Summary
Här presenterar vi ett protokoll för att implantatet bröstcancerceller i mjölkkörtlar fettet pad i en enkel, mindre invasiv och lätt att hantera sätt, och denna mus ortotop breast cancer modell med en ordentlig mjölkkörtlar fett pad miljö kan användas för att undersöka olika aspekter av cancer.
Abstract
En lämplig djurmodell är avgörande för en bättre förståelse av sjukdomar. Djur modeller som inrättats genom olika metoder (subkutana injektioner, xenograft, genetisk manipulation, kemiska reagenser induktion, etc.) har olika patologiska tecken och spelar viktiga roller i att undersöka vissa aspekter av sjukdomar. Även om ingen enda modell kan helt härma den hela mänskliga sjukdomsprogressionen, spelar ortotop organ sjukdomsmodeller med en ordentlig stromal miljö en oersättlig roll i att förstå sjukdomar och screening för potentiella läkemedel. I den här artikeln beskrivs hur man implantatet bröstcancerceller i mjölkkörtlar fettet pad i en enkel, mindre invasiv och lätt att hantera sätt, och följ metastaser till avlägsna organ. Med rätt funktioner av primär tumörtillväxt, bröstet och bröstvårtan patologiska förändringar, och en hög förekomst av metastaser i andra organ härmar denna modell maximumly mänskliga bröstcancer cancer progression. Primär tumör tillväxt i situ, lång-fjärrmetastaser och den tumör mikromiljö av bröstcancer kan undersökas med hjälp av denna modell.
Introduction
Bröstcancer är den vanligaste orsaken till kvinnliga dödlighet i hela världen. Med dess successivt ökande incidens blivit bröstcancer ett allvarligt hot mot folkhälsan1. Murina cancer modeller är bra broar mellan prekliniska och kliniska studier, och en bra härma murina sjukdom modell kommer att öka noggrannheten för forskning om sjukdomar och medicin.
Primär tumörtillväxt börjar utvecklingen av malign sjukdom, medan metastaser och komplikationer är de främsta orsakerna till dödsfall och fattiga livet egenskaper hos de flesta cancerpatienter. Flera murina modeller används för att efterlikna patologin av mänskliga bröstcancer cancer2,3,4. Xenograft-modeller används allmänt för cancer studien att förstå patologiska tecken och att skärmen droger för säkerhet och effekt5,6,7. Genetiskt modifierade möss (GEM) genereras för att efterlikna mänskliga bröstcancer genom att rikta vissa onkgener eller tumör suppressor gener8. PÄRLA har en relativt enkel och uniformerade bakgrund att förstå rollen av gener i cancerogena framsteg; konstgjord miljö och bakgrund är dock begränsade att undersöka metastaser patologi och relaterade terapier9. Mänskliga cancerceller, även om med mänskliga patologiska funktioner, kan endast implanteras i immun-brist möss, och otillräcklighet tumör-host immun interaktionen kan leda till partisk resultat10.
Där den solid tumören initierar har en direkt inverkan på de biologiska och patologiska tecken av sjukdom11,12,13. Eftersom cancerceller framsteg är komplicerade resultatet av samspel mellan tumörceller, stromaceller, immunologi celler, inflammatoriska celler, tillväxtfaktorer och proteaser, primära tumörer implanteras i situ kommer att ge en bättre insikt och efterlikna den cancergen process celler mer exakt än tumörer som inducerats av kemiska agenser eller en subkutan injektion av tumör. Kemiska medel som används för att inducera tumörer kan vara skadligt för forskare och miljö och är även förbjudet i vissa länder. På grund av avsaknad av en mjölkkörtlar fett pad miljö, kan patologiska utvecklingen av en subkutan injektion variera med att riktiga bröstcancerpatienter, vars cancer påbörjar och irriterar från mjölkkörtlar fett pad. Nackdelarna med subkutana injektioner uppmuntra användningen av ortotop modeller att studera tumörtillväxt. I tidigare forskning anges mycket metastaserande MDA-MB-231 tumörer, framkallade efter sju ortotop transplantationer, vikten av injektion läge14. Ortotop implantation av bröstcancerceller i mjölkkörtlar fettet pad med kirurgi var nyligen rapporterade15,16. Med mjölkkörtlar pad miljön, tumörtillväxt och migration in avlägsna organ täcka hela processen av bröstcancer på patologiskt relevanta webbplatser, vilket gör denna modell en miniatyr av utvecklingen av mänskliga sjukdomar. Men efter operationen försöker huden automatiskt att läka sig själv, vilket kan få den potentiella risken för stör den normala bröst cancer originering och bias resultaten.
Vi har jämfört några bröst cancer modeller och etablerade en minimalinvasiv ortotop modell för att undersöka den potentiella effekten av läkemedel på breast cancer progression17,18. I denna studie en video protokollet om hur man orthotopically injicera bröstcancerceller i mjölkkörtlar fettet pad i en enkel, mindre invasiva sätt presenteras. Detta ortotop injektion metod utan kirurgi är fördelaktigt på många sätt. Första är operationen enkel och snabb, ca 1 minut per mus. För det andra, med primärtumör foci börjar på rätt patologiska platser, täcker hela tumörframkallande processen av bröst cancer progression från tumörtillväxt till andra organ metastas, vilket ger en bra experimentell djurmodell för att studera den interaktion av tumörceller och tumör mikromiljö. Det kan vara en värdefull modell att uppskatta behandlingseffekter på alla stadier av bröstcancer. Målet med denna metod är att ge en djurmodell till maximumly härma mänskliga bröstcancer cancer progression.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Djurförsök genomfördes i enlighet med tillhandahållande och allmänna rekommendation av kinesiska experimentella djur Administration lagstiftning och godkändes av institutionen av djur vård och användning kommittén av kapital medicinska universitet (Ref nr. AEEI-2014-052). Balb/c honmöss i åldern 6 till 8 veckor användes.
1. beredning av celler och djur
- En dag innan operationen, raka håret runt de fjärde bröstvårtorna att exponera det operativa området.
- Använd en hand för att hålla musen hårt på baksidan för att kontrollera musen inte kommer röra sig fritt, Vrid upp musen för att exponera sin mage till operatören och sedan använda en annan hand för att raka pälsen runt fjärde bröstvårtorna med en elektronisk rakapparaten.
- Lägg ett tunt lager av hårborttagning grädde runt bröstvårtorna för 30-60 s, städa bort krämen med destillerat vatten, och torka sedan musen med mjukt papper.
- Samma dag som operationen, samla murina bröstcancer cancerceller (4T1-luc2), räkna cell, och justera cell densiteten till 2 x 105 celler/mL i fosfatbuffrad saltlösning (PBS) i steril mikrocentrifugrör och hålla dem på isen. För varje mus, är 1 x 104 celler/50 µL i en 1 mL spruta beredd.
2. ortotop injektion
-
Anestesi av möss
- Inducera anestesi. Sätta mössen i en försluten genomskinlig behållare och slå på 2% isofluran gas för att söva möss i ca 5 min, tills de alla ligga ner och falla sovande.
- Underhålla anestesi. Överföra mössen från behållaren till enskilda anestesi masker, sätta vissa vet salva på deras ögon att undvika torrhet, hålla mössen supinely med sin Bröstvårtor utsatt för operatören och låta dem fortsätta att inhalera isofluran gas i några minuter tills den injektion har utförts.
- Bekräfta framgången för anestesi av bristen på en tå nypa uttag reflex.
- Tillämpa oftalmologiska salva i ögonen hos mössen att förhindra torra ögon.
Obs: Enligt container storlek och antalet enskilda anestesi masker tillgängliga, en grupp möss kan vara sövda tillsammans och injiceras en efter en under enskilda anestesi.
-
Prestanda av injektionen
- Använda en hand för att tältet upp huden runt fjärde bröstvårtan med pincett, för att ställa in en upplyft ”tunnel” för sprutan att följa. Använd den andra handen till Håll sprutan med nålen vände uppåt för att ange huden subkutant vid 5-10 mm från bröstvårtan; då följer ”tunneln” tills nålens spets kommer nära bröstvårtan, försiktigt flytta nålen spets till mjölkkörtlar fettet pad tills visaren syna kommer under bröstvårtan tipset, kasta pincetten och injicera cellerna långsamt.
- Vrid runt nålen lite och dra in sprutan långsamt; Använd en bomullspinne för att trycka nålen sår för 10-20 s att se till att det finns ingen vätska läckage.
- Observera den fjärde bröstvårtan att bekräfta en framgångsrik injektion: en vit genomskinlig platta sfär med bröstvårtan som centrum kan observeras (figur 1).
- Hålla mössen sövda i en annan minut för att undvika att låta mössen återställa och flytta för snabbt, vilket kommer att orsaka injektionen sår för att öppna och tumörcellerna att läcka ut.
3. analys av tumörens tillväxt och metastas
Obs: Primära tumörer identifieras som transparent eller blister-liknande knölar efter injektioner och som sfäriska eller ellipsoid fasta klumpar med bröstvårtan några dagar senare. Tumörtillväxt utvärderas av tumör volym och tumör Mareld.
- För att fastställa den tumör volymen, håll musen med ena handen. Exponera sin mage till operatören och Använd den andra handen till OK tumör längd (L) och bredd (W). Beräkna volymen tumör (V) enligt följande.
V = (L x W2) / 2 - För att fånga tumör Mareld, injicera 150 mg/kg D-luciferin på baksidan av musens hals, 10 min innan imaging. Söva möss med 2% isofluran gas för 5 min och överföra dem till enskilda anestesi masker att låta dem inhalera isofluran gas för 5 min längre. Efter tillverkarens instruktioner, fånga Mareld bilder av primärtumör och metastaser, med auto exponeringstid, medellång binning och f/stop 1.
4. upptagning av primärtumör och metastaser organ för analys
Obs: När att uppnå syftet med detta experiment, eller nå humana slutpunkten, den primära tumören kan skördas för vidare studier. I denna studie avlägsnas tumörer 4 till 5 veckor efter injektion, när volymen tumör når cirka 800 mm3. I lungorna tas bort vid 8 veckor.
-
Skörd av den primära tumören
- Utför operationen i en steril huva att upprätthålla en steril atmosfär. Söva djuren av isofluran. Bekräfta framgången för anestesi av bristen på tå nypa uttag reflexer. Tillämpa oftalmologiska salva i ögonen hos mössen att hindra dem från att torka ut.
- Separera tumören från huden med sax, droppvis painkiller (1 mg/mL tramadol, 1 droppe av ca 50 µL per mus) för att lindra postoperativ smärta.
- Sy huden med en kirurgisk sutur, klipp av överflödigt sutur, drapera av snittet.
- Skär den primära tumören i halvt med en skalpell, sätta 1/2 av tumören i 4% PARAFORMALDEHYD för ytterligare hematoxylin och eosin (H & E) färgning och immunohistokemi och genast frysa den andra 1/2 med flytande kväve för western blotting eller en RNA isolering studie senare.
- Efter suturering, värma möss med en lampa tills de återhämta sig, hålla mössen i enda burar tills återhämtat sig helt. Kontinuerligt administrera 10 mg/kg tramadol med en oral sondmatning för 3 d efter operationen.
-
Skörd av metastaser organ
- Euthanize möss med en överdos av pentobarbital, öppna deras kistor med sax, försiktigt ta ut lungorna och tvätta dem med PBS. Lungan metastaser foci kan identifieras som vit transparent knölar som är morfologiskt olika och skiljer sig från normala rosa lungvävnad.
- In 4% PARAFORMALDEHYD att verifiera metastaser av H & E färgning lungorna.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Efter en framgångsrik injektion, en vit genomskinlig platta sfär med bröstvårtan som den ut ytan runt center kan observeras (figur 1). Primär tumörtillväxt kan mätas genom tumör volym och levande tumör cell Mareld (figur 2). Under experimentet innan resektion ökat både tumör volym och de totala fluxen. I ett tidigt skede, kan inte metastaser hittas eftersom ingen sekundär tumör har hänt eller stark självlysande signalerar av den primära tumören hindrar upptäckt av små metastaser foci med svaga signaler. Efter resektion, kan självlysande signalen från de metastaserad foci av avlägsna organ identifieras och analyseras. Morfologi av både primär bröstcancer tumören och avsnitten lung studerades med H & E färgning, medan angiogenes undersöktes av färgning tumören med fartyget markör CD31 för microvessel densitet (MVD) (figur 3).
Figur 1: bilder före och efter ortotop injektionen vid coitus fettet pad för Balb/c honmöss. Operationen utfördes, och bilderna togs medan mössen var under isofluran anestesi. A, före injektion, B, efter injektion.
Figur 2: volym och totala flödet av den primära tumören mättes från 7 dagar efter det att inplantera. Cell suspension implantation genererade en ökad primärtumör såväl i volym, vilket var visualiserat och fastställs med hjälp av bromsok, total flux, som mättes av spektrum systemet. Figuren visar självlysande bilder av primära tumörer och metastaser som observerats vid olika tidpunkter efter dag 7 av implantationen. p/s = fotoner/sekund. Denna siffra har ändrats från Zhang et al. 17. vänligen klicka här för att visa en större version av denna siffra.
Figur 3: H & E färgning och immunhistokemisk färgning analys av primära tumörer och lungmetastaser. Vävnaderna var fast i 4% paraformaldehyd, inbäddade i paraffin och målat. (A och B) sektioner var färgas med hematoxylin och eosin (H & E). (C och D) sektioner var målat med antiCD31 antikroppar. Brunaktig färgning anges CD31 + fartyg. C nuvarande primära tumörvävnad och paneler A , paneler B och D presenterar lungmetastaser. CD = kluster av differentiering. Förstoringen används = 200 X. Skalstapeln = 50 µm. Denna siffra har ändrats från Zhang et al. 17. vänligen klicka här för att visa en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Cellerna som används i denna studie är 4T1-luc2, murina triple-negativ bröstcancer cancerceller med luciferas märkning, som är ett användbart verktyg för att investera antitumöreffekt och antimetastatic effekterna av läkemedel på grund av deras mycket invasiva natur2,19 . Luciferases, stabil till nästa cell generation, används för att indikera den levande tumören celler, både på bröstkörteln och andra avlägsna organ20. I vissa fall är hypoxi och näringsbrist inom tumör resultatet i en minskning av självlysande signalen, och volymen av den primära tumören inte oförenligt med självlysande signalen i ett senare skede av tumör progression. Tekniken för cellulära ortotop injektion (COI) av cellsuspensioner kan även utföras med andra breast cancer cellinjer, såsom mänskliga celler MDA-MB-231 (opublicerade data). I denna studie, med bröstkörteln som dess miljö, det är en lämplig djurmodell att studera tumören mikromiljö, passerar talar mellan tumörceller och stromaceller. Under tumör framsteg, i vissa möss, kan bröstvårtan ulcerate, didn, växa röd granulationsvävnad, platta eller ens försvinna, liknar vad som händer i människans Bröstvårtor under bröstcancer. Möss kan uppleva obehag med ulcerationer; humana omsorg bör tas. Mer nippel förändring har hittats i möss med denna COI-teknik än med mikro-invasiv kirurgi teknik. Kirurgiska ortotop implantation (SOI) av histologiskt intakt mänsklig tumörvävnad, jämfört med den cellulära ortotop injektionen (COI) av cellsuspensioner, visar högre elakartad cancer i urinblåsan, lungor, mage, njure och kolon21 som efterlikna vad som ses i patienter22.
Med en hög förekomst av metastaser, särskilt lungmetastaser, murina breast cancer modellen etablerad i denna studie är en bra syngena cancer modell att utforska spontana migration och invasion, jämfört med en konstgjord metastaser modell, såsom en svans ven injektion. Den tumör cell aktiviteter och tecken också spela viktiga roller i metastaser. Andra cellinjer, har såsom mänskliga bröstcancer cancercell MCF-7, även implanteras av en ortotop injektion på coitus fett pad av immun-brist Balb/c möss, en lägre metastaserande förmåga. Med ändring av celler eller möss, såsom alltför uttryck eller ned-uttryck för en viss gen, kan denna teknik tillämpas inom flera forskningsområden.
Denna injektion avgörande funktion är att försiktigt och långsamt flytta upp nålspetsen, från subkutan i mjölkkörtlar fettet pad. När sprutspetsen kommer nära bröstvårtan, känner operatören insisterande från vävnaden. Eftersom musen körteln är mycket liten, behövs bara lite mer press att låt sprutspetsen passera genom påtryckningar. För mycket press kommer att resultera i spetsen passerar genom körteln och bryta huden, vilket resulterar i ett fel av injektionen. Logaritmisk-fas celler, en encellig suspension, standarddrift protokoll (SOP) och skickliga operatörer behövs alla att minska variationen mellan möss. Tumör cell beteende är viktigt för bildandet och den repeterbara tumör modeller. Skörda logaritmisk-fas celler när de växer till ca 80% - 90% sammanflödet; för låg eller för hög cell tätheter kommer störa tumör modellen och leda till variationer mellan olika experiment. Singel-cellsuspensionen är också viktigt eftersom cellen klumpar leda till felbedömningar av cellen numrera. Trypsin, en EDTA-lösning eller andra lämpliga metoder väljs att lossa cellerna enligt experiment syftena och målen forskaren är intresserad av. Beroende på sprutan skala och cell densiteten, injektionsvolymen kunde variera från 25 till 100 µL. Mängden 1 x 104 1 x 106 celler används ofta irritera tumörtillväxt enligt olika celltyper. Trypan blå färgning används för att skilja viabla celler från döda. Mer än 95% cellviabilitet betraktas som en bra situation att framkalla en snabb tumör tillväxt och metastas i vivo. Dessa lämpar sig även för eventuella andra tumör modeller när du förbereder tumörceller. För att korrekt OK primärtumör storlek och få en korrekt självlysande signal, bör pälsen runt bröstvårtan tas bort igen när det växer tillbaka. När den primära tumören växer till en stor massa och dess självlysande signalen är för stark för forskare att observera andra orgel-metastaser (t.ex., lungmetastaser), täcka den med svart eltejp innan Mareld bilder är tagna eller ta bort den av kirurgi. Ett smärtstillande medel kan användas för postoperativ smärta.
Framgångsrika inympningen kan resultera i lungmetastaser: med en förekomst av mer än 90%, metastaserad foci på icke-injiceras bröst, ben eller lymfkörtlar är ganska vanligt, medan celiaki metastaser är sällsynt. De sekundära tumörerna är en genomskinlig massa och kan särskiljas från omgivande normala vävnader. Ansökan oprecisa injektionsstället kan leda till experimentella fel i tumör storlek och form och metastaser platser. Läckage från platt sfären efter injektionen kommer att minska storleken på tumören, läckage från mjölkkörtlarna i ”tunneln” kommer att resultera i en lång cylindriska tumör som kommer hindra fastställandet av tumör volym när vi använder en digital skjutmått till mäta det. Subkutana injektioner runt mjölkkörtlar fettet pad sällan leda till lungmetastaser och lämpar sig inte för avlägsen metastas-associerade studie. För att göra inympningen stabil och minska risken för läckage, kan Matrigel användas när avbryta tumörceller. Men Matrigel är inte ett enda lösningsmedel, det betraktas som ett slags extracellulär matrix (ECM) och vissa typer av gel innehåller även faktorer som kan störa experimenten. I experimentet syftar till tumör mikromiljö, ECM, passerar talar bland tumörceller eller med stromaceller, är det bättre att undvika att använda Matrigel. För injicerade cellerna med luciferas tag D-luciferin, substrat för luciferas injiceras för att binda levande tumörceller hos möss. I denna studie, dynamiken i Mareld i vivo föreslog att på 10 minuter efter D-luciferin injektion, självlysande signalen når toppen och kan vara stabil i ca 10-15 minuter (varierar mellan olika möss), huruvida med en intraperitoneal injektion eller en subkutan injektion. Med tanke på det testade läkemedlet injiceras intraperitonealt, att undvika samspelet mellan det testa läkemedlet med D-luciferin och minska den peritoneal retning, föreslås en subkutan injektion.
Sammanfattningsvis är ortotop injektion av bröstcancerceller som beskrivs i detta dokument ett mycket användbart och kraftfullt verktyg i studera patologi och progression av bröstcancer. Det är lätt att hantera och kan utföras snabbt. Den primära tumören har sitt ursprung på bröstkörteln med en hög förekomst av metastaser, som maximumly härmar den patofysiologiska processen av mänskliga bröstcancer carcinom.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har något att avslöja.
Acknowledgments
Författarna vill tacka de National Natural Science Foundation Kina (grant nr 81873111, 81673924, 81774039, 81503517), Stiftelsen Beijing naturvetenskap (grant nr 7172095, 7162084, 7162083), och stiftelsen Xu Xia av Beijing sjukhuset av Traditionell kinesisk medicin (bevilja nr, xx201701). Vi tackar Prof. Chang-Zhen Liu, från experimentell Research Center, Kina Akademi av kinesiska medicinska vetenskaper, för självlysande bilder.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| anesthesia machine | Midmark Corporation, Dayton, OH, USA | Matrx VMS | anesthesia |
| In-Vivo Imaging System | PerkinElmer | IVIS Spectrum | used for bioluminescence detecion |
| isoflurane | Hebei yipin chemical reagents company | O21400 | anesthesia |
| 1 ml syringe | Becton,Dickinson and Company | A257 | cell injection |
| digital caliper | Shang Hai Shen Han Measuring Tools Co., Ltd. | S-H | volume measurement |
| tramadol | Mundipharma company | - | pain killer |
| D-luciferin | Gold Biotechnology Inc. | LUCK-1G | used for bioluminescence detecion |
| The primary antibody against cluster of differentiation (CD) 31 | Abcam | ab28364 | used for MVD detection |
| hematoxylin and eosin staining kit | Beijing Zhong Shan Jinqiao Biotechnology Co., Ltd. | ZLI-9615 | histology |
| hair removal cream | Veet | - | hair removal cream |
| Carbomer Eye Gel | Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH | - | ophthalmic ointment |
| sewing needle | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd. | 17U0302J | suture |
References
- Torre, L. A., et al.
- Rashid, O. M., Takabe, K. Animal models for exploring the pharmacokinetics of breast cancer therapies. Expert Opinion on Drug Metabolism & Toxicology. 11 (2), 221-230 (2015).
- Wagner, K. U. Models of breast cancer: quo vadis, animal modeling. Breast Cancer Research. 6 (1), 31-38 (2004).
- Horas, K., Zheng, Y., Zhou, H., Seibel, M. J. Animal models for breast cancer metastasis to bone: opportunities and limitations. Cancer Investigation. 33 (9), 459-468 (2015).
- Kawaguchi, T., Foster, B. A., Young, J., Takabe, K. Current Update of Patient-Derived Xenograft Model for Translational Breast Cancer Research. Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. 22 (2), 131-139 (2017).
- Wright, L. E., et al. Murine models of breast cancer bone metastasis. BoneKEy Reports. 5, 804 (2016).
- Cassidy, J. W., Batra, A. S., Greenwood, W., Bruna, A. Patient-derived tumour xenografts for breast cancer drug discovery. Endocrine-Related Cancer. 23 (12), T259-T270 (2016).
- Stiedl, P., Grabner, B., Zboray, K., Bogner, E., Casanova, E. Modeling cancer using genetically engineered mice. Methods in Molecular Biology. 1267, 3-18 (2015).
- Menezes, M. E., et al. Genetically engineered mice as experimental tools to dissect the critical events in breast cancer. Advances in Cancer Research. 121, 331-382 (2014).
- Talmadge, J. E., Singh, R. K., Fidler, I. J., Raz, A. Murine models to evaluate novel and conventional therapeutic strategies for cancer. The American Journal of Pathology. 170 (3), 793-804 (2007).
- Spaw, M., Anant, S., Thomas, S. M. Stromal contributions to the carcinogenic process. Molecular Carcinogenesis. 56 (4), 1199-1213 (2017).
- Joyce, J. A., Pollard, J. W. Microenvironmental regulation of metastasis. Nature Reviews Cancer. 9 (4), 239-252 (2009).
- Hanahan, D., Weinberg, R. A. Hallmarks of cancer: the next generation. Cell. 144 (5), 646-674 (2011).
- Yano, S., et al. Tumor-targeting adenovirus OBP-401 inhibits primary and metastatic tumor growth of triple-negative breast cancer in orthotopic nude-mouse models. Oncotarget. 7 (51), 85273-85282 (2016).
- Kocaturk, B., Versteeg, H. H. Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth. Journal of Visualized Experiments. (96), e51967 (2015).
- Tavera-Mendoza, L. E., Brown, M. A less invasive method for orthotopic injection of breast cancer cells into the mouse mammary gland. Lab Animal. 51 (1), 85-88 (2017).
- Zhang, Y., et al. Establishment of a murine breast tumor model by subcutaneous or orthotopic implantation. Oncology Letters. 15 (5), 6233-6240 (2018).
- Zhang, Y., et al. Gubenyiliu II Inhibits Breast Tumor Growth and Metastasis Associated with Decreased Heparanase Expression and Phosphorylation of ERK and AKT Pathways. Molecules. 22 (5), (2017).
- Kwon, Y. S., Lee, K. S., Chun, S. Y., Jang, T. J., Nam, K. S. Suppressive effects of a proton beam on tumor growth and lung metastasis through the inhibition of metastatic gene expression in 4T1 orthotopic breast cancer model. International Journal of Oncology. 49 (1), 336-342 (2016).
- Kalra, J., et al. Validating the use of a luciferase labeled breast cancer cell line, MDA435LCC6, as a means to monitor tumor progression and to assess the therapeutic activity of an established anticancer drug, docetaxel (Dt) alone or in combination with the ILK inhibitor, QLT0267. Cancer Biology & Therapy. 11 (9), 826-838 (2011).
- Hoffman, R. M. Orthotopic metastatic mouse models for anticancer drug discovery and evaluation: a bridge to the clinic. Investigational New Drugs. 17 (4), 343-359 (1999).
- Hoffman, R. M. Patient-derived orthotopic xenografts: better mimic of metastasis than subcutaneous xenografts. Nature Reviews Cancer. 15, 451 (2015).
