Summary
Hier presenteren we een protocol om het implantaat van borstkankercellen in de borstklier vet pad in een eenvoudige, minder invasief, en gemakkelijk te bedienen manier, en deze orthotopic borst kanker muismodel met een juiste borstklier vet pad omgeving kan worden gebruikt voor het onderzoeken van verschillende aspecten van kanker.
Abstract
Een goede diermodel is van cruciaal belang voor een beter begrip van ziekten. Dierlijke modellen opgericht door verschillende methoden (subcutane injecties xenografts, genetische manipulatie, chemische reagentia inductie, etc.) hebben diverse pathologische tekens en spelen een belangrijke rol bij het onderzoek van bepaalde aspecten van ziekten. Hoewel geen enkel model de progressie van de gehele menselijke ziekte volledig nabootsen kan, spelen orthotopic organen ziekte modellen met een juiste stromale omgeving een onvervangbare rol in het begrip van ziekten en screening voor potentiële geneesmiddelen. In dit artikel beschrijven we hoe implantaat van borstkankercellen in de borstklier vet pad in een eenvoudige, minder invasief, en gemakkelijk te bedienen manier, en volgen de metastase tot verre organen. Met de juiste kenmerken van primaire tumorgroei-, borst- en pathologische veranderingen van de tepel, en een hoge voorkomen van andere organen metastase bootst dit model maximumly menselijke borst kanker progressie. Primaire tumor groei in situ, lange verre metastase en de communicatie van de tumor van borstkanker kunnen worden onderzocht met behulp van dit model.
Introduction
Borstkanker is de belangrijkste oorzaak van vrouwelijke mortaliteit wereldwijd. Met haar geleidelijk toenemende incidentie, borstkanker is uitgegroeid tot een serieuze uitdaging voor de volksgezondheid1. Lymfkliertest kanker modellen zijn goede bruggen tussen preklinische en klinische studies, en een goede mimic lymfkliertest ziekte model zal het verhogen van de nauwkeurigheid van het onderzoek naar de ziekte en geneeskunde.
Primaire tumorgroei begint de voortgang van maligne aandoeningen, terwijl metastase en complicaties de belangrijkste oorzaken van dood en slechte leven kwaliteiten bij de meeste kankerpatiënten zijn. Verschillende lymfkliertest modellen worden gebruikt om na te bootsen de pathologie van menselijke borst kanker2,3,4. Xenograft modellen worden veel gebruikt voor kanker onderzoek te begrijpen van de pathologische tekens en scherm drugs voor de veiligheid en werkzaamheid5,6,7. Genetisch gemodificeerde muizen (GEM) worden gegenereerd om na te bootsen van menselijke borstkanker door gericht op bepaalde oncogenen of tumor suppressor genen8. GEM hebben een relatief eenvoudige en geüniformeerde achtergrond te begrijpen van de rol van genen in kanker vooruitgang; de kunstmatige omgeving en de achtergrond zijn echter beperkt tot het onderzoeken van de metastase pathologie en gerelateerde therapieën9. Menselijke kankercellen, hoewel met menselijke pathologische kenmerken, kunnen alleen worden geïmplanteerd bij immuun-deficiënte muizen, en de ontoereikendheid van de tumor-host immuun interactie kan leiden tot vooringenomen resultaten10.
Waar de solide tumor initieert heeft een directe invloed op de biologische en pathologische tekens van de ziekte11,12,13. Aangezien kanker vooruitgang de complexe uitkomst van interacties tussen tumorcellen, stromale cellen, cellen van de immunologie, ontstekingscellen, groeifactoren en proteasen is, primaire tumoren geïmplanteerd in situ zal beter inzicht en bootsen de kanker proces cellen nauwkeuriger dan tumoren geïnduceerd door chemische agentia of een subcutane injectie van tumor. Chemische stoffen die worden gebruikt voor het opwekken van tumoren kunnen schadelijk zijn voor onderzoekers en milieu en zijn zelfs verboden in sommige landen. Vanwege het ontbreken van een borstklier vet pad omgeving, kan de pathologische voortgang van een subcutane injectie afwijken met dat in echte borstkankerpatiënten, waarvan kanker afkomstig is en niet irriteert van de borstklier vet pad. De nadelen van subcutane injecties aanmoediging van het gebruik van orthotopic modellen te bestuderen van de tumorgroei. In eerder onderzoek, zeer gemetastaseerde tumoren van de MDA-MB-231, ontwikkelde na zeven orthotopic transplantaties, gewezen op het belang van de injectie locatie14. Onlangs was de inplanting van de orthotopic van borstkankercellen in de borstklier vet pad met chirurgie gerapporteerde15,16. Met de borstklier pad omgeving, de tumorgroei en de migratie in verre organen cover het hele proces van borstkanker bij pathologisch relevante sites waardoor dit model een miniatuur van het verloop van ziekten bij de mens. Echter, na de operatie, de huid automatisch pogingen om zichzelf, die kunnen brengen het potentiële risico van het verstoren van het normale borst kanker ontstaan en bias van de resultaten te genezen.
Wij hebben ten opzichte van sommige borst kanker modellen en een minimaal invasieve orthotopic model voor het onderzoek naar de mogelijke gevolgen van drugs voor borst kanker progressie17,18. In deze studie, een video protocol over hoe te orthotopically borstkankercellen injecteren in de borstklier vet pad in een eenvoudige, minder invasieve manier wordt gepresenteerd. Deze methode orthotopic injectie zonder chirurgie is voordelig in vele opzichten. Ten eerste, de werking, is eenvoudig en snel, ongeveer 1 minuut per muis. Ten tweede, met primaire tumor foci basisgewicht van de juiste pathologische sites, het bestrijkt het hele tumorigene proces van borst kanker progressie van de tumorgroei naar andere organen metastase, waarmee een goede experimentele diermodel voor de studie van de interactie van tumorcellen en tumor communicatie. Bovendien, kan het een waardevol model te schatten van de effecten van de behandeling in alle stadia van borstkanker. Het doel van deze methode is bedoeld als een dierlijk model te maximumly nabootsen menselijke borst kanker progressie.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Dierproeven verliepen overeenkomstig de bepaling en de algemene aanbeveling van de Chinese Experimental dierlijke administratie wetgeving en goedgekeurd door de instelling van Animal Care en gebruik Comité van kapitaal medische universiteit (Ref geen. AEEI-2014-052). Vrouwelijke Balb/c muizen 6 tot 8 weken leeftijd werden gebruikt.
1. voorbereiding van de cellen en de dieren
- Één dag vóór de operatie, scheren de haren rond de vierde tepels om het operationele gebied bloot te stellen.
- Gebruik één hand te houden van de muis strak aan de achterkant om te controleren of de muis zal niet zich vrij bewegen, zet de muis zijn buik aan de exploitant bloot te stellen en gebruik vervolgens een andere hand te scheren van de vacht rond de vierde tepels met een elektronische scheerapparaat.
- Een dun laagje ontharing crème zette rond de tepels voor 30-60-s, schoon weg de crème met gedestilleerd water en vervolgens drogen de muis met zachte papier.
- Op de dag van de operatie, verzamelen lymfkliertest borstkankercellen (4T1-luc2), cel tellen, en aanpassen van de celdichtheid tot 2 x 105 cellen/mL in een met fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) in steriele microcentrifuge buizen en houden hen op ijs. Voor elke muis, is 1 x 104 cellen/50 µL in een spuit van 1 mL bereid.
2. Orthotopic injectie
-
Verdoving van muizen
- Induceren van anesthesie. Leg de muizen in een gesloten transparante bak en zet 2% Isofluraan gas naar het anesthetize van de muizen voor ongeveer 5 minuten, totdat ze allemaal liggen en val in slaap.
- Handhaven van anesthesie. De muizen uit de container overbrengen in individuele verdoving maskers, sommige dierenarts zalf zetten hun ogen te vermijden droogheid, houd de muizen blindelings met hun tepels blootgesteld aan de exploitant, en laat hen blijven inhaleren Isofluraan gas voor een paar minuten tot de injectie is verricht.
- Bevestigen het succes van verdoving door het ontbreken van een teen reflex voor de terugtrekking van de snuifje.
- Ophthalmic zalf toepassen door de ogen van de muizen om te voorkomen dat oog droogheid.
Opmerking: Volgens de grootte van de container en het aantal individuele verdoving maskers beschikbaar, een groep van muizen kan samen worden verdoofd en één voor één onder individuele verdoving ingespoten.
-
Prestaties van de injectie
- Gebruik enerzijds naar de tent van de huid rond de vierde tepel met een pincet, een opgeheven "tunnel" instellen voor de spuit te volgen. De andere hand gebruiken om te houden van de spuit met de naald naar boven gedraaid om de huid subcutaan bij 5-10 mm uit de tepel; vervolgens, volg de "tunnel" tot het uiteinde van de naald komt dicht bij de tepel, zorgvuldig zet de naald tip omhoog in de borstklier vet pad tot het oog van de naald komt onder het uiteinde van de tepel, negeren de pincet en langzaam injecteren van de cellen.
- De naald een beetje omdraaien en intrekken van de spuit langzaam; Gebruik een wattenstaafje om te drukken de naald wond voor 10-20 s om ervoor te zorgen is er geen lekkage van vloeistof.
- Observeren van de vierde tepel te bevestigen van een succesvolle injectie: een witte transparante platte bol met de tepel als het centrum kan worden waargenomen (Figuur 1).
- Houd de muizen verdoofd voor een andere minuut om te laten de muizen herstellen en snel ook, die zal leiden tot de injectie gewikkeld om te openen en de tumorcellen uit te lekken.
3. analyse van de tumorgroei en uitzaaiing
Opmerking: Primaire tumoren zijn geïdentificeerd als transparant of blister-achtige hobbels na injecties en als bol of ellipsoïde solide brokken met de tepel een paar dagen later. Tumorgroei wordt geëvalueerd door het volume van de tumor en tumor bioluminescentie.
- Om het volume van de tumor, houd de muis met één hand. Bloot zijn buik aan de exploitant en de andere kant met remklauw de tumor lengte (L) en breedte (W). Bereken het volume van de tumor (V) als volgt.
V = (L x W2) / 2 - Injecteren om vast te leggen van de tumor bioluminescentie, 150 mg/kg D-luciferine aan de achterkant van de muis nek, 10 minuten vóór imaging. Anesthetize van de muizen met 2% Isofluraan gas voor 5 min en deze overbrengen naar individuele verdoving maskers te laten inhaleren Isofluraan gas gedurende 5 minuten langer. Na instructies van de fabrikant, bioluminescentie foto's vastleggen van de primaire tumor en metastase, met auto belichtingstijd, middellange weggooien en f/stop bij 1.
4. het oogsten van de primaire Tumor en metastase organen voor analyse
Opmerking: Bij het bereiken van het doel van dit experiment, of het bereiken van het eindpunt van de humane, de primaire tumor geoogst kan worden voor verdere studie. In deze studie, worden tumoren verwijderd op 4 tot 5 weken na de injectie, wanneer het volume van de tumor ongeveer 800 mm-3 bereikt. De longen worden verwijderd tijdens de week 8.
-
Oogsten van de primaire tumor
- Het uitvoeren van de operatie in een steriele kap te handhaven van een steriele atmosfeer. Anesthetize de dieren door Isofluraan. Bevestigen het succes van verdoving door het ontbreken van Teen snuifje terugtrekking reflexen. Ophthalmic zalf toepassen door de ogen van de muizen om te voorkomen dat ze uitdrogen.
- Distantiëren van de tumor van de huid met een schaar, dropwise pijnstiller (1 mg/mL tramadol, 1 druppel ongeveer 50 µL per muis) ter verlichting van postoperatieve pijn.
- Steek de huid met een chirurgische hechtdraad, afgesneden van overtollige hechtdraad, drape uit de incisie.
- De primaire tumor gesneden in de helft met een scalpel, 1/2 van de tumor gestoken met 4% paraformaldehyde voor verdere haematoxyline en eosine (H & E) kleuring en immunohistochemistry en onmiddellijk bevriezen de andere 1/2 met vloeibare stikstof voor het westelijke bevlekken of een RNA isolatie studie later.
- Na het hechten, warm u de muizen met een lamp tot ze herstellen, houden van de muizen in één kooien totdat volledig hersteld. Continu beheren 10 mg/kg tramadol met een mondelinge maagsonde voor 3 d na de operatie.
-
Oogsten van metastase organen
- De muizen met een overdosis van pentobarbital euthanaseren, openen hun borst met een schaar, zachtjes nemen uit de longen en wassen met PBS. Long metastase foci kunnen worden geïdentificeerd, zoals wit transparant hobbels die zijn morfologisch verschillend en te onderscheiden van normale roze longweefsel.
- Zet de longen in 4% paraformaldehyde om te controleren of de metastase door H & E kleuring.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Na een succesvolle injectie, een witte transparante platte bol met de tepel als de uitgaande oppervlak rond center kan worden waargenomen (Figuur 1). Groei van de primaire tumor kan worden gemeten door het volume van de tumor en tumor van de levende cel bioluminescentie (Figuur 2). Zowel het volume van de tumor en de totale flux verhoogd tijdens het experiment voor resectie. In een vroeg stadium, kan niet uitzaaiing worden gevonden omdat geen secundaire tumor is gebeurd of de sterke bioluminescente signalen van de primaire tumor de opsporing van kleine metastase foci met zwakke signalen belemmeren. Na resectie, kan de bioluminescente signaal van de metastatische foci van verre organen worden gedetecteerd en geanalyseerd. De morfologie van zowel de primaire borst tumor en de secties van de longen werden bestudeerd met H & E kleuring, terwijl angiogenese werd onderzocht door de kleuring van de tumor met vaartuig marker, CD31 voor microvessel dichtheid (MVD) (Figuur 3).
Figuur 1: foto's voor en na de injectie van de orthotopic op de borstklier vet pad van vrouwelijke Balb/c muizen. De bewerking is uitgevoerd, en de foto's werden genomen terwijl de muizen onder Isofluraan verdoving waren. A, vóór injectie, B, na injectie.
Figuur 2: Volume en de totale flux van de primaire tumor werden gemeten vanaf 7 dagen na de inplanting. De cel schorsing inplanting gegenereerd een verhoogde primaire tumor, zowel in volume, die werd gevisualiseerd en bepaald met behulp van de remklauwen, totale flux, die werd gemeten door het systeem van Spectrum. De figuur toont bioluminescente beelden van primaire tumoren en uitzaaiingen waargenomen op verschillende tijdstippen na dag 7 innesteling. p/s = fotonen/seconde. Dit cijfer is gewijzigd van Zhang et al. 17. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 3: H & E kleuring en immunohistochemische kleuring van analyse van primaire tumoren en longkanker metastase. Weefsels werden vastgesteld in 4% paraformaldehyde ingebed in paraffine en gekleurd. (A en B) secties werden gekleurd met haematoxyline en eosine (H & E). (C en D) secties werden gekleurd met antiCD31 antilichaam. Bruinachtige vlekken aangegeven CD31 + vaartuigen. Panelen A en C huidige primaire tumor weefsel, presenteren panelen B en D Long metastase. CD = cluster van differentiatie. De vergroting gebruikt = 200 X. De schaal bar = 50 µm. Dit cijfer is gewijzigd van Zhang et al. 17. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
De cellen die worden gebruikt in deze studie zijn 4T1-luc2, lymfkliertest triple-negatieve borstkankercellen met luciferase etikettering, die een nuttig instrument voor het investeren antitumorale en antimetastatic gevolgen van drugs als gevolg van hun zeer invasieve aard2,19 . Luciferases, stabiel aan de volgende generatie van de cel, worden gebruikt om aan te geven van de tumor van levende cellen, zowel op de melkklier als op andere verre organen20. In sommige gevallen is hypoxie en voedingsstoffen tekort binnen het resultaat van de tumor in een daling in de bioluminescente signaal, en het volume van de primaire tumor niet strijdig met de bioluminescente signaal in een later stadium van de tumor progressie. De techniek van de cellulaire orthotopic-injectie (COI) van cel schorsingen kan ook worden uitgevoerd met andere borst kanker cellijnen, zoals menselijke cellen MDA-MB-231 (niet-gepubliceerde gegevens). In deze studie, met de melkklier als haar omgeving, het is een goede diermodel studie tumor communicatie, kruising tussen tumorcellen en stromale cellen praten. Tijdens de voortgang van de tumor, in sommige muizen, kan de tepel ulcerate, schurft, rode granulatie weefsel groeien, plat of zelfs verdwijnen, vergelijkbaar met wat er in menselijke tepels tijdens borstkanker gebeurt. Muizen kunnen ervaren ongemak met zweren; humane zorg moet worden genomen. Meer tepel verandering heeft gevonden in muizen met behulp van deze techniek COI dan met de techniek van de micro-invasieve chirurgie. De chirurgische orthotopic implantatie (SOI) van histologisch intact menselijke tumor weefsel, in vergelijking met de cellulaire orthotopic-injectie (COI) van cel schorsingen, blijkt hoger kwaadaardige kanker in de blaas, longen, maag, nier en dubbele punt21 dat nabootsen van wat wordt gezien in patiënten22.
Met een hoge incidentie van metastase, met name Long metastase, de lymfkliertest borst kanker model gevestigd in deze studie is een goed syngeneic kanker model om te ontdekken de spontane migratie en invasie, vergeleken met een kunstmatige metastase model, zoals een staart veneuze injectie. De tumor cel activiteiten en tekens spelen ook belangrijke rollen in de metastase. Andere cellijnen, hebben zoals menselijke borst kankercel MCF-7, zelfs ingeplant door de injectie van een orthotopic op de borstklier vet pad van immuun-deficiënte Balb/c muizen, een lagere metastatische vermogen. Met de wijziging van de cellen of muizen, zoals de overmatige expressie of down-expressie van een bepaald gen, kan deze technologie worden toegepast in meer onderzoeksgebieden.
De essentiële werking van deze financiële injectie is om zorgvuldig en langzaam omhoog de naald tip, van onderhuids in de borstklier vet pad. Wanneer de injectiespuit tip dicht bij de tepel komt, voelt de exploitant aandringen van het weefsel. Aangezien de muis klier zeer klein is, is slechts een beetje meer druk nodig om laat de spuit tip passeren aandringen. Te veel druk zal resulteren in de tip passeren de klier en het breken van de huid, wat in een fout van de injectie resulteert. Cellen logaritmisch-fase, een eencellige schorsing, de standaardwerking protocol (SOP) en bekwame operatoren zijn alle vereiste om de variatie tussen muizen. Tumor cel gedrag is belangrijk voor de vorming en de herhaalbare van tumor modellen. Oogst cellen in logaritmische-fase als ze tot ongeveer 80% - 90 groeien % samenloop; te laag of te hoog cel dichtheden zal interfereren met het model van de tumor en leiden tot variaties tussen experimenten. De eencellige schorsing is ook belangrijk omdat cel samengeklonterd resultaat in misrekeningen van het nummer van de cel. Trypsine, een EDTA-oplossing, of andere geschikte methoden om los van de cellen volgens de doelstellingen van het experiment te worden gekozen en de doelstellingen van de onderzoeker is geïnteresseerd in. Afhankelijk van de spuit schaal en cel dichtheid, het geïnjecteerde volume kan variëren van 25 tot 100 µL. Het bedrag van 1 x 10,4 naar 1 x 106 cellen is gebruikte te irriteren tumorgroei volgens verschillende soorten cellen. Trypan blauw kleuring wordt gebruikt om te onderscheiden van levensvatbare cellen van dode ones. Meer dan 95% levensvatbaarheid wordt beschouwd als een goede situatie voor het opwekken van een snelle tumor groei en metastase in vivo. Deze zijn ook geschikt voor alle andere modellen van de tumor bij de voorbereiding van tumorcellen. Om correct de primaire tumor grootte remklauw en krijgen een nauwkeurige bioluminescente signaal, moet de vacht rond de tepel weer zodra het groeit terug worden verwijderd. Wanneer de primaire tumor tot een grote massa groeit en zijn bioluminescente signaal te sterk voor onderzoekers is te observeren van andere orgel metastasen (bijvoorbeeldlongkanker metastase), bedekken met zwarte isolatietape voordat bioluminescentie beelden zijn genomen, of verwijdert het door chirurgie. Een pijnstiller kan worden gebruikt voor post chirurgische pijn.
Succesvolle inoculatie kan leiden tot longkanker metastase: met een tarief van voorkomen van meer dan 90%, gemetastaseerde foci op niet-ingespoten borsten, bot of lymfeklieren zijn vrij algemeen, terwijl coeliakie metastase zeldzaam is. De secundaire tumoren zijn een doorschijnend massa en van het omliggende normale weefsel kunnen worden onderscheiden. Een onduidelijke toepassing van de injectie kan leiden tot experimentele fouten in grootte en vorm en metastase locaties van de tumor. Lekkages van het platte vlak na de injectie de grootte van de tumor vermindert, lekkages van de melkklier in de "tunnel" zal resulteren in een lange cilindrische tumor die de bepaling van het volume van de tumor belemmeren zal wanneer we gebruik maken van een digitale schuifmaat naar meten. Subcutane injecties rond de borstklier vet pad zelden leiden tot longkanker metastase en zijn niet geschikt voor verre metastase-geassocieerde studie. Om de inoculatie stabiel en verminderen het risico van lekkage, kan Matrigel worden gebruikt wanneer opschorting van tumorcellen. Echter Matrigel is niet een enkel oplosmiddel, het wordt beschouwd als een soort van extracellulaire matrix (ECM), en sommige soorten gel bevatten zelfs factoren die met de experimenten interfereren kunnen. In het experiment gericht op tumor communicatie, ECM, kruising praten onder tumorcellen of met stromale cellen, is het beter om te voorkomen dat met behulp van Matrigel. Voor ingespoten cellen met de luciferase label D-luciferine, het substraat van luciferase wordt geïnjecteerd om het binden van de levende tumorcellen in muizen. In deze studie, de dynamiek van de Bioluminescentie in vivo gesuggereerd dat de bioluminescente signaal op 10 minuten na het inspuiten van de D-luciferine, de piek bereiken en kunnen stabiel gedurende ongeveer 10-15 minuten (variërend tussen verschillende muizen), of met een intraperitoneale injectie of een subcutane injectie. Gelet op dat de geteste drug wordt geïnjecteerd in de intraperitoneally, om te voorkomen dat de interactie van de geteste drug met D-luciferine en om de irritatie van het buikvlies, wordt een subcutane injectie voorgesteld.
Kortom, is de orthotopic injectie van borstkankercellen die worden beschreven in dit document een zeer nuttige en krachtige tool in het bestuderen van de pathologie en de progressie van kanker van de borst. Het is gemakkelijk te verwerken en kunnen snel worden uitgevoerd. De primaire tumor ontstaat op de melkklier met een hoge voorkomen van metastase, die maximumly het pathofysiologisch proces van menselijke borst carcinoom bootst.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs hebben niets te onthullen.
Acknowledgments
De auteurs bedank de nationale Natural Science Foundation van China (alleen grant nr. 81873111, 81673924, 81774039, 81503517), de Peking Natural Science Foundation (grant nr. 7172095, 7162084, 7162083), en de Xu XI bis Foundation van het ziekenhuis van Peking van Traditionele Chinese geneeskunde (verlenen van Nee, xx201701). We bedanken Prof. Chang-Zhen Liu, van experimentele Research Center, China Academie van Chinese medische wetenschappen, voor bioluminescente beelden.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| anesthesia machine | Midmark Corporation, Dayton, OH, USA | Matrx VMS | anesthesia |
| In-Vivo Imaging System | PerkinElmer | IVIS Spectrum | used for bioluminescence detecion |
| isoflurane | Hebei yipin chemical reagents company | O21400 | anesthesia |
| 1 ml syringe | Becton,Dickinson and Company | A257 | cell injection |
| digital caliper | Shang Hai Shen Han Measuring Tools Co., Ltd. | S-H | volume measurement |
| tramadol | Mundipharma company | - | pain killer |
| D-luciferin | Gold Biotechnology Inc. | LUCK-1G | used for bioluminescence detecion |
| The primary antibody against cluster of differentiation (CD) 31 | Abcam | ab28364 | used for MVD detection |
| hematoxylin and eosin staining kit | Beijing Zhong Shan Jinqiao Biotechnology Co., Ltd. | ZLI-9615 | histology |
| hair removal cream | Veet | - | hair removal cream |
| Carbomer Eye Gel | Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH | - | ophthalmic ointment |
| sewing needle | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd. | 17U0302J | suture |
References
- Torre, L. A., et al.
- Rashid, O. M., Takabe, K. Animal models for exploring the pharmacokinetics of breast cancer therapies. Expert Opinion on Drug Metabolism & Toxicology. 11 (2), 221-230 (2015).
- Wagner, K. U. Models of breast cancer: quo vadis, animal modeling. Breast Cancer Research. 6 (1), 31-38 (2004).
- Horas, K., Zheng, Y., Zhou, H., Seibel, M. J. Animal models for breast cancer metastasis to bone: opportunities and limitations. Cancer Investigation. 33 (9), 459-468 (2015).
- Kawaguchi, T., Foster, B. A., Young, J., Takabe, K. Current Update of Patient-Derived Xenograft Model for Translational Breast Cancer Research. Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. 22 (2), 131-139 (2017).
- Wright, L. E., et al. Murine models of breast cancer bone metastasis. BoneKEy Reports. 5, 804 (2016).
- Cassidy, J. W., Batra, A. S., Greenwood, W., Bruna, A. Patient-derived tumour xenografts for breast cancer drug discovery. Endocrine-Related Cancer. 23 (12), T259-T270 (2016).
- Stiedl, P., Grabner, B., Zboray, K., Bogner, E., Casanova, E. Modeling cancer using genetically engineered mice. Methods in Molecular Biology. 1267, 3-18 (2015).
- Menezes, M. E., et al. Genetically engineered mice as experimental tools to dissect the critical events in breast cancer. Advances in Cancer Research. 121, 331-382 (2014).
- Talmadge, J. E., Singh, R. K., Fidler, I. J., Raz, A. Murine models to evaluate novel and conventional therapeutic strategies for cancer. The American Journal of Pathology. 170 (3), 793-804 (2007).
- Spaw, M., Anant, S., Thomas, S. M. Stromal contributions to the carcinogenic process. Molecular Carcinogenesis. 56 (4), 1199-1213 (2017).
- Joyce, J. A., Pollard, J. W. Microenvironmental regulation of metastasis. Nature Reviews Cancer. 9 (4), 239-252 (2009).
- Hanahan, D., Weinberg, R. A. Hallmarks of cancer: the next generation. Cell. 144 (5), 646-674 (2011).
- Yano, S., et al. Tumor-targeting adenovirus OBP-401 inhibits primary and metastatic tumor growth of triple-negative breast cancer in orthotopic nude-mouse models. Oncotarget. 7 (51), 85273-85282 (2016).
- Kocaturk, B., Versteeg, H. H. Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth. Journal of Visualized Experiments. (96), e51967 (2015).
- Tavera-Mendoza, L. E., Brown, M. A less invasive method for orthotopic injection of breast cancer cells into the mouse mammary gland. Lab Animal. 51 (1), 85-88 (2017).
- Zhang, Y., et al. Establishment of a murine breast tumor model by subcutaneous or orthotopic implantation. Oncology Letters. 15 (5), 6233-6240 (2018).
- Zhang, Y., et al. Gubenyiliu II Inhibits Breast Tumor Growth and Metastasis Associated with Decreased Heparanase Expression and Phosphorylation of ERK and AKT Pathways. Molecules. 22 (5), (2017).
- Kwon, Y. S., Lee, K. S., Chun, S. Y., Jang, T. J., Nam, K. S. Suppressive effects of a proton beam on tumor growth and lung metastasis through the inhibition of metastatic gene expression in 4T1 orthotopic breast cancer model. International Journal of Oncology. 49 (1), 336-342 (2016).
- Kalra, J., et al. Validating the use of a luciferase labeled breast cancer cell line, MDA435LCC6, as a means to monitor tumor progression and to assess the therapeutic activity of an established anticancer drug, docetaxel (Dt) alone or in combination with the ILK inhibitor, QLT0267. Cancer Biology & Therapy. 11 (9), 826-838 (2011).
- Hoffman, R. M. Orthotopic metastatic mouse models for anticancer drug discovery and evaluation: a bridge to the clinic. Investigational New Drugs. 17 (4), 343-359 (1999).
- Hoffman, R. M. Patient-derived orthotopic xenografts: better mimic of metastasis than subcutaneous xenografts. Nature Reviews Cancer. 15, 451 (2015).
