para investigar vários aspectos da câncer.
Abstract
Um modelo animal adequado é crucial para uma melhor compreensão de doenças. Animal modelos estabelecidos por métodos diferentes (injecções subcutâneas xenografts, manipulação genética, indução de reagentes químicos, etc.) tem vários personagens patológicas e desempenhar um papel importante na investigação de certos aspectos da doenças. Embora nenhum modelo único totalmente pode imitar a progressão da doença humana inteira, modelos de doença ortotópico órgãos com um ambiente adequado do estroma desempenham um papel insubstituível na compreensão de doenças e de rastreio de drogas potenciais. Neste artigo, descrevemos como implante de células de câncer de mama para a almofada de gordura mamária de forma simples, de maneira menos invasiva e fácil de manusear e siga a metástase para órgãos distantes. Com os recursos adequados de crescimento do tumor primário, da mama e alterações patológicas do mamilo e uma alta ocorrência de metástase de outros órgãos, este modelo màxima imita a progressão do câncer de mama humano. Tumor primário crescimento em situ, long-metástase à distância e o microambiente do tumor do câncer de mama podem ser investigada usando este modelo.
Introduction
Câncer de mama é a principal causa de mortalidade feminina em todo o mundo. Com sua incidência progressivamente crescente, câncer de mama tornou-se um sério desafio para a saúde pública1. Modelos de câncer murino são boas pontes entre os estudos pré-clínicos e clínicos, e um modelo de bom imitar murino doença aumentará a precisão das pesquisas sobre a doença e a medicina.
O crescimento do tumor primário começa o progresso da doença maligna, enquanto metástase e as complicações são as principais causas de morte e qualidades de vida pobre, na maioria dos pacientes de câncer. Vários modelos de murino são usados para imitar a patologia do câncer de mama humano2,3,4. Modelos de enxerto são amplamente utilizados para o estudo do câncer entender os personagens patológicos e às drogas da tela para a segurança e eficácia de6,5,7. Ratos geneticamente modificados (GEM) são gerados para imitar o câncer de mama humano pela segmentação determinados oncogenes ou tumor supressor genes8. GEM tem um fundo relativamente simples e uniformizado para entender o papel dos genes em andamento canceroso; no entanto, o ambiente artificial e fundo limitam-se a investigar a patologia de metástase e relacionados a terapias9. Células cancerosas humanas, embora com características patológicas humanas, poderá apenas ser implantadas em camundongos deficientes em imune, e a insuficiência da interação imune tumor-hospedeiro pode conduzir a resultados tendenciosos10.
Onde inicia o tumor sólido tem uma influência direta sobre os caracteres biológicos e patológicos da doença11,12,13. Desde que progresso canceroso é o complicado resultado das interações entre as células do tumor, células do estroma, células de Imunologia, células inflamatórias, fatores de crescimento e proteases, tumores primários implantados em situ fornecerá uma visão melhor e imitar o processo canceroso mais precisão do que tumores induzidos por agentes químicos ou uma injeção subcutânea de tumor de células. Agentes químicos utilizados para induzir tumores podem ser prejudiciais para os pesquisadores e o meio ambiente e até são proibidos em alguns países. Devido à ausência de um ambiente do tecido mamário, a evolução patológica de uma injeção subcutânea pode diferir com que em pacientes de câncer de mama real, cujo câncer se origina e irrita do pad gordo mamário. As desvantagens de injecções subcutâneas incentivam a utilização de modelos ortotópico para estudar o crescimento do tumor. Na pesquisa anterior, altamente metastáticos tumores MDA-MB-231, desenvolvidos após sete transplantes ortotópico, indicaram a importância da injeção local14. Recentemente, a implantação ortotópico de células de câncer de mama para a almofada de gordura mamária com cirurgia foi relatado15,16. Com o ambiente de almofada mamária, o crescimento do tumor e a migração para o disfarce de órgãos distantes de todo o processo de câncer de mama em sites relevantes patologicamente, que torna este modelo uma miniatura do progresso de doenças humanas. No entanto, após a cirurgia, a pele automaticamente tentativas para curar a próprio, que pode trazer o risco potencial de interferir com a originação de câncer mamário normal e influenciar os resultados.
Nós temos comparado a alguns modelos de câncer de mama e estabeleceu um modelo ortotópico minimamente invasiva para investigar o potencial efeito das drogas sobre1817,progressão do cancro da mama. Neste estudo, um protocolo de vídeo sobre como orthotopically injetar células de câncer de mama a almofada de gordura mamária de forma simples, da maneira menos invasiva é apresentada. Este método de injeção ortotópico sem cirurgia é vantajoso em muitos aspectos. Primeiro, a operação é simples e rápida, cerca de 1 minuto por rato. Em segundo lugar, com focos de tumor primário começando no sites bem patológicos, abrange o processo inteiro tumorigênico da progressão de câncer de mama do crescimento do tumor para outras metástases de órgãos, que fornece um bom modelo animal experimental para estudar a interação de células tumorais e o microambiente do tumor. Além disso, pode ser um modelo valioso para estimar os efeitos do tratamento em todas as fases do câncer de mama. O objetivo desse método é fornecer um modelo animal para a progressão de câncer de mama humano imitar màxima.
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Protocol
Experimentos com animais foram conduzidos de acordo com a disposição e recomendação geral de chinês Experimental Animal administração legislação e foram aprovados pelo Comitê de uso de Capital médica Universidade e instituição de cuidado Animal (Ref não. AEEI-2014-052). Foram utilizados camundongos Balb/c fêmeas com idade de 6 a 8 semanas.
1. preparação das células e animais
- Um dia antes da operação, raspe os pelos ao redor dos mamilos quarto para expor a área de atuação.
- Utilize uma mão para segurar o mouse firmemente para trás para certificar-se de que o mouse não irá mover-se livremente, transformar-se o mouse para expor sua barriga ao operador e então usar a outra mão para raspar a pele ao redor dos mamilos quarta com uma máquina eletrônica.
- Coloque uma camada fina de depilação creme ao redor dos mamilos para 30-60 s, limpar o creme com água destilada e seque o mouse com papel macio.
- No dia da operação, coletar células de câncer de mama murino (4T1-luc2), contar o número de células e ajustar a densidade da célula a 2 x 105 células/mL de tampão fosfato salino (PBS) em tubos estéreis microcentrifuga e mantê-los no gelo. Para cada rato, 1 x 104 células/50 µ l em uma seringa de 1 mL é preparada.
2. ortotópico injeção
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Anestesia de ratos
- Induzi a anestesia. Colocar os ratos em um recipiente transparente fechado e vire na queda e 2% de isoflurano gás para anestesiar os ratos por cerca de 5 min, até que todos mentem para baixo dormindo.
- Manter a anestesia. Transferir os ratos do recipiente para máscaras individuais de anestesia, colocar alguma pomada de veterinário em seus olhos para evitar ressecamento, manter os ratos passivamente com os mamilos expostos ao operador e deixá-los continuar a inalar gás de isoflurano durante alguns minutos até o injeção foi executada.
- Confirme o sucesso da anestesia pela falta de um reflexo de retirada de pitada de dedo do pé.
- Aplica a pomada oftálmica aos olhos dos ratos para evitar ressecamento do olho.
Nota: De acordo com o tamanho do recipiente e o número de máscaras de anestesia individuais disponíveis, um grupo de ratos pode ser anestesiado juntos e injetou um sob anestesia individual.
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Desempenho da injeção
- Utilize uma mão para tenda a pele ao redor do mamilo quarto com uma pinça, para criar um "túnel" Erguido para a seringa seguir. Use a outra mão para segurar a seringa com a agulha virada para cima para entrar na pele por via subcutânea em 5-10 mm de mamilo; em seguida, siga o "túnel" até que a ponta da agulha aproxima-se o mamilo, cuidadosamente mover a agulha é dica para do tecido mamário até o olho de agulha vem sob a ponta do mamilo, descartar a pinça e injetar as células lentamente.
- Vire a agulha um pouco e retirar a seringa lentamente; Use um cotonete para pressionar a agulha ferida para 10-20 s para certificar-se de que não há nenhum escoamento de fluidos.
- Observar o mamilo quarto para confirmar uma injeção bem sucedida: uma esfera branca transparente plana com o mamilo como o centro pode ser observada (Figura 1).
- Manter os ratos anestesiados por mais um minuto evitar que os ratos recuperar e mover-se muito rapidamente, que fará com que a injeção ferida para abrir e as células do tumor a vazar.
3. análise do crescimento tumoral e metástase
Nota: Tumores primários são identificados como solavancos transparentes ou bolha-como após as injeções e como esféricos ou elipsoide pedaços sólidos com o mamilo alguns dias mais tarde. O crescimento do tumor é avaliado pelo volume do tumor e bioluminescência do tumor.
- Para estabelecer o volume do tumor, segure o mouse com uma mão. Expor sua barriga ao operador e use a outra mão para pinça apoio o tumor comprimento (L) e largura (W). Calcule o volume do tumor (V) como segue.
V = (L x W2) / 2 - Para capturar a bioluminescência de tumor, injete 150 mg/kg D-luciferina nuca do rato, 10 minutos antes da imagem latente. Anestesiar os ratos com gás de isoflurano 2% por 5 min e transferi-los para máscaras individuais de anestesia para deixá-los a inalar gás de isoflurano por mais 5 min. Seguindo as instruções do fabricante, capture imagens de bioluminescência do tumor primário e metástases, com tempo de exposição automática, binning médio e de f/stop em 1.
4. colheita do Tumor primário e metástases órgãos para análise
Nota: Quando alcançar o objetivo deste experimento, ou atingindo o ponto de extremidade humano, o tumor primário pode ser colhido para um estudo mais aprofundado. Neste estudo, os tumores são removidos em 4 a 5 semanas após a injeção, quando o volume do tumor atinge cerca de 800 mm3. Os pulmões são removidos na semana 8.
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Colheita do tumor primário
- Realizar a cirurgia em um capuz estéril para manter um ambiente estéril. Anestesia os animais por isoflurano. Confirme o sucesso da anestesia pela falta de reflexos de retirada de pitada de dedo do pé. Aplica a pomada oftálmica aos olhos dos ratos para evitar que sequem.
- Dissocia o tumor da pele com uma tesoura, gota a gota analgésico (tramadol 1mg/mL, 1 gota de cerca de 50 µ l por rato) para aliviar a dor pós-operatória.
- Costurar a pele com uma sutura cirúrgica, cortar o excesso sutura, drape fora da incisão.
- Cortado ao meio com um bisturi, o tumor primário, coloque 1/2 do tumor em paraformaldeído 4% para mais hematoxilina e eosina (H & E) coloração e imuno-histoquímica e congelar imediatamente a outra 1/2 com nitrogênio líquido para a mancha ocidental ou um RNA estudo de isolamento mais tarde.
- Após a sutura, aquecer os ratos com uma lâmpada, até se recuperarem, manter os ratos em gaiolas simples até totalmente recuperado. Continuamente, administre tramadol 10 mg/kg com uma oral gavagem para 3 d após a cirurgia.
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Colheita de órgãos de metástase
- Eutanásia em ratos com uma overdose de pentobarbital, abrir o peito com uma tesoura, delicadamente tirar os pulmões e lavá-los com PBS. Focos de metástase pulmonar podem ser identificados como branco transparente solavancos que são morfologicamente diferentes e distinguíveis de tecido pulmonar normal de rosa.
- Colocar os pulmões em paraformaldeído 4%, para verificar se a metástase por H & E mancha.
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Representative Results
Depois de uma injeção bem sucedida, uma esfera branca transparente plana com o mamilo como a out-superfície redondo centro pode ser observado (Figura 1). O crescimento do tumor primário pode ser medido pelo volume do tumor e vivos tumor celular bioluminescência (Figura 2). Tanto o volume do tumor e o fluxo total aumentaram durante o experimento antes de ressecção. Numa fase inicial, a metástase não pode ser encontrado porque nenhum tumor secundário aconteceu ou os sinais fortes bioluminescentes do tumor primário obstruam a detecção de focos de metástase pequeno com sinais fracos. Após a ressecção, o sinal bioluminescente dos focos metastáticos de órgãos distantes pode ser detectado e analisado. A morfologia do tumor primário de mama e as seções de pulmão foram estudados com H & E mancha, enquanto a angiogênese foi investigada pela coloração do tumor com marcador de navio CD31 para densidade microvessel (MVD) (Figura 3).
Figura 1: fotos antes e depois da injeção ortotópico ao bloco gordura mamária da fêmeas camundongos Balb/c. A operação foi executada, e as fotos foram tiradas enquanto os ratos estavam sob anestesia de isoflurano. A, antes da injeção, B, após injeção.
Figura 2: Volume e fluxo total do tumor primário foram medidos a partir de 7 dias após a implantação. A implantação de suspensão celular gerado um tumor primário aumento em volume, que foi visualizado e determinado usando pinças, e em fluxo total, que foi medido pelo sistema de espectro. A figura mostra imagens bioluminescentes de tumores primários e metástases observados em vários pontos de tempo após o dia 7 de implantação. p/s = fótons/segundo. Esta figura foi modificada de Zhang et al . 17. clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 3: coloração H & E e análise de tumores primários e metástases de pulmão de coloração imuno-histoquímica. Tecidos foram fixados em paraformaldeído 4%, incorporados em parafina e manchados. (A e B) seções foram coradas com hematoxilina e eosina (H & E). (C e D) seções foram coradas com anticorpo antiCD31. Coloração acastanhada indicado CD31 + vasos. Painéis A e C presente tecido do tumor primário, painéis B e D apresentam metástase pulmonar. CD = aglomerado de diferenciação. A ampliação usada = 200 X. Barra de escala = 50 µm. Esta figura foi modificada de Zhang et al . 17. clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
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Discussion
As células utilizadas neste estudo são 4T1-luc2, células cancerosas murino mama triplo-negativo com rotulagem luciferase, que são uma ferramenta útil para investir efeitos antitumorais e antimetastatic de drogas devido à sua natureza altamente invasivo2,19 . Luciferases, estáveis para a próxima geração de célula, são usados para indicar o tumor de vida células, ambos na glândula mamária e em outros órgãos distantes20. Em alguns casos, hipóxia e deficiência de nutrientes dentro do resultado de tumor em uma diminuição do sinal bioluminescente e o volume do tumor primário não é inconsistente com o sinal bioluminescente numa fase posterior da progressão do tumor. A técnica da injeção de suspensões celulares celular ortotópico (COI) também pode ser realizada com outras mama câncer linhas celulares, tais como células humanas MDA-MB-231 (dados não publicados). Neste estudo, com a glândula mamária como seu ambiente, é um modelo animal adequado para estudar o microambiente do tumor, atravessando a conversa entre células tumorais e células do estroma. Durante o andamento do tumor, em alguns ratos, o mamilo pode ulcerate, fura-greve, crescer o tecido de granulação vermelho, achatar ou até mesmo desaparecer, semelhante ao que acontece em mamilos humanos durante o câncer de mama. Ratos podem sentir desconforto com ulcerações; humana deve ser cuidado. Mais mudança de mamilo foi encontrada em ratos usando esta técnica do COI do que com a técnica de microinvasiva. A implantação cirúrgica ortotópico (SOI) do tecido do tumor humano histologicamente intacta, em comparação com a injeção de celular ortotópico (COI) de suspensões celulares, mostra maior câncer maligno na bexiga, pulmão, estômago, rim e cólon21 que imite o que é visto em pacientes22.
Com uma alta incidência de metástases, especialmente metástase do pulmão, o modelo de câncer de mama murino estabelecido neste estudo é um modelo de câncer syngeneic bom para explorar a migração espontânea e invasão, em comparação com um modelo de metástase artificiais, tais como uma injeção de veia da cauda. As atividades de células de tumor e personagens também desempenham papéis importantes em metástase. Outras linhas de células, como células de câncer de mama humano MCF-7, nem implantado por uma injeção ortotópico no do tecido mamário de camundongos Balb/c de deficiência imune, tem uma menor capacidade metastática. Com a modificação de células ou ratos, tais como a sobre-expressão ou para baixo-expressão de um determinado gene, esta tecnologia pode ser aplicada em mais campos de pesquisa.
A operação crucial desta injeção é lentamente e com cuidado passar a ponta da agulha, do subcutâneo para a almofada de gordura mamária. Quando a ponta da seringa aproxima-se o mamilo, o operador sentirá uma insistência do tecido. Como a glândula de rato é muito pequena, apenas um pouco mais de pressão é necessária para a ponta da seringa ter deixado passar a insistência. Demasiada pressão resultará na ponta de passagem a glândula e quebrar a pele, o que resulta em uma falha da injeção. Células em fase logarítmica, uma suspensão de célula única, o protocolo padrão de operação (SOP) e operadores qualificados são necessários para reduzir a variação entre ratos. Comportamento de células do tumor é importante para a formação e a repetição dos modelos de tumor. Colheita de células em fase logarítmica quando crescem a cerca de 80% - 90% confluência; densidades de célula muito baixo ou muito alto irão interferir com o modelo de tumor e resultar em variações entre as experiências. A suspensão de célula única também é importante, uma vez que a célula agrupa o resultado em erros de cálculo do número de células. Tripsina, uma solução de EDTA ou outros métodos apropriados são escolhidos para destacar as células de acordo com os objectivos do experimento e os alvos o pesquisador está interessado em. Depende da densidade de escala e célula de seringa, o volume de injeção pode variar de 25 a 100 µ l. A quantidade de 1 x 104 a 1 x 106 células é comumente usada para irritar o crescimento do tumor de acordo com diferentes tipos de células. Coloração azul trypan é usado para distinguir células viáveis de mortos. Mais do que viabilidade celular de 95% é considerado como uma boa situação para induzir um tumor rápido crescimento e a metástase na vivo. Estas também são adequadas para quaisquer outros modelos de tumor ao preparar células tumorais. Para corretamente pinça apoio o tamanho do tumor primário e obter um sinal bioluminescente preciso, a pele ao redor do mamilo deve ser removida novamente uma vez que ele volta a crescer. Quando o tumor primário cresce para uma grande massa e seu sinal bioluminescente é forte demais para os pesquisadores a observar outras metástases de órgão (por exemplo, metástase pulmonar), cubra-o com fita isolante preta antes de imagens de bioluminescência são tomadas, ou removê-lo por cirurgia. Um analgésico pode ser usado para dor pós-cirúrgica.
Inoculação de sucesso pode resultar em metástase pulmonar: com uma taxa de ocorrência de mais de 90%, focos metastáticos no seios não injectada, óssea ou de gânglios linfáticos são bastante comuns, enquanto doença celíaca metástase é rara. Os tumores secundários são uma massa translúcida e podem ser distinguidos os tecidos normais circundantes. Um aplicativo impreciso da injeção pode levar a erros experimentais em locais de metástase e a forma e o tamanho do tumor. Qualquer vazamento da esfera lisa após a injeção irá reduzir o tamanho do tumor, fugas da glândula mamária no "túnel" irão resultar em um tumor cilíndrico longa que vai obstruir a determinação do volume do tumor, quando usamos um paquímetro digital para medi-lo. Injecções subcutâneas em torno a almofada de gordura mamária raramente levam a metástase do pulmão e não são adequadas para estudo associada a metástases distante. Para fazer a inoculação estável e reduzir o risco de vazamento, Matrigel pode ser usado quando a suspensão de células tumorais. No entanto, Matrigel não é um único solvente, é considerado como um tipo de matriz extracelular (ECM) e alguns tipos de gel mesmo contenham fatores que podem interferir com os experimentos. No experimento visando o microambiente do tumor, ECM, cruzando a falar entre as células do tumor ou com células do estroma, é melhor evitar o uso de Matrigel. Para células injetadas com a luciferase marca D-luciferina, o substrato da luciferase é injetado para vincular os vivos células tumorais em ratos. Neste estudo, a dinâmica de bioluminescência em vivo sugeriu que em 10 minutos após a injeção D-luciferina, o sinal bioluminescente atingir o pico e pode ser estável por cerca de 10-15 minutos (variando entre ratos diferentes), se com um injeção intraperitoneal ou uma injeção subcutânea. Considerando que a droga testada é injectada intraperitonealmente, para evitar a interação da droga testada com D-luciferina e para reduzir a irritação peritoneal, sugere-se uma injeção subcutânea.
Em conclusão, a injeção de ortotópico de células de câncer de mama descritas neste artigo é uma ferramenta muito útil e poderosa no estudo da patologia e progressão do câncer de mama. É fácil de manipular e pode ser executada rapidamente. O tumor primário se origina na glândula mamária, com uma alta ocorrência de metástase, màxima que imita o processo fisiopatológico do carcinoma de mama humano.
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Disclosures
Os autores não têm nada para divulgar.
Acknowledgments
Os autores gostaria de agradecer a Fundação Nacional de ciências naturais da China (grant n º 81873111, 81673924, 81774039, 81503517), a Fundação de ciência Natural de Beijing (grant n º 7172095, 7162084, 7162083) e a Xu Xia Fundação do Hospital de Beijing Medicina tradicional chinesa (conceder n, xx201701). Agradecemos o Prof Chang-Zhen Liu, do centro de pesquisa Experimental, China da Academia de ciências médicas chinesas, para imagens bioluminescentes.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| anesthesia machine | Midmark Corporation, Dayton, OH, USA | Matrx VMS | anesthesia |
| In-Vivo Imaging System | PerkinElmer | IVIS Spectrum | used for bioluminescence detecion |
| isoflurane | Hebei yipin chemical reagents company | O21400 | anesthesia |
| 1 ml syringe | Becton,Dickinson and Company | A257 | cell injection |
| digital caliper | Shang Hai Shen Han Measuring Tools Co., Ltd. | S-H | volume measurement |
| tramadol | Mundipharma company | - | pain killer |
| D-luciferin | Gold Biotechnology Inc. | LUCK-1G | used for bioluminescence detecion |
| The primary antibody against cluster of differentiation (CD) 31 | Abcam | ab28364 | used for MVD detection |
| hematoxylin and eosin staining kit | Beijing Zhong Shan Jinqiao Biotechnology Co., Ltd. | ZLI-9615 | histology |
| hair removal cream | Veet | - | hair removal cream |
| Carbomer Eye Gel | Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH | - | ophthalmic ointment |
| sewing needle | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd. | 17U0302J | suture |
References
- Torre, L. A., et al. Global cancer statistics. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 65 (2), 87-108 (2012).
- Rashid, O. M., Takabe, K. Animal models for exploring the pharmacokinetics of breast cancer therapies. Expert Opinion on Drug Metabolism & Toxicology. 11 (2), 221-230 (2015).
- Wagner, K. U. Models of breast cancer: quo vadis, animal modeling. Breast Cancer Research. 6 (1), 31-38 (2004).
- Horas, K., Zheng, Y., Zhou, H., Seibel, M. J. Animal models for breast cancer metastasis to bone: opportunities and limitations. Cancer Investigation. 33 (9), 459-468 (2015).
- Kawaguchi, T., Foster, B. A., Young, J., Takabe, K. Current Update of Patient-Derived Xenograft Model for Translational Breast Cancer Research. Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. 22 (2), 131-139 (2017).
- Wright, L. E., et al. Murine models of breast cancer bone metastasis. BoneKEy Reports. 5, 804 (2016).
- Cassidy, J. W., Batra, A. S., Greenwood, W., Bruna, A. Patient-derived tumour xenografts for breast cancer drug discovery. Endocrine-Related Cancer. 23 (12), T259-T270 (2016).
- Stiedl, P., Grabner, B., Zboray, K., Bogner, E., Casanova, E. Modeling cancer using genetically engineered mice. Methods in Molecular Biology. 1267, 3-18 (2015).
- Menezes, M. E., et al. Genetically engineered mice as experimental tools to dissect the critical events in breast cancer. Advances in Cancer Research. 121, 331-382 (2014).
- Talmadge, J. E., Singh, R. K., Fidler, I. J., Raz, A. Murine models to evaluate novel and conventional therapeutic strategies for cancer. The American Journal of Pathology. 170 (3), 793-804 (2007).
- Spaw, M., Anant, S., Thomas, S. M. Stromal contributions to the carcinogenic process. Molecular Carcinogenesis. 56 (4), 1199-1213 (2017).
- Joyce, J. A., Pollard, J. W. Microenvironmental regulation of metastasis. Nature Reviews Cancer. 9 (4), 239-252 (2009).
- Hanahan, D., Weinberg, R. A. Hallmarks of cancer: the next generation. Cell. 144 (5), 646-674 (2011).
- Yano, S., et al. Tumor-targeting adenovirus OBP-401 inhibits primary and metastatic tumor growth of triple-negative breast cancer in orthotopic nude-mouse models. Oncotarget. 7 (51), 85273-85282 (2016).
- Kocaturk, B., Versteeg, H. H. Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth. Journal of Visualized Experiments. (96), e51967 (2015).
- Tavera-Mendoza, L. E., Brown, M. A less invasive method for orthotopic injection of breast cancer cells into the mouse mammary gland. Lab Animal. 51 (1), 85-88 (2017).
- Zhang, Y., et al. Establishment of a murine breast tumor model by subcutaneous or orthotopic implantation. Oncology Letters. 15 (5), 6233-6240 (2018).
- Zhang, Y., et al. Gubenyiliu II Inhibits Breast Tumor Growth and Metastasis Associated with Decreased Heparanase Expression and Phosphorylation of ERK and AKT Pathways. Molecules. 22 (5), (2017).
- Kwon, Y. S., Lee, K. S., Chun, S. Y., Jang, T. J., Nam, K. S. Suppressive effects of a proton beam on tumor growth and lung metastasis through the inhibition of metastatic gene expression in 4T1 orthotopic breast cancer model. International Journal of Oncology. 49 (1), 336-342 (2016).
- Kalra, J., et al. Validating the use of a luciferase labeled breast cancer cell line, MDA435LCC6, as a means to monitor tumor progression and to assess the therapeutic activity of an established anticancer drug, docetaxel (Dt) alone or in combination with the ILK inhibitor, QLT0267. Cancer Biology & Therapy. 11 (9), 826-838 (2011).
- Hoffman, R. M. Orthotopic metastatic mouse models for anticancer drug discovery and evaluation: a bridge to the clinic. Investigational New Drugs. 17 (4), 343-359 (1999).
- Hoffman, R. M. Patient-derived orthotopic xenografts: better mimic of metastasis than subcutaneous xenografts. Nature Reviews Cancer. 15, 451 (2015).
